Phân tích các thành phần hóa học trong các loài Cistanche

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yong Jiang, Peng-Fei Tu, et al

trừu tượng

Các loài thuộc chiCistanche(Tiếng Trung Quốc là Rou Cong Rong) là loại thảo mộc sống ký sinh lâu năm và phân bố chủ yếu ở những vùng đất khô cằn và sa mạc ấm áp. Là một loại thuốc bổ cao cấp trong việc điều trị các chứng thận hư, liệt dương, vô sinh nữ, bệnh di tinh, đau bụng kinh, táo bón do tuổi già,Cistanchecác loại thảo mộcđược vinh danh là "Nhân sâm của sa mạc". Gần đây, giới khoa học ngày càng chú ý đến Herba Cistanche vì các hoạt tính sinh học đáng chú ý của nó bao gồm chống oxy hóa, bảo vệ thần kinh và chống lão hóa. Các thành phần hóa học củaCistanchethực vậtchủ yếu bao gồm các loại dầu dễ bay hơi và không bay hơiphenylethanoidglycoside(PhG), iridoids, lignans, alditols, oligosaccharid và polysaccharid. Các nghiên cứu dược lý cho thấy PhG là thành phần hoạt động chính để chữa bệnh thiếu thận, chống oxy hóa và bảo vệ thần kinh; galactitol và oligosaccharid là những đại diện để điều trị chứng táo bón do tuổi già, trong khi polysaccharid có nhiệm vụ cải thiện khả năng miễn dịch của cơ thể. Trong bài báo này, những tiến bộ về các thành phần hóa học củaCistanchethực vậtvà các phân tích tương ứng của chúng được xem xét.

Từ khóa:Cistanche Herba, Cistanches Chemical, Phân tích thành phần, Phenylethanoid glycoside

1. Giới thiệu

CistancheHoffmg. Et Link, một trong các chi của họ Orobanchaceae, với 22 loài trên thế giới, phân bố chủ yếu ở các vùng đất khô cằn và sa mạc ở Bắc bán cầu, như khu tự trị Tân Cương, Nội Mông, Ninh Hạ, và các tỉnh Cam Túc, Thanh Hải của Trung Quốc, cũng như Iran, Ấn Độ, Mông Cổ, v.v. [1]. Môi trường sinh trưởng của chúng rất khắc nghiệt: khí hậu khô cằn khắc nghiệt, nhiệt độ thay đổi nghiêm trọng, ánh nắng mặt trời gay gắt, lượng mưa hàng năm dưới 250 mm, và đất bạc màu [2,3]. CácCistanchecác loài thuộc cây thảo sống ký sinh lâu năm, thường bám vào rễ của cây cố định cát, như cây Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliated, và cây Tamarix, ... [3]. Có sáu loài Cistanche ở Trung Quốc, theo ghi chép của Chỉ số phân loại các loài thực vật bậc cao của Trung Quốc [4]. Tuy nhiên, một nghiên cứu sâu hơn đã xác nhận rằng chỉ có bốn loài và một biến thể củaCistanchetồn tại ở Trung Quốc, tức làCistanchesa mạcYC Ma, C. tubulosa (Schenk) R. Wight, C. salsa (CA Mey.) G. Beck, C. salsa var. albiflflora PF Tu et ZC Lou và C. sinensis G. Beck [5].

Rou Cong Rong (HerbaCistanche), lần đầu tiên được ghi lại trong Trung Quốc của Thần Nông Medica, đề cập đến thân cây mọng nước khô củaCistanchethực vật.HerbaCistancheđã được coi là một loại thuốc bổ thượng hạng và được vinh danh là "Nhân sâm của sa mạc". Giá trị khoa học của Herba Cistanche nằm trong việc điều trị chứng thận hư, liệt dương, vô sinh nữ, bệnh đái dắt, đau nhiều, táo bón tuổi già [6,7]. Nó đã được kê đơn thường xuyên nhất để chống lại chứng thiếu thận ở Trung Quốc trong các triều đại kế tiếp. Trong số các loài Cistanche, chỉ có C. Desticola được xếp lại thứ tự trong Dược điển Trung Quốc (ấn bản năm 2000) [8], và C. tubulosa đã được thêm vào Dược điển Trung Quốc năm 2005 như một sự thay thế, vì các thành phần hóa học tương tự, các hoạt tính dược lý và tương đối của nó nguồn tài nguyên phong phú so với C. sa mạc hóa [9–11]. Tuy nhiên, trong những năm gần đây, loài C. sa mạc đen hoang dã đang trên bờ vực tuyệt chủng do khai thác quá mức, và nó đã được thu thập là một trong những loài thực vật cấp II cần được bảo vệ ở Trung Quốc. Do sự thiếu hụt các nguồn tài nguyên thiên nhiên của các quan chứcHerbaCistanche, các loài khác của chi này, chẳng hạn như C. salsa và C. Sinensis, cũng được sử dụng làm thực phẩm thay thế trong nhiều lĩnh vực [10].

Nghiên cứu khoa học vềCistanchethực vậtbắt đầu vào những năm 1980 [12], và phân tích hóa học chỉ ra rằng các hợp chất khác nhau, bao gồm cả tinh dầu,phenylethanoidglycoside(PhGs), iridoids, lignans, alditols, oligosaccharid và polysaccharid là những thành phần chính củaCistanchethực vật[13,14]. Nghiên cứu dược lý cho thấy rằng các chất chiết xuất từCistanchethực vật có nhiều hoạt tính, chẳng hạn như chữa bệnh thiếu thận và táo bón do tuổi già, tăng cường khả năng học hỏi và ghi nhớ, điều trị bệnh Alzheimer, tăng cường khả năng miễn dịch, chống lão hóa và chống mệt mỏi [14–21]. Với việc nâng cao mức sống và sự xuất hiện của một xã hội già hóa,Cistanchethực vậtđã được chú ý nhiều hơn và được sử dụng ngày càng rộng rãi do các hoạt tính dược lý đặc biệt của chúng.

Đã có một số đánh giá về việc nghiên cứu các thành phần hóa học và hoạt động dược lý củaCistanchethực vật[13–15]. Bài báo hiện tại tập trung vào phân tích hóa học của chi này và những tiến bộ trong nghiên cứu thành phần hóa học.

2. Các hợp chất dễ bay hơi

Các phương pháp chiết xuất thường được sử dụng cho các hợp chất dễ bay hơi của TCM bao gồm chưng cất hơi nước và chiết xuất dung môi hữu cơ ưa béo. Sử dụng phương pháp chưng cất hơi nước, tinh dầu của C. salsa và C. tubulosa đã được chiết xuất, và 38 và 21 thành phần được xác định tương ứng bằng GC – MS (Bảng 1). Các thành phần chính trong tinh dầu của C. salsa bao gồm ankan, rượu, andehit và một số hợp chất dị vòng, trong khi axit palmitic và axit linoleic là hai thành phần chính trong tổng số dầu của C. tubulosa [22,23]. Các hợp chất dễ bay hơi của C. sa mạcza được chiết xuất bằng ete dầu mỏ, và 25 thành phần được xác định bằng GC – MS. Ba thành phần giàu nhất là metyl 14- metylpentadecanoat (13,61 phần trăm), etyl palmitat (12,39 phần trăm) và 2,5, 6- trimethylolethane (7,60 phần trăm) [24]. Một báo cáo khác về các thành phần dễ bay hơi của C. sa mạc hoá cho thấy rằng eugenol là thành phần chính khi sử dụng phương pháp chiết xuất-chưng cất đồng thời [25]. Các kết quả phân tích khác nhau của hai bài báo này [24,25] có thể do các phương pháp chiết xuất khác nhau và các điều kiện phân tích khác nhau của GC – MS.

Bên cạnh đó, Ma đã báo cáo một phương pháp chiết chất lỏng siêu tới hạn (SFE) để chiết xuất các thành phần không phân cực từ C. salsa. Phân tích dịch chiết bằng GC – MS cho thấy một số este và hợp chất phân tử thấp có chứa oxy hoặc nitơ tồn tại, bên cạnh ankan. Kết quả này chứng minh rằng nhiều hợp chất phân cực hơn có thể được chiết xuất bằng SFE thông qua việc bổ sung một chất điều chỉnh phân cực [26].

3. Các hợp chất không bay hơi

Các hợp chất không bay hơi củaCistanchethực vậtchủ yếu bao gồm phenylethanoids, iridoids, lignans, alditols, oligosaccharides và polysaccharides. Cho đến nay, hơn 100 hợp chất không bay hơi đã được phân lập từCây cistanche. Sự phân bố của các loại hợp chất trongCistanchethực vậtđược liệt kê trong Bảng 2. Năm 1995, Moriya [27,28] báo cáo rằng nguyên liệu thực vật của C. salsa đã bị xác định sai trước đó khi ông điều tra nguồn Herba Cistanches từ các thị trường y tế Nhật Bản, vì vậy các thành phần hóa học được phân lập từ C. . salsa trong những năm 80 đã được chỉ định lại cho C. sa mạc phủ trong đánh giá này.

3.1. Phenylethanoid glycoside

3.1.1. Cấu trúc hóa học của PhGs

PhG đã được coi là thành phần tích cực chính củaCistancheloài. Đến nay, 34 PhGs(phenylethanoidglycoside)đã bị cô lập từCây bìm bìm biếc, bao gồm 22 glycoside disaccharide, 10 glycoside trisaccharide, và 2 glycoside monosaccharide (Bảng 3). Bằng cách phân tích cấu trúc của PhG trongCistanche, các đặc điểm cấu tạo sau đây đã được tóm tắt: đoạn đường của glycosid disaccharid gồm glucozo và rhamnose, có liên kết Glc (3 → 1) Rha. Glucose thường liên kết trực tiếp với aglycone, và ở vị trí C4 hoặc C6 của nó, nơi thường có coumaroyl hoặc caffeoyl. Khi PhG là một glycoside trisaccharide, glucose hoặc rhamnose bổ sung thường xuất hiện ở vị trí C6 của glucose bên trong. Trong số các PhG đó (phenylethanoidglycoside)từCistancheloài, crenatoside (34) là một loại đặc biệt, vì một vòng ête tồn tại giữa vị trí của aglycone và vị trí C -2 của glucose bên trong trong cấu trúc của nó [34]. Gần đây, lần đầu tiên, cấu trúc đơn tinh thể tia X của salidroside (15), một PhG được phân lập từ C. sa mạc phủ, đã được báo cáo lần đầu tiên [44].

Các nghiên cứu hoạt động dược lý của PhGs(phenylethanoidglycoside)đã chứng minh rằng chúng có nhiều chức năng khác nhau, chẳng hạn như chống oxy hóa, bảo vệ thần kinh, tăng cường chức năng miễn dịch và tình dục, bảo vệ gan, chống bức xạ, v.v. [15–17,40,48–50]. Trong số đó, bảo vệ thần kinh đang trở thành một chủ đề nóng. Một số thành phần hoặc phần nhỏ của PhGs(phenylethanoidglycoside)đã được báo cáo là có tác dụng ức chế quá trình apoptosis của các tế bào thần kinh gây ra bởi các chất hóa học khác nhau [51–57], và sự bảo vệ thần kinh của chúng trong ống nghiệm cũng đã được chứng minh trên một số mô hình động vật in vivo [58–64]. Những kết quả này chỉ ra rằng PhGs(phenylethanoidglycoside)có thể là một ứng cử viên hấp dẫn để điều trị các rối loạn thoái hóa thần kinh, chẳng hạn như chứng mất trí nhớ hoặc bệnh Parkinson.

3.1.2. Phân tích PhGs

Là các thành phần hoạt động chính trongCistanchethực vật, PhGs(phenylethanoidglycoside)thường được sử dụng làm chất đánh dấu để đánh giá chất lượng của thuốc thô hoặc các công thức tương ứng của chúng.

3.1.2.1. Phân tích PhGs bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC).

Zhang lần đầu tiên thiết lập một phương pháp xác định TLC cho acteoside (2), echinacoside (11) và cistanoside A (3) trongHerbaCistanchesbằng silica gel, sử dụng etyl axetat – metanol – axit axetic 9 phần trăm (20: 3: 2) làm dung môi khai triển, và dung dịch FeCl3 làm thuốc thử tạo màu [65]. Phương pháp này cũng được sử dụng trong Dược điển Trung Quốc (2000) để xác định acteoside (2) [8]. Tuy nhiên, trong Dược điển Trung Quốc (2005), chất hấp phụ của sắc ký lớp mỏng đã được thay đổi từ silica gel thành polyamide để có được hiệu quả tách tốt hơn nhiều, và metanol-axit axetic-nước (2: 1: 7) đã được sử dụng. như một dung môi phát triển. Hai PhG chính trongHerbaCistanchesEchinacoside (11) và acteoside (2) có thể được xác định đồng thời [9].

3.1.2.2. Phân tích PhGs bằng phương pháp đo quang phổ tia cực tím (UV).

Như đã đề cập ở trên, nhóm cinnamoyl thường tồn tại trong cấu trúc của PhG, do đó, PhG có thể được xác định trực tiếp bằng UV hoặc bằng phương pháp so màu sau khi phản ứng với một số thuốc thử tạo màu [66-72]. Tuy nhiên, như chúng ta biết rằng phương pháp so màu không phải là một cách tiếp cận hợp lý để xác định chính xác các thành phần hóa học trong TCM, do tính không ổn định, độ tái lập kém và sai số thử nghiệm lớn. Hơn nữa, việc xử lý trước các mẫu được phát hiện bằng UV sẽ tẻ nhạt hơn so với các phương pháp khác. Vì vậy, hiện nay, phương pháp UV không được sử dụng để định lượng hợp chất tinh khiết nữa, mà chỉ dùng để xác định tổng PhG theo cách thông thường.

3.1.2.3. Phân tích PhGs bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Trong số tất cả các phương pháp phân tích, HPLC là phương pháp được sử dụng thường xuyên nhất để định tính và định lượng PhG, và Bảng 4 tóm tắt các phương pháp được công bố về các phân tích PhG của HPLC trong tài liệu, sẽ được trình bày chi tiết như sau.

3.1.2.3.1. Phân tích PhG trong thuốc thô, mẫu sinh học và các sản phẩm phức tạp bằng HPLC.

Vào năm 1995, Xu đã thực hiện một phép so sánh các thành phần hóa học của C. Desticola với chất thay thế của nó là C. salsa. Phân tích HPLC cho thấy rằng thành phần hóa học của PhGs(phenylethanoidglycoside)giữa hai loài này tương tự nhau, nhưng số lượng của chúng khác nhau [73]. Cùng năm đó, Moriya đã so sánh giữa các thành phần hóa học của C. sa mạc (Cd), C. tubulosa (Ct) và C. salsa (Cs), sử dụng bảy PhG làm chất đánh dấu. Kết quả cho thấy rằng cistanoside A (3), C (5) và một lượng vết nhỏ của tubuloside A (17) tồn tại trong Cd và Cs, trong khi chỉ có tubuloside A (17) tồn tại trong Ct, không có cistanoside A (3) và C (5). Ngoài ra, tổng lượng PhGs trong cây Ct và Cs đã được tìm thấy nhiều hơn trong cây Cd [28]. Điều đáng giá là bài báo này đã so sánh sự khác biệt giữa cácCistanchechi thông qua phân tích đa thành phần; tuy nhiên, điều đáng tiếc là việc định lượng bảy PhG này(phenylethanoidglycoside)chỉ được thực hiện bằng một phương pháp tiêu chuẩn bên ngoài, mà không có sự xác nhận phương pháp luận có hệ thống.

Tú đã thực hiện một phân tích định tính của sáu PhG(phenylethanoidglycoside)và phân tích định lượng hai PhG trong chi Cistanche bằng Rp-HPLC. Kết quả cho thấy các thành phần hóa học của C. sa mạc, C. salsa, C. salsa var. albiflflora và C. tubulosa tương tự nhau, trong khi C. Sinensis khác với những loài khác [10]. Wang đã thiết lập một phương pháp phân tích bảy PhG ở C. sa mạc, C. tubulosa và C. salsa bằng HPLC / MS / MS, và kết quả cho thấy rằng sự phân bố thành phần hóa học của bảy PhG tham chiếu là khác nhau ở mỗi loài [ 74]. Các con đường phân mảnh của các liên kết glycosidic, liên kết este và một số tổn thất thần kinh thú vị của PhG đã được thảo luận trong bài báo này [74] và trong một bài báo khác [75]. Tuy nhiên, ưu điểm của kỹ thuật HPLC-MS vẫn chưa được chứng minh một cách triệt để trong các phân tích này, vì chỉ nghiên cứu cơ chế phân mảnh của các tiêu chuẩn PhG. Việc sử dụng các cơ chế này để làm sáng tỏ các hợp chất PhG chưa biết để cung cấp thêm thông tin hóa học, và nghiên cứu cơ chế phân mảnh của các hợp chất khung xương khác đã bị bỏ qua.

Bên cạnh phân tích định tính, cũng có nhiều báo cáo về phân tích định lượngHerbaCistanches, đặc biệt là hai PhG lớn(phenylethanoidglycoside), echinacoside (11) và acteoside (2). Năm 2000, Zhang đã thiết lập một tiêu chuẩn chất lượng cho C. sa mạc phủ, bao gồm việc xác định hàm lượng của acteoside (2) bằng HPLC, kết hợp với việc xác định định tính các thành phần thứ năm bằng TLC [65]. Năm 2003, một phương pháp Rp-HPLC để phát hiện echinacoside (11) và acteoside (2) trong cây Nhục thung dung trồng trên cây ký chủ và môi trường sống khác nhau đã được thành lập. Tác giả đã sử dụng hai pha động khác nhau để xác định echinacoside (11) và acteoside (2), tức là acetonitril-nước – axit axetic băng (13: 86: 1) cho echinacoside và metanol-nước – axit axetic băng (32: 67: 1) đối với acteoside. Kết quả sơ bộ cho thấy rằng hàm lượng của echinacoside và acteoside rõ ràng là bị ảnh hưởng bởi các vật chủ khác nhau, và hàm lượng của hai hợp chất này trong C. tubulosa ký sinh trong Tamalrix L. được nuôi trồng là cao nhất [76].

Xét thấy hơi tẻ nhạt khi xác định hai thành phần trong cùng một cây bằng cách sử dụng hai dung môi khác nhau, một phương pháp Rp-HPLC đơn giản hơn đã được thiết lập để phát hiện đồng thời echinacoside (11) và acteoside (2) [77]. Chen sau đó đã áp dụng phương pháp này để xác định hàm lượng của echinacoside (11) và acteoside (2) trong C. tubulosa hoang dã và được nuôi trồng [78]. Kết quả cho thấy hàm lượng echinacoside (11) cao hơn rõ rệt so với acteoside (2) trong tất cả các mẫu, và hàm lượng của hai thành phần hoạt tính này trong tự nhiên cao hơn trong nuôi trồng [78]. Cần lưu ý rằng việc chuẩn bị mẫu trong bài báo này đã áp dụng phương pháp trộn nhiều lô với nhau, có nghĩa là tác giả đã xem xét sự khác biệt rõ ràng về chất lượng riêng lẻ trongHerbaCistanches.

Kể từ khi hoang dãCistanchecác loài đang trên bờ vực tuyệt chủng, việc trồng C. sa mạc và C. tubulosa đang được thực hiện ở Tân Cương và Nội Mông, Trung Quốc. Để đưa ra một số hướng dẫn lý thuyết cho việc trồng trọt, các mẫu trồng trọt khác nhau đã được phân tích. Cao xác định nội dung của PhGs(phenylethanoidglycoside)vào mùa xuân và mùa thu với LC-MS, để so sánh các mẫu C. sa mạc hóa được thu thập trong các mùa khác nhau. Bốn PhG(phenylethanoidglycoside), tức là echinacoside (11), acteoside (2), cistanoside A (3) và 2 - acetylacteoside (1) được chọn làm chất đánh dấu và tổng hàm lượng của chúng được quan sát thấy vào mùa xuân cao hơn vào mùa thu [79] . Wang đã thực hiện một nghiên cứu về sự biến đổi của các thành phần hóa học ở các thời điểm sinh trưởng khác nhau và các bộ phận khác nhau của loài C. tubulosa được nuôi trồng, sử dụng dấu vân tay và hàm lượng của echinacoside (11) làm chỉ số. Ông phát hiện ra rằng sự phân bố hóa học của PhGs(phenylethanoidglycoside)là tương tự giữa các mẫu khác nhau, nhưng số lượng của mỗi PhG, đặc biệt là của echinacoside (11), là khác nhau đáng kể giữa các mẫu khác nhau. Sau khi so sánh, ông kết luận rằng thời gian nuôi trồng của C. tubulosa phải trên ba năm và thời gian thu hoạch của nó phải được kiểm soát chặt chẽ trước khi nở hoa. Trong bài báo này, chất lượng cây trồng không tốt hơn cây hoang dã, vì vậy tác giả đề xuất rằng cần đẩy mạnh công nghệ nuôi trồng để nâng cao hàm lượng các hợp chất có hoạt tính [80]. Yang đã nghiên cứu sự tích tụ chất khô và hàm lượng echinacoside (11) của C. tubulosa ở đồng bằng Huabei. Kết quả cho thấy rằng sự tích lũy chất khô của C. tubulosa ở dạng biến thể hình chữ "S", và hàm lượng echinacoside (11) cao nhất khi C. tubulosa lớn lên được 5 tháng [81].

Ngoài những điều này, dấu vân tay, một kỹ thuật mới tập trung vào các đặc điểm toàn diện và hệ thống của các mẫu được phân tích cũng đã được sử dụng để đánh giá chất lượng củaCistanchethực vật. Như đã đề cập ở trên, Wang đã phân tích các thành phần hóa học và sự biến đổi của chúng ở loài C. tubulosa được nuôi trồng bằng cách sử dụng dấu vân tay và các chỉ số khác [80]. Xie đã thiết lập một dấu vân tay sắc ký của C. Desticola bằng HPLC (Hình 1) và sử dụng nó để đánh giá sự khác biệt về chất lượng vốn có của các mẫu từ các môi trường sống khác nhau. Cuối cùng, sự khác biệt đáng chú ý đã được tìm thấy về chất lượng của các mẫu từ các môi trường sống khác nhau [82]. Hiện tượng tương tự thậm chí đã được quan sát thấy trong quá trình nghiên cứu của chúng tôi về việc đánh giá chất lượng của C. sa mạc, vì vậy sau này cần quan tâm nghiêm túc hơn đến tính nhất quán về chất lượng của các loài Cistanche.

Ngoại trừ trồng trọt, canh tác bằng tế bào hoặc mô sẹo là một giải pháp thay thế hấp dẫn khác để giải quyết sự thiếu hụt tài nguyên của HerbaCistanche. Trong quá trình canh tác, nhiều phương pháp phân tích đã được thiết lập để phân tích kết quả canh tác và tối ưu hóa các điều kiện canh tác [83–88]. Các điều kiện phân tích tương ứng cũng đã được tóm tắt trong Bảng 4.

Đối với việc phân tích PhG trong các sản phẩm phức tạp, Zhang đã báo cáo một phương pháp định lượng isoacteoside (12) trong tổng sốCistancheviên nang glycosid bằng HPLC [89]. Chúng tôi đã thiết lập một phương pháp phân tích acteoside (2) trong viên nang Shenqiyinao bằng HPLC [90], và Lei đã xác định echinacoside (11) trong tinh thần Congrong bằng HPLC [91]. Điểm chính của việc phân tích PhGs(phenylethanoidglycoside)trong các sản phẩm phức hợp là để tránh sự xáo trộn của các thành phần khác, do đó, việc xử lý trước mẫu và tối ưu hóa các điều kiện sắc ký thường là cần thiết.

3.1.2.3.2. Phân tích chuyển hóa PhGs bằng HPLC.

Năm 2001, Lei lần đầu tiên báo cáo quá trình chuyển hóa của PhGs(phenylethanoidglycoside)trong dạ dày của chó beagle, và bốn chất chuyển hóa, echinacoside (11), acteoside (2), isoacteoside (12), và 2 - acetylacteoside (1) được phân lập từ phân bằng HPLC chuẩn bị [96]. Năm 2006, sự chuyển hóa của acteoside (2) và echinacoside (11), chúng là các thành phần hoạt động củaHerbaCistanchesđã được nghiên cứu tương ứng, và dược động học và khả năng sinh học của chúng ở chuột đã được phân tích [97,98,134]. Chúng tôi đã thiết lập phương pháp LC-MS / MS nhạy cảm với chiết xuất pha rắn đơn giản để phát hiện acteoside (2) trong huyết tương chuột và đồng nhất mô để khảo sát khả dụng sinh học và sự phân bố não ở chuột di chuyển tự do [97,134]. Jia đã phát triển một phương pháp ghép nối HPLC nhanh chóng và đơn giản với phương pháp UV để xác định hàm lượng echinacoside (11) trong huyết thanh chuột [98]. Tuy nhiên, khả năng sinh học của echinacoside và acteoside chỉ được tìm thấy là {{1 0}}. 83% và 0,12%, tương ứng, mâu thuẫn với các tác dụng sinh học quan trọng của PhGs(phenylethanoidglycoside)ở động vật [58–64]. Trong tương lai, các nghiên cứu sâu hơn sẽ được thực hiện để làm sáng tỏ quá trình trao đổi chất và cơ chế hấp thụ của PhGs(phenylethanoidglycoside).

3.1.2.4. Phân tích PhGs(phenylethanoidglycoside)bằng sắc ký phản dòng tốc độ cao (HSCCC).

HSCCC, một sắc ký phân vùng lỏng-lỏng không hỗ trợ, loại bỏ sự hấp phụ không thuận nghịch của mẫu vào pha tĩnh và đã được sử dụng rộng rãi trong quá trình phân tách chuẩn bị các sản phẩm tự nhiên. So với sắc ký cột rắn-lỏng truyền thống, nó mang lại hiệu suất và độ thu hồi cao hơn. Lei đã áp dụng HSCCC để tách và tinh chế acteoside (2) và 2- acetylacteoside (1) từ C. salsa với hệ dung môi hai pha bậc bốn bao gồm etyl axetat – n-butanol – etanol-nước ( 4: 0. 6: 0. 6: 5, v / v). Phân tích HPLC về các phân đoạn CCC cho thấy rằng hai PhG(phenylethanoidglycoside)có độ tinh khiết hơn 98% [99]. Sau đó, Li đã thiết lập một phương pháp sử dụng hai hệ dung môi, một gồm etyl axetat – etanol-nước (5: 0. 5: 4,5, v / v / v) và hệ còn lại gồm etyl axetat – n-butanol –Etanol-nước ({{1 0}}. 5: 0. 5: 0,1: 1, v / v / v / v) để cô lập PhG(phenylethanoidglycoside)từ C. Desticola. Năm PhG(phenylethanoidglycoside), echinacoside (11), cistanoside A (3), acteoside (2), isoacteoside (12), và 2 - acetylacteoside (1) đã được phân lập và tinh chế, và độ tinh khiết của các hợp chất phân lập này đều trên 92,5% là xác định bằng HPLC [100]. Các phương pháp này cung cấp tài liệu tham khảo tốt cho việc phân lập và tinh chế các tiêu chuẩn PhGs trong tương lai.

3.2. Benzyl glycoside

Gần đây, Lei đã báo cáo sự phân lập và làm sáng tỏ cấu trúc của ba benzyl glycoside mới, salsaside A – C (35–37, Hình 2) từ C. salsa, cũng là benzyl glycoside được phân lập từCistanchethực vậtlần đầu tiên [47]. Đặc điểm cấu trúc của những benzyl glycoside này tương tự như của phenylethanoids được phân lập từ chi này, ngoại trừ rượu benzyl thay thế phenethylol trong aglycone.

3.3. Iridoids

Cho đến nay, ba iridoid aglycones và mười bốn iridoid glycoside đã được phân lập từCistanchethực vật(38–54, Bảng 5) [102–109]. Đặc điểm cấu trúc của iridoid glycoside từCistanchethực vậtđược tóm tắt như sau: glucose xuất hiện ở vị trí C1 của aglycone, với cấu hình ở H5 và H9; hydroxyl hóa thường xảy ra ở vị trí C8 và C10; đôi khi, sự mất nước có thể xảy ra giữa các hydroxyl của C10 với C1 hoặc C3 để tạo ra gốc epoxy.

3.4. Lignans

Một lignan aglycones và năm mươi lignan glycoside đã được phân lập từ cây C. sa mạc và C. tubulosa (55–60, Bảng 6). Bộ xương cơ bản của các hợp chất này là tetrahydrofuran và benzofuran lignans. Nguồn của C. tubulosa mà từ đó một số lignan đã được phân lập chủ yếu từ Pakistan, trong khi một số lignan được phân lập từ C. tubulosa được thu thập ở Trung Quốc. Điều này càng chứng minh rằng sự khác biệt về mặt hóa học tồn tại giữa C. tubulosa từ Trung Quốc và Pakistan [27,28].

3.5. Saccarit và các dẫn xuất của chúng

3.5.1. Nghiên cứu hóa học về saccharide và các dẫn xuất của chúng

Carbohydrate chiếm một tỷ lệ cao trong khối lượng khô của thực vật thuộc loài Cistanche [110]. Trong số đó, một trong những monosaccharide, galactitol đã được báo cáo là thành phần hoạt chất chính có hoạt tính nhuận tràng trong cây Herba Cistanches [18,19,103,104]. Trong khi, các polysaccharid được coi là thành phần tích cực giúp tăng cường khả năng miễn dịch của cơ thể, chống lão hóa và các hoạt động chống ung thư trongHerbaCistanches[20,21,111–113].

Trong những năm 90, các nghiên cứu về polysaccharid củaCistanchecác loài đã được tập trung vào việc phân lập / tinh chế và phân tích thành phần của các monosaccharide [110,112,114–116]. Các cấu trúc chính xác của polysaccharid từCistanchecác loài vẫn chưa được làm rõ cho đến năm 1997. Trong Bảng 7, các đặc tính cấu trúc được làm sáng tỏ của polysaccharid phân lập từ các loài Cistanche đã được liệt kê. Điều thú vị là tất cả chúng đều đã được phân lập từ C. sa mạc, và các polysaccharid trongCistanchethực vậtchưa được nghiên cứu.

Ngoại trừ những dẫn xuất này, một số dẫn xuất oligosaccharide, chẳng hạn như cistanoside F, cistanoside I, cistantubuloses A1 / A2, và cistansinensose A1 / A2 cũng đã được phân lập từHerbaCistanches(Hình 3), thực sự là dư lượng của PhGs(phenylethanoidglycoside)sau khi làm mất aglycone phenethylol. Vì có những cấu hình tồn tại trong tự nhiên của glucose, nên đôi khi, các dẫn xuất oligosaccharide này cũng tồn tại dưới dạng cực dương, và hiện tượng này có thể được quan sát thấy từ các tín hiệu NMR được ghép đôi [37,39,40,11,45].

3.5.2. Phân tích saccharide và các dẫn xuất của chúng

Để đánh giá chất lượng củaHerba Cistanchesmột cách toàn diện, galactitol, thành phần hoạt chất chính có hoạt tính nhuận tràng trong Herba Cistanches [18,19,97,98] gần đây đã được chọn làm chỉ số để đánh giá chất lượng củaHerbaCistanches, kết hợp với PhGs(phenylethanoidglycoside). Để đánh giá toàn diện chất lượng của C. tubulosa từ các khu vực khác nhau, Cai đã phát triển một phương pháp định lượng galactitol kết hợp với echinacoside (11) và acteoside (2) bằng HPLC. ELSD được chọn làm máy dò tìm galactitol, do khả năng hấp thụ đầu cuối yếu của nó trong phổ UV, và cột gel polyme Prevail Carbohydrate ES được sử dụng để tách nó. Các lô C. sa mạc và C. tubulosa từ các môi trường sống khác nhau đã được đo, và phương pháp chế biến các mẩu nước sắc C. tubulosa tươi cũng được tối ưu hóa bằng phương pháp này [92,93]. Kết quả của họ cho thấy hàm lượng galactitol, echinacoside (11), và acteoside (2) trong nước sắc C. tubulosa theo phương pháp đã mô tả cao hơn vài lần so với được làm khô bằng cách sấy hoặc bằng phương pháp truyền thống [93]. Ngoài ra, Zhang đã từng thiết lập phương pháp xác định TLC của mannitol trong C. sa mạc hóa, sử dụng etyl axetat – pyridin – nước (7: 2: 1) làm dung môi khai triển, và dung dịch KMnO4 1% làm chất tạo màu [65].

Đối với việc xác định hàm lượng polysaccharid trongCistancheloài, axit phenol – sulfuric là phương pháp được sử dụng thường xuyên nhất, và hàm lượng polysaccharide trong C. salsa thông qua các phương pháp chiết xuất khác nhau được xác định là từ 11,61 phần trăm đến 13,22 phần trăm [123–125]. Tuy nhiên, đó chỉ là một số kết quả phân tích sơ bộ do hạn chế của phương pháp so màu.

3.6. Ancaloit và phân tích tương ứng của chúng

Cho đến nay, chỉ có hai ancaloit được phân lập từCistanchecác loài, đó là betaine (65) và N, N-dimethyl glycine methyl ester (66) (Hình 3) [126]. Betaine (65) là một alkaloid phân bố phổ biến trong thực vật, vì vậy có nhiều báo cáo hơn về phân tích định tính và định lượng của nó. Zhang đã so sánh sự biến đổi hàm lượng của betaine trong C. sa mạc phủ trước và sau khi chế biến, sử dụng nhận dạng TLC kết hợp với phương pháp so màu [127]. Phương pháp TLC này cũng đã được thu thập trong Dược điển Trung Quốc 2000 [8], trong khi phương pháp định lượng bằng phép so màu đó sau đó đã được những người khác áp dụng để tối ưu hóa công nghệ chiết xuất củaHerbaCistanches[128,129]. Vào năm 2007, Gong đã báo cáo một phương pháp HPLC để phát hiện betaine trong cây Cistanche kết hợp với máy dò ELSD, và betaine được tìm thấy chỉ tồn tại ở C. sa mạc, mà không tồn tại ở C. tubulosa. Do đó, tác giả cho rằng nên dùng betaine làm chất đánh dấu để phân biệt hai loại cây Cistanche này [101]. Tuy nhiên, do các lô mẫu chỉ có hai cho mỗi loài và một trong những môi trường sống của C. tubulosa (Vân Nam) là không chắc chắn, chúng tôi khuyến nghị kết luận này nên được chứng minh thêm. Ngoài ra, việc xác định TLC của betaine đối với Herba Cistanche đã bị xóa khỏi Dược điển Trung Quốc từ năm 2005, do tính chất không đặc hiệu của nó. Do đó, việc coi nó như một chỉ số duy nhất để tối ưu hóa công nghệ chiết xuất Herba Cistache là không hợp lý [129].

3.7. Các hợp chất khác

Có một lượng nhỏ các hợp chất khác, chẳng hạn như glycoside phenolic, monoterpenoids, sterol hoặc glycoside của chúng, axit béo, axit amin và một số nguyên tố vi lượng, v.v. tồn tại trong cây Cistanche [13,41,42.103,105,130–133].

4.Kết luận

Trong bài đánh giá này, các thành phần hóa học củaCistanchecác loài và phương pháp phân tích của chúng đã được mô tả. Trong số các phân tích hiện có, phần lớn tập trung vào PhG(phenylethanoidglycoside), và HPLC là phương pháp được sử dụng rộng rãi nhất do hiệu quả và độ chính xác cao. Thông qua phân tích các công trình nghiên cứu trước đây, kết hợp với nhiều năm nghiên cứu của chúng tôi về các loài Cistanche, một số vấn đề chính tồn tại trong việc phân tíchCistanchethực vậtđã được tóm tắt như sau: thứ nhất là việc sử dụng hỗn hợp các nguồn loài: C. sa mạc và C. tubulosa là hai loài chính thức được thu thập trong Dược điển Trung Quốc. Tuy nhiên, hai loài Cistanche khác, C. salsa, và C. Sinensis cũng được sử dụng ở một số khu vực do thiếu hụt tài nguyên. Mặc dù đã có một số ấn phẩm đề cập đến sự so sánh giữa các loài khác nhau [6–8], chúng không đủ thuyết phục do số lượng mẫu và dấu hiệu hạn chế. Vì vậy, cần phải thiết lập một phương pháp toàn diện, chẳng hạn như công nghệ lấy dấu vân tay để phân tích so sánh các loại thuốc thô của các nguồn khác nhau. Thứ hai là sự không đồng đều về chất lượng của Herba Cistanches chưa được quan tâm nhiều. Các loài Cistanche là loài thảo mộc sống ký sinh. Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng của chúng, chẳng hạn như khí hậu, môi trường sống, ký chủ, thời gian thu hoạch, phương pháp chế biến và các bộ phận khác nhau của cùng một cây. Các nghiên cứu của chúng tôi cho thấy chất lượng của các loài Cistanche không ổn định, đặc biệt là của C. sa mạc sống hoang dã [80,82,92]. Tuy nhiên, vấn đề này đã bị bỏ qua trong một số phân tích trước đây và chỉ một hoặc hai mẫu được sử dụng [74,76], điều này có thể dẫn đến kết luận không chính xác. Vì vậy, trong tương lai, cần thu thập và phân tích nhiều mẫu hơn nữa để có được kết luận khách quan hơn. Thứ ba là các phân tích hiện tại chủ yếu tập trung vào hai PhG chính(phenylethanoidglycoside), echinacoside (11) và acteoside (2), nhưng như chúng ta đã biết, tác dụng dược lý của TCM là sự hợp tác của nhiều thành phần hoặc các loại thành phần khác nhau. Do đó, việc xác định đồng thời các đa thành phần hoạt động có ý nghĩa hơn đối với việc kiểm tra chất lượng TCM. Tuy nhiên, cho đến nay, chưa có phân tích định lượng nào cho hơn ba PhG trongHerbaCistanches, thậm chí không có báo cáo về việc phân tích benzyl glycoside, iridoids và lignans. Sau đó, nghiên cứu trong tương lai nên củng cố nghiên cứu phân tích và dược lý của họ. Nhìn chung, nghiên cứu hiện tại về phân tích các loài Cistanche vẫn còn ở trạng thái cấp thấp hơn. Herba Cistanches là loại thuốc bổ quan trọng, nhưng thực tế, chất lượng của chúng không thể được kiểm soát hiệu quả chỉ bởi hai đại diện PhGs(phenylethanoidglycoside)[9]. Việc kết hợp xác định nhiều thành phần với dấu vân tay được coi là một cách tiếp cận hiệu quả để kiểm soát chất lượng của TCM. Trong tương lai, trình độ nghiên cứu của các loài Cistanche trên hai lĩnh vực này cần được nâng cao hơn nữa. Thiết lập một phương pháp, có thể đồng thời phân tích định tính và định lượng PhG, iridoids và các thành phần hoạt tính khác trongHerbaCistanchessẽ là một hướng nghiên cứu có ý nghĩa.

Cistanchetubulosacó nhiều tác dụng, bấm vào đây để biết thêm

Sự nhìn nhận

Công trình này được hỗ trợ tài chính bởi Tổ chức Khoa học Tự nhiên Quốc gia Trung Quốc (Số 30472070), và Chương trình Tài năng Thế kỷ Mới, Bộ Giáo dục Trung Quốc (Số 985-2-102-113), và các tác giả cũng biết ơn Xiaoming Liu, Zhihong Song, LiLei từ Đại học Bắc Kinh nhờ chuyên gia hỗ trợ kỹ thuật của họ.

Từ: 'Phân tích các thành phần hóa học trongCistancheloài 'của Yong Jiang, Peng-Fei Tu

--- Tạp chí Sắc ký A, 1216 (2009) 1970–1979