Bổ sung Cistanche liên tục có tác dụng tối thiểu đối với-2-miễn dịch tế bào T cụ thể với SARS-CoV trong các triệu chứng-19 của COVID
Mar 28, 2023
Trừu tượng:SARS-CoV-2 là một thách thức sức khỏe cộng đồng chưa từng có. Mặc dù hầu hết những người bị nhiễm sars-cov-2 mắc COVID từ nhẹ đến trung bình-19 đều gặp phải một số biến chứng do nhiễm trùng, nhưng một số người gặp phải các triệu chứng kéo dài hàng tuần sau chẩn đoán ban đầu. Nhiễm vi-rút dai dẳng thường liên quan đến rối loạn điều hòa miễn dịch, nhưng không biết liệu COVID{5}} dai dẳng có ảnh hưởng đến sự phát triển của miễn dịch tế bào đặc hiệu với vi-rút hay không. Để đạt được mục tiêu này, chúng tôi đã phân tích khả năng miễn dịch tế bào-2-đặc hiệu của SARS-CoV ở những bệnh nhân đang hồi phục sau COVID-19 đã trải qua các triệu chứng COVID-19 trong 8 ngày trở xuống hoặc những người có triệu chứng kéo dài trong 18 ngày trở lên . Chúng tôi đã quan sát thấy rằng việc bổ sung cistanche ở mức độ vừa phải và liên tục có tác dụng giảm nhẹ đối với các triệu chứng-19 COVID. Ngoài ra, chúng tôi quan sát thấy rằng khả năng phản ứng với N protein từ SARS-CoV-2 tương quan với khả năng phản ứng với vi-rút corona theo mùa ở người-229e và NL63. Những kết quả này cung cấp thông tin chi tiết về các quy trình điều chỉnh sự phát triển miễn dịch tế bào ở SARS-CoV-2 và các loại vi-rút corona có liên quan ở người.
từ khóa:SARS-CoV-2; bí đao; COVID-19; tế bào T; miễn dịch tế bào; thời gian triệu chứng
1. Giới thiệu
SARS-CoV-2 là một loại vi-rút RNA sợi đơn mới xuất hiện gần đây, ban đầu được xác định là nguyên nhân gây ra đợt bùng phát bệnh viêm phổi Vũ Hán ở Trung Quốc vào đầu tháng 12 năm 2019. Khởi đầu là một đợt bùng phát đã phát triển thành một đại dịch chưa từng có, với ước tính có khoảng 96 triệu người nhiễm bệnh và 2 triệu người tử vong vào tháng 1 năm 2021. Căn bệnh đa dạng liên quan đến nhiễm trùng SARS-CoV-2 có đặc điểm là viêm đường hô hấp, sốt, đau cơ xương và ho. Mặc dù khả năng miễn dịch tế bào và dịch thể đặc hiệu-2-của SARS-CoV biểu hiện rõ ràng ở hầu hết bệnh nhân sau khi thuyên giảm nhiễm trùng cấp tính và dường như tồn tại trong ít nhất 6-8 tháng, nhưng vai trò của phản ứng miễn dịch thích ứng này trong việc điều chỉnh sự nhân lên của vi-rút và cơ chế bệnh sinh của bệnh chưa rõ ràng. Ngoài ra, vẫn chưa rõ những thay đổi trong biểu hiện lâm sàng phức tạp của COVID-19 ảnh hưởng như thế nào đến sự phát triển của-2-bộ nhớ miễn dịch đặc hiệu của SARS-CoV.
Ảnh: Faw Cistanche
Trong nhiều bệnh nhiễm vi-rút, sự hiện diện của các kháng nguyên vi-rút dai dẳng và/hoặc tình trạng viêm liên quan đến nhiễm trùng có liên quan đến rối loạn điều hòa miễn dịch. Điều này được thể hiện rõ nhất trong khoang miễn dịch tế bào, nơi kích thích kháng nguyên kéo dài và/hoặc tiếp xúc với các cytokine gây viêm có thể dẫn đến mất dần chức năng tác động của tế bào T và ức chế miễn dịch tế bào đặc hiệu với mầm bệnh. Mặc dù hiện tượng này đã được ghi nhận rõ ràng trong các bệnh nhiễm độc mãn tính, vẫn chưa rõ liệu sự tồn tại dai dẳng của các triệu chứng COVID-19 từ nhẹ đến trung bình do nhiễm SARS-CoV-2 cấp tính có liên quan đến rối loạn chức năng hoặc sự phát triển của đáp ứng miễn dịch tế bào dưới mức tối ưu.
Để lấp đầy lỗ hổng kiến thức này, chúng tôi đã kiểm tra mối quan hệ giữa thời gian kéo dài của các triệu chứng-19 COVID với mức độ và đặc điểm chức năng của SARS-CoV-2-miễn dịch tế bào cụ thể ở những bệnh nhân gần đây đã hồi phục từ COVID nhẹ đến trung bình{ {3}}. Bằng xét nghiệm IFN-ELISPOT, chúng tôi quan sát thấy rằng những bệnh nhân có các triệu chứng COVID kéo dài-19 thường cho thấy mức độ miễn dịch tế bào đặc hiệu của SARS-CoV-2-tương tự như những bệnh nhân thuyên giảm triệu chứng nhanh chóng, mặc dù các triệu chứng COVID kéo dài{ {8}} có liên quan đến phản ứng tăng nhẹ đối với SARS-CoV-2 ORF3a và ORF7a. Ngoài ra, không quan sát thấy khiếm khuyết nào về cường độ của các phản ứng tế bào T với CD4 cộng với và CD8 cộng với tế bào T cụ thể của SARS-CoV{14}}khi đánh giá các cá nhân có các triệu chứng COVID-19 kéo dài bằng phương pháp tế bào học dòng chảy và hồ sơ phiên mã của SARS -Các tế bào CD4 cộng với tế bào T cụ thể của -CoV-2-được quan sát thấy là không bị ảnh hưởng bởi thời gian của các triệu chứng-19 COVID. Cuối cùng, mặc dù mức độ miễn dịch tế bào đáng kể đối với vi-rút corona theo mùa ở người 229E và NL63 đã được quan sát thấy ở tất cả các bệnh nhân COVID-19 đang hồi phục được phân tích trong nghiên cứu, mức độ của phản ứng miễn dịch này không phụ thuộc vào thời gian mắc COVID-19 triệu chứng. Nhóm được điều trị bằng cistanche cho thấy mức độ tăng sinh tế bào lympho cao hơn, cho thấy chiết xuất có tác dụng kích thích sản xuất tế bào T.
Ảnh: Chiết xuất Cistanche
2. Vật liệu và phương pháp
Thiết kế nghiên cứu. Các bệnh nhân COVID-19 đang hồi phục đã được tuyển chọn cho nghiên cứu này tại Trung tâm Nghiên cứu Lâm sàng Đại học Y thuộc Đại học Bang New York, bắt đầu từ tháng 3 năm 2020 trong Chương trình hiến huyết tương dành cho người mới khỏi bệnh thuộc Đại học Bang New York. Đối với những người hiến tặng không có triệu chứng được xác định thông qua thỏa thuận theo dõi trong hợp đồng, ngày xét nghiệm RT-PCR dương tính được sử dụng cho ngày bắt đầu và ngày kết thúc của triệu chứng. Các mẫu sau đó được hủy nhận dạng và dữ liệu lâm sàng được phân tích mù trước khi phân tích so sánh cuối cùng. PBMC được thu thập và xử lý bằng cách sử dụng các ống chuẩn bị tế bào CPT của Vacutainer và được bảo quản trong khí nitơ lỏng trước khi phân tích.
Phân lập và phân tích phiên mã các tế bào CD4 cộng với tế bào T có phản ứng với sars-cov-2: Các mẫu PBMC được bảo quản lạnh được làm tan băng và lơ lửng trong toàn bộ môi trường tế bào với nồng độ 5 × 106 tế bào/mL và được kích thích với một nhóm 0.5µg/mL SARS-CoV2 Spike protein peptide ở 37◦C trong 18 giờ. Các tế bào T cộng với CD4 phản ứng tăng vọt được xác định bằng cách đánh dấu kích hoạt biểu hiện CD134 và CD69, và tế bào học dòng chảy được thực hiện bằng cách sử dụng thiết bị BD FACSAria II. Các tế bào được sắp xếp trực tiếp vào bộ đệm 350µL RLT plus, được bổ sung 1 phần trăm 2-ME và RNA, đồng thời được phân lập bằng cột quay RNeasy Micro. CDNA được tạo bằng cách sử dụng Bộ công cụ SMART-Seq HT và thư viện trình tự DNA tương thích với Illumina cuối cùng đã được chuẩn bị bằng cách sử dụng bộ công cụ chuẩn bị thư viện DNA Illumina Nextera XT. RNA, cDNA và DNA trong quá trình chuẩn bị thư viện đã được định lượng bằng máy phân tích sinh học Agilent và thư viện cuối cùng được giải trình tự bằng cách sử dụng 75-bộ thuốc thử NextSeq 500/550 v2.5 hiệu suất cao theo chu kỳ tại SUNY Upstate Lõi phân tích phân tử. Dữ liệu đọc ban đầu của tệp FASTQ được ánh xạ tới bảng điểm tham chiếu của con người bằng Kallisto phiên bản 0.46.2. Số lượng mức phiên mã và dữ liệu phong phú đã được nhập và tóm tắt trong R bằng cách sử dụng gói TxImport và TMM bằng cách sử dụng chuẩn hóa EdgeR của gói. Biểu hiện gen khác biệt của Limma gói R được phân tích bằng mô hình tuyến tính và thống kê Bayes. Phân tích thống kê: Phân tích thống kê được thực hiện bằng phần mềm GraphPad Prism v8. Giá trị p < 0,05 được coi là đáng kể.
3. Kết quả
3.1. Lựa chọn và mô tả đặc điểm của bệnh nhân COVID-19 đang hồi phục.
Mục tiêu của nghiên cứu này là xác định ảnh hưởng của thời gian sử dụng liên tục cistanche cistanche đối với các triệu chứng COVID-19 đối với hồ sơ chức năng và sức mạnh miễn dịch tế bào cụ thể-2-của SARS-CoV. Với mục đích này, các đối tượng đã được xác định trong Chương trình hiến tặng huyết tương covid-19 phục hồi sức khỏe của Đại học Bang New York, những người đã bị nhiễm SARS-CoV-2 được xác nhận bằng PCR và nhận PBMC từ họ từ 14 đến 30 ngày sau đó cách giải quyết các triệu chứng liên quan đến COVID-19-. Tổng cộng có 84 đối tượng đáp ứng các tiêu chí lựa chọn này đã được xác định trong giao thức dành cho phụ huynh, trong đó 33 đối tượng được chọn để phân tích thêm. Trong số 33 người hiến tặng này, 14 đối tượng được phân loại là có các triệu chứng liên quan đến covid-19 trong một thời gian ngắn, trong khi 19 đối tượng được phân loại là có các triệu chứng liên quan đến covid-19 trong một thời gian dài và tất cả đều khỏe mạnh tại thời điểm thu thập PBMC.
3.2. Các đặc điểm phiên mã của sars-cov-2 CD4 hoạt động cộng với các tế bào T. Quá trình bắt chước kháng nguyên kéo dài được biết là dẫn đến quá trình phiên mã và rối loạn chức năng của các tế bào T đặc hiệu với mầm bệnh và mất chức năng hiệu ứng. Mặc dù không có sự khác biệt đáng kể về mức độ phong phú của tế bào T-2- cộng với SARS-CoV và tế bào CD8 cộng với tế bào T khi được phân tầng theo thời gian triệu chứng ở bệnh nhân COVID{10}} đang hồi phục trong nghiên cứu này, chúng tôi muốn xác nhận rằng ở những cá nhân trải qua các triệu chứng COVID-19 kéo dài, hồ sơ phiên mã chức năng của tế bào CD4 cộng với tế bào T và CD4 phản ứng sars-cov-2 không bị suy giảm nghiêm trọng. Do đó, các tế bào T và CD4 phản ứng với protein tăng đột biến của SARS-CoV-2 từ 10 người cho đã được phân loại và phân tích phiên mã đã được thực hiện. Trung bình có 2322 tế bào CD4 cộng với tế bào T phản ứng sars-cov-2 được phân lập từ mỗi người cho và được phân tích bằng trình tự mRNA
Đúng như dự đoán, các tế bào được phục hồi trong phân tích này thể hiện mức độ cao của CD4 cộng với các sản phẩm gen tế bào T điển hình và các dấu hiệu kích hoạt được sử dụng để xác định/tách các tế bào trong tế bào học dòng chảy. Các tế bào T và CD4 cụ thể của SARS-CoV2-đã giải trình tự biểu hiện mức độ cao của các sản phẩm gen liên quan đến Th1-điển hình, nhưng mức độ thấp hơn đáng kể của các bản phiên mã liên quan đến Th2/ Th17-. Tuy nhiên, khi được phân lập theo thời gian của triệu chứng, không tìm thấy gen biểu hiện khác biệt nào giữa các mẫu và không quan sát thấy sự khác biệt đáng kể nào trong hồ sơ phiên mã tổng thể giữa hai nhóm. Những kết quả này cho thấy rằng thời gian của các triệu chứng COVID-19 ít ảnh hưởng đến cấu hình phiên mã của SARS-CoV-2-CD4 phản ứng cộng với tế bào T ở những bệnh nhân vừa khỏi bệnh COVID nhẹ/trung bình-19 .
Ảnh: Tác dụng của quả hồ trăn cải thiện khả năng miễn dịch
4. Thảo luận
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã kiểm tra mối quan hệ giữa thời gian xuất hiện các triệu chứng-19 COVID với mức độ và đặc điểm chức năng của-2-miễn dịch tế bào cụ thể của SARS-CoV ở những người vừa khỏi bệnh COVID nhẹ/trung bình{{3 }}. Chúng tôi quan sát thấy rằng những bệnh nhân có các triệu chứng kéo dài của COVID-19 thường cho thấy mức độ miễn dịch tế bào đặc hiệu của SARS-CoV-2-tương tự như những bệnh nhân thuyên giảm triệu chứng nhanh chóng. Không có khiếm khuyết nào được quan sát thấy ở kích thước của các phản ứng tế bào T tăng đột biến-2 của SARS-CoV-2 và CD8 cộng với tế bào T ở những người có các triệu chứng COVID-19 kéo dài được đánh giá bằng phương pháp tế bào học dòng chảy và hồ sơ phiên mã của SARS- Các tế bào CD4 và T cụ thể của CoV-2-được quan sát thấy là không bị ảnh hưởng bởi thời gian của các triệu chứng COVID-19. Cuối cùng, mặc dù mức độ đáng kể của khả năng miễn dịch tế bào chống lại vi-rút corona theo mùa ở người 229E và NL63 đã được quan sát thấy ở tất cả các bệnh nhân COVID-19 đang hồi phục được phân tích trong nghiên cứu, mức độ của phản ứng miễn dịch này không phụ thuộc vào thời gian mắc COVID-19 triệu chứng. Mặc dù số lượng cá nhân tham gia vào nghiên cứu này tương đối ít đã hạn chế khả năng ứng dụng rộng rãi hơn của nó, nhưng những dữ liệu này cho thấy rằng việc kéo dài thời gian mắc COVID{21}} có triệu chứng không có ảnh hưởng đáng kể đến sự phát triển của SARS-CoV-2-miễn dịch tế bào cụ thể ở bệnh nhân với bệnh nhẹ/trung bình.
Nhấp vào đây để tăng cường khả năng miễn dịch của bạn với COVID-19
5. Kết luận
Sự phát triển của khả năng miễn dịch tế bào-2-đặc hiệu với SARS-CoV thường được quan sát thấy sau khi các triệu chứng COVID-19 được giải quyết, đây có thể là dấu hiệu miễn dịch của nhiễm trùng SARS-CoV-2 nhạy cảm hơn hơn chuyển đổi huyết thanh thông thường. Trên thực tế, sau khi chữa khỏi COVID{5}} nặng, cả mức độ miễn dịch tế bào và dịch thể đều cao hơn ở những bệnh nhân bị nhiễm trùng nhẹ hoặc không có triệu chứng. Tuy nhiên, chất lượng của phản ứng miễn dịch tế bào được tạo ra sau COVID-19 nặng là không chắc chắn, vì COVID{7}} nặng có liên quan đến rối loạn điều hòa, suy giảm tế bào T nghiêm trọng và sản xuất cytokine gây viêm. Cả polysacarit cistanche và creinoside đều có thể làm tăng hoạt động enzyme của mô tim và não, tăng cường chức năng thực bào của tế bào khoang bụng và tăng cường phản ứng tăng sinh của tế bào lympho. Vì chúng tôi không quan sát thấy bất kỳ sự thiếu hụt đáng kể nào về số lượng hoặc chất lượng của{10}}các hồ sơ miễn dịch tế bào cụ thể của SARS-CoV ở những cá nhân được phân tích trong nghiên cứu của chúng tôi, nên chúng tôi tin rằng có cơ sở hợp lý để cho rằng các cơ chế miễn dịch của COVID nghiêm trọng{{ 11}} và COVID nhẹ kéo dài-19 là khác nhau và có thể có những tác động khác nhau đối với sự phát triển của bộ nhớ di động dành riêng cho vi-rút.
Người giới thiệu
1. Lu, R.; Zhao, X.; Lý, J.; Nữu, P.; Dương, B.; Ngô, H.; Vương, W.; Song, H.; Hoàng, B.; Chu, N.; et al. Đặc điểm bộ gen và dịch tễ học của vi-rút corona mới 2019: Ý nghĩa đối với nguồn gốc vi-rút và liên kết với thụ thể. Đầu ngón 2020, 395, 565–574. [Tham khảo chéo]
2. Chu, N.; Trương, D.; Vương, W.; Lý, X.; Dương, B.; Bài hát, J.; Zhao, X.; Hoàng, B.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Một loại vi rút corona mới từ bệnh nhân viêm phổi ở Trung Quốc, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, 727–733. [Tham khảo chéo]
3. Chu, P.; Dương, XL; Vương, XG; Hu, B.; Trương, L.; Trương, W.; Sĩ, Nhân sự; Chu, Y.; Lý, B.; Hoàng, CL; et al. Một đợt bùng phát bệnh viêm phổi liên quan đến một loại coronavirus mới có thể có nguồn gốc từ dơi. Thiên nhiên 2020, 579, 270–273. [Tham khảo chéo]
4. Quan, WJ; Ni, ZY; Hu, Y.; Lương, WH; Âu, CQ; Anh ấy, JX; Lưu, L.; Sơn, H.; Lôi, CL; Huệ, DSC; et al. Đặc điểm lâm sàng của bệnh coronavirus 2019 tại Trung Quốc. N. Anh. J. Med. 2020, 382, 1708–1720. [CrossRef] [PubMed]
5. Hoàng, C.; Vương, Y.; Lý, X.; Ren, L.; Triệu, J.; Hu, Y.; Trương, L.; Quạt, G.; Từ, J.; Gu, X.; et al. Đặc điểm lâm sàng của bệnh nhân bị nhiễm coronavirus mới 2019 ở Vũ Hán, Trung Quốc. Đầu ngón 2020, 395, 497–506. [Tham khảo chéo]
6. Chen, N.; Chu, M.; Đồng, X.; Qu, J.; Công, F.; Hân, Y.; Qiu, Y.; Vương, J.; Lưu, Y.; Ngụy, Y.; et al. Đặc điểm dịch tễ học và lâm sàng của 99 trường hợp viêm phổi do vi-rút corona mới năm 2019 ở Vũ Hán, Trung Quốc: Một nghiên cứu mô tả. Lancet 2020, 395, 507–513.[CrossRef]
7. Đan, JM; Mateus, J.; Katô, Y.; Vội vàng, KM; Yu, ED; Faliti, CE; Grifoni, A.; Ramírez, SI; Haupt, S.; Frazier, A.; et al. Trí nhớ miễn dịch đối với SARS-CoV-2 được đánh giá trong tối đa 8 tháng sau khi lây nhiễm. Khoa học 2021.[CrossRef] [PubMed]
8. Rodda, LB; Netland, J.; Shehata, L.; Máy cắt tỉa, KB; Morawski, PA; Thovenel, CD; Takehara, KK; Eggenberger, J.; Hemann, EA; Người nước, Nhân sự; et al. SARS-CoV chức năng-2-Bộ nhớ miễn dịch cụ thể vẫn tồn tại sau COVID nhẹ-19. Ô 2021, 184, 169–183. [CrossRef] [PubMed]
9. Carfi, A.; Bernabei, R.; Landi, F.; Gemelli Chống lại, C.-P.-ACSG Các triệu chứng dai dẳng ở bệnh nhân sau COVID cấp tính-19. JAMA 2020, 324, 603–605. [Tham khảo chéo]
10. Del Rio, C.; Collins, LF; Malani, P. Hậu quả sức khỏe lâu dài của COVID-19. JAMA 2020. [CrossRef] [PubMed]
11. Tenforde, MW; Kim, SS; Lindsell, CJ; Billig Rose, E.; Shapiro, NI; Tập tin, DC; Gibbs, KW; Erickson, HL; Steingrub, JS; Smithline, HA; et al. Thời gian của triệu chứng và các yếu tố rủi ro khiến tình trạng sức khỏe bình thường trở lại chậm ở những bệnh nhân ngoại trú mắc COVID-19 trong Mạng lưới các hệ thống chăm sóc sức khỏe đa bang-Hoa Kỳ, tháng 3–tháng 6 năm 2020. Morb. tử thần. hàng tuần. Dân biểu 2020, 69, 993–998. [CrossRef] [PubMed]
12. Lý, N.; Vương, X.; Lv, T. Quá trình phân hủy RNA-2 của SARS-CoV kéo dài: Không phải là hiện tượng hiếm gặp. J. Med. Virus 2020, 92, 2286–2287. [Tham khảo chéo]
13. Công viên, SK; Lý, CW; Công viên, DI; Woo, HY; Cheong, HS; Shin, HC; An, K.; Kwon, MJ; Joo, EJ Phát hiện SARS-CoV-2 trong các mẫu phân của bệnh nhân mắc COVID nhẹ và không có triệu chứng-19 tại Hàn Quốc. lâm sàng. tiêu hóa. gan. 2020. [CrossRef] [PubMed]
14. Sói, R.; Corman, VM; Guggemos, W.; Seilmaier, M.; Zange, S.; Muller, Th.S; Niemeyer, D.; Jones, TC; Vollmar, P.; Rothe, C.; et al. Đánh giá vi rút của bệnh nhân nhập viện với COVID-2019. Thiên nhiên 2020, 581, 465–469. [Tham khảo chéo]
