Y học Trung Quốc Cistanche Thành phần hóa học và phân tích các thành phần trong cơ thể Ⅲ

Chương 2 Nghiên cứu định tính thành phần hóa học của Cistanche Deserticola

Cistanche là thân thịt lá có vảy khô củaCistanche Deserticola YC.MaVà Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Đây là một trong những loại thuốc truyền thống bổ thận dương nổi tiếng của Trung Quốc. Nó có chức năng củadưỡng thận dương, bổ sung tinh huyết, dưỡng ẩm. Nó có tác dụng nhuận tràng và thường được dùng để điều trị chứng bất lực, vô sinh, đau nhức thắt lưng và đầu gối, yếu cơ và xương, khô ruột và táo bón, v.v. Nó có tác dụng dược lý như chống viêm mất trí nhớ, bệnh chống Parkinson, bảo vệ khỏi thiếu máu não và cải thiện khả năng học tập và trí nhớ. Để làm rõ cơ sở vật chất củahiệu quả của Cistanche Deserticola, chương này sử dụng HPLC và LC-IT-TOF-MS để mô tả toàn diện đặc tính củathành phần hóa học của Cistanche. Dựa trên bản tóm tắt có hệ thống về quy tắc bẻ khóa của các loại thành phần hóa học khác nhau, các tính chất của Cistanche Deserticola được phân tích một cách có hệ thống. Thành phần hóa học, để cung cấp dữ liệu phong phú từ các nguồn đáng tin cậy cholàm sáng tỏ sâu sắcvề đặc tính chữa bệnh củaCistanche Deserticolatrong cơ thể sống.

MẤT BAO LÂU ĐỂ CISTANCHE CÓ HOẠT ĐỘNG?

Mục 1 Tài liệu thí nghiệm

1. Dụng cụ

Máy quang phổ khối chất lỏng Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (được trang bị 2 bơm LC-20ADXR, bộ lấy mẫu tự động SIL-20AC, lò cột CTO-20AC, đầu dò UV SPD-M20A, DGU-20Máy khí khử nhiễm A3R, CBM-20Bộ điều khiển, nguồn ion ESI, Công ty Shimadzu, Nhật Bản), hệ thống lọc nước siêu tinh khiết Milli-Q (Công ty Milipore, Hoa Kỳ): Cân phân tích điện tử Mettler ME204 ( Công ty Mettler Toledo, Thụy Sĩ).

2. Thuốc thử

Loại sắc ký và loại metanol, acetonitril và axit formic cấp khối phổ được mua từ Công ty Thermo-Fisher (Pittsburgh, PA, Hoa Kỳ). Nước là nước siêu tinh khiết Milli-Q được sản xuất trong phòng thí nghiệm (Millipore, Bedford, MA, USA). Các thuốc thử còn lại đều thuộc loại phân tích.

Salidroside, 6-deoxycatalpol, 8-axit epi-loganic, echinacoside, Acteoside, isoside Verbascoside (isoacteoside,) và pinoresinol- -D-glucopyranoside (pinoresinol- -D-glucopyranoside) đều được cung cấp bởi nhóm nghiên cứu của Giáo sư Tu Pengfei tại Phòng thí nghiệm trọng điểm về thuốc tự nhiên và sinh học tại Đại học Bắc Kinh. Sarcoside F (cistanosideF) được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Mansite Thành Đô, cistanoside A (cistanoside A), 2'-acetylacteoside (2'-acetylacteoside), 2'-acetylpoliumoside (2'-acetylpoliumoside), cistanoside Polyglucoside (poliumoside ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanosideC) và cistanoside D (cistanosideD) đều được mua từ Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulosideA) và tubuloside B (tubulosideB) được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Weikeqi Thành Đô.

Phần 2 Nội dung thí nghiệm

1. Chuẩn bị mẫu

1.1 Chuẩn bị chất đối chiếu

Cân chính xác lượng thích hợp của các chất đối chiếu khác nhau trong "Vật liệu thí nghiệm Phần 1" ở trên và chuẩn bị dung dịch gốc 10 mM với DMSO. Dùng pipet lấy chính xác 2 mL mỗi dung dịch gốc và pha loãng với 25% axetonitril để tạo thành dung dịch đối chứng hỗn hợp 2 μM. 1.2 Chuẩn bị dung dịch thử

Chiết xuất nước của Cistanche Deserticola được thực hiện bởi phòng thí nghiệm của chúng tôi và mẫu được lưu trữ tại Trung tâm Nghiên cứu Hiện đại hóa Y học Cổ truyền Trung Quốc, Trường Y học Cổ truyền Trung Quốc, Đại học Y học Trung Quốc Bắc Kinh. Lấy 20 mg bột Cistanche Deserticola, thêm 40 mL nước để hòa tan, vortex và trộn, ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút và lấy phần nổi phía trên. Tức là thu được dung dịch thử.

3. Điều kiện khối phổ

Nguồn ion phun điện tử (ESI), chế độ quét là quét đồng thời các ion dương và âm và tự động kích hoạt phép đo khối phổ đa cấp. Phạm vi quét khối lượng của MS'~MS' đối với các ion dương là m/z50~800, và đối với các ion âm là m/z100~1000. Điện áp của buồng phun lần lượt là 4,5kV và -3,5kV: tốc độ dòng khí phun (Nz) là 1,5Lmin; áp suất khí sấy là 110MPa; điện áp phát hiện là 1,55 kV; nhiệt độ của ống khử dung môi cong (CDL) và mô-đun gia nhiệt đều là 200 độ. Áp suất buồng va chạm là 1,5e-Pa; áp suất bẫy ion là 2,8e-Pa; số lần lặp lại của giai đoạn đầu dương và âm là 1 và thời gian tích lũy ion là 30 ms; số lần lặp lại của giai đoạn thứ hai dương và âm là 2 và thời gian tích lũy ion là 20ms. ; Năng lượng phân ly do va chạm (CID) là 50%.

Phần 3 Kết quả và thảo luận

Lựa chọn cột

Để có được khả năng phân tách sắc ký tốt hơn, chúng tôi đã sàng lọc rộng rãi các cột sắc ký từ các nhà sản xuất và thông số kỹ thuật khác nhau, chẳng hạn như cột sắc ký ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Scotland), Shiseido Capcell Core Ci8 ( 2,1 mm x 150mm, 2,7μm), cột Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) và cột Capcell Core ADME (2,1x150mm, 2,7μm, Shiseido Corporation, Nhật Bản). Qua so sánh hệ thống, người ta nhận thấy rằng khi sử dụng cột sắc ký Capcell Core ADME (2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan), mỗi tín hiệu sắc ký có thể được phân tách tốt hơn (Hình 3-1).

2. Lựa chọn điều kiện pha lỏng

Vì thành phần hóa học chính củaCistanche Deserticolalà phenyletanol glycoside, lignan, iridoids và các hợp chất khác, nó thường phản ứng tốt hơn trong điều kiện ion âm. Để xác định các thành phần hóa học ở mức độ thấp trong chiết xuất nước của Cistanche Deserticola, người ta suy đoán rằng có thể cần phải thêm axit vào pha động để tăng cường hiệu lực. Do đó, thí nghiệm này đã sử dụng nước-metanol, nước-acetonitril, 0,1% axit formic nước-metanol và 0,1% axit formic nước-acetonitril làm hệ pha động để nghiên cứu. Người ta nhận thấy rằng acetonitrile nước axit formic 0,1% có hiệu quả tách tốt nhất, với hình dạng pic tốt và dung lượng pic lớn, do đó, nước axit formic 0.1% và axetonitril được chọn làm chất pha động. 3. Phân tích định tính thành phần hóa học. Sử dụng 19 chất tham chiếu hiện có để khám phá quy tắc phân mảnh khối phổ của các loại hợp chất khác nhau trong Cistanche Deserticola. Các chất tham chiếu hỗn hợp là sắc ký đồ PDA ở bước sóng 340 nm trên cột ADME và biểu đồ BPC ở chế độ ion dương và âm. Xem Hình 3-1. Chúng tôi đã xem xét các tài liệu liên quan thông qua PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP và Wanfang, v.v. và xây dựng cơ sở dữ liệu tự tạo về các thành phần hóa học của Cistanche Deserticola. Dựa trên việc so sánh quy tắc phân mảnh khối phổ và thời gian lưu của các hợp chất đã biết, chúng tôi đã xác định sơ bộ 45 hợp chất trong Cistanche Deserticola. các hợp chất, bao gồm 31 glycoside phenyletanol, 9 iridoid, 3 glycoside benzyl và 2 lignan, như thể hiện trong Bảng 3-1.

So sánh thời gian bảo mật, phổ MS và phổ MS của chất đối chiếu, các hợp chất 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 được xác định tuần tự Chính xác là genipin, cistanchein F, cistancheoside E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glucoside, mullein Glycosides, isocannabinoid glycoside, pinoresin monomethyl ether glycoside, 2'acetyl verascoside, cistanche glycoside C, isocistancoside C, tuberosin B và cistanche glycoside D.

Thí nghiệm này sử dụng công nghệ HPLC-IT-TOF-MS để phân tích một cách nhanh chóng và chính xác một cách có hệ thống các thành phần hóa học phức tạp trong dịch chiết nước của Cistanche Deserticola, tạo cơ sở cho việc phân tích chất lượng toàn diện của Cistanche Deserticola và nghiên cứu về các dược chất in vivo.

Hình 3-1 Sắc ký đồ chất tham chiếu hỗn hợp Trên cùng: Biểu đồ BPC ở chế độ ion dương: Dưới cùng: Biểu đồ BPC ở chế độ ion âm

Hình 3-1 Sắc ký đồ chất tham chiếu hỗn hợp Trên cùng: Biểu đồ BPC ở chế độ ion dương: Dưới cùng: Biểu đồ BPC ở chế độ ion âm