Sự hấp thụ cytokine trong quá trình tưới máu ở thận của con người làm giảm chức năng ghép bị trì hoãn liên quan đến dấu hiệu gen viêm

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

John R. Ferdinand1,2|Sarah A. Hosgood2,3|Tom Moore2,3|Ashley Ferro1|Christopher J. Ward1|Tomas Castro-Dopico1|Michael L. Nicholson2,3|Menna R. Clatworthy1,2

1 Đơn vị Miễn dịch Phân tử, Khoa Y Đại học Cambridge, Phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử, Cambridge, Vương quốc Anh

2 Viện nghiên cứu sức khỏe quốc gia về máu và đơn vị nghiên cứu cấy ghép trong hiến tặng nội tạng, Cambridge, Vương quốc Anh

3 Khoa Phẫu thuật của Đại học Cambridge, Cambridge, Vương quốc Anh

Cấy ghép là phương pháp điều trị tối ưu cho hầu hết bệnh nhân giai đoạn cuốiquả thậndịch bệnhnhưng tình trạng thiếu nội tạng là một thách thức lớn. Truyền dịch bằng máy định mức (NMP) đã được sử dụng để phục hồi các cơ quan cận biên; tuy nhiên, các cơ chế mà NMP có thể mang lại lợi ích cho các cơ quan vẫn chưa được hiểu rõ. Sử dụng các cặp thận của con người thu được từ cùng một người hiến tặng, chúng tôi so sánh tác động của NMP với hiệu quả của việc bảo quản lạnh trên toàn cầuquả thậnhệ Phiên mã. Chúng tôi nhận thấy rằng việc bảo quản lạnh dẫn đến sự giảm biểu hiện gen trên toàn cầu, bao gồm các gen gây viêm nhiễm và những gen cần thiết cho quá trình tạo năng lượng, chẳng hạn như quá trình phosphoryl hóa oxy hóa (OXPHOS). Ngược lại, trong quá trình NMP, có sự điều chỉnh rõ rệt của các gen OXPHOS, nhưng cũng có một số gen con đường miễn dịch và viêm. Sử dụng sinh thiết từ thận trải qua NMP sau đó được cấy ghép, chúng tôi nhận thấy rằng biểu hiện gen viêm cao hơn xảy ra ở các cơ quan có chức năng ghép chậm kéo dài (DGF). Do đó, chúng tôi đã sử dụng chất hấp phụ hem (HA) để loại bỏ các cytokine gây viêm. Biểu hiện gen viêm giảm độc lực này làm tăng các gen theo con đường OXPHOS và có khả năng tác động quan trọng về mặt lâm sàng trong việc giảm sự biểu hiện của dấu hiệu gen liên quan đến DGF. Cùng với nhau, dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng sự hấp phụ của các chất trung gian gây viêm từ dịch tiết đại diện cho một can thiệp tiềm năng có thể cải thiện khả năng sống của các cơ quan.

TỪ KHÓA:nghiên cứu / thực hành lâm sàng, chức năng ghép chậm (DGF), người hiến tặng và hiến tặng: đã qua đời,quả thận(allograft) chức năng / rối loạn chức năng,quả thậndịch bệnh: miễn dịch / viêm, thận

Cistanche thảo mộc cải thiện chức năng thận

1. GIỚI THIỆU

Quả thậncấy ghép đại diện cho phương pháp điều trị tối ưu cho hầu hết bệnh nhângiai đoạn cuốiquả thậndịch bệnh, mang lại lợi ích cho cả chất lượng và số lượng cuộc sống.1 Thiếu hụt nội tạng là một thách thức lớn và một số chiến lược đã được áp dụng để tăng số lượng thận sẵn có, bao gồm sử dụng người hiến tặng chết tuần hoàn (DCD) đã qua đời và người hiến tặng tiêu chí mở rộng (ECD ), cả hai đều có liên quan đến tỷ lệ chức năng ghép chậm (DGF) cao hơn so với người chết não đã qua đời (DBD) .2,3 Ở thận DCD, tiếp xúc với thiếu máu cục bộ ấm trong quá trình ngừng tuần hoàn góp phần đáng kể vào DGF . DGF xảy ra do tổn thương hoặc chết tế bào ống do thiếu máu cục bộ, có thể kích thích quá trình hoạt hóa miễn dịch bẩm sinh thông qua tổ hợp thể viêm NLRP3 dẫn đến việc tạo ra interleukin (IL) 1 và IL18. 4-6 Thật vậy, sự hiện diện của các cytokine gây viêm trong nước tiểu đã được được sử dụng như một dấu ấn sinh học củanhọnquả thậnvết thươngvà DGF. 7-9

Truyền dịch bằng máy định mức (NMP) cho phép các cơ quan cấy ghép được tưới máu bằng các tế bào hồng cầu ấm, oxy, trong trường hợp không có các thành phần miễn dịch lưu thông, bao gồm cả bổ thể và bạch cầu trung tính. 10-14 Quá trình này đã được sử dụng để đánh giá các cơ quan cận biên15 và để " cải tạo "các cơ quan để tạo điều kiện cho việc ghép thận ban đầu đã bị từ chối sau lời đề nghị thông qua dịch vụ phân bổ nội tạng quốc gia.16 Kinh nghiệm trước đây của chúng tôi sử dụng NMP đã cung cấp cơ sở cho một thử nghiệm ngẫu nhiên có đối chứng để đánh giá hiệu quả của nó trong việc ngăn ngừa DGF ở thận DCD, 17 nhưng các cơ chế mà NMP có thể có lợi cho thận ghép vẫn chưa được hiểu đầy đủ. Hơn nữa, câu hỏi về việc liệu có thao tác bổ sung đối vớiquả thậntrong quá trình NMP, ví dụ như bằng cách loại bỏ các cytokine và chemokine gây viêm khỏi dịch thơm, có thể mang lại những lợi ích bổ sung trong việc tối ưu hóa cơ quan trước khi cấy ghép chưa được đề cập ở thận người, nhưng nghiên cứu của chúng tôi về NMP ở lợn đã cho thấy kết quả đầy hứa hẹn.18

Ở đây, chúng tôi đã thực hiện một cách tiếp cận không thiên vị để giải quyết hai câu hỏi này bằng cách sử dụng phân tích bảng điểm của con ngườiquả thậnsinh thiết được thực hiện khi bắt đầu và kết thúc NMP để đánh giá những thay đổi toàn cầu trong biểu hiện gen. Chúng tôi đã sử dụng các cặp thận của con người từ một người hiến tặng để so sánh hiệu quả của các biện pháp can thiệp khác nhau ở các cơ quan có nền tảng di truyền giống hệt nhau và có thể đánh giá tác động của những thay đổi đó đối với dự đoán kết quả ghép.

Lợi ích chiết xuất Cistanche: ngăn ngừa cấp tínhquả thậnvết thương

2. KẾT QUẢ

2.1. Các quả thận ghép tương tự nhau về mặt di truyền và là một mô hình hữu ích để đánh giá các biện pháp can thiệp

Chúng tôi đã điều tra những thay đổi phiên mã liên quan đến bảo tồn nội tạng và NMP trong hai nghiên cứu độc lập, mỗi nghiên cứu có 5 cặp thận, tạo nên tổng số 10 cặp / 20 thận người. Trong số này, hai từ DBD và tám từ các nhà tài trợ DCD (Bảng S1, S2 và Hình S1). Trong những nghiên cứu này, chúng tôi lấy sinh thiết vỏ não trước và sau can thiệp (bảo quản lạnh hoặc NMP) và điều tra bối cảnh phiên mã bằng cách sử dụng giải trình tự RNA (RNA-Seq). Việc sử dụng thận ghép đôi và sinh thiết ghép đôi từ cùng mộtquả thậncho phép chúng tôi kiểm soát sự biến đổi sinh học và hồi quy yếu tố gây nhiễu này ra khỏi phân tích (Hình S2A). Chúng tôi đã xác nhận rằngquả thậncác cặp bắt đầu với bối cảnh phiên mã chung (Hình S2B) và bằng cách áp dụng các biện pháp can thiệp khác nhau cho từngquả thậntrong một cặp, chúng tôi có thể nghiên cứu ảnh hưởng của một can thiệp độc lập với sự biến đổi sinh học.

HÌNH 1 Thận tiếp xúc với bảo quản lạnh có những thay đổi hạn chế trong biểu hiện gen so với thận đang trải qua NMP. Một cặp thận được lấy đã bị từ chối sử dụng trong cấy ghép. Mộtquả thậnđược duy trì trong kho lạnh tĩnh và chiếc còn lại đã trải qua quá trình truyền dịch bằng máy namamic (NMP). Sinh thiết được lấy từ vỏ ngoài khi bắt đầu và sau 2 giờ. B, Đồ thị núi lửa cho thấy sự thay đổi biểu hiện gen ở nhóm được chỉ định ở thời điểm 2 giờ so với lúc bắt đầu. Các chấm màu đỏ cho biết các gen biểu hiện khác biệt với giá trị P đã điều chỉnh<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

HÌNH 2 Mối tương quan của bản sao mã sau NMP với độ dài của chức năng ghép trễ. Biểu hiện gen có tương quan với độ dài của DGF trong các mẫu sinh thiết được thực hiện sau NMP như một phần của thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên. Các mức độ biểu hiện của 1000 gen có mối tương quan lớn nhất với kết quả đã được vẽ biểu đồ. B, GSEA được thực hiện cho mối tương quan từ A với tập dữ liệu đánh dấu. Chỉ những con đường quan trọng (giá trị FDR q<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. NMP dẫn đến sự gia tăng OXPHOS và các gen gây viêm so với bảo quản lạnh

Để điều tra các cơ chế tiềm ẩn mà NMP có thể ảnh hưởng đến thận, ban đầu chúng tôi lấy 5quả thậncác cặp (n {{0}} người hiến tặng DCD và n=1 người hiến tặng chết não [DBD] đã qua đời, Hình S1, Bảng S1) và thực hiện sinh thiết vỏ não trong thời gian 0 (0 giờ) . Tại thời điểm này, thận được ngẫu nhiên đưa vào kho lạnh tĩnh hoặc NMP, như đã mô tả trước đây 10 (Hình 1A). Sau 2 giờ, sinh thiết thứ hai được lấy từ cả hai thận và RNA-Seq được thực hiện. Khi so sánh biểu hiện gen giữa thời gian 0- và 2- giờ sinh thiết, chúng tôi nhận thấy rằng thận được đặt trong kho lạnh tĩnh không có sự thay đổi có ý nghĩa thống kê về biểu hiện của bất kỳ gen riêng lẻ nào khi được hiệu chỉnh cho nhiều xét nghiệm (Hình 1B , bảng điều khiển bên trái). Ngược lại, trong suốt 2 giờ NMP, 956 gen được điều hòa và 353 gen bị điều hòa (Hình 1B, bảng bên phải). Tiếp theo, chúng tôi đánh giá những thay đổi trong biểu hiện của các nhóm gen trong một con đường chung, so sánh hàng chục hoặc hàng trăm gen chứ không phải bất kỳ gen riêng lẻ nào, do đó làm giảm hơn nữa ảnh hưởng của sự biến đổi giữa các cá thể sinh học đối với phân tích. Điều này cho thấy những thay đổi trong các con đường quan trọng về mặt chức năng, trong đó sự biểu hiện của từng gen riêng lẻ trong con đường đó không bị thay đổi với mức độ đủ lớn để đạt được ý nghĩa thống kê. Phân tích làm giàu bộ gen này (GSEA) đã chứng minh rằng bảo quản lạnh có tác động đáng kể đến một số con đường trao đổi chất (Hình 1C, bảng điều khiển bên trái). Đặc biệt, có sự giảm rõ rệt các gen liên quan đến quá trình phosphoryl hóa oxy hóa (OXPHOS), một con đường quan trọng cần thiết để tạo ra ATP.19 Ngược lại, OXPHOS là một trong những con đường được điều chỉnh đáng kể trong quá trình NMP (Hình 1C, bảng bên phải), với những lợi ích tiềm năng cho khả năng tồn tại của tế bào và phục hồi cân bằng nội môi của tế bào. Ngoài ra, một số con đường liên quan đến quá trình miễn dịch hoặc viêm được tạo ra trong NMP, với "tín hiệu TNF qua NFkB" cho thấy mức tăng lớn nhất. Để phù hợp với điều này, TNF, cũng như IL1B và các chemokine thu nhận bạch cầu trung tính CXCL8 (IL8) và CXCL2, là một trong những gen được điều chỉnh nhiều nhất trong 2- giờ sinh thiết NMP (Hình 1D). Phân tích chuỗi của 50 gen được điều chỉnh hàng đầu cho thấy sự điều hòa của các gen liên quan đến hóa sinh được nhóm lại thành bốn nút chính; IL8 và các chemokine thu nhận bạch cầu trung tính, gen liên quan đến Inflammasome, tín hiệu NFkB và điều hòa phiên mã (Hình 1E). Đáng chú ý, thận DBD và thận DCD tương tự nhau về mặt phiên mã tại thời điểm ban đầu (Hình S2C), và các con đường gen thay đổi trong quá trình NMP cũng tương tự ở thận DBD và DCD (Hình S2D). Cùng với đó, phân tích của chúng tôi chứng minh rằng trong quá trình NMP, có sự gia tăng biểu hiện của các gen thúc đẩy quá trình tạo ra năng lượng, với các tác dụng có lợi cho cơ quan, nhưng sự cảm ứng đồng thời của các gen gây viêm, có thể có hại.

Chiết xuất Cistanche tubulosa: cải thiện chức năng thận

2.3. Các gen gây viêm trong thận NMP liên quan đến chức năng ghép bị trì hoãn kéo dài

Để liên kết những thay đổi phiên mã xảy ra trong quá trình bảo quản lạnh và NMP với kết quả lâm sàng, chúng tôi thực hiện RNA-Seq trên sinh thiết lấy từ 33 thận DCD đã trải qua NMP như một phần của thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên hiện đang đánh giá hiệu quả của nó.17 Mẫu có sẵn trên một tập hợp con các thận được phân ngẫu nhiên vào nhánh NMP của nghiên cứu sau đó đã được cấy ghép (Bảng S3, Hình S1). DGF phổ biến hơn ở thận DCD và được định nghĩa cổ điển là một yêu cầu lọc máu trong tuần đầu tiên sau ghép. Tuy nhiên, trong giai đoạn ngay sau ghép tạng, một số bệnh nhân được lọc máu một đợt duy nhất vì tăng kali máu, điều này không nhất thiết phản ánh sự hiện diện của hoại tử ống thận cấp tính đáng kể. Do đó, chúng tôi đã sử dụng mô hình tương quan biểu hiện gen với thời gian từ khi phẫu thuật cấy ghép đến lần lọc máu cuối cùng (tức là thời gian của DGF). Điều này cho thấy những thay đổi phiên mã rõ rệt hơn trong các ca cấy ghép yêu cầu lọc máu ngoài 24 giờ đầu tiên sau khi cấy ghép (Hình 2A), cũng như mối tương quan tích cực đáng kể giữa sự biểu hiện của các gen của con đường viêm bao gồm "tín hiệu TNFA qua NFkB" và các con đường "phản ứng viêm" và độ dài của DGF, với sự phong phú nhiều hơn các con đường này trong thận trải qua quá trình cấy ghép DGF kéo dài hơn (Hình 2B). Ngược lại, chiều dài của DGF tương quan nghịch với mức độ biểu hiện của các gen theo con đường "OXPHOS" (Hình 2B). Các dữ liệu này kết hợp với nhau chỉ ra rằng sau NMP, những thận có biểu hiện thấp hơn của các gen con đường viêm và biểu hiện cao hơn của các gen của con đường "OXPHOS" sẽ ít nhạy cảm hơn với DGF sau cấy ghép kéo dài. Điều này sẽ hỗ trợ kết luận rằng những thay đổi phân tử xảy ra trong quá trình NMP có thể có cả tác dụng có lợi (cảm ứng gen con đường OXPHOS) và tác động có hại (cảm ứng gen con đường viêm).

2.4. Lượng nước tiểu và lưu lượng máu qua thận trong suốt quá trình NMP chứng tỏ các mối liên quan khác nhau với OXPHOS và các gen gây viêm

Số lượng nước tiểu được tạo ra trong NMP là một trong số các thông số được đưa vào điểm đánh giá chất lượng phẫu thuật được sử dụng để hướng dẫn các quyết định sử dụng cơ quan, 15 nhưng liệu lượng nước tiểu cao trong NMP có thực sự là một tiên lượng tốt cho thận và các con đường phân tử cơ bản được kích hoạt trong thận với lượng nước tiểu nhiều không rõ ràng. Trong tổng số 1 0 thận trải qua NMP (chỉ thận NMP, Bảng S1 và S2, Hình S1), chúng tôi quan sát thấy lượng nước tiểu xuất ra từ 0 đến 340 ml trong khoảng thời gian 2- giờ tưới máu (Hình 3A bảng điều khiển bên trái). Lưu ý, khi chúng tôi so sánh các con đường thay đổi trong quá trình NMP ở 5 quả thận trong hai thí nghiệm độc lập, chúng tôi thấy rằng các con đường tương tự được tạo ra (Hình S3A) xác nhận khả năng tái tạo của thiết kế thí nghiệm của chúng tôi và tiện ích của việc so sánh các con đường thay vì các gen riêng lẻ. Trong sinh thiết sau truyền máu 2- giờ, sự biểu hiện của 11 gen tương quan đáng kể với lượng nước tiểu được tạo ra trong giai đoạn này. Chúng bao gồm các protein sốc nhiệt (HSP), HSPA1A, HSPA1B và HSPH1, có tương quan thuận với việc tăng lượng nước tiểu (Hình 3A bảng bên phải). Phân tích làm giàu bộ gen cho thấy lượng nước tiểu cũng tương quan thuận với các gen của con đường "TNF truyền tín hiệu qua NFkB", và tương quan nghịch với gen OXPHOS trong sinh thiết sau tưới máu (Hình 3B, S3C). Tương tự, trong sinh thiết trước tưới máu, OXPHOS tương quan nghịch với lượng nước tiểu trong những thận này trong khi các con đường liên quan đến hoạt hóa miễn dịch bao gồm "tín hiệu TNF qua NFkB" và "từ chối allograft" tương quan thuận với lượng nước tiểu, cho thấy NMP có ít ảnh hưởng đến các quá trình này , hoặc trên các con đường khác được phân tích, trong thận có lượng nước tiểu cao (Hình 3B, S3C-D). Vì sự cảm ứng của các gen gây viêm đã được quan sát thấy trong các mẫu lâm sàng của chúng tôi với DGF kéo dài (Hình 2B), những dữ liệu này thách thức tín điều rằng lượng nước tiểu cao xảy ra ở những quả thận "khỏe mạnh", khả thi hơn và cho thấy rằng trên thực tế, những quả thận này có thể có nhiều hơn khả năng gây viêm, ít có khả năng tạo ra năng lượng hơn và điều này không bị thay đổi đáng kể trong quá trình NMP.

Lưu lượng máu qua thận trong quá trình truyền dịch cũng được đánh giá là một thông số có thể phản ánh chức năng cấy ghép sau đó.15 Trong 10 thận được nghiên cứu, lưu lượng máu qua thận tại thời điểm truyền dịch 2 giờ dao động từ 14,1 đến 168,8 ml / phút (Hình 3C bảng bên trái). Trong sinh thiết sau truyền máu 2- giờ, tám gen tương quan thuận đáng kể với việc tăng lưu lượng máu đến thận (Hình 3C bảng bên phải), bao gồm cả HSPA1L, nhưng không có sự chồng chéo trực tiếp giữa danh sách gen này và những gen tương quan với lượng nước tiểu (Hình 3A ). Phân tích làm giàu bộ gen đã chứng minh rằng lưu lượng máu ở thận cao tương quan thuận với gen OXPHOS trong 0- giờ sinh thiết, nhưng ngược lại với những người có lượng nước tiểu cao nhất, tưới máu có tác động đáng kể, dẫn đến mối tương quan nghịch với "OXPHOS" con đường gen bằng 2 giờ (Hình 3D, Hình S4A-B). Dòng máu qua thận tương quan nghịch với một số con đường gen miễn dịch và viêm trong cả sinh thiết 0- và 2- giờ (Hình 3D, Hình S4B), ngược lại với lượng nước tiểu (Hình 3B, Hình S3C). Những dữ liệu này kết hợp với nhau cho thấy rằng lưu lượng máu qua thận và lượng nước tiểu có thể không phải là các chỉ số tương đương của một quả thận hoạt động tốt hơn, nhưng điều đó có thể xác định trung thực hơnquả thậnít có khả năng bị DGF kéo dài.

lợi ích và tác dụng phụ của cistanche: chống viêm

2.5. Việc bổ sung chất hấp phụ hem vào mạch tưới máu không ảnh hưởng đến các thông số tưới máu nhưng làm giảm đáng kể biểu hiện gen viêm, bao gồm NLRP3 và IL1B

Phân tích vềquả thậnperfusate đã chứng minh sự gia tăng đáng kể nồng độ của các cytokine và chemokine chống viêm trong quá trình hạ thân nhiệt và NMP.20,21 Các phân tử hoạt tính sinh học này tuần hoàn vào thận, có khả năng gây viêm thêm. Cho rằng phân tích của chúng tôi vềquả thậncác mẫu chỉ ra rằng sự cảm ứng của các gen phụ thuộc TNF trong thận NMP có liên quan đến DGF (Hình 2B), chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng việc loại bỏ cytokine và chemokine khỏi mạch tưới máu có thể làm giảm cảm ứng gen viêm, với những tác dụng có lợi cho thận. Cách tiếp cận như vậy đã cho thấy một số hiệu quả ở những bệnh nhân mắc hội chứng phản ứng viêm toàn thân, 22,23 và có liên quan đến việc tăng lưu lượng máu đến thận ở thận lợn đang trải qua NMP.18 Để kiểm tra điều này ở thận người, chúng tôi đã lấy thêm năm cặp thận và thực hiện NMP trong 4 giờ với sinh thiết được lấy vào 0, 2 và 4 giờ (Hình S1). Trong mỗi trường hợp, chất hấp phụ hem trong tế bào (HA) loại bỏ các phân tử có trọng lượng phân tử 10-50 kDa được thêm vào mạch tưới máu của một thận trong mỗi cặp (NMP cộng với HA) (Hình 4A). Như dự đoán, việc bổ sung HA dẫn đến nồng độ của nhiều loại cytokine trong dịch vị thấp hơn (Hình 4B) nhưng không ảnh hưởng đến lưu lượng máu thận, lượng hoặc thành phần nước tiểu, mức tiêu thụ oxy và cân bằng nội môi acid-base (Hình 4C, Bảng S4, S5). Do đó, trong hơn 4 giờ NMP, HA không ảnh hưởng đến các thông số tưới máu hiện đang được sử dụng trên lâm sàng để tạo ra điểm đánh giá chất lượng nhưng có ảnh hưởng đáng kể đến biểu hiện gen; Theo sau NMP, gen 1794 và 4026 lần lượt được điều chỉnh ở 2 giờ và 4 giờ, bao gồm TNF và IL6 (Hình 4D, E). nhưng chỉ một nửa con số này (n=898 và n=2606) được tăng lên khi HA có mặt (Hình 4D, Hình S5A và B). Số lượng gen điều hòa cũng bị giảm khi bổ sung HA (Hình 4D). Sau 4 giờ NMP, 46 gen được điều hòa đáng kể và 181 gen giảm điều hòa khi bổ sung HA (Hình 4F). Phản ứng phiên mã giảm độc lực này bao gồm các gen liên quan đến hoạt hóa gen NLRP3, chẳng hạn như IL1B, NLRP3 và CASP1 (Hình 4G, Hình S4B) và một số chemokine thu nhận bạch cầu trung tính (Hình S5C), trước đây có liên quan đến chấn thương thận ở các mô hình động vật. 24,25 Điều này chứng tỏ rằng các chất hòa giải hòa tan được giải phóng từquả thậntái tuần hoàn và thúc đẩy biểu hiện de novo của các gen viêm trong cơ quan, nhưng điều này có thể được giảm bớt bằng cách loại bỏ chúng khỏi mạch tưới máu.

HÌNH 4 Việc bổ sung chất hấp phụ hem vào mạch truyền dịch của máy nor mạch có ảnh hưởng đáng kể đến mức cytokine trong dịch truyền và hệ thống phiên mã nhưng không ảnh hưởng đến các thông số vật lý được ghi trên thiết bị. Một cặp thận của con người được lấy từ cùng một người hiến tặng, một trong hai quả này đã trải qua quy trình truyền dịch bằng máy nahma tiêu chuẩn (NMP) trong 4 giờ và cặp còn lạiquả thậnđã trải qua NMP với việc bổ sung chất hấp phụ hem vào mạch. Các mẫu được lấy để tìm RNA-Seq trước khi truyền dịch (0 giờ), sau 2 giờ và cuối cùng (4 giờ). B, Nồng độ các cytokine chính trong dịch vị sau 4 giờ NMP. Đường biểu thị các cặp thận. Các phép đo cytokine được chuẩn hóa cho tổng hàm lượng protein perfusate. Giá trị P được nêu là từ một thử nghiệm t-test được ghép nối để giảm các cytokine với việc bổ sung HA. C, Sản xuất nước tiểu và lưu lượng máu qua thận (RBF) trong suốt thời gian tưới máu. Đường màu xanh lá cây chỉ ra NMP đơn lẻ và màu cam với việc bổ sung hem-adsorber. D, Biểu đồ Venn cho thấy số lượng gen được biểu hiện khác biệt đáng kể khi so sánh các mẫu 2- giờ hoặc 4- giờ với các mẫu trước (0- giờ). Sơ đồ màu đỏ là gen điều hòa và gen điều hòa màu xanh lam. Giao điểm là các gen được biểu hiện đặc trưng ở cả hai thời điểm theo cùng một hướng. Giá trị biểu hiện chuẩn hóa E, log2 cho các gen được chỉ định trong quá trình tưới máu từ bộ phiên mã mô, các thanh lỗi tiêu chuẩn được chỉ ra. F, Đồ thị Volcano để so sánh từng cặp giữa NMP một mình với NMP cộng với HA ở 4 giờ. Màu đỏ cho thấy các gen biểu hiện khác biệt với giá trị P đã điều chỉnh<0.05. g,="" as="" for="">

điều trị bệnh thận chiết xuất cistanche

2.6. HA liên quan đến giảm ký hiệu gen liên quan đến chức năng ghép chậm

Phân tích làm giàu bộ gen cho thấy sự giảm đáng kể trong con đường "tín hiệu TNF qua NFkB" ở thận NMP cộng với HA so với NMP đơn thuần (Hình 5A-B). Đáng chú ý, sự hiện diện của HA không chỉ làm giảm biểu hiện gen viêm trongquả thậnmà còn tăng OXPHOS và các con đường chuyển hóa axit béo, cả hai đều góp phần tạo ra năng lượng (Hình 5A-B). Do đó, những thay đổi trong con đường biểu hiện gen xảy ra với HA sẽ hỗ trợ kết luận rằng tác dụng của nó có lợi về mặt lâm sàng, vì nó làm giảm "tín hiệu TNFA thông qua các gen của con đường NFkB" và tăng các gen theo con đường "OXPHOS", cả hai đều có liên quan đến một đường ngắn hơn thời gian của DGF (Hình 2B).

Để khám phá sâu hơn mối quan hệ giữa những thay đổi phiên mã trong NMP và kết quả lâm sàng, chúng tôi đã tìm cách tìm kiếm dấu hiệu gen hiện diện trong thận bằng DGF. Chúng tôi đã xác định 100 gen quy định tích cực (TĂNG) và tiêu cực (XUỐNG) hàng đầu (được xếp hạng theo sự thay đổi nếp gấp log) tương quan với độ dài của DGF trong 33 mẫu thử nghiệm lâm sàng (Hình 5C, Dữ liệu S1). Chúng tôi nhận thấy sự phong phú đáng kể của dấu hiệu gen liên quan đến việc tăng chiều dài của DGF trong các mẫu có lượng nước tiểu cao hơn (Hình 5D), cho thấy rằng lượng nước tiểu cao trong thời gian NMP xác định thận có nguy cơ bị DGF kéo dài hơn. Không có mối tương quan có ý nghĩa thống kê giữa dấu hiệu DGF và các gen liên quan đến lưu lượng máu qua thận cao hơn (Hình 5E). Tiếp theo, chúng tôi đánh giá xem việc bổ sung HA vào mạch NMP có ảnh hưởng như thế nào đến sự biểu hiện của chữ ký gen DGF "UP" và "DOWN". Đáng chú ý, điều này cho thấy rằng sự biểu hiện của dấu hiệu gen liên quan đến việc tăng chiều dài của DGF đã giảm đáng kể khi bổ sung HA và dấu hiệu liên quan đến việc giảm chiều dài của DGF được tăng lên đáng kể khi bổ sung HA (Hình 5F).

Nhìn chung, những thay đổi phiên mã mà chúng tôi đã xác định cho thấy rằng NMP có những lợi ích tiềm năng so với bảo quản lạnh về tác động của nó đối với việc tạo ra năng lượng trong thận. Tuy nhiên, trong quá trình tưới máu, một số phân tử hoạt tính sinh học được giải phóng từ thận vào mạch tưới máu, tạo ra một vòng khuếch đại dẫn đến tình trạng viêm khi chúng vào lại thận. Việc loại bỏ các phân tử này làm gián đoạn vòng lặp này và có thể hữu ích để giảm viêm và tăng sinh năng lượng, tăng cường hơn nữa tác dụng có lợi của NMP và giảm nhạy cảm với DGF (Hình 6).

HÌNH 5 Việc bổ sung chất hấp phụ ham làm giảm dấu hiệu gen liên quan đến DGF. Phân tích GSEA về tác động của việc bổ sung HA vào bộ sao mã sau 4 giờ NMP đối với con đường dấu hiệu của tập gen. Chỉ những con đường quan trọng mới được vẽ. Các chấm màu đỏ cho biết mức độ làm giàu dương và âm tính màu xanh lam, kích thước của dấu chấm tương quan nghịch với giá trị FDR q và vị trí cho biết điểm làm giàu chuẩn hóa (NES). B, Biểu đồ làm giàu từ GSEA cho các con đường chính từ cơ sở dữ liệu Hallmark để so sánh từ A. Đường biểu thị điểm làm giàu đang chạy và biểu đồ vĩ cầm cho biết sự phân bố của các gen thành viên của bộ gen trong danh sách gen được xếp hạng được sử dụng trong mỗi phân tích. C, Bản đồ nhiệt của bốn mối tương quan tích cực nhất (TĂNG) và âm (XUỐNG) lớn nhất với độ dài của DGF và được sử dụng như một phần của dấu hiệu biểu hiện gen cho DGF. Chữ ký DGF đầy đủ được cung cấp trong dữ liệu bổ sung. Chữ ký gen liên quan DF, DGF được sử dụng với GSEA để điều tra sự biểu hiện của chữ ký trong mối tương quan của lượng nước tiểu 2- giờ với 2- giờ phiên mã (D), tương quan của 2- giờ RBF với 2- hr transcriptome (E) và ảnh hưởng của việc bổ sung HA lên transcriptome ở 4 giờ (F). Lô đất như cho A

HÌNH 6 Tóm tắt bằng đồ thị. A, Trong quá trình bảo quản lạnh, có sự giảm phiên mã toàn cục. Trong quá trình NMP, sự biểu hiện của các gen trong một số con đường được điều chỉnh bao gồm quá trình phosphoryl hóa oxy hóa (OXPHOS) và các gen theo con đường viêm như TNF, IL8 và NFkB. Bảng điều khiển bên trái B, Trong thời gian NMP, các chất trung gian gây viêm (vòng tròn màu vàng) được giải phóng khỏiquả thậnvào dung dịch truyền dịch. Chúng tái tuần hoàn và kích thích phiên mã gen tiền viêm ở thận, và có liên quan đến việc giảm các gen sản xuất đường năng lượng, làm giảm ATP. Bảng điều khiển bên phải, Sự hiện diện của hem-adsorber (HA) phá vỡ vòng khuếch đại viêm này

Cistanche thảo mộc cải thiện chức năng thận

3. THẢO LUẬN

Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng bảo quản lạnh có hiệu quả trong việc hạn chế những thay đổi đáng kể trong biểu hiện gen. Điều này phù hợp với các mô hình động vật gặm nhấm, trong đó thận được lưu trữ đến 18 giờ trong kho lạnh cho thấy ít thay đổi trong biểu hiện của các cytokine gây viêm, bao gồm IL1, TNF và IL6.26 Việc chúng tôi sử dụng hồ sơ phiên mã toàn cầu, không thiên vị thay vì việc đo lường một số lượng nhỏ các gen ứng viên cho phép chúng tôi phân tích sự biểu hiện của các nhóm gen được tìm thấy trong các con đường cụ thể. Điều này cho thấy sự giảm đáng kể sự biểu hiện của OXPHOS và các gen đường phân trong thận được bảo quản lạnh, có khả năng làm giảm khả năng tạo ra ATP của những quả thận này, phù hợp với một nghiên cứu trước đây cho thấy giảm ATP trong thận người được bảo quản lạnh. các con đường tiền viêm cũng được điều chỉnh giảm trong quá trình bảo quản lạnh, bao gồm cả sự hoạt hóa TNF thông qua NFkB và các con đường phản ứng của các loài oxy có thể có lợi. Tuy nhiên, có thể việc bảo quản lạnh chỉ đơn thuần là giữ tạm thời các con đường này và sau khi tái tưới máu ở người nhận, những thay đổi tương tự trong biểu hiện gen viêm như được quan sát thấy trong NMP sẽ xảy ra.

NMP có tác động ngược lại với việc bảo quản lạnh đối với OXPHOS và các gen đường phân, làm tăng sự biểu hiện của chúng, với khả năng tăng khả năng tạo ATP của tế bào và khôi phục cân bằng nội môi. Cần lưu ý, việc tưới máu bằng oxy giảm nhiệt cho thận của con người cũng đã được chứng minh là làm tăng mức ATP so với khi bảo quản lạnh 27, do đó việc phục hồi oxy có thể là kích thích chính cho các quá trình này hơn là quá trình khử trùng. Tuy nhiên, những thay đổi này có thể có lợi cho cơ quan khi chúng tôi quan sát thấy mối tương quan nghịch giữa sự gia tăng biểu hiện của các gen theo con đường OXPHOS và DGF kéo dài.

Một bài báo gần đây của Hameed và cộng sự cũng đã thực hiện một phân tích phiên mã của NMP ở ba thận đang trải qua NMP. Rất tiếc, các tác giả đã không công bố công khai dữ liệu của họ, do đó không thể so sánh sâu với tập dữ liệu của chúng tôi. Tuy nhiên, bản thảo của họ chỉ ra cảm ứng của các gen liên quan đến đáp ứng miễn dịch trong NMP, bao gồm IL1B, CXCL2 và TNF, phù hợp với phát hiện của chúng tôi.

Trong phân tích của chúng tôi về thận đang trải qua NMP trong bối cảnh thử nghiệm lâm sàng, chúng tôi đã so sánh các dấu hiệu biểu hiện gen với độ dài DGF chứ không phải tỷ lệ mắc bệnh DGF (được định nghĩa là nhu cầu lọc máu trong tuần đầu tiên sau khi cấy ghép). Đáng chú ý, thận có thời gian DGF từ 1 ngày trở xuống có khả năng phiên mã cao tương tự như những thận không có DGF, có khả năng phản ánh nhu cầu lọc máu do tăng kali máu liên quan đến chu phẫu hơn là DGF thực sự. Chúng tôi nhận thấy rằng DGF dài hơn có liên quan đến sự biểu hiện cao hơn của tín hiệu TNFA thông qua các gen con đường NFkB và sự biểu hiện thấp hơn của các gen liên quan đến OXPHOS. Những dữ liệu này gợi ý rằng thận có OXPHOS tăng và giảm tín hiệu miễn dịch có thể có tiềm năng tốt hơn như thận của người hiến tặng, nhưng kết luận này cần được xác nhận trong một nghiên cứu tiền cứu lớn hơn.

Chúng tôi cũng đánh giá các quá trình phân tử tương quan với lượng nước tiểu và máu thận trong quá trình NMP. Các thông số này trước đây đã được sử dụng cùng với một số biện pháp khác để tạo ra điểm đánh giá chất lượng của thận được tưới máu. Các giá trị cao của lượng nước tiểu và lưu lượng máu qua thận được coi là phản ánh một mô ghép khả thi hơn.15 Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng các con đường tương quan với lượng nước tiểu cao và lưu lượng máu đến thận cao là khác nhau, và trên thực tế, các thông số này chứng minh các mối liên quan đối cực với các con đường viêm . Lượng nước tiểu cao có liên quan đến sự biểu hiện cao hơn của các gen con đường miễn dịch trong khi lưu lượng máu qua thận cao có tương quan nghịch với các con đường này. Chúng tôi cũng phát hiện ra rằng dấu hiệu gen DGF mà chúng tôi tạo ra đã được làm giàu trong thận với lượng nước tiểu cao trong NMP, cho thấy rằng thông số này có thể xác định thận có nguy cơ mắc DGF dài hơn, trái ngược với tín điều hiện tại. Một lời giải thích tiềm ẩn là lượng nước tiểu rất cao phản ánh thận bị tổn thương nhiều hơn ở ống thận, không có khả năng cô đặc nước tiểu. Do đó, có thể có "hiệu ứng Goldilocks" liên quan đến lượng nước tiểu, trong đó thận có lượng nước tiểu thấp / ít là những người có bất thường đáng kể trong quá trình tạo dịch lọc, những người có lượng nước tiểu quá cao có tổn thương ống thận đáng kể không kể đến cô đặc nước tiểu. Giả thuyết này sẽ cần được thử nghiệm trên một số lượng lớn hơn các quả thận đã được cấy ghép sau đó.

Trong 4 giờ của NMP, có sự cảm ứng của các gen viêm trong thận. Tuy nhiên, cần lưu ý rằng thực hành lâm sàng hiện tại chỉ bao gồm NMP trong 1 giờ và tác dụng này có thể không rõ ràng trong thời gian truyền dịch ngắn hơn. Tuy nhiên, truyền dịch lâu hơn có thể có lợi ích về mặt khôi phục oxy và tạo năng lượng, và trong thí nghiệm của chúng tôi, tác động tiêu cực của cảm ứng gen miễn dịch về cơ bản có thể bị phủ nhận bằng cách đưa một tế bào HA vào mạch tưới máu. Những dữ liệu này chỉ ra rằng các chất trung gian gây viêm do thận tạo ra trong quá trình NMP đi vào mạch tưới máu và có khả năng làm trầm trọng thêm tình trạng viêm vô trùng và việc loại bỏ chúng giúp cải thiện sự cảm ứng của các gen gây viêm được quan sát thấy trong NMP. Điều quan trọng, chúng tôi đã chỉ ra rằng việc bổ sung HA ảnh hưởng đến sự biểu hiện của các gen có liên quan đến kết quả xấu hơn về mặt lâm sàng. Chữ ký gen DGF của chúng tôi được lấy từ các mẫu trải qua NMP như một phần của thử nghiệm lâm sàng đánh giá hiệu quả của nó, cho phép chúng tôi liên kết chặt chẽ những thay đổi mà chúng tôi quan sát được trong các nghiên cứu về thận được ghép nối với các tiêu chí lâm sàng ở thận được cấy ghép. Tuy nhiên, ứng dụng của nó trong bối cảnh thử nghiệm lâm sàng sẽ là cần thiết để chứng minh một cách dứt khoát về công dụng của ứng dụng đối với thận trước khi cấy ghép. HA không đặc hiệu và có thể loại bỏ các phân tử hữu ích, ngoài những phân tử có hại cho cơ quan. Chúng tôi nhận thấy rằng tác dụng thực của HA đối với hệ thống sao mã của thận có vẻ có lợi, nhưng có thể việc cải tiến để loại bỏ đặc biệt các chất trung gian có hại đã được chứng minh có thể thậm chí còn hiệu quả hơn.

Các cặp thận mà chúng tôi sử dụng là của cùng một cá nhân và do đó giống hệt nhau về mặt di truyền và đã trải qua một môi trường tương tự trong suốt cuộc đời của người hiến tặng. Chúng tôi xác nhận rằng bản sao thời gian 0 của chúng cực kỳ giống nhau (Hình S2 A, B). Tuy nhiên, những mẫu sinh thiết này lấy mẫu một phần nhỏ của thận và các cặp thận có thể bị ảnh hưởng không đối xứng bởi bệnh lý, ví dụ, u nang hoặc bệnh mạch máu nhỏ. Một lưu ý bổ sung là tất cả các quả thận được sử dụng trong các thí nghiệm can thiệp được trình bày ở đây đã bị từ chối để cấy ghép và một số đại diện cho các cơ quan được cấy ghép ở cuối phổ chất lượng thấp hơn. Tuy nhiên, chúng tôi đã quan sát thấy các kết quả có khả năng tái tạo cao khi so sánh các con đường gen trong các nhóm của năm quả thận. Chúng tôi cũng có thể chứng minh rằng thận do DCD và DBD có phản ứng tương tự với sự tưới máu. Bằng cách kết hợp điều này với chữ ký DGF sau NMP đã được kiểm duyệt của chúng tôi, chúng tôi có thể dự đoán những lợi ích lâm sàng tiềm năng. Cách tiếp cận thử nghiệm này có thể được sử dụng như một công cụ tiền lâm sàng để sàng lọc các can thiệp trong tương lai nhằm mang lại hiệu quả điều trị tiềm năng để cho phép lựa chọn hợp lý các can thiệp ứng viên cho các thử nghiệm lâm sàng.

Tóm lại, nghiên cứu của chúng tôi cung cấp hồ sơ phiên mã toàn cầu đầu tiên của thận người trải qua NMP, giải quyết các con đường phân tử khác nhau được kích hoạt trong NMP so với bảo quản lạnh và cho thấy rằng các tác động có hại của các phân tử hoạt tính sinh học được tạo ra hoặc giải phóng khỏi thận trong quá trình NMP có thể được đảo ngược bằng cách thêm HA. Hơn nữa, sự can thiệp này làm giảm sự biểu hiện của các gen liên quan đến DGF kéo dài, cung cấp một cơ sở lý luận cơ học mạnh mẽ để áp dụng một biện pháp can thiệp như vậy cho một thử nghiệm lâm sàng trong tương lai. Dữ liệu của chúng tôi cũng có ý nghĩa đối với các chiến lược truyền dịch ngoài thận, bao gồm cả ghép gan và phổi, cho thấy rằng việc loại bỏ các phân tử hoạt tính sinh học khỏi dịch truyền nên được nghiên cứu trong những bối cảnh nơi NMP ngày càng được sử dụng nhiều hơn. Cuối cùng, nghiên cứu của chúng tôi làm nổi bật tiện ích của việc lập hồ sơ phiên mã toàn cầu theo cặpthậnđể đánh giá các can thiệp mới cho các cơ quan được tưới máu; những thay đổi phiên mã trước những thay đổi về sự phong phú của protein (theo truyền thống được sử dụng làm dấu ấn sinh học củaquả thậnchấn thương) và hàng chục nghìn bản sao gen có thể được đo lường một cách dễ dàng. Do đó, phép đo RNA có tiềm năng cung cấp khả năng đọc sớm, nhạy cảm về chức năng tế bào của các cơ quan người được lấy ra để cấy ghép có thể được áp dụng cho các nghiên cứu trong tương lai.

SỰ NHÌN NHẬN

Các tác giả cảm ơn tất cả những người hiến tạng và gia đình của họ. Phòng thí nghiệm Clatworthy rất biết ơn về các cơ sở cốt lõi do Phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử MRC cung cấp. Công việc này được thực hiện bằng cách sử dụng các tài nguyên được cung cấp bởi Dịch vụ Cambridge dành cho Khám phá theo hướng Dữ liệu (CSD3) được điều hành bởi Dịch vụ Máy tính Nghiên cứu của Đại học Cambridge, được cung cấp bởi Dell EMC và Intel bằng cách sử dụng tài trợ Cấp -2 từ Nghiên cứu Khoa học Vật lý và Kỹ thuật Hội đồng (tài trợ vốn EP / P020259 / 1), và tài trợ DiRAC từ Hội đồng Cơ sở Khoa học và Công nghệ (www. Dirac. Ac. Vương quốc Anh).

TIẾT LỘ

Các tác giả không có xung đột lợi ích để tiết lộ như mô tả của Tạp chí Cấy ghép Hoa Kỳ.

SỰ ĐÓNG GÓP CỦA TÁC GIẢ

JRF, SH, MLN và MRC đã thiết kế nghiên cứu và giải thích dữ liệu. JRF, SH, TM, CJW, AF và TCD đã thực hiện các thí nghiệm. JRF, SH và MRC đã tạo ra các hình và bảng. MRC đã viết bản thảo chính. JRF và SH đã tạo ra các phương pháp và truyền thuyết về figure, JRF, SH và MLN đã chỉnh sửa bản thảo.

Cistanche lợi: cải thiện chức năng thận

Người giới thiệu:
1. Methven S, Steenkamp R, Fraser S. Báo cáo thường niên lần thứ 19 của Cơ quan đăng ký thận Vương quốc Anh: Chương 5 Tỷ lệ sống và nguyên nhân tử vong ở bệnh nhân trưởng thành tại Vương quốc Anh về liệu pháp thay thế thận năm 2015: Phân tích quốc gia và trung tâm cụ thể. Nephron. 2017; 137 (1): 117–150.
2. Summers DM, Johnson RJ, Allen J, et al. Phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả sau khi ghép thận hiến sau khi chết vì tim ở Anh: một nghiên cứu thuần tập. Cây thương. 2010; 376 (9749): 1303–1311.
3. Summers DM, Johnson RJ, Hudson A, Collett D, Watson CJ, Bradley JA. Ảnh hưởng của tuổi hiến tặng và thời gian bảo quản lạnh đến kết quả ở những người nhận thận hiến sau khi chết tuần hoàn ở Anh: một nghiên cứu thuần tập. Cây thương. 2013; 381 (9868): 727–734.
4. Friedewald JJ, Rabb H. Tế bào viêm trong suy thận cấp do thiếu máu cục bộ.Quả thậnInt. 2004; 66 (2): 486–491.
5. Kono H, Rock KL. Làm thế nào các tế bào chết đi cảnh báo hệ thống miễn dịch về nguy hiểm. Nat Rev Immunol. 2008; 8 (4): 279–289.
6. Berry M, ÔNG LÃNH THỔ. Liệu pháp miễn dịch cho cấp tínhquả thậnvết thương. Liệu pháp miễn dịch. 2012; 4 (3): 1–12.
7. Parikh CR, Coca SG, Thiessen-Philbrook H, et al. Dấu ấn sinh học sau phẫu thuật dự đoán cấp tínhquả thậnchấn thương và kết quả kém sau phẫu thuật tim ở người lớn. J Am Soc Nephrol. 2011; 22 (9): 1748–1757.
8. Hội trường IE, Yarlagadda SG, Coca SG, et al. IL -18 và NGAL tiết niệu dự đoán sự phục hồi của lọc máu và mô ghép sauquả thậncấy ghép. J Am Soc Nephrol. 2010; 21 (1): 189–197.
9. Malyszko J, Lukaszyk E, Glowinska I, Durlik M. Dấu ấn sinh học của chức năng ghép chậm như một dạng cấp tínhquả thậnchấn thương trongquả thậncấy ghép. Đại diện khoa học 2015; 5: 11684.
10. Hosgood SA, Nicholson ML. Lần đầu tiên được ghép thận ở nam giới sau khi truyền dịch cũ trên cơ thể người. Cấy ghép. 2011; 92 (7): 735–738.
11. Yong C, Hosgood SA, Nicholson ML. Tưới máu ngoại vivo trong ghép thận: quá khứ, hiện tại và tương lai. Cấy ghép nội tạng Curr Opin. 2016; 21 (3): 301–307.
12. Fisher A, Andreasson A, Chrysos A, et al. Một nghiên cứu quan sát về Truyền máu Donor Ex Vivo Lung trong cấy ghép phổi ở Vương quốc Anh: DEVELOP-Vương quốc Anh. Đánh giá Technol Y tế. 2016; 20 (85): 1–276.
13. Slama A, Schillab L, Barta M, et al. Mua phổi của người hiến tặng tiêu chuẩn với truyền dịch phổi nor dìmic ex vivo: Một thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên tiền cứu. J Cấy ghép tim phổi. 2017; 36 (7): 744–753.
14. Nasralla D, Coussios CC, Mergental H, et al. Một thử nghiệm ngẫu nhiên về sự bảo tồn của Na-pô-lê-ông trong cấy ghép gan. Thiên nhiên. 2018; 557 (7703): 50–56.
15. Barlow AD, Hamed MO, Mallon DH, et al. Sử dụng Ex Vivo Normothermic Perfusion để Đánh giá Chất lượng của các tuyến tụy người hiến tặng bị loại bỏ. Am J Cấy ghép. 2015; 15 (9): 2475–2482.

16. Hosgood SA, Saeb-Party K, Hamed MO, Nicholson ML. Cấy ghép thành công thận người được coi là không thể cấy ghép nhưng được hồi sức bằng phương pháp truyền dịch bằng máy Ex Vivo Normothermic. Am J Cấy ghép. 2016; 16 (11): 3282–3285.
17. Hosgood SA, Saeb-Party K, Wilson C, Callaghan C, Collett D, Nicholson ML. Quy trình của một thử nghiệm ngẫu nhiên có đối chứng, nhãn mở về truyền dịch ngoài cơ thể người bệnh so với bảo quản lạnh tĩnh trong hiến tặng sau khi ghép thận chết tuần hoàn. BMJ mở. 2017; 7 (1): e012237.
18. Hosgood SA, Moore T, Kleverlaan T, Adams T, Nicholson ML. Haemoads hấp thụ làm giảm phản ứng viêm và cải thiện lưu lượng máu trong quá trình tưới máu thận ex vivo trong một mô hình thử nghiệm. J Dịch Med. 2017; 15 (1): 216.
19. Krebs HA. Lịch sử của chu trình axit tricarboxylic. Perspect Biol Med. 1970; 14 (1): 154–170.
20. Hoogland ER, de Vries EE, Christiaans MH, Winkens B, Snoeijs MG, van Heurn LW. Giá trị của nồng độ dấu ấn sinh học tưới máu máy trong DCDquả thậncấy ghép. Cấy ghép. 2013; 95 (4): 603–610.
21. van Balkom BWM, Gremmels H, Ooms LSS, et al. Protein trong chất lỏng bảo quản là yếu tố dự báo chức năng ghép chậm trong thận từ người hiến tặng sau khi chết tuần hoàn. Clin J Am Soc Nephrol. 2017; 12 (5): 817–824.
22. Kogelmann K, Jurczak D, Scheller M, Druner M. Hấp thụ máu bằng CytoSorb ở bệnh nhân nhiễm trùng: một loạt trường hợp. Chăm sóc Crit. 2017; 21 (1): 74.
23. David S, Thamm K, Schmidt BMW, Falk CS, Kielstein JT. Ảnh hưởng của việc loại bỏ cytokine ngoài cơ thể lên chức năng hàng rào mạch máu ở bệnh nhân sốc nhiễm trùng. J Chăm sóc Chuyên sâu. 2017; 5: 12.
24. Li L, Huang L, Vergis AL, et al. IL -17 do bạch cầu trung tính tạo ra điều chỉnh sự di chuyển của bạch cầu trung tính qua trung gian IFN-gamma ở chuộtquả thậnchấn thương do thiếu máu cục bộ-tái tưới máu. J Clin Đầu tư. 2010; 120 (1): 331–342.
25. Hayama T, Matsuyama M, Funao K, et al. Tác dụng có lợi của chất ức chế elastase bạch cầu trung tính đối với tổn thương do thiếu máu cục bộ do tái tưới máu do thiếu máu cục bộ ở thận ở chuột. Cấy ghép Proc. 2006; 38 (7): 2201–2202.
26. Saat TC, Susa D, Roest HP, et al. So sánh các cấu hình biểu hiện gen viêm, bảo vệ tế bào và tổn thương trong thận của những người hiến tặng chết não và chết vì tim. Cấy ghép. 2014; 98 (1): 15–21.
27. Ravaioli M, Baldassare M, Vasari F, et al. Các chiến lược để khôi phục mức Adenosine Triphosphate (ATP) sau hơn 20 giờ của thời gian thiếu máu cục bộ lạnh ở vùng biên của con ngườiQuả thậnGhép. Ann Cấy ghép. 2018; 23: 34–44.
28. Hameed AM, Lu DB, Patrick E, et al. Máy Normothermic Tóm tắt Sự tưới máu làm trẻ hóa những quả thận bị phế thải của con người. Cấy ghép trực tiếp. 2019; 5 (11): e502.