Xác định Acteoside và Echinacoside của Cistanche Tubulosa

[Trừu tượng]Mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác định (thành phần hiệu quả và thành phần echinacea－) trong Cistanche Tubulosa bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao. Để so sánh hàm lượng thành phần chính trong hai môi trường sống, bốn vật chủ và bốn đợt ở Cistanche tubulosa. Để cung cấp bằng chứng khoa học cho u－ việc sử dụng các loại Cistanche tubulosa. Phương pháp: Sử dụng cột sắc ký Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm); Pha động: metanol, axetonitril-1 phần trăm axit axetic (14∶9∶77); Tốc độ dòng chảy: 1.0 mL·min-1; Bước sóng phát hiện 334 nm; Nhiệt độ cột là 30 độ Kết quả: Hai thành phần có dải tuyến tính tốt của đường chuẩn trong thử nghiệm (r=0.999,9). Tỷ lệ thu hồi trung bình là 96,89 phần trăm và 100,7 phần trăm, và phần trăm RSD là 0,91 phần trăm và 1,96 phần trăm. Kết quả phân tích cho thấy có sự khác biệt đáng kể giữa hàm lượng thành phần hiệu quả chính (stateside và echinacoside) ở các vùng, lô và vật chủ khác nhau ở Cistanche tubulosa. Kết luận: Phương pháp này đơn giản, chính xác và có thể tái sản xuất. Nó cung cấp cơ sở thực nghiệm cho giá trị dược liệu của Cistanche tubulosa.

[Từ khóa] Cistanche tubulosa; Acteoside; Echinacoside; xác định nội dung

Thí nghiệm Cistanche Deserticola

Nhấn vào đây để xem các sản phẩm Cistanche

【Yêu cầu thêm】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Ứng dụng Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche Deserticola lần đầu tiên được ghi nhận trong “Thần nông bản thảo kinh điển” và là một trong những vị thuốc được sử dụng thường xuyên nhất trong các đơn thuốc bổ thận tráng dương. Trong những năm gần đây, việc khai quật quy mô lớn Cistanche Deserticola đã dẫn đến sự suy giảm nhanh chóng các nguồn tài nguyên hoang dã. Để thay thế cho Cistanche Deserticola, loài hoa hình ống Cistanche Deserticola được sản xuất ở Tân Cương đã chiếm 60% nguồn cung của cả nước.

bột hồ đào

Phenylethanol glycoside như echinacoside và ergosterol glycoside là một trong những thành phần dược lý chính của Cistanche tubulosa. Echinoside có tác dụng bảo vệ thần kinh [3], tác dụng bảo vệ xương [4] và tác dụng chống lão hóa [5]. Ergosteroside có tác dụng cải thiện tình trạng suy giảm trí nhớ, điều trị bệnh Alzheimer, có tác dụng giống androgen. Tubular Cistanche: còn được gọi là Hongliu Dayun, được chứa bởi nhiều loại cây Tamarix L. [8-9]. Tác giả đã sử dụng phương pháp HPLC để xác định hàm lượng hai thành phần trên trong Cistanche Deserticola. Phương pháp và kết quả xác định cung cấp cơ sở khoa học cho việc kiểm soát chất lượng và giá trị dược liệu của vị thuốc này.

Phenylethanol glycoside là thành phần hoạt động chính của Cistanche Deserticola

1 Dụng cụ và thuốc thử

Thuốc thử và thuốc thử: Echinacetin (số lô 111670-200401), ergosterol (số lô 111530-200505), chất đối chiếu do Viện Kiểm soát Dược phẩm và Sinh phẩm Trung Quốc cung cấp. Acetonitril và metanol là tinh khiết về mặt sắc ký, trong khi nước là nước siêu tinh khiết; Tất cả các thuốc thử khác là tinh khiết phân tích. Tất cả các dược liệu của Cistanche Deserticola đã được thu thập và xác định bởi Giáo sư Ju Aihua từ Đại học Y Nội Mông. Dụng cụ: Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1100 của Mỹ.

2 Phương pháp và Kết quả

2.1 Điều kiện sắc ký và kiểm tra khả năng thích ứng của hệ thống

Cột sắc ký: Cột sắc ký Kromasil C18 (4,6 mm × 250 mm,5 μ m）; Pha động: acetonitril metanol, dung dịch axit axetic 1 phần trăm (9:14:77); Bước sóng phát hiện là 334 nm; Dòng chảy tốc độ: 1,0 mL · phút-1; Nhiệt độ cột 30 độ ; Thể tích tiêm 20 μ L. Số lượng đĩa lý thuyết không được ít hơn 5000 dựa trên tính toán của glycoside echinacea. Mức độ tách của hai thành phần dược lý là tốt, với độ phân tách lớn hơn 1,5 so với các đỉnh liền kề. (Xem Hình 1-3)

Hình 1 Sắc ký đồ của chất tham chiếu Echinacetin

Hình 2 Sắc ký đồ của chất đối chiếu ergosterol

Hình 3 Sắc ký đồ của Cistanche Deserticola

2.2 Chuẩn bị dung dịch mẫu

Cân chính xác khoảng 0.5 g bột Cistanche Deserticola (rây qua rây 60 mesh) và cho vào bình nón màu nâu dung tích 100 mL. Thêm chính xác 50 mL pha động, cân khối lượng, siêu âm trong 40 phút và đặt ở nhiệt độ phòng; Cân lại khối lượng, dùng pha động để bù khối lượng đã mất, lắc đều, lọc, lấy lại dịch lọc và để sang một bên.

2.3 Chuẩn bị dung dịch đối chiếu

Cân chính xác một lượng thích hợp các chất đối chứng Echinacetin và ergosterol, rồi thêm pha động để chuẩn bị dung dịch chứa khoảng {{0}}.14 mg Echinacetin và 0,10 mg ergosterol trên 1 mL, tương ứng.

2.4 Kiểm tra quan hệ tuyến tính

Cân chính xác 6,4 mg chất đối chiếu echinacea và 3,0 mg chất đối chiếu ergosterol tương ứng, cho chúng vào bình định mức 10 mL, pha loãng chúng bằng pha động và lắc đều; Hút chính xác 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 và 3.0 mL tương ứng vào bình định mức 5 mL, pha loãng đến vạch mức bằng pha động và lắc lên; Hấp thụ tương ứng 20 μ Tiêm mẫu L và đo theo các điều kiện sắc ký trên. Trục Y biểu thị diện tích cực đại và trục X biểu thị thể tích tiêm. Vẽ một đường cong tiêu chuẩn. Dữ liệu đo được cho thấy lượng Echinacetin là 0,26 μ g-7.75 μ Có mối quan hệ tuyến tính tốt giữa diện tích pic và thể tích tiêm giữa g và phương trình hồi quy là Y=831.41X21. 88, R2=0.9999; Lượng ergosterol glycoside là 0,30 μ g-7.50 μ Có mối quan hệ tuyến tính tốt giữa diện tích pic và thể tích tiêm giữa g và phương trình hồi quy là Y=671.53X cộng 158,71, R{ {39}}.9999.

Echinoside, thành phần hóa học chính của Cistanche Deserticola

2.5 Phép thử độ chụm

Cân chính xác 0.5 g bột thuốc trên, chuẩn bị dung dịch thử theo phương pháp mô tả trong "2.2", tiêm 6 lần liên tiếp và ghi lại diện tích pic của 2 thành phần. Phần trăm RSD của diện tích cực đại của echinacoside của nó là 1,46 phần trăm ; Hàm lượng ergosterol glycoside là 1,62%.

2.6 Kiểm tra ổn định

Lấy {{0}}}.5 g bột mẫu và chuẩn bị dung dịch thử theo phương pháp mô tả trong "2.2". Tiêm mẫu vào 0, 1, 2, 4, 8 và 12 giờ sau khi chuẩn bị. Kết quả cho thấy phần trăm RSD của diện tích đỉnh của Echinacetin là 1,5 phần trăm ; Hàm lượng ergosterol glycoside là 2,0%.

2.7 Phép thử độ lặp lại

Cân chính xác 6 mẫu bột từ cùng một lô được sản xuất tại Minfeng, Hotan, Tân Cương, mỗi mẫu nặng khoảng 0.5g. Chuẩn bị và đo diện tích pic theo phương pháp trong "2.2". Tính phần trăm RSD của diện tích pic của echinacoside trong 6 mẫu là 1,85 phần trăm và ergosterol là 1,93 phần trăm .

2.8 Thử nghiệm bổ sung và thu hồi mẫu

Cân chính xác 6 mẫu bột thuốc từ cùng một lô được sản xuất tại Minfeng, Hotan, Tân Cương, với mỗi mẫu nặng khoảng 0.1 g. Thêm một lượng Echinacetin và ergosterol nhất định và chuẩn bị dung dịch thử theo phương pháp được mô tả trong "2.2". Tỷ lệ thu hồi trung bình lần lượt là 96,89 phần trăm và 100,7 phần trăm , với phần trăm RSD lần lượt là 0,91 phần trăm và 1,96 phần trăm . (Xem Bảng 1-2)

Bảng 1 Kết quả thử nghiệm thu hồi glucoside trong nước dứa

Bảng 2 Kết quả thử nghiệm phục hồi ergosterol glycoside

2.9 Xác định mẫu

Lấy bột thuốc Cistanche Deserticola từ mỗi ống và vận hành theo phương pháp trong "2.2". Các kết quả đo được thể hiện trong Bảng 3.

Bảng 3 Xác định Echinacetin và Ergosteroside trong Cistanche Deserticola

3 Thảo luận

3.1 Lựa chọn pha động

Hai bộ pha động được so sánh: 1) dung dịch axit axetic 1% metanol axetonitril (14:9:77); (2) Methanol: 1 phần trăm axit formic (21,5:78,5). Kết quả cho thấy rửa giải bằng pha động (1) dẫn đến thời gian lưu tương đối vừa phải, ít pic tạp chất hơn và khả năng tách hai thành phần tốt.

3.2 Lựa chọn điều kiện chiết

Ảnh hưởng của các phương pháp chiết xuất khác nhau (hồi lưu gia nhiệt, siêu âm) và thời gian chiết xuất (40 phút, 50 phút) đối với hàm lượng hoạt chất được so sánh bằng cách sử dụng pha động làm dung môi chiết xuất. Cuối cùng, người ta thấy rằng mặc dù hàm lượng cao nhất được đo sau khi đun nóng và hồi lưu trong 50 phút, nhưng không có sự lựa chọn nào do hình dạng đỉnh kém. Hàm lượng đo bằng siêu âm 40 phút và siêu âm 50 phút là tương đương nhau nên chọn siêu âm 40 phút làm điều kiện chiết xuất.

3.3 Nghiên cứu đã chỉ ra

cistache thảo mộc Trung Quốc

Các vật chủ và môi trường sống khác nhau có sự khác biệt đáng kể về hàm lượng echinacoside và ergosterol trong Cistanche Deserticola, cho thấy chất lượng của dược liệu bị ảnh hưởng đáng kể bởi vị trí và vật chủ. Vì vậy, việc nghiên cứu một cách hệ thống về mối tương quan giữa nguồn gốc, ký chủ và chất lượng dược liệu của cây Sa nhân có ý nghĩa rất lớn cho việc lựa chọn cây ký chủ tối ưu và đánh giá chất lượng cây Sa nhân.

thẩm quyền giải quyết

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei, et al. Tiến độ nghiên cứu về Cistanche Deserticola [J]. Nghiên cứu Đánh giá Thuốc, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Tiến độ nghiên cứu về thành phần hóa học của Cistanche tubulosa [J]. Y học cổ truyền Tân Cương, 2010, 28 (01): 76-78

[3] CHU M,LỤC,LIW. Phơi nhiễm tạm thời với echinacoside là đủ để kích hoạt tín hiệu Trk và bảo vệ tế bào neu－ ronal khỏi rotenone [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG X,YANG Y,etal.Hoạt động chống loãng xương của echinacoside ở chuột bị cắt bỏ buồng trứng [J].Phytomedicine, 2013,20(6):549-557.

[5] XIE H,ZHU H,CHENG C, et al. Echinacoside làm chậm quá trình lão hóa tế bào của các tế bào nguyên bào sợi của con người MRC-5[J]. Pharmazie,2009,64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian, et al. Sự cải thiện chứng rối loạn thu nhận trí nhớ do scopolamine gây ra bởi coeliaoside [J]. Bản tin Dược lý Trung Quốc, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui, et al. Tiến độ nghiên cứu điều trị loãng xương bằng Cistanche Deserticola [J]. Tạp chí Y học cổ truyền Đại học Liêu Ninh, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei, et al. Phân tích RAPD của Cistanche Deserticola ký sinh trên các loài khác nhau của Tamarix [J]. Tạp chí Y học cổ truyền Trung Quốc, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun, et al. Tình trạng và triển vọng nghiên cứu về đặc điểm môi trường sống, cơ chế ký sinh và vận chuyển chất dinh dưỡng của Cistanche Deserticola [J] Tạp chí Y học Cổ truyền Trung Quốc, 2012, 37 (19): 2831-2835