Tác dụng chống tăng sinh của Cistanches Salsa đối với sự tiến triển của tăng sản tuyến tiền liệt lành tính
Oct 18, 2022
Ảnh hưởng của CSE đối với chứng viêm ở chuột do rầy nâu gây ra
Hoạt động của oxit nitric và COX có thể đóng một vai trò quan trọng trong việc xác định mối liên hệ giữa viêm và sự phát triển của tuyến tiền liệt (Sciarra và cộng sự.2008). Oxit nitric cũng tăng cường hoạt động của COX, đây là yếu tố thứ hai. Hoạt động COX -2 đã được phát hiện trong tất cả các tế bào viêm trong biểu mô và các khoảng kẽ của mô tuyến tiền liệt của con người, và nó được gia tăng trong các tổn thương viêm tăng sinh, tạo ra các prostaglandin gây viêm. Để điều tra tác động của CSE đối với tình trạng viêm, chúng tôi đã kiểm tra sự biểu hiện protein của iNOS và COX -2 trong mô tuyến tiền liệt của chuột do BPH gây ra. Như thể hiện trong Hình 4, phân tích Western blot cho thấy sự gia tăng biểu hiện protein iNOS và COX -2 trong nhóm gây ra BPH so với mức của chúng trong nhóm đối chứng. Tuy nhiên, so với nhóm được điều trị bằng BPH, các nhóm được điều trị bằng Finasteride và CSE cho thấy biểu hiện protein iNOS và COX -2 giảm, cho thấy tác dụng chống viêm của chúng trong BPH.
Hình 3. Ảnh hưởng của việc sử dụng chiết xuất Cistanche salsa (CSE) đối với sự tăng sinh tế bào tuyến tiền liệt. Nhuộm Hematoxylin và eosin của mô tuyến tiền liệt từ mô hình chuột gây ra tăng sản lành tính tuyến tiền liệt (BPH) (A) độ dày lớn của mô biểu mô từ tuyến tiền liệt (TETP) (B); độ phóng đại gốc lần lượt là 40x （bar∶200 μm） và 400x （scale bar∶20μm）. （C） Tăng sinh kháng nguyên nhân tế bào, mức biểu hiện protein PCNA） được xác định bằng phương pháp thấm phương tây sử dụng các kháng thể đặc hiệu. -actin đã được sử dụng như một kiểm soát nội bộ. Phân tích mật độ được thực hiện bằng phần mềm Bio-rad Quantity One @. Dữ liệu được hiển thị đại diện cho trung bình ± SEM của 6 con chuột mỗi nhóm. ""P<0.01,><0.001 vs.con=""><><><0.001 vs.bph="">
Ảnh hưởng của CSE đối với quá trình chết rụng ở chuột do rầy nâu gây ra
Apoptosis đề cập đến sự chết của tế bào xảy ra như một phần bình thường và được kiểm soát của sự phát triển của sinh vật. Những xáo trộn trong quá trình apoptosis có liên quan đến một số bệnh và tình trạng của con người, bao gồm cả rầy nâu (Sciarra et al.2007). Kích hoạt các protease cysteine đặc hiệu với aspartate, còn được gọi là caspase, là một sự kiện sinh hóa quan trọng trong quá trình apoptosis (Fadeel và Orrenius 2005). và PARP -1 (chất nền nội sinh của caspase -3) so với nhóm do BPH gây ra.
Các sự kiện apoptotic được quy định chặt chẽ bởi các thành viên của họ protein Bcl -2 (Cory và Adams 2002). Để xác định xem CSE có gây ra quá trình apoptosis bằng cách thay đổi sự biểu hiện của protein Bcl -2 và Bax trong mô tuyến tiền liệt của động vật cảm ứng BPH hay không, mức độ của các protein này đã được kiểm tra bằng phân tích Western blot. Như được thể hiện trong Hình 5B, nhóm được điều trị bằng CSE cho thấy giảm biểu hiện protein của các protein chống apoptotic Bcl -2 và Bcl-xL nhưng lại tăng biểu hiện của protein pro-apoptotic Bax, so với nhóm được gây ra bởi BPH . Do đó, tỷ lệ Bcl -2 so với Bax giảm đáng kể sau khi điều trị bằng CSE, cho thấy sự tham gia của họ protein Bcl -2 trong quá trình chết rụng do CSE gây ra trong BPH (Hình 5C).
Những phát hiện này cho thấy rằng quá trình chết rụng do CSE gây ra đóng một vai trò trong tác động của hợp chất này đối với rầy nâu, và những tác động này được thực hiện qua trung gian điều hòa biểu hiện protein chống và pro-apoptotic.
Thảo luận
BPH là một bệnh mãn tính, có thời gian phát triển và tiến triển kéo dài. BPH phát triển từ tăng sản vi mô đơn giản thành tăng sản thể tích vĩ mô, sau đó trở thành một vấn đề lâm sàng (Sciarra et al. 2007). Mặc dù cơ chế bệnh sinh của BPH phần lớn vẫn chưa được biết rõ, nhưng nồng độ androgen cao và lão hóa được coi là hai yếu tố nguy cơ chính có lẽ liên quan đến sự phát triển của BPH (Botto và cộng sự.2005; Gann và cộng sự 1995; Meigs và cộng sự.2001) . Một số nghiên cứu cũng đã gợi ý rằng testosterone và DHT đóng vai trò chính trong BPH (Carson và Rittmaster 2003; Gittelman và cộng sự 2006). Có một lượng dữ liệu đáng kể cho thấy testosterone được chuyển đổi thành DHT bởi 5a-reductase loại 1 và loại 2, và DHT kích thích sự phát triển của tuyến tiền liệt và đóng những vai trò quan trọng hơn trong quá trình sinh bệnh của BPH, cùng với 5a-reductase loại 2 (Bartsch et al. 2002a; Isaacs và Coffey 1989) Ngoài ra, phần lớn các nghiên cứu hiện tại báo cáo rằng 5a-reductase type 2 là isoenzyme chủ yếu trong mô tuyến tiền liệt và nó chịu trách nhiệm cho 2/3 lượng DHT lưu hành (Bartsch et al.2002b; Silver et al.1994a). Tuy nhiên, vai trò của 5o-reductase loại 1 và loại 2 trong sự phát triển của rầy nâu vẫn còn gây tranh cãi (Berman và Russell 1993; Bonnet et al. 1993; Shirakawa et al.2004; Silver et al.1994b; Thigpen et al.1993 ), và cần nhiều nghiên cứu sinh học và dược lý học trên các mô hình động vật khác nhau để giải quyết vấn đề này. Trong nghiên cứu này, điều trị CSE ức chế sự biểu hiện mRNA của 5a-reductase loại 1 và loại 2 so với nhóm được gây ra bởi BPH. Những dữ liệu này cho thấy rằng CSE liên kết cạnh tranh với 5a-reductase loại 1 và loại 2 và ngăn không cho testosterone chuyển hóa thành DHT.
Hình 4. Ảnh hưởng của việc sử dụng chiết xuất Cistanche salsa (CSE) trên sự biểu hiện của cảm ứng nitric oxide synthase (iNOS) và cyclooxygenase (COX) -2 trong các mô tuyến tiền liệt của các mô hình chuột do tăng sản lành tính tuyến tiền liệt (BPH) gây ra. Mức độ biểu hiện của các protein iNOS và COX -2 được xác định bằng phương pháp Western blotting sử dụng các kháng thể cụ thể. -actin đã được sử dụng như một kiểm soát nội bộ. Phân tích mật độ được thực hiện bằng phần mềm Bio-rad Quantity One @. Dữ liệu được hiển thị thể hiện trung bình ± SlEM của 6 con chuột mỗi nhóm. "" P<0.01 vs.con=""><><0.01 vs.="" bph="">
BPH đi kèm với sự phát triển không kiểm soát của mô và trong quá trình này, vi môi trường gây viêm xung quanh tế bào tuyến tiền liệt là kết quả của hoạt động tổng hợp NO và COX -2 (Nelson et al. 2003). Trong tất cả các tế bào viêm đến tuyến tiền liệt, iNOS có mặt, và nó có thể kích hoạt nitơ phản ứng có thể làm hỏng tế bào (Baltaci et al.2001). Các tế bào viêm trong biểu mô tuyến tiền liệt biểu hiện enzym này. NO cũng tăng cường hoạt động của COX -2, một chất trung gian gây viêm thứ hai. COX -2 đã được phát hiện trong tất cả các tế bào viêm ở biểu mô và mô kẽ
khoảng trống, và nó được gia tăng trong các tổn thương viêm tăng sinh, tạo ra các prostaglandin gây viêm (Sciarra et al. 2008). Do các báo cáo này, chúng tôi cũng đã kiểm tra xem liệu biểu hiện của iNOS và COX -2 có tăng lên hay không và liệu CSE có làm giảm biểu hiện của các protein này trong mô hình chuột cống BPH hay không. Trong nghiên cứu này, CSE đã ngăn chặn rõ rệt sự biểu hiện của iNOS và COX -2, và những dữ liệu này cho thấy rằng CSE có thể là một tác nhân mạnh để điều trị dược lý đối với BPH thông qua việc điều chỉnh biểu hiện protein liên quan đến viêm.
Hình 5. Ảnh hưởng của việc sử dụng chiết xuất Cistanche salsa (CSE) trên sự biểu hiện của các protein liên quan đến quá trình apoptosis trong các mô tuyến tiền liệt của các mô hình chuột gây ra tăng sản tuyến tiền liệt lành tính (BPH). (A) Mức độ biểu hiện của PARP -1 và procaspase {{4 }} các protein được xác định bằng phương pháp Western blotting sử dụng các kháng thể cụ thể. (B) Mức độ biểu hiện của các protein họ Bcl -2 được xác định bằng phương pháp thấm phương tây sử dụng các kháng thể cụ thể. -actin đã được sử dụng như một kiểm soát nội bộ. (C) Phân tích mật độ của dải Bax và Bcl -2 đã được thực hiện và dữ liệu (mật độ tương đối chuẩn hóa thành -actin) được vẽ dưới dạng tỷ lệ Bcl -2 / Bax. Phân tích mật độ được thực hiện bằng phần mềm Bio-rad Quantity One @. Dữ liệu được hiển thị đại diện cho trung bình ± SEM của 6 con chuột mỗi nhóm. "P<><><0.001 vs.con="" group;=""><><0.001vs.bph>
Trong BPH, các tế bào tuyến tiền liệt biểu hiện COX -2 có tỷ lệ tăng sinh cao hơn và gen chống apoptotic Bcl -2 được điều chỉnh (Wang et al.2004), cung cấp các mối tương quan giữa viêm, quá trình apoptosis và sự phát triển của tuyến tiền liệt sự mất cân bằng. Các protein họ Bcl -2 là chất trung gian chính của phản ứng apoptotic. Protein Bax, một thành viên của họ Bcl -2, thúc đẩy quá trình apoptosis bằng cách hình thành homodimer và giải phóng cytochrome c từ ty thể để phản ứng với căng thẳng (Walensky 2006). Trong nhiều hệ thống, các thành viên của Bcl {{7} } gia đình điều chỉnh quá trình apoptosis, với tỷ lệ Bcl -2 / Bax đóng vai trò là một chỉ báo về tính nhạy cảm của tế bào đối với quá trình apoptosis (Salakou et al. 2007). Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng CSE làm giảm rõ rệt mức Bcl chống apoptosis Biểu hiện protein -2 và mức độ biểu hiện protein Bax tăng lên trong mô hình BPH của chuột. Những dữ liệu này chỉ ra rằng BPH đã bị ức chế bởi một cơ chế chống apoptotic liên quan đến việc giảm tỷ lệ Bcl -2 so với Bax trong nhóm được điều trị bằng CSE và gợi ý rằng CSE rất có thể gây ra quá trình chết rụng thông qua con đường ty thể.
Trong nghiên cứu này, việc xử lý CSE dẫn đến việc kích hoạt caspase -3 và làm giảm biểu hiện protein của chất nền của nó, PARP -1, trong nhóm gây ra BPH. Ai cũng biết rằng caspase là một họ các protease cysteine phân cắt các protein mục tiêu tại các gốc aspartate cụ thể, và chúng tạo thành các thành phần chính của con đường apoptotic. Hai con đường khác biệt của quá trình chết rụng đã được xác định: quá trình chết rụng do ty thể bắt đầu, xảy ra thông qua caspase -9 và con đường qua trung gian thụ thể chết, yêu cầu caspase -8 (Mao và cộng sự 2010). Caspase -3 là một phân tử tác động chính trong con đường tự chết của tế bào phụ thuộc vào caspase, nó phân cắt một số protein tế bào, dẫn đến những thay đổi tự chết. Do đó, việc kích hoạt hoạt tính enzym của caspase -3 có thể cung cấp một cơ chế để bắt đầu chương trình apoptotic (Potokar và cộng sự.2003). Trước đây, nghiên cứu về cơ chế hoạt động mới của thuốc đối kháng o-adrenoceptor đã được Kyprianou et al đi tiên phong. (1998), người đầu tiên báo cáo về tác dụng gây apxe của doxazosin. Nghiên cứu này cho thấy điều trị bằng doxazosin làm tăng đáng kể hoạt động apoptotic của các tế bào mô đệm. Cùng một nhóm đã báo cáo rằng tác dụng của thuốc đối kháng o-adrenoceptor (terazosin và doxazosin) đối với quá trình apoptosis được trung gian bởi sự gia tăng biểu hiện TGF- và caspase 3 (Glassman và cộng sự.2001); dữ liệu này đã được xác nhận lại bởi Ilio et al. (2001) và được chứng minh là đúng ngay cả trong tế bào ung thư tuyến tiền liệt (Benning và Kyprianou 2002). Hơn nữa, Finasteride, một chất ức chế 5o-reductase chuyển đổi testosterone thành dihydrotestosterone trong các tế bào biểu mô và mô đệm của tuyến tiền liệt, điều hòa sự biểu hiện của Bcl -2 và Bcl-xL, làm cho các tế bào tuyến tiền liệt dễ bị apoptosis hơn (Huỳnh 2002). Tương tự, việc điều chỉnh các protein Xấu được phát hiện, chúng liên kết Bcl -2 và Bcl-xL với nhau, cuối cùng gây ra hiệu ứng pro-apoptotic. Một nghiên cứu khác báo cáo rằng quá trình apoptosis gây ra bởi Finasteride được trung gian bởi sự hoạt hóa của caspase, cung cấp thêm bằng chứng về các cơ chế phân tử tốt của hoạt động của nó (Bozec et al. 2005). Giống như các nghiên cứu này, dữ liệu của chúng tôi gợi ý rằng tác dụng chống tăng sinh của CSE có thể liên quan không chỉ đến việc ức chế sản xuất DHT trong huyết thanh mà còn liên quan đến việc kích thích quá trình apoptosis, bao gồm cả việc điều chỉnh vi môi trường gây viêm trong mô tuyến tiền liệt của chuột gây ra BPH.
Dựa trên nghiên cứu này, CSE có khả năng làm giảm trọng lượng tuyến tiền liệt và sản xuất DHT huyết thanh ở chuột gây ra BPH. Những tác động này của CSE có thể là do tỷ lệ Bcl -2 / Bax bị suy giảm và sự kích hoạt của caspase -3, dẫn đến cảm ứng quá trình apoptosis thông qua sự điều hòa giảm biểu hiện iNOS và COX -2. Kết quả từ nghiên cứu này cho thấy CSE có thể là một tác nhân điều trị tiềm năng để điều trị BPH.
