Trừu tượng:Điều tra hóa chất thực vật của hạt giống quýt Ai Cập (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) thu được 13 hợp chất đã biết, 1–13. Cấu trúc của các hợp chất phân lập được chỉ định bằng cách sử dụng các phân tích 1D và 2D NMR và HRESIMS. Để mô tả hoạt động dược lý của các hợp chất này, một số thí nghiệm dựa trên mô phỏng động lực học phân tử và dựa trên sàng lọc ảo tích hợp đã được áp dụng. Kết quả là, các hợp chất 2, 3 và 5 được xác định chính thức là chất ức chế hyaluronidase, xanthine oxidase và tyrosinase. Thử nghiệm in vitro sau đó đã được thực hiện để xác nhận các thí nghiệm trên cơ sở silico nhằm làm nổi bật tiềm năng của các flavonoid này như các chất ức chế hyaluronidase, xanthine oxidase và tyrosinase đầy triển vọng với các giá trị IC50 nằm trong khoảng từ 6,39 ± 0,36 đến 73,7 ± 2,33 µM . Nghiên cứu hiện tại đã làm sáng tỏ tiềm năng của chất thải từ quả quýt Ai Cập (nghĩa là hạt của nó) như một tác nhân tự nhiên tăng cường sức khỏe cho da. Ngoài ra, nó còn tiết lộ khả năng ứng dụng của sàng lọc ảo dựa trên lắp ghép nghịch đảo tích hợp và các thí nghiệm dựa trên MDS trong việc dự đoán hiệu quả tiềm năng sinh học của các sản phẩm tự nhiên.

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có khả năng loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra, đồng thời cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.

Nhấp vào Lợi ích của viên nén Cistanche

【Để biết thêm thông tin: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Giới thiệu

Quýt, C. reticulata, là một số loại cây có múi đáng chú ý nhất để sử dụng tươi [1]. Chúng thường được giới thiệu là 'quýt;' tuy nhiên, 'Mandarin' là tên phổ biến hơn. Một số giống và giống quýt lai phân bố trong tự nhiên [1]. Các loài phức tạp, nổi tiếng nhất bao gồm C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore và C. reticulata Blanco [1,2]. Quýt là một trong những loại trái cây có múi chính được thu hoạch ở nhiều quốc gia. Mặc dù các loại cây trồng chủ yếu được sử dụng cho món tráng miệng, nhưng chúng có tầm quan trọng thương mại đáng kể do tinh dầu của chúng [3]. Hương vị cam quýt được sử dụng trong đồ uống, bánh kẹo, bánh quy và món tráng miệng [4]. Ngoài ra, vỏ C. reticulata được dùng làm hương liệu cho rượu [4].

Kết nối nghịch đảo là một loại phương pháp sàng lọc ảo có thể được thao tác để dự đoán các mục tiêu phân tử tiềm năng cho một cấu trúc hợp chất nhất định. Trước đây, chúng tôi đã sử dụng phương pháp sàng lọc ảo hiệu quả này để xác định các mục tiêu protein tốt nhất cho một số sản phẩm tự nhiên bị cô lập [5]. Tuy nhiên, điểm kết nối thu được từ bước sàng lọc sơ bộ này chỉ cung cấp một số thông tin về sự bổ sung cấu trúc giữa các mục tiêu protein và cấu trúc hợp chất truy vấn [6]. Theo đó, các thí nghiệm mô phỏng động lực học phân tử (MDS), bao gồm năng lượng tự do liên kết tuyệt đối (∆Gbinding) mang lại kết quả chính xác và đáng tin cậy hơn, có thể được chọn để thử nghiệm trong ống nghiệm. Ở đây, chúng tôi đã đưa các hạt C. reticulata vào quá trình phân lập sắc ký từng bước để có được một số ý tưởng về hóa chất thực vật chính trong sản phẩm thải này. Sau đó, chúng tôi đã điều tra xem liệu các chất hóa học thực vật đó có tác dụng dược lý nhất định hay không bằng cách đưa chúng vào phân tích từng bước trong phân tích dựa trên silico được bắt đầu bằng cách lắp ghép nghịch đảo toàn diện và kết thúc bằng một số thí nghiệm MDS. Tiềm năng của các chất hóa học thực vật hoạt tính sinh học có nguồn gốc từ hạt C. reticulata làm sáng tỏ khả năng cao của các chất thải từ trái cây ăn được như một kho chứa khổng lồ các chất tăng cường sức khỏe.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Nguyên liệu thực vật

Quả C. reticulata được thu thập vào tháng 1 năm 2021 từ một khu vực địa phương ở Beni-Suef, Ai Cập và được xác thực bởi một nhà thực vật học cấp cao, Giáo sư Tiến sĩ Abd El-Halim A. Mohammed, Khoa Nghiên cứu Hệ thực vật và Phân loại thực vật; Viện nghiên cứu cây trồng; dokki; Cairô; Ai Cập). Một mẫu trái cây được lưu giữ theo chứng từ số 2021-BuPD 80 tại Cục Dược lý; Trường Dược; Đại học Beni-Suef; Ai Cập).

2.2. Hóa chất và thuốc thử

Etyl axetat (EtOAc), metanol (MeOH), n-Hexan (n-Hex), etanol (EtOH), diclometan (DCM) và n-butanol (n-BuOH) được mua từ Công ty El-Nasr, Ai Cập. Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, Hoa Kỳ, đã cung cấp dung môi khử màu cho phân tích NMR cũng như dung môi có độ tinh khiết cao cho HPLC, phân tích quang phổ và sắc ký (ví dụ: metanol-d4 (CD3OD), dimethyl sulfoxide-d6 (DMSO), chloroform -d (CDCl3), metanol cho HPLC, nước cấp độ HPLC và axetonitril cấp độ HPLC). Để phân lập sắc ký, Sephadex LH20 (0.25–0.1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, USA) và Silica gel (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, USA) đã được sử dụng. Đối với sắc ký lỏng chân không, một silica gel cho TLC (Dược phẩm và Hóa chất; Công ty El-Nasr; Cairo, Ai Cập) đã được sử dụng (VLC). Silica gel tráng sẵn (E-Merck, Darmstadt, Đức) đã được sử dụng cho các nghiên cứu TLC. Các vết sinh ra được xác định bởi para anisaldehyde sau khi đun nóng ở 110 ◦C [7]. Tất cả các tài liệu cho nghiên cứu sinh học đến từ Công ty Hóa chất Sigma (SCC; CA, Hoa Kỳ).

2.3. Phân tích quang phổ

Tín hiệu NMR thu được ở 400 cho 1H-NMR và 100 MHz cho 13C-NMR. Các pic dung môi CDCl3-d, CD3OD-d4 và DMSO-d6 được sử dụng làm tín hiệu tham chiếu. Tín hiệu NMR được thu bằng máy NMR Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, California, MA, USA).

Dữ liệu khối lượng có độ phân giải cao được thu thập bằng cách sử dụng máy Acquity-Ultra-Performance-LiquidChromatography-machine được liên kết với Máy quang phổ khối lượng lai bốn cực-thời gian bay-lai (Waters, Milford, MA, USA). Agilent/1260-Infinity-preparative-HPLC đã được sử dụng để đạt được sự phân tách bằng sắc ký HPLC.

2.4. Chuẩn bị chiết xuất hạt C. reticulata

Hạt C. reticulata (1 kg) được mua tươi và sau đó sấy khô trong bóng râm. Sau đó, hạt được nghiền bằng máy nghiền (Hà Nam, Trung Quốc đại lục). Sau đó, sản phẩm dạng bột được chiết hoàn toàn bằng EtOH 70 phần trăm (1 L × 5). Dịch chiết lỏng thu được được cô đặc bằng Máy cô quay (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, USA) trong điều kiện chân không ở 45 ◦C để cung cấp 100 g chiết xuất khô thô, sau đó được phân chia bằng cách sử dụng một loạt dung môi có độ phân cực tăng dần: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. Các phần I (24.0 g), II (5,0 g), III (3,0 g) và IV (6,0 g) thu được bằng cách làm bay hơi pha hữu cơ đã tách ở áp suất giảm. Tất cả các chất chiết xuất và phân số được bảo quản ở 4 ◦C để phân tích hóa sinh và hóa thực vật tiếp theo.

2.5. Phân lập các sản phẩm tự nhiên chính của hạt C. reticulata 

Cột TLC-silica gel được sử dụng để phơi nhiễm phần I (20 g) với VLC bình thường. EtOAc và quá trình rửa giải liên tiếp n-Hex (0–100 phần trăm , tăng 5 phần trăm) đã được sử dụng. Ba phân số phụ (I1–I3) thu được bằng cách thu thập các phân số giống hệt nhau và làm bay hơi chúng dưới áp suất giảm. Trên một cột silica gel khác, phân đoạn phụ I1 (1,0 g) được phân đoạn rộng rãi. Quá trình rửa giải sắc ký được thực hiện bằng n-Hex thành EtOAc, hỗn hợp gradient (0–10 phần trăm , độ tăng 1 phần trăm, mỗi loại 100 mL) để thu được hợp chất 13. (10 mg).

Phần phụ I2 (50 mg) được sắc ký tiếp trên silica-gel-60 (100 × 1 cm, 20 g). Quy trình sắc ký được thực hiện bằng cách sử dụng DCM:MeOH, hỗn hợp đồng đẳng (0,5 phần trăm , 500 mL) để tạo ra các hợp chất 8 (20 mg) và 9 (15 mg). Tiểu phần I3 được phân đoạn phần nào trên silica gel 60 (100 × 1 cm, 20 g). Quá trình rửa giải được tạo ra bằng cách sử dụng DCM:MeOH, hỗn hợp đẳng quyền (0,5 phần trăm , 500 mL) để thu được 10 (20 mg).

Cột silica-gel TLC được sử dụng để phơi nhiễm phân đoạn II (2,5 g). DCM: EtOAc (0–100 phần trăm , tăng 5 phần trăm ) được sử dụng để rửa giải các mẫu. Nước thải được sản xuất đã được nhận trong các phần 250 mL. Thu được các phân số giống hệt nhau và giảm thành hai phân số phụ (II1–II2) ở áp suất giảm. Trên một cột silica gel khác, phân đoạn phụ I1 (1,0 g) được phân đoạn rộng rãi. Hợp chất 5 được rửa giải bằng cách sử dụng DCM: EtOAc (0–10 phần trăm , tăng 1 phần trăm, mỗi loại 100 mL) (10 mg).

Phần phụ I2 (50 mg) được sắc ký tiếp trên silica gel60 (100 × 1 cm, 20 g). Quá trình rửa giải sắc ký được áp dụng bằng cách sử dụng DCM to MeOH, (rửa giải đẳng tốc; 0,5 phần trăm , 500 mL) để tạo ra các hợp chất 11 (20 mg) và 12 (15 mg).

Trên VLC thông thường, phần IV (6.0 g) được phân tách bằng silica gel. DCM: EtOAc (0–100 phần trăm , tăng 5 phần trăm, mỗi loại 250 mL) được sử dụng để rửa giải các mẫu. Các chất thải sắc ký đã được nhận với gia số 250 mL.

Các phân số giống hệt nhau được nhóm lại và giảm dưới áp suất giảm để tạo ra năm phân số con (IV1–V5); các phần phụ IV1, IV2, IV3 và IV4 chỉ được sắc ký nhẹ trên cột Sephadex-LH20 rửa giải bằng MeOH để thu được 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg) và 1 (15 mg, tương ứng, trong khi phần phụ IV5 tinh khiết đáng kể (10 mg).

2.6. trong nghiên cứu silico

2.6.1. Kết nối nghịch đảo

Các mục tiêu phân tử có thể xảy ra đối với các flavonoid đã phân tách đã được kết luận bằng cách đưa cấu trúc của chúng vào sàng lọc ảo tùy thuộc vào việc kết nối nghịch đảo với hầu hết tất cả các protein được đưa ra trong Ngân hàng Dữ liệu Protein; PDB.

Nền tảng dựa trên trực tuyến IdTarget đã được sử dụng cho bước này. Chương trình sàng lọc nhỏ gọn về cấu trúc ảo này sử dụng một phương pháp ghép nối nghịch đảo cụ thể, cụ thể là DivideConquer-Docking, xây dựng các mạng chồng lấp có giới hạn, khiến quá trình khám phá protein bị hạn chế hơn. Kết quả là, nó có thể thực hiện một số lượng lớn các kết nối trong một khoảng thời gian ngắn [8]. Điểm số kết quả được mô tả dưới dạng danh sách xếp hạng từ kém nhất đến tốt nhất. Để xác định các mục tiêu protein tối ưu cho từng cấu trúc nhất định, chúng tôi đã sử dụng điểm ái lực −10 kcal/mol làm giá trị giới hạn (Bảng 1).

Các thí nghiệm mô phỏng động lực học phân tử (MDS) đã được thực hiện như báo cáo trước đó của Alhadrami et al. 2021 [6]. Máy MDS của phần mềm Maestro (tức là Desmond v. 2.2; Hamburg, Đức) đã được sử dụng để vận hành các thí nghiệm MDS [9–11]. OPLS-Force-Field đã được sử dụng để chạy mô phỏng.

Quá trình chuẩn bị cấu trúc protein được thực hiện bằng thuật toán System-Builder, trong đó chúng được đóng gói bên trong hộp nước hình thoi (20 Å3 ) sử dụng mô hình nước TIP3P cùng với các ion Na plus và Cl−, {{ 16}}.15 M cho mỗi người trong số họ. Sau đó, các cấu trúc được mô hình hóa được tối ưu hóa đã được cân bằng sơ bộ trong 10 ns. Các cấu trúc phối tử được tự động tham số hóa trong bước chuẩn bị cấu trúc theo OPLSForce-Field. Các protein chứa kim loại như MMP liên quan đến phức hợp histidine-Zn plus 2 ở vị trí hiệu quả nên được tham số hóa trong bước hình thành protein. Để tiếp tục, một trạng thái dị thể phải được thiết lập cho các nguyên tử dị thể như Zn (Tạo trạng thái dị thể). Chức năng này là một phần của trình hướng dẫn Hình thành Protein của nhạc trưởng. Bước này sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của trạng thái dị hợp tử hoặc trạng thái cộng hóa trị phối hợp thích hợp, đối với nguyên tử dị hợp tử (nghĩa là Zn cộng 2) trong một mạng lưới với protein để các trường lực như OPLS có thể nhanh chóng quan sát nguyên tử kẽm. Đối với các bản sao được thực hiện bởi phần mềm Động lực học phân tử quy mô nano (NAMD 3.0) [12], các cấu trúc liên kết và tham số của các cấu trúc được mô hình hóa được xác định bởi Ligand Reader và Modeler nền tảng trực tuyến. Lực Tcl hài hòa được sử dụng để giữ Zn cộng 2 tại chỗ.

Việc tính toán năng lượng tự do liên kết (∆Gbinding) đã được thực hiện như mô tả trước đây của Alhadrami et al. 2021 [6]. ∆Quá trình mài được thực hiện bằng cách sử dụng quy trình nhiễu loạn năng lượng tự do (FEP) [12], được trình bày chi tiết trong ấn phẩm của Kim và cộng sự. Tóm lại, kỹ thuật này tính toán năng lượng có thể truy cập cần thiết ∆Gbinding bằng cách sử dụng phương trình ∆Gbinding=∆GComplex − ∆GLigand. Giá trị của mỗi ∆Grinding được tính toán bằng chương trình NAMD trong các thử nghiệm riêng biệt.

Tất cả các tệp đầu vào có thể được chuẩn bị qua trang web CharmmGUI. Sau đó, các tệp này được sử dụng để tạo ra các phép tính liên kết ∆G đã lên kế hoạch bằng cách sử dụng giao thức FEP trong NAMD. Sự cân bằng sau đó được thiết lập trong NPT (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Áp suất "Phức hợp"-"Ligand") trong sự tồn tại của mô hình nước TIP3P. Sau đó, các mô phỏng FEP 10 ns được tạo ra cho từng cấu trúc và 5 ns cuối cùng của lượng năng lượng khả dụng được tính toán cho mức năng lượng tự do đã hoàn thành [12]. Cuối cùng, các tư thế ràng buộc đã được dự đoán và đánh giá bằng cách sử dụng chương trình VMD [13].

2.7. Thử nghiệm trong ống nghiệm về hoạt động của Hyaluronidase

Hoạt động ức chế hyaluronidase được hình thành theo quy trình đã được thiết lập trước đó được cấp cho Chaiyana et al. 2019 [14]. Tác dụng ức chế hoạt động của hyaluronidase được ước tính từ phương trình sau: ức chế hyaluronidase ( phần trăm )=(1 − A/B) × 100, trong đó A và B là đặc tính của axit hyaluronic sau khi xử lý khi có hoặc thiếu mẫu, riêng biệt. Để kiểm soát dương tính, 6-axit O-palmitoyl-Lascorbic đã được sử dụng. Các thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần.

2.8. Thử nghiệm trong ống nghiệm về hoạt động của Xanthine Oxidase

Tiềm năng ức chế Xanthine oxidase (XO) được thực hiện theo phương pháp đã mô tả trước đây [15]. Màu được tạo ra do giải phóng hydro peroxide trong quá trình oxy hóa XO được đo ở bước sóng 570 nm bằng cách sử dụng đầu đọc bản kính EPOCH™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". Bốn mươi bốn microlit dung dịch đệm xanthine oxidase được trộn với 2 µL dung dịch chất nền xanthine và 2 µL XO. L-mimosine đã được áp dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực. Thí nghiệm này đã được thực hiện trong ba lần.

2.9. Thử nghiệm trong ống nghiệm về hoạt động của Tyrosinase

Hoạt động ức chế tyrosinase của từng flavonoid đã được quan sát bằng cách sử dụng quy trình DOPAchrom tuân theo sơ đồ của Momtaz et al. 2008 [16], được sửa đổi từ Nerya et al. 2003 [17], và Curto et al. 1999 [18]. Hoạt tính ức chế tyrosinase được đo từ phương trình sau: hoạt tính ức chế ( phần trăm )=(1 − A/B) × 100, (9) trong đó A và B là độ hấp thụ của hỗn hợp khi có hoặc không có kiểm tra flavonoid, tương ứng. Mỗi thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần.

3. Kết quả và thảo luận

3.1. Điều tra hóa chất thực vật của hạt C. reticulata

Sử dụng UV, 1H và DEPT-Q NMR, ngoài việc so sánh với tài liệu và sử dụng một số mẫu xác thực, các hợp chất đã biết kaempferol 1 [19], kaempferol-40 -O- -Dglucopyranoside 2 [19], kaempferol -7-O- -D-glucopyranoside 3 [19], 2-hydroxy genistein 4 [19], hesperetin 5 [19], 3000 (1000-O- - D-glucopyranosyl)-sucrose 6 [20], 6(1000 -O- -Dfructofuranosy)-30 (1"-O- -D-glucopyranosyl)-sucrose 7 [20 ], 1-O-elaidoyl-glycerol 8 [21], 1- O-oleoyl-2-palmitoyl-glycerol 9 [22], 1-O-oleoyl-glycerol 10 [ 21], (E)-3-((4-metyl heptyl oxy) cacbonyl)axit acrylic 11 [23], (E)-3-((6-metyl nonyl oxy) carbonyl)axit acrylic 12 [23] và -sitosterol 13 [24] (Hình 1) được xác định từ chiết xuất etanol thô của hạt C. reticulata. Tất cả các hợp chất 11 và 12 đã xác định lần đầu tiên được tách ra ở đây từ chi Citrus ( Điều đáng chú ý là, không giống như flavanone và flavon phân bố rộng rãi trong các bộ phận trên mặt đất của C. reticulata, bao gồm cả quả, flavonol dường như là loại flavonoid chiếm ưu thế trong hạt.

3.2. Trong điều tra Silico

Để mô tả hoạt động sinh học của các hợp chất đã phân lập, chúng tôi đã đưa chúng vào một loạt các phân tích dựa trên silico. Đầu tiên, chúng tôi tập trung vào các flavonoid đã phân lập (1–5) cho bước sàng lọc ảo ban đầu của chúng tôi vì flavonoid là các chất chuyển hóa thứ cấp thực vật có hoạt tính sinh học nổi tiếng. Ngoài ra, các hợp chất phân lập còn lại (6–13) là các chất chuyển hóa chính phổ biến có khả năng không có hiệu quả điều trị.

Các cấu trúc của flavonoid 1–5 đã được sàng lọc ảo dựa trên kết nối đối với hầu hết tất cả các protein được lưu trữ trong PDB. Nền tảng trực tuyến, cụ thể là idTarget đã được sử dụng cho nhiệm vụ sàng lọc ảo sơ bộ này [8]. Các điểm được khôi phục được truy xuất dưới dạng danh sách từ giá trị âm lớn nhất đến giá trị nhỏ nhất. Chúng tôi đặt điểm ái lực kết luận là −10 kcal/mol làm giá trị giới hạn để chọn ra các mục tiêu tốt cho từng flavonoid bị cô lập (1–5). Một số mục tiêu phân tử thú vị đã được phát hiện có lẽ là mục tiêu tốt cho các hợp chất liên quan này, bao gồm protein kinase và synthase (Bảng 1).

Thật thú vị, ba mục tiêu phân tử phổ biến đã được báo cáo giữa các flavonoid này, hyaluronidase, xanthine oxidase và enzyme tyrosinase. Các enzym này có liên quan đến việc duy trì làn da khỏe mạnh [25–30], và do đó, bước sàng lọc ảo sơ bộ đã xác định chính thức các flavonoid này là chất thúc đẩy chăm sóc da có thể xảy ra.

3.3. Mô phỏng động lực học phân tử và tính toán năng lượng tự do liên kết tuyệt đối

Để hỗ trợ thêm cho bước sàng lọc sơ bộ dựa trên lắp ghép, chúng tôi đã ước tính năng lượng tự do liên kết tuyệt đối (∆Gbinding) của các hợp chất 1–5 với các enzym hyaluronidase, xanthine oxidase và tyrosinase bằng phương pháp phụ thuộc MDS, cụ thể là phương pháp nhiễu loạn năng lượng tự do ( FEP) [26,31].

Như thể hiện trong Bảng 2, chỉ các hợp chất 2, 3 và 5 là có thể đạt được ái lực cao nhất đối với các enzym hyaluronidase, xanthine oxidase và tyrosinase với các giá trị ∆Grinding nằm trong khoảng từ -8,1 đến -9,9 kcal/mol. Các hợp chất còn lại có giá trị ∆Gliên kết cao hơn −6 kcal/mol.

Các thí nghiệm MDS 50 ns khác đã được thực hiện để nghiên cứu sự tương tác và tính ổn định liên kết của các hợp chất 2, 3 và 5 với các enzym hyaluronidase, xanthine oxidase và tyrosinase. Như được mô tả trong Hình 2, cả hợp chất 3 và phối tử đồng kết tinh đều đạt được độ ổn định liên kết tương tự bên trong vị trí liên kết của enzym trong suốt MDS với RMSD ~2,8 Å từ các tư thế lắp ghép ban đầu. RMSD của hợp chất 2 0 cũng giống như RMSD của hợp chất 3 cho đến 28,7 ns khi nó bắt đầu lệch cao hơn một chút so với hợp chất 3 và phối tử đồng kết tinh để đạt được RMSD trung bình là 3,8 Å trong suốt MDS. Ảnh chụp nhanh cuối cùng thu được từ MDS của các hợp chất 2 và 3 và phối tử kết tinh đã chỉ ra rằng TYR-75, ASP-129 và GLU-131 là các gốc axit amin tương tác phổ biến thông qua H- liên kết.

Về xanthine oxidase, hợp chất 3 đã đạt được liên kết ổn định bên trong vị trí hoạt động của nó trong suốt MDS, ghi lại RMSD trung bình là 2,6 Å hội tụ với RMSD của chất ức chế đồng kết tinh (RMSD ~2,4 Å). Liên kết ổn định như vậy của hợp chất 3 rõ ràng là do mạng liên kết H mà nó đã thiết lập với LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{ 12}}, PHE-911, ARG-912 và THR-1010 (Hình 3).

Cuối cùng, hợp chất 5 cũng ổn định bên trong vị trí hoạt động của tyrosinase trong suốt 50 ns MDS với giá trị RMSD trung bình là 4,9 Å, cao hơn giá trị của chất ức chế đồng kết tinh (RMSD ~3,8 Å). Như được thể hiện trong ảnh chụp nhanh cuối cùng có nguồn gốc từ MDS, hợp chất 5 có thể tương tác với hai ion Zn2+ tương tự như chất ức chế đồng kết tinh. Ngoài ra, nó được ổn định bằng một số liên kết H với LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374 và THR-391 (Hình 4 ).

【Để biết thêm thông tin: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】