Benzylated Dihydroflavones và Isoquinoline có nguồn gốc từ vỏ cây của Diclinanona Calycina (họ Annonaceae) và độc tính tế bào của chúng

Để biết thêm thông tin, liên lạctina.xiang@wecistanche.com

trừu tượng: Diclinanona calycina RE Fries thường được gọi là "enviro", là một loài thuộc họ Annonaceae đặc hữu của Brazil. Trong quá trình tìm kiếm liên tục của chúng tôi về các hợp chất có hoạt tính sinh học từ cây họ Annonaceae Amazon, vỏ của D.calycina đã được nghiên cứu bằng các kỹ thuật sắc ký cổ điển mang lại 13 hợp chất (alkaloid và flavonoid) lần đầu tiên được mô tả ở D. calycina cũng như trong chi Diclinanona. Cấu trúc của các hợp chất cô lập này được thiết lập bằng cách phân tích mở rộng sử dụng quang phổ 1D / 2D-NMR kết hợp với MS. Các alkaloid phân lập được xác định thuộc các phân lớp: isoquinoline đơn giản, thali trực tuyến (1); aporphine, anonaine (2); oxoaporphine, liriodenine (3); benzyltetrahydroisoquinolines, (S) - (cộng) -reticuline (4); dehydro-oxonorreticuline (3, 4- dihydro -7- hydroxy -6- metoxy -1- isoquinolinyl) (3- hydroxy -4- metoxyphenyl) -methanone) (5 ); (cộng) -1 S, 2R-reticuline Ng-oxit (6); và (cộng) -1 S, 2S-reticuline N -oxide (7); tetrahydro protoberberine, coreximine (8); và pavine, bisnorargemonine (9). Trong khiflavonoidthuộc về benzylateddihydroflavones, isorhamnetin (10), dichamanetin (11), và hỗn hợp uvarinol (12) và isouvarinol (13). Hợp chất 5 lần đầu tiên được mô tả trong tài liệu như một sản phẩm tự nhiên. Hoạt động gây độc tế bào của các hợp chất chính được phân lập đã được đánh giá chống lại bệnh ung thư và các dòng tế bào không ung thư. Trong số các hợp chất được thử nghiệm, kết quả hứa hẹn nhất đã được tìm thấy đối với dihydroflavones dihydroflavones được benzyl hóa (10), và hỗn hợp của uvarinol (12) và isouvarinol (13), thể hiện hoạt tính gây độc tế bào vừa phải so với thử nghiệmtế bào ung thưdòng (<20.0 ug·ml-)="" and="" low="" cytotoxicity="" against="" the="" non-cancerous="" cell="" line="" mrc-5(="">25. 0 ug · mL-I). Dichamanetin (11) cho thấy hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60 và HCT116 với giá trị IC50 là 15,78 ug · mL-I (33,70 umol·LI) và 18,99 ug∶mL- （40,56 umol. L-）, tương ứng trong khi hỗn hợp uvarinol （12） và isouvarinol (13) thể hiện hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60, với giá trị IC5 là 9,74 ugs.mL -1 và HCT116, với IC50 giá trị của 17,31 ug. mL-I. Các hoạt động gây độc tế bào này có thể là do sự hiện diện của một hoặc nhiều nhóm hydroxy benzyl có trong các phân tử này cũng như vị trí mà các nhóm này được liên kết. Các hoạt động gây độc tế bào của reticuline, anonaine và liriodenine đã được thiết lập trước đây, với liriodenine là hợp chất mạnh nhất.

Từ khóa: Diclinanona đài hoa; ancaloit và dihydroflavon benzyl hóa; hoạt động độc tế bào

Click để tìm hiểu thêm về sản phẩm

1. Giới thiệu

Họ Annonaceae là một họ cây bụi và cây bụi nhiệt đới và cận nhiệt đới, bao gồm khoảng 112 chi và 2440 loài [1]. Một số loài được biết đến với các loại trái cây ăn được và các đặc tính làm thuốc] 2]. Cuộc điều tra hóa thực vật trước đây với một số loài thuộc họ Annonaceae đã dẫn đến việc phân lập và xác định đặc điểm của các lớp chất chuyển hóa thứ cấp khác nhau, chẳng hạn như monoterpenes, diterpenes, triterpenes, lignans,flavonoid, phenylpropanoids có nguồn gốc asarone, acetogenin, và chủ yếu là các alkaloid điển hình có nguồn gốc isoquinoline [3-7]. Một số chất chuyển hóa thứ cấp được phân lập từ các loài Annonaceae thể hiện các hoạt tính sinh học quan trọng, chẳng hạn như đặc tính chống viêm và ức chế men urease [8,9], trypanocidal [10,11], leishmanicidal [11,12], chống sốt rét [4,13] , hoạt động chống vi trùng [4,14,15], chống oxy hóa và chống tổn thương [9,15] và đặc biệt, hoạt động gây độc tế bào chống lại các dòng tế bào khối u khác nhau của con người [4,6,11, 16-21].

Mặc dù họ Annonaceae được coi là một họ nguyên thủy và được nghiên cứu kỹ lưỡng, nhưng rất ít nghiên cứu về hóa thực vật và / hoặc dược lý đã được thực hiện với các loài của nó [3]. Các nghiên cứu về hóa thực vật và / hoặc dược lý tập trung chủ yếu vào các loài thuộc các chi Annona, Asimina và Cananga, do tầm quan trọng về kinh tế của chúng, và trên một số loài thuộc các chi Duguetia, Guatteria và Xylopia [5]. Mặc dù có sự phát triển vượt bậc trong 20 năm qua liên quan đến các nghiên cứu về hóa thực vật và dược lý, số lượng loài được điều tra vẫn còn rất nhỏ so với một số lượng lớn các loài đã được công nhận. Hiện tại, theo cơ sở dữ liệu khoa học Web of Science, Scopus và SciFinder, chỉ khoảng 15% các loài thuộc họ Annonaceae được mô tả có bất kỳ nghiên cứu hóa thực vật và / hoặc dược lý tương ứng nào.

Trong số các loài ít được nghiên cứu có những loài thuộc chi Diclinanona Diels. Chi này thuộc bộ lạc Annoneae, thuộc phân họ Annonoideae, và chỉ xuất hiện ở vùng nhiệt đới Nam Mỹ (chủ yếu ở vùng Amazon). Nó là một chi chỉ bao gồm ba loài, Diclinanona calycina (Diels) RE Fries Diclinanona matogrossensis Maas và Diclinanona tessmannii Diels, xuất hiện dưới dạng cây [22-24]. D.calycina (từ đồng nghĩa Xulopia calycina Diels) là loài 8 to Cây cao 30 m, thường được gọi là "envireira" và "enviro", phân bố khắp lưu vực sông Amazon ở Brazil, Peru và Venezuela [23]. D.calycina bề ngoài giống với Xylopia về hoa của nó với cánh hoa thuôn dài và hẹp, nhưng nó khác với thân gỗ, hình cầu, hình cầu và lá đơn thành dày [23,24].

Các nghiên cứu trước đây với D. calycina chỉ báo cáo các nghiên cứu dược lý. Nghiên cứu đầu tiên mô tả việc điều tra hoạt tính kháng khuẩn của các chất chiết xuất từ ​​methanolic, chloroform và dung dịch nước chống lại các vi sinh vật Mycobacterium smegmatis, Escherichia coli, Streptococcus sanguis, Streptococcus oralis, Staphylococcus aureus và Candida albicans bằng phương pháp khuếch tán gel [25]. Báo cáo thứ hai báo cáo việc điều tra hoạt động kháng khuẩn của chất chiết xuất hữu cơ (dichloromethane: methanol 1: 1) và dung dịch nước chống lại vi sinh vật Enterococcus faecalis bằng cách sử dụng xét nghiệm canh trường pha loãng (MDBA) và xét nghiệm khuếch tán đĩa (DDA) [26]. Do đó, trong quá trình tìm kiếm liên tục các sản phẩm tự nhiên có hoạt tính sinh học mới từ Annonaceae từ rừng nhiệt đới Amazon, nghiên cứu này nhằm mục đích điều tra các đặc tính dược lý và hóa thực vật của vỏ cây D.calycina. Trong báo cáo này, mười ba hợp chất (chín ancaloit và bốn benzyl hóadihydroflavones) lần đầu tiên được phân lập và xác định ở D.calycina, cũng như trong chi Diclinanona. 4}} dòng tế bào khối u sử dụng xét nghiệm xanh Alamar.

2. Kết quả và thảo luận

2.1 Sự làm bóng cấu trúc của các hợp chất

Sau khi phát hiện ra sự hiện diện của các hợp chất chứa nitơ trong dịch chiết metanol bằng thuốc thử của Dragendorff, nó đã được xử lý axit-bazơ theo phương pháp của Costa và cộng sự. [12] dẫn đến các phần alkaloidal và trung tính. Một nồng độ cao của các hợp chất chứa nitơ đã được quan sát thấy trong phần alkaloid được phân tích sắc ký. Sự phân tách sắc ký liên tiếp, như được mô tả trong phần Chiết xuất và Phân lập, dẫn đến việc phân lập và xác định mười ba thành phần hóa học (1-13, Hình 1), chín ancaloit có nguồn gốc isoquinoline 1-9 và bốn dihydroflavon được benzyl hóa {{số 8}}. Cấu trúc của các hợp chất cô lập này (Hình 1) được thiết lập bằng phân tích mở rộng sử dụng quang phổ NMR 1D và 2D kết hợp với MS (Dữ liệu bổ sung), cũng như so sánh với dữ liệu từ tài liệu.

Hợp chất 5 thu được dưới dạng bột vô định hình màu nâu và có kết quả dương tính với thuốc thử Dragendorff. Nó cho thấy một phân tử proton hóa ở m / z328 [M cộng với H] 'trong MS tương thích với LR-ESI (cộng) với công thức phân tử C18H1NO5. Phổ 'H và 13C-NMR của 5 (Bảng 1) phù hợp với phổ của reticuline (4) [27, ngoại trừ sự vắng mặt của nhóm metyl liên kết nitơ (CH 3- N) và tín hiệu của nhóm methine ở vị trí 1, được thay thế bằng một tín hiệu ở δc 165,1 trong phổ 13C-NMR điển hình của nhóm imine liên hợp với một nhóm cacbonyl ở bc 192,8. Trong phổ 'H-NMR, ba hydro hydro trường xuống ở H 6,88 （1H, d, J =8. 4 Hz, H -5'）, 5H7,57 （1H, d, J {{33} }. 0 Hz, H -2 '） và δH 7,6 0 （1H, dd, J =8. 4 và 2,0 Hz, H -6'） , tiết lộ sự hiện diện của hệ thống khớp nối ABX. Hai tín hiệu đơn ở 6H 6,90 (1H, s, H -8) và 6,71 (1H, s, H -5) cho biết sự hiện diện của 1,2,4, 5- vòng phenyl tetrasubstit. Ngoài ra, phổ H-NMR của 5 cũng cho thấy tín hiệu cho hai nhóm metoxy cộng hưởng ở bH 3,93 (3H, s) và 6H 3,95 （3H, s）, và tín hiệu cho hai nhóm metylen cộng hưởng ở δμ 2,79 （2H, t, J =7. 8 Hz） và 6H 3,89 (2H, t, / =7. 8 Hz), được quy cho H -4 và H -3, tương ứng (Bảng 1) . Những dữ liệu này chỉ ra rằng alkaloid 5 có khung benzyltetrahydroisoquinoline [28-30].

Các nhóm này được thành lập dựa trên bản đồ Tương quan 'H {1}} hai liên kết và ba liên kết từ thí nghiệm HMBC-NMR (Hình 2 và Bảng 1). Phân tích này cho thấy hiđrô ở δH 3,89 （H -3） cho thấy mối tương quan ba dải 'H -13 C với các nguyên tử ở 6c13 0. 1 （4a） và δc165. { {42}} （C -1） và liên kết hai lH -13 C tương quan với cacbon atδc 25,4 (C -4), xác nhận sự có mặt của nhóm imine trong phân tử. Mặt khác, các tín hiệu tại δH 7,57 （H -2 '） và δH 7,60 （H -6'） cho thấy mối tương quan lH -13 C ba liên kết với các cacbon tại δc 124,3 （ C -6 '）, 5c 151,4 （C -4'） và δc192,8 （C -7）, và5c116.0 （C -2 '）, 6c 151,4 (C -4 ') và c 192,8 (C -7'), tương ứng, thiết lập nhóm cacbonyl trong phân tử (Hình 2 và Bảng 1). Do đó, dựa trên dữ liệu NMR này, hợp chất 5

được thành lập dưới dạng benzyltetrahydroisoquinoline alkaloid 34- dihydro -7- hydroxy -6- methoxy -1- isoquinolinyl) (3- hydroxy -4- methoxyphenyl) -methanone, là được đặt tên là dehydro-oxonorreticuline. Alkaloid này lần đầu tiên được mô tả trong y văn như một sản phẩm tự nhiên. Bản ghi đầu tiên và duy nhất của nó được mô tả bởi Dörnyei et al. vào năm 1982 【31】 như một sản phẩm có nguồn gốc tổng hợp. Chỉ dữ liệu'H-NMR được mô tả với một số phép nhân chưa xác định. Do đó, các bài tập hoàn chỉnh cho tất cả các chuyển dịch hóa học 1H- và 13C-NMR được thiết lập bằng các thí nghiệm tương quan một liên kết (HSOC) và hai và ba liên kết (HMBC) 'H {17}} C-NMR, và được mô tả trong Bảng 1.

Hợp chất 6 và 7 được xác định là ancaloit benzyltetrahydroisoquinoline (cộng) -1 S, 2R-reticuline-N -oxide, và (cộng) -1 S, 2S-reticuline-N -oxide, tương ứng. Dữ liệu H-NMR của những ancaloit này được so sánh với dữ liệu được mô tả bởi Lee et al. [28] bằng cách sử dụng cùng một dung môi đã khử hóa (CD3OD) và một số điểm không nhất quán đã được quan sát thấy (Bảng 1), chủ yếu liên quan đến H -1, H -8 và H, C-NO. Không có dữ liệu 13C-NMR được mô tả cho các ancaloit này trong tài liệu. Dựa trên dữ liệu hạn chế 1H- và 13C-NMR, cũng như sự mơ hồ quan sát được đối với các phân tử này, các thí nghiệm NMR 'H và 13C 1D và 2D đã được thực hiện để xác định các phép gán và phép nhân chính xác của chúng.

Vị trí chính xác của hydro H {{0}} và H -1 của cả đồng phân 6 và 7 được thiết lập dựa trên bản đồ tương quan ba liên kết 'H -13 C từ HMBC -Thí nghiệm -NMR （Hình2）. Đối với đồng phân 6, phép phân tích cho thấy rằng hydro ở δH 5,78 （H -8） cho thấy mối tương quan ba liên kết 'H -13 C với các nguyên tử cacbon ở 6c 79,8 （C -1）, δc120 .6 （4a）, và δc 149.4 （C -6）, trong khi hydro ở δH 4,13 （H -1） cho thấy mối tương quan ba liên kết 'H -13 C với các nguyên tử tại c 60,7 （C -3）, 6c 115,7 （C -8）, δc 120,6 （C -4 a） và 131,2 （C -1 '）, do đó thiết lập vị trí chính xác của hiđro H -8 và H -1 cho đồng phân 6. Sự phân bổ này có thể được khẳng định thêm bằng phân tích hiđro ở δH 6,76 （H -5） cho thấy liên kết ba H -13 Tương quan C với các cacbon atδc 27.0 （C -4）, δc 127.1 （C -8 a） và δc 145.7 （C -7） （Hình2）. Đối với đồng phân 7, phép phân tích cho thấy hydro ở δH 6,30 （H -8） cho thấy mối tương quan ba liên kết 'H -13 với các nguyên tử cacbon ở δc 79,4 （C -1）, δc 122,8 （ 4a）, và δc 148,9 （C -6）, trong khi hydro ở δH 4,46 （H -1） cho thấy mối tương quan ba liên kết H -13 C với các nguyên tử ở δc 62,9 （C { {82}}）, 5c 115,5 （C -8）, bc 122,8 （C -4 a）, và 131,4 （C -1 '）, do đó thiết lập vị trí chính xác của hydro hydro H -8 và H -1 cho đồng phân 7. Phân bổ này cũng được xác nhận bằng phân tích hydro ở δH 6,71 （H -5） cho thấy liên kết ba lH -13 C tương quan với các cacbon tại δc26,3 （C -4）, δc 126,9 （C -8 a）, và 6c 146,1 （C -7） (Hình 2). Thí nghiệm NOESY cũng được thực hiện để thiết lập hóa học lập thể chính xác của các đồng phân 6 và 7. Trong thí nghiệm này, mối tương quan NOE mạnh của H -1 （δH 4,13） và H, CN (5 3. 15) chỉ ra rằng - định hướng của oxy trong đồng phân 6. Mặt khác, không có mối tương quan NOE rõ ràng nào giữa H {122}} (6H 4,46) và HAC-N (5H 3,20) có thể được tìm thấy trong thí nghiệm 2D-NOESY cho 7, cho biết định hướng của oxi trong đồng phân 7 (Hình 2). Những khác biệt nhỏ trong sự chuyển dịch hóa học của các đồng phân này được quan sát thấy rõ ràng do tính chất lập thể của nitơ bị ảnh hưởng bởi vị trí và vị trí của oxy. So sánh dữ liệu 'H-và 13C-NMR thu được đối với các hợp chất 6 và 7 với dữ liệu của các phân tử có cấu trúc gần nhau như hexapetaline A và hexapetaline B [30] hỗ trợ dữ liệu được mô tả trong Bảng 1 mà không có sự mơ hồ.

Hợp chất 1-4 và 8-13 được xác định là thalifoline (1) [32], anonaine (2) [33] liriodenine (3) [10,34], (S) - (plus) -reticuline ( 4) [27], coreximine (8) [34,35], bisnorargemonine (9) [36], isochamanetin (10) [37], dichamanetin (11) [37] và hỗn hợp của uvarinol (12) và isouvarinol (13) [37] dựa trên cấu hình quang phổ của chúng và so sánh với các giá trị trong tài liệu. Phổ lH-và 13C 1D và 2D-NMR, cũng như phổ khối của tất cả các hợp chất được phân lập, có sẵn dưới dạng Vật liệu bổ sung.

Từ quan điểm hóa học (một thuật ngữ mới cho hệ thống hóa học thực vật / hóa học thực vật), điều quan trọng cần lưu ý là sự hiện diện của C-benzyl hóa flavanones và C-benzyl hóa dihydrochalcones là một loại flavonoid đặc biệt có nguồn gốc từ flavanone pinocembrin nổi tiếng. và đã được mô tả đặc biệt ở các loài thuộc chi Uoaria thuộc họ Annonaceae [3, 38-42]. Sự hiện diện của các hợp chất này trong D. calycina cho thấy mối quan hệ hóa học gần gũi với Uoaria. Flavanones và chalcones phổ biến ở thực vật bậc cao, nhưng việc bổ sung các nhóm benzyl là khá hiếm và dường như chỉ giới hạn trong họ Annonaceae đến chi Uoaria [3, 39-42] và bây giờ là chi Diclinanona. Các nhóm benzyl có lẽ phát sinh từ đường dẫn C 6- C1, nhưng chức năng o-hydroxy là không bình thường. Sự vắng mặt của các nhóm thế ở vòng B trong tất cả các flavonoid này của Uoaria và Diclinanona có thể liên quan đến quan sát trước đó về các flavonoid của Popowia cauliflora [38].

Các ancaloit có nguồn gốc isoquinoline được phân lập và mô tả trong công trình này đã được đăng ký trong một số loài thuộc họ Annonaceae trong các chi khác nhau. Một số trong số này, chẳng hạn như liriodenine và anonaine, được coi là các dấu hiệu hóa học và sự hiện diện của các ancaloit này trong D.calycina càng củng cố thêm mối quan hệ của các dấu hiệu hóa học này trong họ Annonaceae [5-7, 15,20,27, 33-35, 43].

Điều đáng nói là, theo Zidorn [44], các nghiên cứu từ hóa học được định nghĩa là các nghiên cứu nhằm mô tả mảng các chất chuyển hóa thứ cấp chuyên biệt trong một đơn vị phân loại nhất định, như đã được quan sát trong một số công trình đã xuất bản [5-7, 15,20 , 27, 33-35, 43-46]. Do đó, các nghiên cứu hóa học góp phần vào việc mô tả từ tính của đơn vị phân loại, tương tự như các phương pháp tiếp cận giải phẫu, hình thái học và nhân học, vốn đã được công nhận là có tầm quan trọng lớn đối với việc thiết lập các hệ thống "tự nhiên" và tiếp tục có tầm quan trọng cực kỳ quan trọng đối với mô tả các sinh vật được phân loại với sự trợ giúp của các phương pháp phân tử hiện đại [44].

2.2. Thử nghiệm chất độc tế bào

Hoạt tính gây độc tế bào in vitro của các hợp chất được phân lập (Bảng 2), ngoại trừ các hợp chất 2, 3,5 và 8 (do năng suất thấp), đã được đánh giá dựa trêntế bào ung thưdòng HL -60 (bệnh bạch cầu nguyên bào nuôi ở người), MCF -7 (ung thư biểu mô tuyến vú ở người), HepG2 (ung thư biểu mô tế bào gan ở người), HCT116 (ung thư biểu mô ruột kết ở người) và dòng tế bào không ung thư MRC {{5} } (nguyên bào sợi phổi người) sử dụng xét nghiệm xanh Alamar sau 72 giờ ủ.

Among the compounds evaluated (Table2), the most promising results were verified for benzylated dihydroflavones dichamanetin (10), and the mixture of uvarinol (12)and isouvarinol (13), which showed moderate cytotoxic activity against the tested cancer cell lines and low cytotoxicity against the non-cancerous cell line MRC-5(>25. 0 ug.mL -1). Dichamanetin (11) cho thấy hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60 và HCT116 với giá trị IC5 0 là 15,78 ug · mL -1 （33,7 0 μmol·L -1） và 18,99 ug · mL -1 （40,56 umol.L -1）, tương ứng. Hỗn hợp uvarinol (12) và isouvarinol (13) đã chứng minh hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60, với giá trị ICs0 là 9,74ug∶mL -1 và HCT116, với giá trị ICs0 là 17,31 ug∶mL { {30}}. Trong số các dihydroflavon được benzyl hóa, chỉ có isorhamnetin (10) cho thấy hoạt tính gây độc tế bào chống lại HepG2 với giá trị IC50 là 19,79 ugs: mL -1 (54,65 umol.L -1). Theo tài liệu, dihydroflavone benzyl hóa được mô tả có đặc tính gây độc tế bào [39-42]. Trong số những chất được mô tả trong nghiên cứu này, isorhamnetin (10), dichamanetin (11) và uvarinol (12) được mô tả trong các đặc tính gây độc tế bào ống nghiệm chống lại các dòng tế bào khối u của người ung thư biểu mô vòm họng (KB) và bệnh bạch cầu lympho P -388 (PS) với các giá trị IC50 lần lượt là 5,3 và 4,1,4,8 và 1,8, và 5,9 và 9,7, ug.mL -1 [39,40]. Những hoạt động khác nhau này có thể là do sự hiện diện của một hoặc nhiều nhóm hydroxy benzyl có trong phân tử cũng như vị trí mà các nhóm này được liên kết. Tuy nhiên, cần phải điều tra thêm để xác nhận nhận định này.

Hoạt tính gây độc tế bào in vitro của ancaloit có nguồn gốc isoquinoline anonaine (2), liri-adenine (3), và (S) - (cộng) -reticuline (4) đã được Menezes và cộng sự mô tả gần đây. [2 {{16 }}], Souza và cộng sự. [6] và Costa và cộng sự. [43] nhấn mạnh vào liriodenine, đã chứng minh hoạt tính gây độc tế bào mạnh chống lại các dòng tế bào ung thư B {{1 0}} F1 0 (u ác tính ở chuột), HepG2 (ung thư biểu mô tế bào gan ở người), HL {{13 }} (bệnh bạch cầu nguyên bào tủy ở người) và K562 (bệnh bạch cầu nguyên bào tủy mãn tính ở người） với giá trị IC5s0 dưới 10,0 μmol.L -1 【43】. Anonaine cho thấy hoạt động vừa phải đối với B 16- F10, HepG2, HL60 và K562 với giá trị IC50 thấp hơn 19,0 umol.L -1 [20]. (S) - (cộng) -Reticuline chỉ cho thấy hoạt động vừa phải đối với HepG2 với giá trị IC50 là 15,35 μmol L -1 【 6,20】.

3. Vật liệu và Phương pháp

3.1. Quy trình thí nghiệm chung

Sự quay quang học trong metanol (MeOH) được ghi lại bằng máy đo phân cực P {{0}} (Jasco, Tokyo, Nhật Bản) ở bước sóng 589 nm. Các thí nghiệm NMR 1D và 2D được thu nhận trong CDCl. (cloroform-d) hoặc CDCl cộng với giọt CD, OD (metanol-du, và CD, COCD3 (axeton-d6) ở 298 K trên máy quang phổ AVANCE I HD NMR (Bruker, Billerica, MA, USA) hoạt động ở 11,75 T (Hand 13C ở 5 00 và 125 MHz, tương ứng) và trên máy đo phổ kế Bruker AVANCE I 6 0 0 NMR hoạt động ở 14,1 T ('H và 13Cat 6 0 { {63}} và 15 0 MHz tương ứng). Tất cả các dịch chuyển hóa học lH- và13C-NMR （δ） được trình bày bằng ppm so với tín hiệu tetramethylsilan ở 0. 00 ppm như một tham chiếu bên trong và hằng số ghép nối (D) được tính bằng Hz. Máy đo phổ NMR được trang bị đầu dò phát hiện nghịch đảo đa hạt nhân 5- mm (thí nghiệm NMR 1D và 2D) với gradient z. Một liên kết (HSQC) và hai và các thí nghiệm tương quan ba liên kết (HMBC) 1H -13 C-NMR được tối ưu hóa cho hằng số ghép nối trung bình 'JcH và LRJ (cH tương ứng là 140 và 8 Hz. Đối với phân tích khối phổ có độ phân giải thấp (LC-MS), mẫu của các hợp chất phân lập được trộn lại trong metanol (loại HPLC), tạo ra mùi k dung dịch (1 mg · mL -1). Phần nhỏ (5 uL) của các dung dịch gốc được pha loãng thêm đến 5 ug · mL-và được phân tích bằng cách truyền trực tiếp vào máy đo khối phổ ba cực bốn cực, kiểu TSO Quantum Access (Thermo Scientific, San Jose, CA, USA), được trang bị ion hóa tia điện (ESI) hoặc nguồn ion hóa hóa học áp suất khí quyển (APCI). Điều kiện ESI-MS: điện áp phun, 5kV; khí vỏ bọc, 10 đơn vị tùy ý (arb); khí phụ, 5arb; khí quét, 0arb; nhiệt độ mao dẫn, 250 độ; điện áp mao dẫn, 40 V; thấu kính ống, 70 V; phạm vi khối lượng, m / z 100 đến 1000. Điều kiệnAPCI-MS: dòng phóng, 5 μA; nhiệt độ máy hóa hơi, 350 độ; áp suất khí vỏ, 25 đơn vị tùy ý （arb）; áp suất khí quét ion, 0,0 arb; Áp suất khí aux, 10 arb; nhiệt độ mao quản, 250 độ C; ống kính bù trừ, 70 V; phần bù skimmer, 0 V; phạm vi khối lượng, m / z 100 đến 1000. Argon được sử dụng làm khí va chạm, và phổ MS / MS thu được khi sử dụng năng lượng va chạm trong khoảng từ 25 đến 30 eV. Silica gel60 (Sigma-Aldrich, San Luis, MO, USA, 70-230 mesh) được sử dụng cho sắc ký cột (CC), trong khi silica gel 60 F254 (Macherey-Nagel, Düren, Germany, 0,25 mm, nhôm) được sử dụng để phân tích và chuẩn bị với sắc ký mỏng (PTLC) (Macherey-Nagel, 1,00 mm, thủy tinh). Các hợp chất được hình dung bằng cách tiếp xúc dưới ánh sáng UV254 / 365, bằng cách phun thuốc thử p-anisaldehyde sau đó đun nóng trên bếp điện và bằng cách phun thuốc thử Dragendorff.

3.2 Chất liệu cây trồng

Trong cuộc điều tra hiện tại, vật liệu thực vật (vỏ cây) của D.calycina được thu thập vào ngày 27 tháng 5 năm 2017 tại Khu bảo tồn Adolpho Ducke (tọa độ địa lý: 02 độ 53'36.1S và 59 độ 58'28.9 "W), Manaus, Bang Amazonas , Brazil, và được xác định bởi Giáo sư Tiến sĩ Antonio Carlos Webber, nhà phân loại thực vật thuộc Khoa Sinh học của Đại học Liên bang do Amazonas (DB / UFAM). Một mẫu chứng từ số 10.810 đã được gửi tại Herbarium của DB / UFAM. quyền truy cập (mẫu vật) đã được đăng ký tại Sistema Nacional de Gestao do Patrimonio Genetico e do Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) với hồ sơ A70EDCD.

3.3. Chiết xuất và cô lập

Vỏ của D.calycina ban đầu được làm khô ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ và sau đó được làm khô trong tủ sấy lưu thông không khí trong 48 giờ ở nhiệt độ 40 độ, và sau đó được nghiền thành bột trong máy xay nghiền bốn dao (Marconi, Piracicaba, SP , Brazil) để thu được nguyên liệu dạng bột (1340 g). Sau đó, một quá trình hấp thụ hết với hexan (8 × 4 L) tiếp theo là MeOH (8 × 4 L) được thực hiện. Các dung dịch chiết xuất thu được được cô đặc trong thiết bị cô quay ở áp suất giảm (40-50 độ) để tạo ra các chất chiết xuất hexan (24,85 g) và MeOH (199,43 g) tương ứng.

Phân tích TLC được tiết lộ với thuốc thử của Dragendorff cho thấy sự hiện diện cao của ankan trong MeOHextract. Do đó, một phần chiết xuất MeOH (188,3 {0 g) ban đầu được chiết xuất bằng axit-bazơ để tạo ra các phần alkaloid (5,46 g) và trung tính (4,47 g). Sau đó, một phần của phần alkaloid (5. 0 g) được đưa vào cột sắc ký silica gel (CC) trước đó đã được xử lý bằng dung dịch NaHCO3 10 phần trăm [12], được rửa giải bằng hexan (100 phần trăm), hexan-CHCl, (90: 10,80: 20,70: 30,60: 40,50: 50,40: 60,30: 70,20: 80 và 10: 90, v / o), CH2Cl2 (100 phần trăm), CH2Cl 2- EtOAc (90: 10,80: 20,70: 30,60: 40,50: 50,40: 60,30: 70,20: 80 và 10: 90,0 / u), EtOAc (100 phần trăm), EtOAc-MeOH (95:05, 90: 10,85: 05, 80: 10,75: 25, 70: 30,60: 40, 50: 50,40: 60, 30: 70,20 : 80 và 10:90, v / o), và cuối cùng là MeOH tạo ra 250 phân đoạn (mỗi phân đoạn 30 mL) .Sau khi đánh giá TLC bằng cách sử dụng hỗn hợp CH2Cl 2- MeOH theo tỷ lệ 95:05, 90:10, 85:15 và 80:20 với tư cách là hệ thống rửa giải (v / o), các mẫu tương tự được gộp lại để tạo ra 16 phân số (F1 đến F16).

Phần F5 (181,2 mg) từ CC ban đầu được rửa giải bằng hexan-CH, Cl2 (50:50 đến 10: 90, v / o) chịu một loại silica gel mới, sử dụng cùng một phương pháp ở trên được rửa giải bằng hexan (100%), hexan -CH, Cl2 (90: 10,80: 20,70: 30,60: 40,50: 50,40: 60,30: 70,20: 80 và 10: 90, v / o), CH, Cl , (100 phần trăm), CHCl 2- EtOAc (90: 10,80: 20,70: 30,60: 40,50: 50,40: 60,30: 70,20: 80 và 10:90 , o /), EtOAc (100 phần trăm), EtOAc-MeOH (85: 15,70: 30,50: 50, 30:70 và 15:85, / o) và MeOH (100 phần trăm) có 118 phân số ( 15 mL mỗi) được gộp thành 12 phân đoạn con (F5.1 đến F5.12), theo đánh giá phân tích TLC bằng cách sử dụng hỗn hợp CH2Cl 2- MeOH theo tỷ lệ 95:05 và 90:10 Phân đoạn F5 .1 (28,9 mg) được rửa giải bằng hexan (100%) đã được điều chế TLCeled với CH, Cl-MeOH (95: 05, v / v, hai lần rửa giải) tạo thành 2 (1,4 mg) và 3 (1,7 mg), tương ứng. Các phân đoạn F5.4 (21,5 mg) được rửa giải bằng hexan-CH, C (80: 20, vo), F5,5 (16,7 mg) được rửa giải bằng hexan-CH, Cl (80: 20,70: 30,60; 40 và 50:50 , v /), và F5.6 (15,4 mg) được rửa giải bằng hexan-CHCl2 (50: 50,40: 60, và 30:70, v / o) được gộp lại (53,6 mg) và cũng được rửa giải TLC điều chế. với CH, Cl-MeOH (95:05, v / u, hai lần rửa giải) thu được 3 (8,9 mg).

Phần F6 (2 0 99,1 mg) từ CC ban đầu được rửa giải bằng hexan-CHCl (1 0: 9 0, v /)), CH2Cl, (1 0 0 phần trăm), và CH, Cl 2- EtOAc (90:10 đến 10:90, o / o) phải chịu một loại silica gel mới CC bằng cách sử dụng cùng một phương pháp ở trên được rửa giải với cùng hệ thống dung môi tạo ra 140 phần (30 mỗi ml). Sau khi đánh giá TLC bằng cách sử dụng hỗn hợp CH2Cl 2- MeOH theo tỷ lệ 95:05, 90:10 và 85:15 như hệ thống rửa giải (o / o), các mẫu tương tự được gộp lại để tạo ra 13 phần nhỏ (F6 .1 đến F6.13). Phân đoạn F6.6 (1541,3 mg) được cho vào một silica gel CC mới bằng cách sử dụng cùng một phương pháp ở trên được rửa giải bằng các hệ dung môi giống nhau tạo ra 120 phân đoạn (mỗi phân đoạn 30 mL) được phân tích bằng TLC (sử dụng cùng một phương pháp ở trên) tạo ra 12 phân đoạn mới. phân số con (F6.6.1 đến F6.6.12). Phân đoạn F6.6.2 (17,0 mg) được rửa giải bằng hexan-CH, Cl, (60:40 và 50: 50, v / v) đã phải chịu một TLC so sánh được pha với CH2Cl 2- MeOH (90:10, v / o, một lần rửa giải) dẫn đến 3 (1,4 mg). Phân đoạn F6.6.3 (643,3 mg) được rửa giải bằng hexan-CH2Cl2 (50:50, 40:60, 30:70, 20:80 và 10:90, o / v), CH2Cl2 (100 phần trăm) và CH2Cl 2- EtOAc (90:10 và 80: 20, o / o) được nối phụ với một TLC so sánh được phân phối với CH2Cl 2- MeOH (90 : 10, vfo, một lần rửa giải) tạo ra một phân đoạn mới F6.6.3.1 (161,8 mg) chịu một TLC điều chế mới được rửa giải bằng EtOAc-MeOH (90:10, v / o, một lần rửa giải) theo 4 (148.2 mg). Phân đoạn F6.6.4 (90.2 mg) được rửa giải bằng CH2Cl 2- EtOAc (70:30 và 60: 40, o / o) đã được trải qua một phần TLC trước với CH2Cl-MeOH (90:10, v / o, một lần rửa giải) thu được lần lượt là 1 (1,4 mg) và 4 (50,1 mg). Phân đoạn F6.6.5 (83.4 mg) được rửa giải bằng CH, Cl-EtOAc (60:40 và 50:50, o / o) cũng chịu sự so sánh TLCeled với CH, Cl 2- MeOH (90:10, ufo, một lần rửa giải) lại tạo ra 1 (1,5 mg) và 4 (45,5 mg), tương ứng. Phân đoạn F6.6.6 (101.4 mg) được rửa giải bằng CH, Cl 2- EtOAc (50:50 và 40:60, v /)) chịu một TLC tiền điện giải được rửa giải bằng CH, Cl-MeOH (90: 10, vfo, một lần rửa giải) cho 8 (3,4 mg) và phần con khác F6.6.6.1 (48,8 mg). Phần con này (F6.6.6.1) chịu sự phân cực trước TLC được tạo ra ban đầu bằng EtOAc-MeOH (85 : 15, vo, một lần rửa giải) và CHCl-MeOH sau (90: 10, v / v, một lần rửa giải) lại thu được 4 (37,4 mg). Đối với quy trình này, đĩa sắc ký ban đầu được rửa giải bằng pha động EtOAc-MeOH (85:15, v / o, một lần rửa giải). Sau khi rửa giải này, đĩa sắc ký được làm khô để di chuyển lại dung môi và sau đó được rửa giải mới với pha động CH, Cl, -MeOH (90: 10, vf, một lần rửa giải) thu được 4 phân đoạn F6.6.7 ( 109,0 mg) được rửa giải bằng CH, Cl 2- EtOAc (40: 60,30: 70,20: 80 và 10: 90, vfo) chịu một TLC điều chế được rửa giải bằng CH, Cl {2- MeOH (90: 10, vo, một lần rửa giải) cho một phân đoạn F6.6.7.1 (24,8 mg) khác chịu một TLC điều chế mới được rửa giải ban đầu bằng EtOAc-MeOH (85:15, v / o, một lần rửa giải) và sau đó CH2Cl 2- MeOH (90: 10, vfo, một lần rửa giải) thu được 9 (11,1 mg). Quy trình phân lập được sử dụng cho 9 cũng giống như được mô tả trước đây đối với 4. Phân đoạn F6.6.10 (92,0 mg) được rửa giải bằng EtOAc-MeOH (60:40 và 50:50, v / o) được trải qua một TLC so sánh trước với CH, Cl, -MeOH (90:10, v / o, một lần rửa giải) thu được lần lượt là 5 (1,7 mg) và 6 (7,8 mg). Phân đoạn F6.6.11 (326,0 mg) được rửa giải bằng EtOAc-MeOH (50: 50,40: 60,30: 70,20: 80, và 10: 90, v / o) đã được thử nghiệm tiền điện ly được pha bằng CHCl- MeOH (90: 10, v / o, một lần rửa giải) tương ứng với 1 (2,4 mg) và 7 (12,5 mg).

Phần F7 (692,4 mg) từ CC ban đầu được phân tách bằng EtOAc (100 phần trăm) và CHCl 2- EtOAc (95: 05,90: 10,85: 15, và 75: 25, ofo) được tạo thành một loại gel silica mới CC bằng cách sử dụng cùng một phương pháp luận như được mô tả cho CC ban đầu với các hệ dung môi giống nhau tạo ra 110 phần (mỗi phần 30 mL) .Sau khi đánh giá TLC bằng cách sử dụng hỗn hợp CH2Cl 2- MeOH theo tỷ lệ 95:05, 90:10 và 85 : 15 như hệ thống rửa giải (o / o), các sam-ples tương tự được gộp lại để tạo ra 12 phân đoạn con (F7.1 đến F7.12). F7.8 (147,4 mg) được rửa giải bằng CH, Cl 2- EtOAc (50: 50,40: 60, và 30: 70, v / o phần trăm) đã phải chịu một TLC chuẩn bị rửa giải bằng CHCl-MeOH (95:05, vfo, một lần rửa giải) cho 10 (5,4 mg) và 11 ( Tương ứng là 120,6 mg). F7,9 (144,2 mg) được rửa giải bằng CHCl 2- EtOAc (30:70, 20:80 và 10:90, v / o phần trăm) cũng phải chịu một TLC so sánh với CH, Cl, -MeOH ( 95: 05, vo, một lần rửa giải) tương ứng với 11 (91,2 mg) và hỗn hợp 12 và 13 (39,4 mg).

Thalifoline (1): Bột vô định hình màu nâu; ' H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [32]; LR-ESI (cộng) -MS [M cộng với H] * cộng với m / z 208.

Anonaine (2): Bột vô định hình màu nâu; 1H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [33]; LR-ESI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 266.

Liriodenine (3): Tinh thể màu vàng (CH, Cl-MeOH 3: 1); 1H-NMR và 13C-NMR theo tài liệu [10,34]; LR-ESI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 276.

(S) - (cộng) -Reticuline (4): Bột vô định hình màu nâu; [] p25 cộng với 71,6 0 (c 0,05 g / 100 mL, MeOH); 1H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [27; LR-ESI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 30.

3, 4- Dihydro -7- hydroxy -6- metoxy -1- isoquinolinyl) (3- hydroxy -4- metoxyphenyl) -methanone (Dehydro-oxonorreticuline) (5 ): Bột vô định hình màu nâu; Dữ liệu 'H và 13C-NMR, xem Bảng 1; LR-ESI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 328.

(cộng) {{0}} S, 2R-Reticuline N -oxide (6): Bột vô định hình màu nâu; [lp25 cộng với 136,4 (c0,146g / 100 mL, MeOH); Dữ liệu 1Hand 13C-NMR, xem Bảng 1; LR-APCI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / 2346

(cộng) {{{0}} S, 2S-Reticuline N.-oxit (7): Bột vô định hình màu nâu; [] p25 cộng với 394,5 (c 0,03g / 100 mL, MeOH); 'dữ liệu H và 13C-NMR, xem Bảng 1; LR-APCI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z346.

Coreximine (8): Bột vô định hình màu vàng nhạt; [] p25 cộng với 2 0 1,1 (c 0,08g / 100mL, MeOH) 'H-NMR và 13C-NMR theo tài liệu [34,35]; LR- ESI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 328.

Bisnorargemonine (9): Bột vô định hình màu nâu; 1H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [36]; LR-APCI (cộng) -MS [M cộng với H] cộng với m / z 328.

Isochamanetin (1 0): Bột vô định hình màu vàng nhạt; [p 25-12. 4 (c 0,5 g / 100 mL, MeOH) 'H-NMR và 13C-NMRin theo tài liệu [37; LR-APCI (-) - MS [MH] -m / z361.

Dichamanetin (11): Bột vô định hình màu vàng; [] D 25-10. 7 (c 0. 5g / 100 mL, MeOH); 1H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [37]; LR-ESI (-) - MS [MH] -m / z467.

Hỗn hợp uvarinol (12) và isouvarinol (13): Bột vô định hình màu vàng; H-NMR và 13C-NMR phù hợp với tài liệu [37]; LR-ESI (-) - MS [MH] - m / z 573.

3.4. Trong thử nghiệm gây độc tế bào trong ống nghiệm

3.4.1.

HL -60 (bệnh bạch cầu nguyên bào nuôi ở người), MCF -7 (ung thư biểu mô tuyến vú ở người), HepG2 (ung thư biểu mô tế bào gan ở người), HCT116 (ung thư biểu mô ruột kết ở người) và MRC -5 (nguyên bào sợi phổi ở người) các dòng tế bào thu được từ Bộ sưu tập nuôi cấy loại Mỹ (ATCC, Manassas, VA, USA), và được nuôi cấy theo khuyến cáo của hướng dẫn nuôi cấy tế bào động vật ATCC. Tất cả các dòng tế bào được kiểm tra mycoplasma bằng cách sử dụng bộ nhuộm mycoplasma (Sigma-Aldrich) để xác nhận việc sử dụng các tế bào không bị nhiễm bẩn.

3.4.2. Thử nghiệm độc tính tế bào

Đối với xét nghiệm độc tính tế bào, khả năng sống sót của tế bào được định lượng bằng phương pháp Alamar blue, như đã mô tả trước đây [{{0}}]. Đối với tất cả các thí nghiệm, các tế bào được mạ trong 96- đĩa giếng. Các thành phần hóa học được hòa tan trong dimethyl sulfoxide (DMSO, Vetec Ouimica Fina Ltda., Duque de Caxias, RJ, Brazil) và thêm vào mỗi giếng và ủ trong 72 giờ. Doxorubicin (doxorubicin hydrochloride, độ tinh khiết Lớn hơn hoặc bằng 95 phần trăm, Phòng thí nghiệm IMA SAIC, Buenos Aires, Argentina） được sử dụng như một đối chứng dương tính. Khi kết thúc điều trị, 20 μL dung dịch gốc (0,312 mg / mL) resazurin (Sigma-Aldrich Co.) đã được thêm vào mỗi giếng. Độ hấp thụ ở bước sóng 570 nm và 600 nm được đo bằng thiết bị đọc Microplate SpectraMax190 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Nồng độ nửa ức chế (IC50) thu được bằng phương pháp hồi quy phi tuyến với khoảng tin cậy 95 phần trăm (CI95 phần trăm) bằng cách sử dụng phần mềm GraphPad Prism (Phần mềm Trực quan cho Khoa học; San Diego, CA, Hoa Kỳ).

4.Kết luận

Việc điều tra hóa thực vật của vỏ cây D.calycina đã dẫn đến việc phân lập và xác định mười ba hợp chất (1-13); chín ancaloit có nguồn gốc isoquinoline (1-9) và bốnflavonoid(10-13). Các alkaloid thuộc các phân lớp sau: isoquinoline đơn giản, thali trực tuyến (1); aporphine, anonaine (2); oxoaporphine, liriodenine (3); benzyl-tetrahydroisoquinolines, (cộng) -reticuline (4), de hydro-oxonorreticuline (3, 4- dihydro -7- hydroxy -6- metoxy -1- isoquinolinyl) ({{13} } hydroxy -4- metoxyphenyl) -methanone) (5), 1S, 2R-reticuline Ng-oxit (6) và 1S, 2S-reticuline N.-oxit (7); tetrahydro protoberberine, coreximine (8); và pavine, bisnorargemonine (9). Trong khi các flavonoid thuộc về dihydroflavone benzyl hóa, isorhamnetin (10), dichamanetin (11), và hỗn hợp của uvarinol (12) và isouvarinol (13). Các hợp chất phân lập được mô tả lần đầu tiên ở D.calycina cũng như trong chi Diclinanona.

Hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất được phân lập (ngoại trừ anonaine, liriodenine, 1, 2- dihydro-oxonorreticuline và coreximine) được đánh giá chống lại ung thư (HL -60, MCF -7, HepG2, và HCT116) và các dòng tế bào không ung thư (MRC -5). Trong số đó, các kết quả hứa hẹn nhất đã được quan sát đối với dihydroflavones dichamanetin được benzyl hóa (10), và

hỗn hợp uvarinol (12) và isouvarinol (13) cho thấy hoạt tính gây độc tế bào vừa phải chống lại các dòng tế bào ung thư được thử nghiệm （<20.0μg.ml-1）and low="" cytotoxicity="" against="" the="" non-cancerous="" cell="" line="" mrc-5(="">25. 0 ug · mL- '). Dichamanetin (11) cho thấy hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60 và HCT116 với giá trị IC50 là 15,78ug · mL -1 （33,70 μmol-L -1） và 18,99 ug · mL-I （40,56 μmol .L -1）, tương ứng trong khi hỗn hợp uvarinol （12） và isouvarinol (13) thể hiện hoạt tính gây độc tế bào chống lại HL -60, với giá trị IC50 là 9,74 ug∶mL-I và HCT116, với IC50 giá trị của 17,31 ug · mL -1. Những kết quả này trên các dòng tế bào khối u cũng lần đầu tiên được mô tả đối với các dihydroflavon được benzyl hóa. Các hoạt động gây độc tế bào của reticuline, anonaine và liriodenine đã được thiết lập trước đây, trong đó liriodenine là hợp chất mạnh nhất.

Các kết quả thu được trong nghiên cứu này chỉ ra rằng các loài thuộc họ Annonaceae là một nguồn đầy hứa hẹn của các hợp chất hoạt tính sinh học có đặc tính gây độc tế bào, và gợi ý việc tiếp tục điều tra chúng trong các mô hình thử nghiệm sinh học khác.

Người giới thiệu

1. Couvreur, TLP; Pirie, MD; Chatrou, LW; Saunders, RMK; Su, YCF; Richardson, JE; Erkens, RHJ Lịch sử tiến hóa ban đầu của họ thực vật có hoa Annonaceae: Đa dạng hóa ổn định và phát triển geodispersal boreotropical. J. Biogeogr. 2011, 38, 664–680. [CrossRef]

2. Corrêa, Nghị sĩ Dicionário das Plantas Úteis do Brasil e das Exóticas Cultivadas; IBDF Ministério da nông nghiệp: Rio de Janeiro, Brazil, 1984.

3. Leboeuf, M.; Hang động, A.; Bhaumik, PK; Mukherjee, B.; Mukherjee, R. Hóa chất thực vật của họ Annonaceae. Hóa học thực vật 1982, 21, 2783–2813. [CrossRef]

4. Rupprecht, JK; Hui, Y.-H.; McLaughlin, JL Acetogenin gây nguy hiểm: Một đánh giá. J. Nat. Sản phẩm. 1990, 53, 237–278. [CrossRef]

5. Lúcio, ASSC; Almeida, JRGDS; Da-Cunha, EVL; Tavares, JF; Filho, JMB Alkaloid thuộc họ Annonaceae: Sự xuất hiện và tổng hợp các hoạt động sinh học của chúng. Trong The Alkaloids; Knolker, H.-J., Ed .; Elsevier: Amsterdam, Hà Lan, 2015; Chương 5; Tập 74, trang 233–409. [CrossRef]

6. Souza, CAS; Nardelli, VB; Paz, WHP; Pinheiro, MLB; Rodrigues, ACBC; Bomfifim, LM; Soares, MBP; Bezerra, DP; Chaar, JS; Koolen, HHF; et al. Phenylpropanoids có nguồn gốc asarone và alkaloid có nguồn gốc isoquinoline từ vỏ cây Duguetia pycnastera (họ Annonaceae) và độc tính tế bào của chúng. Quim. Nova 2020, 43, 1397–1403. [CrossRef]

7. Araújo, MS; Silva, FMA; Koolen, HHF; Costa, EV Ancaloit chiết xuất từ ​​isoquinoline từ vỏ cây Guatteria olivacea (họ Annonaceae). Hóa sinh. Syst. Ecol. 2020, 92, 104105. [CrossRef]

8. Ngouonpe, AW; Mbobda, ASW; Happi, GM; Mbiantcha, M.; Tatuedom, OK; Ali, MS; Lateef, M.; Tchouankeu, JC; Kouam, SF Các sản phẩm tự nhiên từ cây thuốc Duguetia staudtii (họ Annonaceae). Hóa sinh. Syst. Ecol. 2019, 83, 22–25. [CrossRef]

9. Santos, RC; Souza, AV; Andrade-Silva, M.; Cruz, KCV; Kassuya, CAL; Cardoso, CAL; Vieira, MC; Formaggio, ASN Điều tra chất chống oxy hóa, chống thấp khớp và chống viêm của chiết xuất và dicentrinone từ Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Benth. & Cái móc. f. J. Ethnopharmacol. 2018, 211, 9–16. [CrossRef]

10. Costa, EV; Pinheiro, MLB; Souza, ADL; Nhà tù, A.; Campos, FR; Valdez, RH; Ueda-Nakamura, T.; Dias Filho, BP; Nakamura, CV Hoạt động diệt khuẩn của oxoaporphine và pyrimidine - - ancaloit carboline từ các chi nhánh của Annona foetida Mart. (Họ Annonaceae). Phân tử 2011, 16, 9714–9720. [CrossRef]

11. Silva, DB; Tulli, ECO; Milita, GCG; Costa-Lotufo, LV; Pessoa, C.; Moraes, MO; Albuquerque, S.; Siqueira, JM Các hoạt động chống ung thư, diệt trypanocidal và kháng khuẩn của chiết xuất và ancaloit được phân lập từ Duguetia furacea. Phytomedicine 2009, 16, 1059–1063. [CrossRef] [PubMed]

12. Costa, EV; Pinheiro, MLB; Xavier, CM; Silva, JRA; Amaral, ACF; Souza, ADL; Nhà tù, A.; Campos, FR; Ferreira, AG; Machado, GMC; et al. Một pyrimidine - - carboline và các ancaloit khác từ Annona foetida có hoạt tính kháng thuốc. J. Nat. Sản phẩm. 2006, 69, 292–294. [CrossRef]