Vi khuẩn lam và các hợp chất có hoạt tính sinh học vi tảo trong quá trình lão hóa da: Khả năng khôi phục sự làm đầy ma trận ngoại bào và khắc phục tình trạng tăng sắc tố

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

TRỪU TƯỢNG

Là cơ quan lớn nhất trong cơ thể con người, da hoạt động như một hàng rào lý hóa, bảo vệ chống lại các tác nhân có hại từ môi trường, chẳng hạn như hóa chất, mầm bệnh, nhiệt độ và bức xạ. Tuy nhiên, sự nổi bật của làn da còn đi xa hơn, với vai trò tâm lý xã hội quan trọng trong dân số ngày càng già hóa. Được khuyến khích bởi sự quan tâm của người tiêu dùng về chăm sóc da, ngành công nghiệp mỹ phẩm đã và đang phát triển các công thức mới có khả năng làm giảm các dấu hiệu lão hóa rõ ràng nhất, bao gồm giảm mật độ và độ đàn hồi của da, nếp nhăn và tăng sắc tố. Đồng minh với việc chăm sóc da là tầm quan trọng ngày càng tăng của các sản phẩm tự nhiên, có được một cách bền vững từ các phương pháp ít tác động đến môi trường. Vi khuẩn lam và vi tảo ngày càng quan trọng trong lĩnh vực này, nhờ khả năng sinh tổng hợp các chất chuyển hóa thứ cấp có khả năng chống lão hóa. Trong bài đánh giá này, chúng tôi trình bày tổng quan về tiềm năng của vi khuẩn lam và các hợp chất vi tảo trong việc khắc phục lão hóa da, về cơ bản bằng cách khám phá tác động của chúng lên các metalloproteinase collagenase, elastase, gelatinase, và hyaluronidase, và các enzym khác liên quan đến quá trình hình thành sắc tố.

1. Giới thiệu

Chiếm 16% tổng trọng lượng cơ thể, da là cơ quan lớn nhất của con người.bioflavonoidsTrong số một số chức năng của nó, da hoạt động như một hàng rào vật lý, giúp bảo vệ chống lại các tác nhân gây căng thẳng có hại, chẳng hạn như hóa chất, mầm bệnh, bức xạ lạnh, nhiệt và tia cực tím (UVR)]. Ngoài ra, da đóng một vai trò quan trọng trong việc tổng hợp vitamin D, cần thiết cho việc duy trì cân bằng nội môi canxi, cũng như trong các chức năng miễn dịch, cảm nhận và điều chỉnh nhiệt độ cơ thể23. Về mặt cấu trúc, da được cấu tạo bởi ba lớp riêng biệt: biểu bì, hạ bì và hạ bì '(Hình 1). Lớp bề mặt và tiếp xúc nhiều nhất, biểu bì, là một biểu mô vảy sừng hóa phân tầng liên tục đổi mới, được cấu tạo chủ yếu bởi các tế bào sừng và tế bào hắc tố. Chức năng chính của nó dựa vào việc bảo vệ chống lại các mối đe dọa hóa học và sinh hóa môi trường, hoạt động như một hàng rào miễn dịch vật lý và thích ứng ?. Bên dưới lớp biểu bì, có lớp hạ bì, được cấu tạo bởi mô liên kết bao gồm chất nền ngoại bào (ECM) và các tế bào như nguyên bào sợi và đại thực bào. ECM là một mạng lưới ba chiều của các sợi collagen và elastin được bao quanh bởi các chất nền, chẳng hạn như axit hyaluronic (HA), hoạt động cùng nhau để duy trì độ đầy, độ đàn hồi và tính linh hoạt của da4 (Hình 1). Bất kỳ sự mất cân bằng nào giữa các thành phần chính này có thể dẫn đến mất cấu trúc da, dẫn đến vẻ ngoài không khỏe mạnh và già nua4. Với vai trò quan trọng của nó đối với các tính năng cá nhân và phúc lợi xã hội, việc giữ gìn tất cả các lớp da đã trở thành một trong những yêu cầu chính của xã hội hiện đại, điều này đã thúc đẩy sự phát triển của các sản phẩm mới và sáng tạo của ngành công nghiệp dược phẩm và mỹ phẩm6.

Các sản phẩm chăm sóc da và làm đẹp đã đóng một vai trò quan trọng trong lịch sử loài người. Những ghi chép lâu đời nhất về mỹ phẩm đến từ những người Ai Cập, những người đặc biệt quan tâm đến ngoại hình, cụ thể là sự phát triển của các nếp nhăn trên khuôn mặt. Do thời tiết khô và nóng mà dân số phải tiếp xúc, chăm sóc da bằng việc sử dụng các loại dầu và kem là một phần của việc chăm sóc da hàng ngày8.mua cistancheTrong những năm qua, các sản phẩm khác như muối, mật ong, hydroxy và axit tartaric cũng được sử dụng để điều trị và làm sạch da. Xuất phát từ nguồn gốc trong các phòng tắm công cộng của người La Mã cổ đại, thuật ngữ "mỹ phẩm", có nghĩa là "làm đẹp cơ thể", ". Hỗn hợp dùng để tiếp xúc với các bộ phận bên ngoài của cơ thể người (biểu bì, tóc, móng tay, môi và các cơ quan sinh dục ngoài) hoặc với răng và màng nhầy của khoang miệng, nhằm mục đích làm sạch, làm thơm, thay đổi sự xuất hiện, bảo vệ, giữ trong tình trạng tốt hoặc điều chỉnh mùi cơ thể "10. Trên toàn cầu, ngành công nghiệp mỹ phẩm là một trong những ngành ít bị ảnh hưởng nhất từ ​​sự dao động của thị trường tài chính. Theo một cuộc khảo sát gần đây", nó được dự đoán là một khối lượng kinh tế là 805,61 tỷ đô la vào năm 2023, do sự gia tăng tiêu dùng toàn cầu. Tương tự như vậy, sự gia tăng tuổi thọ trung bình đã dẫn đến nhu cầu mạnh mẽ đối với các sản phẩm chống lão hóa, do đó tạo ra cơ hội cho vô số đổi mới và thúc đẩy mức độ tăng trưởng của ngành.

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

Nhu cầu chính của xã hội liên quan đến làn da trên thực tế là sự trì hoãn của quá trình lão hóa da. Quá trình chậm và phức tạp này được gây ra bởi các yếu tố nội sinh như di truyền và các yếu tố ngoại sinh như thói quen cá nhân và môi trường'2. Lão hóa nội sinh là một quá trình tự nhiên mà da dần dần mất đi các đặc điểm cấu trúc và chức năng, là hệ quả tự nhiên của quá trình lão hóa tế bào do giảm khả năng trao đổi chất của tế bào, khả năng sửa chữa DNA, đột biến gen, mất telomere, nhiễm sắc thể.

bất thường và thay đổi nội tiết tốl3,12. Mặt khác, lão hóa ngoại sinh là do hóa chất, chất độc, chất ô nhiễm, điều kiện khắc nghiệt của lạnh hoặc nóng, và bức xạ '4. Trong cả hai trường hợp, hiện tượng này thường ảnh hưởng đến độ dày, cấu trúc và sắc tố của biểu bì, cũng như hình thái và cấu trúc vi mô của các lớp sâu hơn, dẫn đến da mỏng, khô, bong tróc, lỗ chân lông mở rộng, nếp nhăn, đốm đen và tăng sắc tố. ".

Trong những thập kỷ qua, nghiên cứu khoa học đã trải qua một bước phát triển đáng kể trong lĩnh vực sản phẩm chống lão hóa, tập trung vào các nguồn tự nhiên và quy trình xanh, không thử nghiệm trên động vật và với chu kỳ sống xanh, bao gồm đóng gói, sản xuất, phân phối, hậu sử dụng của người tiêu dùng và tìm nguồn cung ứng ".cistanchKết quả là, sự mở rộng đáng kể của các ngành công nghiệp mỹ phẩm đã xuất hiện và vô số sản phẩm mới đã được tung ra thị trường ". việc sử dụng các sinh vật khác như tảo vĩ mô và vi tảo nhân chuẩn, cụ thể là có nguồn gốc từ biển ''. Các sinh vật biển do đó đã nổi lên như một nguồn nguyên liệu mỹ phẩm dồi dào có thể giảm thiểu những thiệt hại xảy ra trong quá trình lão hóa da, chẳng hạn như sự hình thành và trầm trọng thêm của nếp nhăn, sắc tố, sự suy thoái collagen và mất độ đàn hồi và mất độ ẩm "". Trong số đó, vi khuẩn lam đã trở nên quan trọng, do khả năng tạo ra các chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học, với cấu trúc và cơ chế hoạt động độc đáo. Vi khuẩn gram âm này đại diện cho duy nhất nhóm sinh vật nhân sơ có thể thực hiện quang hợp tạo ôxy, tương tự như thực vật, mặc dù có tốc độ quang hợp cao hơn và sinh sản xuất hàng loạt2021. Khả năng tự làm mới, các yêu cầu dinh dưỡng cơ bản ", không gian canh tác tối thiểu và tác động môi trường thấp '' 2, khiến chúng trở thành lựa chọn bền vững cho các sản phẩm chăm sóc da. Sinh khối còn lại của chúng có thể được sử dụng làm phân bón hoặc trong thức ăn chăn nuôi và có thể tạo ra sinh học polyeste, được gọi là "Nhựa xanh", do đó phù hợp với khái niệm nền kinh tế tròn'72425. Với điều này, các sinh vật biển, và đặc biệt là vi sinh vật, có thể được coi là một hy vọng mới trong việc tìm kiếm các phân tử hoạt tính sinh học mới và sáng tạo, có thể chống lại các phản ứng dẫn đến tổn thương và lão hóa da.

Cistanche có thể chống lão hóa

2. Phương pháp

Mục đích của bài đánh giá này là tổng hợp các nghiên cứu hiện có về chiết xuất hoặc hợp chất hoạt tính sinh học được tạo ra bởi vi khuẩn lam và vi tảo để có khả năng phục hồi ECM da và khắc phục chứng tăng sắc tố. Đánh giá được thực hiện bằng cách sử dụng cơ sở dữ liệu Scopus, Web of Science, PubMed, ScienceDirect, ResearchGate và Google Scholar. Các cụm từ truy vấn bao gồm "vi khuẩn lam", "vi tảo", "hợp chất hoạt tính sinh học", "lão hóa da", "metalloproteinases", "collagenase", "gelatinase", "elastase", "hyaluronidase", "tyrosinase" và "tăng sắc tố". Ngoài ra, chúng tôi đã bổ sung tìm kiếm bằng cách khám phá thêm các tham chiếu của các bài báo được truy xuất từ ​​cơ sở dữ liệu được giới thiệu.

3. Vi khuẩn lam và vi tảo trong quá trình lão hóa da

Vi khuẩn lam và vi tảo là những nguồn dồi dào của các hợp chất hoạt động sinh học tự nhiên với các lĩnh vực ứng dụng khác nhau22. Được biết, vi khuẩn lam và vi tảo tổng hợp sắc tố, lipid (axit béo không bão hòa đa - PUFAs, hydrocacbon), protein, pol-ysaccharides (cellulose, alginate, tinh bột) và các hợp chất khác, với hoạt tính sinh học đã được chứng minh trong dược phẩm, năng lượng, dinh dưỡng và mỹ phẩm. các lĩnh vực242627. Liên quan đến ứng dụng năng lượng, các loại vi tảo đa dạng đang được sử dụng để sản xuất cồn sinh học, khí sinh học và hydro sinh học. Do hàm lượng protein và PUFAs cao, chúng cũng có thể được sử dụng để làm dinh dưỡng cho người và động vật24. Trong lĩnh vực dược phẩm, đáng chú ý là việc sản xuất Grassysta-tin AB đối với ung thư phổi, kempopeptin A đối với ung thư ruột kết và dolastatin 15 đối với ung thư vú28.cistanche ÚcCác nghiên cứu khác cho thấy chúng cũng có các hoạt động kháng u, chống đông máu, chống viêm và ức chế protease48. Về mỹ phẩm, các hợp chất hoạt tính sinh học của chúng, hầu hết ở dạng chiết xuất, đã được báo cáo là được sử dụng trong dầu gội đầu và xà phòng toàn thân1019, kem dưỡng da mặt, kem chống lão hóa, trang điểm và kem chống nắng. Liên quan đến kem chống nắng, một số vi sinh vật này tạo ra các hợp chất hấp thụ tia cực tím, chẳng hạn như axit amin giống mycosporine (MAAs) và Stoneman, cũng như carotenoid, phycobiliprotein và polyphenol, với vai trò quan trọng trong việc ngăn ngừa stress oxy hóa thông qua khả năng loại bỏ các chất độc hại. gốc tự do47. Chúng cũng tạo ra exopolysaccharides (EPS), với các đặc tính dưỡng ẩm quan trọng '', chất ức chế metalloproteinase "và các hợp chất có thể ức chế tyrosinase, và do đó tránh tăng sắc tố da",

3.1 Các hợp chất mục tiêu ECM

Lớp hạ bì được cấu tạo bởi mô liên kết lỏng lẻo và dày đặc, trong đó ECM là thành phần chính. ECM là một vật liệu giống như gel được tạo thành từ collagen và các sợi đàn hồi được phân tán trong chất nền được tạo ra từ glycosaminoglycans, proteoglycan và glycoprotein mô liên kết. Điều cần thiết là phải giữ các tế bào lại với nhau và cung cấp đường dẫn chất dinh dưỡng và oxy đến epider-mis³! Một số loại tế bào, chẳng hạn như tế bào sừng, nguyên bào sợi, đại thực bào, tế bào nội mô, tế bào mast, bạch cầu ái toan và bạch cầu trung tính, có khả năng sản xuất các enzym cụ thể chịu trách nhiệm về doanh thu ECM và trong một số tình huống, dẫn đến mất cấu trúc da và xuất hiện nếp nhăn . Gần đây, đã có nhiều nghiên cứu hơn về metalloproteinase, và tác động của chúng lên cấu trúc nền da, cũng như trong các enzym chịu trách nhiệm về sắc tố da. Cả metalloproteinase và các enzym liên quan đến sắc tố da đều trở thành mục tiêu cho các hợp chất hoạt tính sinh học có khả năng chống lão hóa. Do đó, chúng tôi trình bày dưới đây tổng quan về tiềm năng của vi khuẩn lam và các hợp chất có nguồn gốc từ vi tảo để khắc phục lão hóa da, tập trung vào các enzym chính chịu trách nhiệm duy trì cấu trúc nền da.

3.1.1.Metalloproteinase

Matrix metalloproteinase (MMPs) là một họ các enzym ngoại bào phụ thuộc vào kẽm, có chức năng chính là tái tạo và phân hủy ECM30. Collagen và elastin là các protein chính của ECM, chịu trách nhiệm về sức đề kháng và độ đàn hồi của da32. Do đó, bất kỳ sự thay đổi nào trong collagen và elastin do MMPs gây ra, sẽ góp phần làm mất cấu trúc da, dẫn đến tổn thương của nó³3. Tình trạng căng thẳng chính của da là tiếp xúc với UVR, làm trầm trọng thêm sự suy thoái của các sợi collagen và elastin trong ECM thông qua việc cảm ứng hoạt động của MMPs '. Mặc dù MMP rất quan trọng đối với sự khác biệt của biểu bì và ngăn ngừa sẹo vết thương, nhưng khả năng điều chỉnh tăng của chúng làm tăng các dấu hiệu lão hóa và sự phát triển của ung thư da ".

Bất chấp sự tồn tại của các phân nhóm MMP khác nhau, chẳng hạn như collagenase, gelatinase, stromelysins, matrilysins, MMP dạng màng （MT-MMPs）, trong số những nhóm khác 4, bài đánh giá này sẽ tập trung vào những gì liên quan nhất liên quan đến lão hóa da: collagenase, gelatinase, elastase, và hyaluronidase (Hình 1).

3.1.1.1. Ảnh ghép. Có các dạng phụ khác nhau của collagenase, ví dụ như MMPs -1, -8, -13 và -18, là các enzym phân giải protein chịu trách nhiệm cho việc bắt đầu phân mảnh collagen ở người

da, và để kiểm soát sự luân chuyển collagen³5. Các enzym này phân cắt tất cả các loại collagens kẽ trong da (I, Il và II) tại một vị trí duy nhất. Sau khi bị phân tách, các mảnh collagen mất ổn định ở nhiệt độ cơ thể và cấu trúc của chúng bị phá vỡ, góp phần làm mất cân bằng nội môi ở da và dẫn đến sự phá hủy mô 303637. Do đó, việc ức chế MMP tạo thành một chiến lược để phục vụ cấu trúc nền da, tránh tổn thương mô và trì hoãn sự hình thành nếp nhăn.

Một số báo cáo gần đây chỉ ra các hợp chất khác nhau được phân lập từ vi khuẩn lam và vi tảo là chất ức chế mạnh mẽ các enzym chịu trách nhiệm tiêu hóa các thành phần ECM, cần thiết để duy trì sự lấp đầy của lớp da, và chúng bị giảm tự nhiên trong quá trình lão hóa và tiếp xúc với các yếu tố phi sinh học có hại * (Hình 1 , Bảng 1). Một ví dụ là mycosporine -2- glycine (M2G) (Hình 2), được phân lập từ vi khuẩn lam Aphanothece halophytica, có đặc tính ức chế collagenase, với ICso mạnh mẽ là 0. 47mmol / L, có thể so sánh với của chất ức chế collagenase nổi tiếng là phenanthroline. Người ta cho rằng cơ chế ức chế enzym có thể liên quan đến khả năng của M2G để chelate ion canxi và hiệu quả của hợp chất trong việc ức chế sự hình thành liên kết chéo protein-protein phụ thuộc glycation, một quá trình liên quan đến sự phát triển da xỉn màu và giảm độ đàn hồi của da. Những kết quả này đã chứng minh M2G là một ứng cử viên hấp dẫn cho sự phát triển của mỹ phẩm chống lão hóa mới và nhấn mạnh tiềm năng của nó trong việc ngăn ngừa lão hóa da³ ".

Một chiết xuất protein có thể làm giảm sự biểu hiện của MMP -1 ở mRNA và mức protein thu được từ vi tảo Chlorella minutissima **. Ngoài ra, một peptide có nguồn gốc Chorella đã được tìm thấy để ức chế sự biểu hiện MMP -1 do tia UVB gây ra, trong nguyên bào sợi của người được chiếu xạ tia UVB, bằng cách ngăn chặn sự biểu hiện của protein truyền tín hiệu được ECM-asso-ciated CYR61, yếu tố phiên mã AP {{ 7}} và sản xuất yếu tố hóa học MCP -1. Những kết quả này là rất quan trọng vì sự điều chỉnh của CYR61 kích hoạt sự thay đổi của collagen loại I tương tự như những thay đổi đã được xác minh ở da có tuổi được chụp ảnh và theo trình tự thời gian, một khi chiếu xạ tia cực tím gây ra sự phiên mã của AP -1 và MCP {{14} }, lần lượt kích thích MMP -1 biểu thức4!

Arthrospira maxima là một ví dụ khác về vi khuẩn lam có thể tạo ra các peptit chống collagenase. Phần peptit PHS cho thấy hoạt động chống collagenase (92,5%) với ICso là 32,5 ug / mL so với chất ức chế tổng hợp (57,13%) "4. Trình tự peptit này có thể giống với vị trí phân cắt trong collagen tự nhiên, và do đó ngăn chặn sự suy thoái của ECM. Cạnh tranh với vị trí hoạt động của enzyme được chỉ ra là hành động ngăn chặn collagenase của các peptit này.

3.1.1.2.Gelatinases

Gelatinase (MMPs -2 và -9) làm suy giảm màng nền và làm biến tính cấu trúc collagens3036. Các enzym này rất cần thiết trong việc tiêu hóa các đoạn collagen sau khi chúng được phân cắt ban đầu bởi các mũi cắt ghép "3. Mặc dù, với số lượng thấp hơn, nhưng cũng có báo cáo về khả năng các hợp chất có nguồn gốc từ vi khuẩn lam hoạt động trên các mũi gelati (Hình 1, Bảng 1) ). Kunte và Desai "đã đánh giá tác dụng của chiết xuất protein phycobiliprotein C-phycocyanin có chứa (chiết xuất C-PC) thu được từ vi khuẩn lam Spirulina platensis, trong gelatinases của người MMP -2 và MMP -9. Các tác giả nhận thấy rằng, bên cạnh việc làm giảm đáng kể hoạt động của MMP -2 xuống 55,13 phần trăm và của MMP -9 là 57,9 phần trăm, chiết xuất C-PC cũng làm giảm biểu hiện mRNA của cả hai gelatinase, trong tế bào ung thư tế bào gan dòng HepG2. Mặc dù cơ chế chính xác của sự ức chế vẫn chưa được biết, nhưng những phát hiện này có thể dẫn đến những hiểu biết mới hơn về S. platensis như một nguồn tiềm năng của các phân tử hoạt tính sinh học trị liệu. Một năm sau, cùng các tác giả đã tìm thấy một chiết xuất protein khác từ Chlorella minutissima làm giảm thành công sự biểu hiện mRNA của MMP -2 và 9 ở người, đồng thời điều chỉnh sự biểu hiện mRNA của chất ức chế mô của metalloproteinase -3 (TIMP { {24}}) 40.

3.1.1.3.Elastase

Elastase (MMPs -12) là một protease serine có khả năng tiêu hóa elastin duy nhất. Sau collagen, elastin là thành phần phong phú nhất của mô liên kết ở lớp hạ bì437. Sự suy thoái của sợi elastin dẫn đến mất độ đàn hồi của da và kéo theo đó là tình trạng chảy xệ và già đi.lợi ích cistancheMMP -12 là MMP hiệu quả nhất chống lại elastin và nó được tạo ra bởi các thực khuẩn thể vĩ mô và nguyên bào sợi để phản ứng với bức xạ UV "5. Một số báo cáo gần đây đã đề cập đến khả năng của các hợp chất tự nhiên có nguồn gốc từ vi khuẩn lam và vi tảo để vượt qua elastase - hoạt tính (Hình 1, Bảng 1). Gần đây, người ta đã tìm thấy các chuỗi depsipeptides tutuilamides AC, được phân lập từ vi khuẩn lam Schizothrix sp. và Coleofasciculus sp, hoạt động như chất ức chế mạnh elastase tuyến tụy của lợn (PPE), thông qua một chế độ liên kết có thể đảo ngược tương tự. đối với những hợp chất lyngbyastatin tự nhiên của vi khuẩn lam ". Theo các tham số của Viện Ung thư Quốc gia, chúng ta có thể xem xét rằng tutuilamide AC có giá trị ICso thấp đáng kinh ngạc (1,18 nM, 2,05 nM và 4,93 nM), là tutuilamide A (Hình 2) là hợp chất có nguồn gốc từ vi khuẩn lam hiệu quả nhất liên quan đến việc ức chế elastase. Phân tích cấu trúc của tutuilamide A được tạo phức với PPE đã xác nhận một liên kết hydro bổ sung giữa dư lượng axit enoic 4- chloro -3- metyl nhưng -3- và nhóm amide xương sống của dư lượng elastase R226, dường như ổn định phối tử và có thể giải thích hiệu lực ức chế tăng lên của hợp chất. Trên thực tế, tutuilamide A cho thấy tiềm năng ức chế elastase cao hơn khi so sánh với các hợp chất khác như lyngbyastatin 7, nơi tương tác bổ sung này không xảy ra *.

Other compounds such as the cyclic depsipeptides lyngbyasta-tin-4,-5,-6, and -7,somamide B, tiglicamides A-C, and largamides A-C, produced by Lyngbya spp,were shown to selectively inhibit PPE in vitro47-49. Lyngbyastatin -5, -6, -7, and somamide B inhib-ited elastase in a competitive way, following the Michaelis-Menten kinetics. The 2-amino-2-butenoic acid (Abu) moiety of the hexa-depsipeptide core appears to be the main contributor to the selectivity for elastase3. The activity of largamides A-C and tiglica-mides A-C in elastase inhibition was inferior to lyngbyastatin 4-74950. Later, three new members of lyngbyastatins, namely lyng-byastatins 8, 9 and 10 isolated from the marine cyanobacteria Lyngbia semiplena, were also found to inhibited PE, with ICso val-ues ranging from 120 to 210 nM>'. Mặc dù đây là những giá trị ICso cao, chúng biểu thị tiềm năng của lyngbyastatins đối với sự ức chế elas-tase và mở ra cánh cửa cho các nghiên cứu sâu hơn trong đó các sửa đổi hóa học có thể được xem xét để tăng hoạt tính và tính đặc hiệu của các hợp chất. Trong số các lyngbyastatin được đánh giá cho đến nay, lyngbyastatin 5 (Hình 2) và lyngbyastatin 6 là hiệu quả nhất chống lại elastase, với giá trị ICso tương ứng là 3,2 và 3,3nM. Trong cùng một chi, Rubio và nhóm của ông 52 đã phân lập được hai chất tương tự depsipeptit vòng tuần hoàn của dolastatin 13, bouillo-mides A và B, từ vi khuẩn lam Lyngbya bouillonii, và nhận thấy khả năng của chúng trong việc ức chế chọn lọc các protease serine này, mặc dù với ICso （ 1,9μM）. Phần gốc Abu cũng được gửi trước trong hai hợp chất này, điều này củng cố vai trò của nó trong tính chọn lọc đối với elastase. Một dep-sipeptit khác có chứa gốc Abu, stigonemapeptin, được phân lập từ Stigonema sp, cũng cho thấy hoạt động ức chế elastase chọn lọc, với ICso là 0. 26μM53.

Salvador và cộng sự? 4 đã chứng minh rằng opelostatin 5-10 (Abu chứa các depsipeptides vòng) (Hình 2), được phân lập từ vi khuẩn lam Symploca sp., Ức chế mạnh mẽ hoạt động pro-teo của elastase (ICso từ 37 đến 89nM) , tương tự như câu chuyện ngụ ngôn về hoạt động của các hợp chất liên quan lyngbyastatin 4 và 7. Người ta cũng chỉ ra rằng các hợp chất chứa N-Me-Tyr (objlostatin 8-10) mạnh hơn một chút so với N-Me-Phe của chúng ( conslostatin 5-7) các đồng loại trong việc ức chế elastase PPE và elastase bạch cầu trung tính ở người. Các hợp chất này, với độ đặc hiệu cao đối với elastase, làm giảm tác dụng của elastase trong việc kích hoạt thụ thể và thể hiện hoạt tính vượt trội hơn sivelestat chất ức chế elastase đã được phê duyệt trên lâm sàng, trong các thử nghiệm ngắn hạn, và cũng cho thấy hoạt tính bền vững vượt trội trong các thử nghiệm dài hạn54.

The cyclic depsipeptides oscillapeptins A, B, D, and E, isolated from Oscillatoria agardhil, inhibited elastase with ICso values of 0.3, 0.05,30, and 3.0ug/mL, respectively. The structure/activity analysis of these compounds suggested that the presence of an amino acid residue between Thr and the 3-amino-6-hydroxy-2-piperidone (Ahp) unit is essential in the selectivity>?. Microviri-din peptit ba vòng I cho thấy hoạt động ức chế elastase với ICso là 0. 34ug / mL. Các depsipetide vòng có chứa gốc Ahp như oscil-lapeptin G và oscillapeptilides 97- A, -B, cũng được công nhận là chất ức chế elastase （ICso =0. 73, 0. 42 và 1.12 ug / mL） độ. Các peptit loại viridin khác (G và H) và nostopeptin (A và B), được tạo ra bởi Nostoc min đờm, cũng đã chứng minh khả năng ngăn chặn sự thoái hóa elastin thông qua ức chế elastase5758. Vi khuẩn lam Microcystis aeruginosa cũng được chứng minh là sản xuất microviridin, cụ thể là microviridin B và C, ức chế elastase với ICso=0. 0 44 và 0. 084 ug / mL và micropeptins HH978, HH960, HH992 và DR1006, vớiICso =17. 6,55.5,16,9 và 13,0μM, tương ứng. Microviridin B và C có ICso tương tự chống lại elastase như G và H, và quan sát này có thể được giải thích, ít nhất một phần, bởi cấu trúc phân tử: đã báo cáo rằng trình tự axit amin của X-Thr-Y ảnh hưởng đến hoạt động ức chế elastase, và cả hai microviridin B, C, G và H đều có gốc axit amin ưa nước ở vị trí của X và Leu ở vị trí của Y 59-61

Một peptit mới, molassamit, từ Dichothrix utahensis, được phát hiện có hoạt tính ức chế protease serine chống lại elastase với ICso=0. 032μM, và có đặc điểm chọn lọc tương tự như những chất được mô tả trước cho lyngbyastatin 4-7, có thể do sự giống nhau về cấu trúc của chúng

2. Hai chuỗi pôlipeptit khác có hoạt tính

chống lại elastase được phân lập từ Scytonema Hofmann, và được chỉ định là A và B * 3 tâm thu. Mối tương quan giữa cấu trúc phân tử và hoạt tính sinh học cũng có thể được dự đoán, khi hai đặc điểm khác biệt được quan sát thấy: vị trí thứ năm được thay thế bởi Leu, như đã báo cáo trước đây trong microviridin và 3- dư lượng clo hóa N-metyl-Tyr ở vị trí thứ tám. Như trong các nghiên cứu trước, PPE được sử dụng làm mô hình, và scyptolin A và B được báo cáo là có thể ngăn chặn hoạt động của elastase ở nồng độ thấp. Người ta đã chứng minh rằng các scyptolin liên kết trực tiếp vào trung tâm hoạt động của peptidase đích, theo cách giống như chất nền, tuy nhiên, cơ sở phân tử của tính chọn lọc này vẫn chưa rõ ràng

Planktothrix rubescens là một vi khuẩn lam khác sản xuất chất ức chế elastase (planktopeptin BL1125, BL843 và BL1 0 6) với giá trị ICso tương ứng là 96 nM, 1,7 μM và 40 nM. Sau khi kiểm tra cấu trúc phân tử của các hợp chất này, có thể dự đoán mối quan hệ cấu trúc-hoạt động, được tiết lộ rằng chuỗi bên linh hoạt của các phân tử cho thấy tính chọn lọc mar-ginal đối với elastase. BL1125 là một chất ức chế liên kết chặt chẽ cạnh tranh lót của bạch cầu người (HLE) (K; =2. 9nM) và pan-creatic (K =7. 2nM) elastase, và có hiệu quả trong việc ức chế sự phân cắt, không chỉ của chất nền tổng hợp, mà còn của elastin có nguồn gốc tự nhiên. HLE đã trở nên phù hợp hơn do nó tham gia vào một số quá trình bệnh lý, vì vậy, việc tìm kiếm các mô đệm cho enzyme này có lợi ích điều trị chiến lược? 4. Nhiều năm sau, Bubik và các đồng nghiệp * 5, đã phát hiện ra các peptid anabaeno-peptins B và F từ cùng một dòng vi khuẩn lam, cũng có khả năng ức chế HLE và PPE, mặc dù ở mức độ thấp hơn PPBL1125. Các cấu hình ức chế của HLE cho thấy sự ức chế cạnh tranh, với K; các giá trị giữa 0. 1-1 μM. Về PPE, các cấu hình cho thấy hình dạng sigmoid, mô tả sự liên kết của hai phân tử chất ức chế với enzyme. Phân tử chất ức chế đầu tiên có K; từ 1-2 uM và thứ hai, được gửi trước K; giá trị cao hơn xấp xỉ 50- lần 5.

Sự ức chế HLE cũng đạt được với sản phẩm brunsvicamides AC do Tychonema sp. Các hợp chất này có tính chọn lọc cao đối với HLE với K; các giá trị tương ứng là 1,1, 0. 7 0 và 1,6 uM, được tính toán với giả định là ức chế cạnh tranh. Nó cũng được báo cáo rằng brunsvicamide có thể hoạt động như chất nền HLE thay thế với sự diacyl hóa giảm tốc mạnh 0. Một sự ức chế HLE khác đã được tìm thấy với Nostoc insulare cyanopeptolins, insulapeptolides AH. Insulapeptolides AD có giá trị ICso từ 85 (K; giá trị 36nM) đến 140 nM, do đó là chất ức chế mạnh, trong khi insulapeptolides EH ít hoạt động hơn, với giá trị ICso thay đổi từ 1,6 đến 3,5 uM. Do đó, có thể kết luận rằng các hợp chất này chiếm vị trí liên kết cơ chất của HLE, cho thấy rằng các insulapeptolide hoạt động như chất ức chế cạnh tranh bằng cách tạo phức chất ức chế enzym không cộng hóa trị với HLE6 ′ (Bảng 1).

Các depsipeptit theo chu kỳ được phân lập từ vi khuẩn lam đã cho thấy tiềm năng to lớn để tránh và làm chậm quá trình thoái hóa elastin thông qua cả ức chế elastase trực tiếp và can thiệp ở mức độ biểu hiện của enzym. Trong một số tình huống, tính đặc hiệu cao của enzyme đặt các hợp chất này lên hàng đầu trong việc phát triển các công thức chống lão hóa hiệu quả và sáng tạo, có khả năng duy trì và cải thiện độ đầy của lớp da, đồng thời trì hoãn sự hình thành các nếp nhăn. Trong số các phân tử đã trình bày trước đây, tutuilamide và lyngbyastatins dường như đáng được các ngành công nghiệp dược phẩm và mỹ phẩm nghiên cứu thêm, dựa trên khả năng chống lại enzyme này đã được chứng minh.

3.1.1.4.Hyaluronidases

Quá nhiều nước bề mặt bị mất đi do bay hơi góp phần rất lớn vào quá trình lão hóa da. Nước bay hơi được thay thế bằng nước từ các lớp biểu bì trong cùng và lớp hạ bì, dẫn đến co rút tế bào và trong trường hợp xấu nhất là chết tế bào * 863. Mối quan hệ giữa quá trình hydrat hóa da và sự xuất hiện của các nếp nhăn đã chứng minh rằng quá trình hydrat hóa da làm giảm đáng kể độ sâu của nếp nhăn và rãnh nhăn. Độ ẩm thích hợp cho da một phần là nhờ việc duy trì axit hyaluronic (HA), do khả năng giữ nước độc đáo của nó. Hyaluronidases (HASEs) là các enzym phân hủy các polyme bằng cách phân cắt HA có trọng lượng phân tử cao thành các mảnh nhỏ hơn .4.HA là phân tử quan trọng liên quan đến độ ẩm của da. Chức năng của nó, trong số những chức năng khác, là để liên kết nước và bôi trơn các bộ phận có thể chuyển động của cơ thể'2. Như đã nêu, HA bị phân hủy thành các mảnh có kích thước khác nhau bởi HASEs ^?. HA được tìm thấy trong lớp da non ở ngoại vi của các sợi collagen và elastin. Da già, kém căng mọng hơn da trẻ, được đặc trưng bởi lượng HA giảm. Sự giảm nồng độ HA có thể liên quan đến những thay đổi được ghi nhận ở da già, bao gồm nếp nhăn, độ đàn hồi bị thay đổi và giảm độ ẩm74. Đánh bại các enzym chịu trách nhiệm cho sự suy thoái HA dường như là một chiến lược hiệu quả để trì hoãn quá trình lão hóa da và cải thiện vẻ ngoài của làn da ở mọi lứa tuổi.

Về hoạt động ức chế HASE, Yamaguchi và Koketsu75 nhận thấy rằng vi khuẩn lam Nostochopsis lobatus MAC 0 8 {{1 0}} 4NAN tạo ra một lượng lớn polysaccharide có tác dụng ức chế cao （ICso {{2} } .18ug / mL） trên HASE, mạnh hơn khoảng 14,5 lần so với chất ức chế tự nhiên dinatri cromoglycate. Là một loài ăn được nên nó được sử dụng cho mục đích thẩm mỹ, cũng như được người tiêu dùng chấp nhận vì nó đã có hồ sơ an toàn được biết đến. Bên cạnh các hợp chất tinh khiết, người ta cũng nhận thấy rằng các chất chiết xuất, cụ thể là các phân đoạn không tan trong etanol, có thể ức chế hoạt động của HASE, như được chỉ ra bởi Fujitani et al. trong một nghiên cứu được thực hiện với bảy chi vi tảo khác nhau (Bảng 1). Các loài tảo Spirulina platensis, Porphyridium purpureum, Rhodosorus Marinus, Chlorella pyrenoidosa, Dunaliella salina và Pleurochrysis carterae là 0. 15, 0. 18, 0. 26,0,94,0.15 và 0,41 mg / mL, tương ứng với S.platensis và D. salina có giá trị tương tự như giá trị của chất ức chế HASE tự nhiên. Người ta báo cáo rằng phần không tan trong etanol bao gồm các đại phân tử như polysaccharid, có thể tham gia vào quá trình ức chế hyaluronidase.

Việc sử dụng các chất chiết xuất hiệu quả làm thành phần hoạt tính để sản xuất mỹ phẩm có thể tạo nên một mặt tài sản cho các hợp chất cô lập, do năng suất chiết xuất cao hơn và chi phí chế biến thấp hơn.

3.2. Sắc tố

Làm trắng da, cũng như làm đẹp và đồng đều sắc tố da về mặt thẩm mỹ, là trọng tâm hàng đầu của nhiều ngành công nghiệp mỹ phẩm. Da thường bị sạm đen bất thường do tia UV, quá trình lão hóa và mang thai. Mặc dù chứng tăng sắc tố da không có hại theo bất kỳ cách nào, nhưng đôi khi nó có thể gây ra các vấn đề nghiêm trọng, chẳng hạn như u ác tính. Do đó, một số phương thức điều trị đang được nghiên cứu về hiệu quả của chúng để điều trị các rối loạn sắc tố da, Melanogenesis xảy ra ở các tế bào hắc tố, nằm ở đáy biểu bì, trong một quá trình bao gồm một số phản ứng hóa học và enzym để tạo ra melanin, một thành phần chính của da màu sắc Tăng sắc tố có thể xảy ra thông qua sự gia tăng số lượng tế bào hắc tố, hoặc do hoạt động quá mức của các enzym tạo hắc tố -Tyrosinase780 (Hình 1). Sự tích tụ của lượng melanin bất thường chủ yếu là do tiếp xúc với tia UVR, làm tăng mức độ sản xuất oxy phản ứng (ROS). ROS được tạo ra trong lớp biểu bì của da và kích thích tế bào hắc tố chuyển đổi tyrosine thành melanin bằng quá trình oxy hóa, thông qua hoạt động của tyrosinase. Tyrosinase là một loại enzyme quan trọng xúc tác quá trình tổng hợp melanin trong tế bào hắc tố. Do đó, sắc tố da có thể được ngăn chặn bằng chất ức chế tyrosinase-tors1081. Một số chất ức chế tyrosinase nổi tiếng là hydroquinone (HQ), axit kojic và arbutin. Mặc dù có hiệu quả như chất làm lắng cặn, nhưng các hợp chất này không phải là không có tác dụng có hại. Người ta đã chứng minh rằng HQ có tác dụng gây đột biến và gây độc tế bào đối với tế bào V79 của động vật có vú82, gây tổn thương DNA88, và có một số bằng chứng về hoạt tính gây ung thư84. Về axit kojic, kích ứng da và viêm da dị ứng được phát triển sau khi sử dụng các sản phẩm chăm sóc da có chứa nó85. Liên quan đến arbutin, việc sử dụng ở nồng độ cao hơn gây kích ứng da và tăng sắc tố da 3. Ngoài ra, chúng có độc tính cao, độ ổn định thấp, thẩm thấu qua da kém và không đủ hoạt động87. Đối mặt với những người bị phơi nhiễm, điều cực kỳ quan trọng là phải tìm ra các giải pháp thay thế để khắc phục chứng tăng sắc tố hoặc tìm các chất ức chế tyrosinase mới có hiệu quả và ít tác dụng phụ có hại hơn. Các nghiên cứu về sự ức chế tyrosinase của vi khuẩn lam và các hợp chất có nguồn gốc từ vi tảo cho đến nay còn rất hạn chế, và phần lớn các nghiên cứu hiện có khám phá tyrosinase của nấm như một mô hình enzym, gây khó khăn cho việc dịch kết quả sang môi trường con người. Tuy nhiên, một số hợp chất có triển vọng và chiết xuất hoạt tính sinh học từ vi khuẩn lam và vi tảo đã xuất hiện trong những năm qua (Bảng 2).

Ví dụ về tiềm năng của vi khuẩn lam trong việc tăng sắc tố da bao gồm chiết xuất thô của Arthrospira platensis. Sahin8 ', nhận thấy rằng chiết xuất etanol và nước của A. platensis thể hiện các giá trị ICso trên một quy mô tương đương với các giá trị của axit kojic. Người ta phát hiện ra rằng một số hợp chất phenolic được tạo ra bởi loài này, ví dụ như axit caffeic và axit ferulic, và có trong các chất chiết xuất, được coi là chất ức chế hiệu quả nhất của enzym tyrosinase, với giá trị ICso thấp hơn đáng kể so với các loại thuốc axit kojic và arbutin. Mặc dù các tác giả đã thực hiện nghiên cứu trên mô hình enzym không phải của con người, việc so sánh kết quả của họ với kết quả của các chất ức chế tyrosinase ở người cho thấy chiết xuất A. platensis là tiền chất thay thế để thu được cả chất ức chế hiệu quả và an toàn hơn đối với hoạt động của tyrosinase87.

Năm 1996, một nghiên cứu được thực hiện với Oscillatoria agardhii đã chứng minh rằng oscillapeptin G thể hiện sự ức chế tyrosinase ở 55% đối mặt với sự kiểm soát không được điều trị, nhưng không có thuốc tham chiếu hoặc cơ học nào được khám phá88. Nghiên cứu phức tạp hơn trong chuyên đề này đã được thực hiện bởi Wu và các đồng nghiệp, những người đã khám phá tác dụng chống tạo hắc tố của C-PC từ Spirulina sp., Sử dụng tế bào hắc tố chuột B16F10. Các tác giả phát hiện ra rằng C-PC ức chế quá trình sinh tổng hợp melanin theo cơ chế kép, một cơ chế thúc đẩy sự thoái hóa của protein MITF, yếu tố phiên mã của tyrosinase, thông qua việc điều chỉnh con đường tín hiệu MAPK / ERK và cơ chế kia bằng cách ngăn chặn sự hoạt hóa của CREB , yếu tố phiên mã của MITF, thông qua cơ chế điều hòa đi xuống của con đường MAPK p38 89. Ồ và đồng nghiệp? đã khám phá một peptide mới được phân lập từ Pavlova lutherie trong quá trình tạo ROS và biểu hiện của các protein đặc hiệu tạo hắc tố. Các tác giả phát hiện ra rằng peptit này thể hiện đặc tính ức chế chống lại sự hình thành hắc tố do Hormone kích thích c-Melanocyte thông qua hàm lượng melanin, ức chế tyrosinase trong tế bào hắc tố B16F10 và cũng làm giảm các protein liên quan đến hình thành hắc tố. Do đó, protein này có tác dụng làm trắng da tiềm năng và tác dụng bảo vệ nổi bật đối với tổn thương tế bào do stress oxy hóa gây ra, có thể được sử dụng như một nguồn tự nhiên hiệu quả trong các sản phẩm mỹ phẩm và dược phẩm.

Bất chấp các thử nghiệm trong ống nghiệm khan hiếm trong chủ đề tăng sắc tố da bằng cách sử dụng vi khuẩn lam và các hợp chất có nguồn gốc từ vi tảo, công ty CODIF Research & Nature đã tiến một bước với một thử nghiệm có sự tham gia của các tình nguyện viên là con người. Công ty công nghệ sinh học này, chuyên khám phá các nguồn tài nguyên biển để sản xuất mỹ phẩm, đã phát triển một chiết xuất công nghệ sinh học, PHORMISKIN Bioprotech G @, từ vi khuẩn lam Phormidium persicinum, có thể làm giảm sự tổng hợp melanin. Trong một nghiên cứu, 15 tình nguyện viên trong độ tuổi từ 25 đến 46 tuổi đã áp dụng chiết xuất này, với nồng độ 2%, trong 28 ngày liên tục. Sau thời gian thử nghiệm, sắc da trở nên đồng đều hơn và da sáng hơn. Chiết xuất cũng kích thích sự tổng hợp protein thioredoxin, được biết đến với đặc tính chống oxy hóa và giải độc ",

Ngoài ra còn có một số nghiên cứu với các chiết xuất hoạt tính sinh học và các hợp chất được phân lập từ vi tảo. Một trong số họ sử dụng astaxanthin từ Haematococcus Pluvialis và cho thấy tác dụng đa mục tiêu của xanthophyll này, cụ thể là trong việc ức chế sự tích tụ ROS và điều chỉnh giảm tyrosinase. Trong nghiên cứu này, những con diestêron astaxanthin có hoạt tính ức chế tyrosinase cao nhất so với những con đơn tính, có giá trị ICso tương ứng là 2,12 và 3,5 ug / mL. Do đó, các đặc tính đã đề cập có thể ngăn chặn sự tăng sinh và tích tụ không kiểm soát của các tế bào hắc tố, và do đó là sắc tố melanin. 2. Ngoài ra, một cuộc khảo sát khác với zeaxanthin từ Nannochloropsis oculata đã báo cáo hoạt động ức chế tyrosinase phụ thuộc vào liều lượng ", giả định tiềm năng của xanthophylls là tác nhân làm sáng.

Một cách tiếp cận khác để ngăn ngừa sự hình thành melanosome trên da là sử dụng vitamin C và E * 4. Về vấn đề này, có thể giả định rằng Spirulina sp.8995 và Chlorella Vulgaris? 6 là ứng cử viên tuyệt vời cho mục đích thẩm mỹ, do hàm lượng đáng kể của chúng trong các loại vitamin này.

Trong nỗ lực chỉ ra mối quan hệ có thể có cấu trúc-hoạt động và tính đến các giá trị ICso được tìm thấy cho các vi khuẩn lam khác nhau và các hợp chất có nguồn gốc từ vi tảo, có vẻ như các axit phenolic như axit caffeic và axit ferulic, có trong các chất chiết xuất có hoạt tính sinh học và cấu trúc phân tử tương tự như axit kojic, có hiệu quả trong việc ức chế tyrosinase hơn peptit.

4. Viễn cảnh tương lai

Mối quan tâm trong việc trì hoãn ảnh hưởng của lão hóa là động lực cho việc đầu tư vào việc tìm kiếm các hợp chất mới, sáng tạo, hiệu quả và thân thiện với môi trường, nhằm mục đích khám phá ra công thức chống lão hóa hoàn hảo. Đồng minh với điều này, nghiên cứu ngày càng tăng trong các nguồn tự nhiên, đặc biệt là từ nguồn gốc biển, đã cung cấp vô số các phân tử mới với các hoạt tính sinh học đầy hứa hẹn đáng được khai thác hơn nữa trong lĩnh vực lão hóa da. Bên cạnh những lợi thế vốn có của việc sử dụng vi khuẩn lam và vi tảo làm nhà sản xuất trao đổi chất, nó đã được chứng minh ở đây tiềm năng to lớn của chúng trong việc nhắm mục tiêu các enzym cụ thể liên quan đến quá trình lão hóa, hầu hết thời gian với hoạt tính cao hơn đáng kể so với các loại thuốc tham chiếu hiện đang được sử dụng. Về vấn đề này, có vẻ như không còn nghi ngờ gì nữa khi các nghiên cứu độc tính và công nghệ sinh học tiếp theo sẽ là bước tiếp theo để đánh giá độ an toàn và hiệu quả của các phân tử này trong các công thức chống lão hóa, và chúng có thể sẽ cách mạng hóa thị trường mỹ phẩm.

Sự nhìn nhận

Công việc này được hỗ trợ bởi ALGAVALOR-MicroALGAs: sản xuất tích hợp và định giá sinh khối và các ứng dụng khác nhau của nó-SI I&DT no 352234- được hỗ trợ bởi PORTUGAL 2020 thông qua Quỹ Phát triển Khu vực Châu Âu và bởi công nghệ sinh học BLUEHUMAN-BLUE như một con đường cho đổi mới về sức khỏe CON NGƯỜI nhằm tăng trưởng thông minh ở Khu vực Đại Tây Dương-EAPA _151 / 2016 của Chương trình Khu vực Liên Đại Tây Dương do Quỹ Phát triển Khu vực Châu Âu tài trợ. ClIMAR thừa nhận tài trợ chiến lược UIDB / 04423/2020 và UIDP / 04423/2020.

Tuyên bố công khai

Các tác giả báo cáo không có xung đột lợi ích. Các nhà tài trợ không có vai trò gì trong việc thiết kế nghiên cứu, trong việc thu thập, phân tích hoặc giải thích dữ liệu, trong việc viết bản thảo hoặc quyết định công bố kết quả.

Kinh phí

Công việc này được hỗ trợ bởi ALGAVALOR-MicroALGAs: sản xuất tích hợp và định giá sinh khối và các ứng dụng khác nhau của nó-SI I&DT no 352234- được hỗ trợ bởi PORTUGAL 2020 thông qua Quỹ Phát triển Khu vực Châu Âu. CIMAR thừa nhận tài trợ chiến lược UIDB / 04423/2020 và UIDP / 04423/2020.

Bài viết này được trích từ HÀNH TRÌNH CỦA ENZYME INHIBITION AND MEDICINICAL CHEMISTRY 2021, VOL. 36, KHÔNG. 1, 1829–1838 https://doi.org/10.1080/14756366.2021.1960830