Echinacoside ức chế Dexamethasone ‑ gây ra sự ức chế tăng trưởng và quá trình chết trong tế bào Osteoblastic MC3T3 ‑ E1

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Trừu tượng.

Glucocorticoids (GCs) được sử dụng rộng rãi để điều trị các bệnh mãn tính. Sử dụng GCs kéo dài và / hoặc quá liều có nhiều tác dụng phụ đối với sức khỏe con người bao gồm loãng xương do GC (GIOP). Trong cuộc điều tra này, mục tiêu là đánh giá ảnh hưởng củaechinacoside từ cistanche(ECH) tác động lên các tế bào E1 của chuột được xử lý bằng dexamethasone tạo xương MC3T 3-. Chúng tôi nhận thấy rằng ECH (echinacoside từ cistanche) (5, 10, 20, and 40 mg/l) inhibited dexamethasone (1,000 nM)-suppressed cell viability as demonstrated by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The dose of 10 mg/l was selected for the following experiments because this dose had a better effect than the dose of 5 mg/l, and the doses >10 mg / l có tác dụng tương tự như liều này. ECH(echinacoside từ cistanche)(10 mg / l) hoặc pifithrin‑ (PFT-) (một chất ức chế p53, 20 µM) ức chế MC3T gây ra bởi dexamethasone 3- E1 apoptosis như được minh họa bởi phân tích đo tế bào dòng ghi nhãn kép Annexin V / propidium iodide (PI) . ECH(echinacoside từ cistanche)hoặc điều trị PFT- cũng làm giảm bớt hành động ức chế biểu hiện Bcl -2 của dexamethasone cũng như hành động kích thích biểu hiện p53 và Bax của dexamethasone. Hơn nữa, biểu hiện quá mức qua trung gian của lentivirus đã đảo ngược tác động của ECH(echinacoside từ cistanche)trong ô MC3T 3- E1 được xử lý bằng dexamethasone, gợi ý rằng ECH(echinacoside từ cistanche)gây ra tác dụng chống apoptotic trong nguyên bào xương được điều trị bằng dexamethasone thông qua con đường phụ thuộc ap 53-. Tóm lại, ECH(echinacoside từ cistanche)có tác dụng bảo vệ chống lại quá trình chết rụng tế bào tạo xương do dexamethasone gây ra, cho thấy rằng ECH(echinacoside từ cistanche)có thể có tiềm năng ứng dụng lâm sàng trong điều trị GIOP.

Cistanche Desticola có nhiều tác dụng, click vào đây để biết thêm

Giới thiệu

Glucocorticoid(GC) thường được sử dụng để điều trị nhiều loại bệnh mãn tính, bao gồm viêm, ung thư và rối loạn tự miễn dịch (1). Tuy nhiên, sử dụng GCs kéo dài và / hoặc quá liều có nhiều tác dụng phụ, chẳng hạn như tăng huyết áp, tăng đường huyết, tăng nhãn áp, hoại tử xương và loãng xương (2-4). Rõ ràng là việc sử dụng GC làm tăng nguy cơ mất xương và gãy xương (3-6). GC có thể gây ra quá trình apoptosis của các nguyên bào xương và làm suy giảm chức năng của các tế bào này. Ví dụ, dexamethasone, một hormone GC, có thể điều chỉnh sự biểu hiện của p53 trong các tế bào MC3T 3- E1 tạo xương, do đó gây ra quá trình chết rụng tế bào (7,8). Quá trình apoptosis của nguyên bào xương dẫn đến giảm sự hình thành xương. Sử dụng đường uống bisphosphonates (alendronate và risedronate) (9,10) đã được giới thiệu để điều trị loãng xương do GC (GIOP). Tuy nhiên, tỷ lệ tuân thủ thấp hạn chế hiệu quả của bisphosphonat đường uống. Các thuốc khác cũng có những hạn chế như sử dụng không thuận tiện [axit zoledronic (11)] và chi phí cao [PTH 1-34 (teriparatide) (12,13)]. Do đó, cần có sự phát triển của các phương pháp điều trị mới cho GIOP.

Echinacoside từ cistanche (ECH)là một glycoside phenylethanoid được phân lập từ y học cổ truyền Trung QuốcHerbaCistanches(14). ECH(echinacoside từ cistanche)có tác dụng bảo vệ hệ thống tế bào thần kinh (15-20), gan (21,22) và phổi (23) thông qua việc thúc đẩy tăng sinh tế bào và ức chế phản ứng viêm, sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS) và quá trình tự chết của tế bào. Mặc dù ECH(echinacoside từ cistanche)cũng có thể thúc đẩy tái tạo xương nguyên bào và có hoạt tính chống loãng xương bất thường trong các mô hình chuột (24,25), không có hồ sơ hiện có nào mô tả tác động của ECH(echinacoside từ cistanche)về quá trình chết rụng tế bào tạo xương do GC gây ra. Do đó, chúng tôi đã điều tra ảnh hưởng mà ECH(echinacoside từ cistanche)tác động lên quá trình chết rụng tế bào tạo xương do dexamethasone gây ra và làm sáng tỏ cơ chế ban đầu trong các tế bào MC3T 3- E1.

Nguyên liệu và phương pháp

Canh tác của tế bào. Ngân hàng Tế bào của Học viện Khoa học Trung Quốc (Thượng Hải, Trung Quốc) đã cung cấp các tế bào E1 tạo xương MC3T 3- của chó. Sự phát triển của tế bào diễn ra trong môi trường thiết yếu tối thiểu (-MEM) (Hyclone; GE Healthcare, Logan, UT, USA) có chứa 10% huyết thanh bò thai (FBS; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Grand Island, NY, USA ) và penicillin / streptomycin (Công ty TNHH Khoa học và Công nghệ Mặt trời Bắc Kinh, Bắc Kinh, Trung Quốc). Bảo dưỡng tế bào được tiến hành trong môi trường có 95% không khí và 5% carbon dioxide ở nhiệt độ 37 ° C.

Cácsản xuấtcủavi-rútbiểu hiện quá mức p53. Để tạo ra cấu trúc biểu hiện p53, vùng trình tự mã hóa protein (CDS) của gen p53 của chuột đã được tổng hợp và đưa vàoSinh tháiRI /BamCác vị trí hạn chế HI của vectơ biểu hiện virut pLVX-puro (Phòng thí nghiệm Clontech, Inc., Palo Alto, CA, Hoa Kỳ) của Genewiz, Inc. (Bắc Kinh, Trung Quốc). Cấu trúc đã được xác minh bằng giải trình tự DNA. Tế bào 293T (Shanghai GeneChem Co., Ltd., Thượng Hải, Trung Quốc) được truyền hỗn hợp các plasmid, bao gồm cả plasmid đóng gói virus và plasmid biểu hiện p53 (pLVX-p53) hoặc plasmid kiểm soát (pLVX) thông qua Lipofectamine 2000 (Invitrogen: Thermo Fisher Scientific, Inc., Carlsbad, CA, USA) dựa trên hướng dẫn của nhà sản xuất. Phần nổi của vi rút được thu thập ở 48 giờ sau khi truyền nhiễm và được sử dụng để lây nhiễm các tế bào MC3T 3- E1. Đánh giá biểu hiện p53 được tiến hành sau 48 giờ sau khi nhiễm virus.

Định lượngpolymerasechuỗisự phản ứng lại(qPCR). Chúng tôi đã sử dụng thuốc thử TRIzol (Invitrogen: Thermo Fisher Scientific, Inc.) để tách tế bào RNA tổng số và MC3T 3- E1, và bộ tổng hợp RevertAid ™ First Strand cDNA (Thermo Fisher Scientific, Inc., Rockford, IL, USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất để phiên mã ngược RNA tổng số. Mức mRNA p53 được phát hiện qua qPCR trên Hệ thống phát hiện trình tự ABI Prism 7300 (Hệ thống sinh học ứng dụng: Thermo Fisher Scientific, Inc., Foster City, CA, USA). Các đoạn mồi như sau: 5'-CCC CTGTCATCTTTTGTCCCT -3 'và 5'-AGCTGGCAGAAT AGCTTATTGAG -3' cho p53, 5'-CTGCCCAGAACATCA TCC -3 'và 5'-CTCAGATGCCTGCTTCAC {{ 18}} 'cho GAPDH.

Sau đó, chúng tôi đánh giá mức mRNA p53 thông qua 2^-Phương pháp ΔΔCT (26) với GAPDH như một kiểm soát nội bộ.

Thấm tây. Quá trình ly giải tế bào MC3T 3- E1 diễn ra trong dung dịch đệm xét nghiệm kết tủa phóng xạ với chất ức chế protease (Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) và quá trình ly tâm tiếp tục ly tâm trong 15 phút ở nhiệt độ 4˚C ở 9.600 xg để có thể loại bỏ kết tủa. Sau đó, chúng tôi đánh giá lượng protein bằng bộ xét nghiệm BCA (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Một lượng protein tương đương được thêm vào 10 hoặc 15 phần trăm SDS-PAGE và chuyển sang màng nitrocellulose (EMD Millipore, Bradford, MA, USA). Các màng được chặn bằng sữa tách béo 5% và được thăm dò bằng các kháng thể chính. Sau khi rửa 3 lần bằng nước muối đệm phosphat (PBS), tiến hành ủ màng với kháng thể thứ cấp liên hợp peroxidase của cây cải ngựa (1: 1, 000; cat no. A0208; Viện Công nghệ Sinh học Beyotime, Thượng Hải, Trung Quốc) . Chúng tôi đã tiến hành các thử nghiệm thấm phương tây thông qua bộ dụng cụ phát quang hóa học (ECL) nâng cao (EMD Millipore). GAPDH được sử dụng làm tiêu chuẩn nội bộ. Các nguồn kháng thể chính như sau: Bax (Sc -493) và Bcl -2 (Sc -492) đều từ Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA, USA); p53 (số 2524) và GAPDH (số 5174) đều từ Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA).

Thực nghiệm phân nhóm. Để xác định liều dexamethasone thích hợp, việc điều trị MC3T 3- tế bào E1 được tiến hành với một loạt lượng dexamethasone (0, 1, 10, 100 và 1, 000 nM; Sigma -Aldrich; Merck KGaA, St. Louis, MO, Hoa Kỳ). Ở 48 giờ sau khi ủ tế bào, xét nghiệm Bộ đếm tế bào -8 (CCK -8) được tiến hành để phát hiện sự tăng sinh của tế bào.

Để chọn liều ECH thích hợp(echinacoside từ cistanche), điều trị MC3T 3- tế bào E1 được tiến hành với 1, 000 nM dexamethasone và các liều ECH khác nhau (0, 2,5, 5, 10, 20 và 40 mg / l; Công ty TNHH Công nghệ Hóa sinh Aladdin Thượng Hải, Thượng Hải, Trung Quốc). Các tế bào phát triển trong điều kiện bình thường (mô phỏng) được coi là đối chứng. Xét nghiệm CCK -8 được thực hiện sau 48 giờ nuôi cấy.

Đối với tất cả các thí nghiệm khác, các tế bào MC3T 3- E1 được chia thành năm nhóm: nhóm 1 (mô hình), các tế bào được nuôi cấy trong điều kiện bình thường; nhóm 2, các tế bào được chuyển nạp bằng vi-rút pLVX; nhóm 3, tế bào được nuôi cấy với 10 mg / l ECH(echinacoside từ cistanche); nhóm 4, tế bào có 20 µM pifithrin- (PFT-; Selleck Chemicals, Houston, TX, USA); nhóm 5, các tế bào được chuyển nạp bằng vi-rút pLVX-p53 và được xử lý bằng 10 mg / l ECH(echinacoside từ cistanche). Các tế bào trong nhóm 2-5 đã được xử lý bằng 1, 000 nM dexamethasone. Quá trình chết rụng tế bào và biểu hiện protein được đo sau 48 giờ nuôi cấy.

Tế bàokhảo nghiệm tăng sinh.Chúng tôi đã gieo hạt MC3T 3- ô E1 vào 96- đĩa giếng ở 3x10³tế bào / giếng và nuôi cấy chúng ở điều kiện bình thường qua đêm. Các tế bào đã được xử lý theo chỉ định. Sau 48 giờ nuôi cấy, xét nghiệm CCK8 (Signalway Antibody LLC, College Park, MD, USA) sau đó được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Tóm lại, môi trường nuôi cấy trong mỗi giếng được thay thế bằng 100 µl dung dịch CCK -8 10% trong môi trường. Sau khi ủ tế bào trong thời gian 1 h ở nhiệt độ 37 ° C, chúng tôi đánh giá độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm bằng đầu đọc vi tấm. Khả năng sống sót của tế bào tương đối (phần trăm) với các kết nối với các giếng điều khiển đã được tính toán.

Tế bàođánh giá apoptosis. Chúng tôi đã sử dụng bộ kit tự hủy tế bào Annexin V-FITC (Viện Công nghệ sinh học Beyotime) để định lượng các tế bào đang trải qua quá trình chết rụng sớm theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Tóm lại, việc thu thập các tế bào được xử lý được tiến hành thông qua quá trình thử nghiệm. Các tế bào được rửa qua PBS và được nối lại với đệm liên kết Annexin. Ủ tế bào được tiến hành thông qua Annexin V-FITC trong thời gian 15 phút ở nhiệt độ 4˚C, sau đó ủ với propidium iodide (PI) trong 5 phút ở 4˚C. Các tế bào ở góc phần tư phía dưới bên phải (Annexin V-FITC dương tính và PI âm tính) được coi là đang tích cực trải qua quá trình chết rụng sớm.

Thống kêphân tích. Dữ liệu là phương tiện ± SD cho cả ba thí nghiệm độc lập. Thử nghiệm so sánh nhiều lần của Tukey và phân tích phương sai một chiều được thực hiện để phân tích sự khác biệt giữa các nhóm thông qua phần mềm GraphPad Prism (phiên bản 6. 0; GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Kết quả

Thành lậpcủaa liều lượng phù hợpcủadexamethasone.Để xác định liều lượng dexamethasone phù hợp, các tế bào MC3T 3- E1 đã tiếp xúc với lượng dexamethasone ngày càng tăng (0, 1, 10, 100 và 1, 000 nM) trong 48 giờ . Như thể hiện trong Hình 1, khả năng sống sót tương đối của tế bào được xác định bằng xét nghiệm CCK -8 đã tăng lên ở các tế bào được xử lý với nồng độ dexamethasone thấp (1 và 10 nM), và giảm đáng kể ở các tế bào tiếp xúc với nồng độ cao của dexamethasone (100 và 1, 000 nM).

Mức giảm đáng kể nhất được quan sát thấy trong các tế bào có 1, 000 nM dexamethasone. Do đó, 1, 000 nM dexamethasone đã được chọn trong các thử nghiệm tiếp theo.

Ảnh hưởng của ECH(echinacoside từ cistanche)ức chế tăng trưởng tế bào do dexamethasone gây ra. Sau đó, chúng tôi khám phá tác động của ECH(echinacoside từ cistanche)ức chế tăng trưởng tế bào do dexamethasone gây ra. Điều trị MC3T 3- tế bào E1 được tiến hành với 1, 000 nM dexamethasone và các liều ECH khác nhau(echinacoside từ cistanche)(0, 2,5, 5, 10, 20 và 40 mg / l; Hình 2). Ở 48 giờ sau điều trị, việc bổ sung ECH(echinacoside từ cistanche)ở liều 5, 10, 20 và 40 mg / l làm giảm đáng kể tổn thương tế bào do dexamethasone gây ra. ECH(echinacoside từ cistanche)ở liều 10 mg / l có tác dụng rõ ràng hơn ở liều 5 mg / l. Khả năng sống sót của tế bào là tương tự ở các tế bào được xử lý với 10, 20 và 40 mg / l ECH(echinacoside từ cistanche). Do đó, 10 mg / l ECH(echinacoside từ cistanche)đã được sử dụng trong các thí nghiệm sau đây.

Biểu hiện quá mức của p53 bằng cách xây dựng lentivirus. Dexametha sone có thể điều chỉnh p53, do đó gây ra quá trình chết rụng nguyên bào xương (8). Để nghiên cứu ảnh hưởng của ECH(echinacoside từ cistanche) on dexamethasone-induced p53 expression, we constructed a lentivirus encoding p53 (pLVX-p53) and transduced the virus into MC3T3-E1 cells. The expression of p53 was analyzed at 48 h after transduction. Fig. 3 shows that p53 mRNA and protein levels were increased to >2 lần trong tế bào được chuyển nạp pLVX-p 53- so với tế bào có vi rút kiểm soát (pLVX). p53 có liên quan đến ảnh hưởng của ECH (echinacoside từ cistanche) về quá trình chết rụng do dexamethasone gây ra. Tế bào MC3T 3- E1 được xử lý bằng Plavix hoặc pLVX-p53, 10 mg / l ECH (echinacoside từ cistanche), 20 µM PFT- (một chất ức chế p53) và 1, 000 nM dexamethasone, và sau đó quá trình tự chết của tế bào được đo thông qua kit Annexin V-FITC apoptosis. Như được thể hiện trong Hình 4A, điều trị dexamethasone gây ra quá trình chết rụng tế bào một cách đáng kể so với các tế bào được nuôi cấy trong điều kiện bình thường (mô hình). ECH (echinacoside từ cistanche) và điều trị PFT- đã bảo vệ đáng kể các tế bào MC3T3 ‑ E1 chống lại quá trình chết rụng do dexamethasone gây ra. Ngoài ra, sự biểu hiện quá mức của p53 đã làm đảo ngược tác dụng bảo vệ của ECH (echinacoside từ cistanche).

Bcl -2 và Bax, là những cơ quan điều hòa quá trình chết theo quy trình quan trọng, được biết là được điều chỉnh bởi p53 (27). Western blotting chỉ ra rằng những thay đổi của biểu hiện protein p53 và Bax phù hợp với những thay đổi của quá trình chết rụng tế bào, trong khi biểu hiện Bcl -2 thay đổi theo hướng ngược lại (Hình 4B và C). Đáng chú ý, mức protein p53 đã bị ECH ức chế đáng kể(echinacoside từ cistanche)và PFT- điều trị ở các tế bào biểu hiện quá mức p53 và được điều trị bằng dexamethasone (Hình 4C). Những dữ liệu này cho thấy rằng ECH(echinacoside từ cistanche)có thể phát huy tác dụng bảo vệ đối với quá trình chết rụng do dexamethasone gây ra thông qua việc ức chế biểu hiện p53.

Tác dụng của cistanche echinacoside

Thảo luận

Chức năng chống apoptosis của ECH(echinacoside từ cistanche)đã được mô tả trong mô hình tổn thương gan cấp tính gây ra bởi D-galactosamine (D-GalN) và lipopolysaccharide (LPS) và ở các tế bào u nguyên bào thần kinh ở người (SH-SY5Y) do yếu tố hoại tử khối u gây ra- hoặc 1- methyl {{6 }}phenylpyridiniumion (MPP cộng) (17,22,28). Người ta đã báo cáo rằng điều trị bằng dexamethasone có thể ức chế sự tăng sinh và gây ra quá trình chết rụng tế bào MC3T 3- E1 (8,29). Trong nghiên cứu hiện tại, khả năng sống của tế bào tương đối giảm đáng kể ở các tế bào tiếp xúc với nồng độ cao của dexamethasone (100 và 1, 000 nM), phù hợp với một nghiên cứu trước đây (8). Điều trị ECH bổ sung (5-40 mg / l) đã ức chế đáng kể khả năng tồn tại của tế bào bị ức chế bởi dexamethasone. Hơn nữa, tiếp xúc với dexamethasone (1, 000 nM) đã kích thích quá trình apoptosis của tế bào MC3T 3- E1, mà phương pháp điều trị ECH đã hạn chế ở một mức độ đáng kể. Báo cáo đã mô tả đầu tiên về cách ECH được bảo vệ chống lại quá trình chết rụng tế bào nguyên bào xương do dexamethasone gây ra và gợi ý rằng ECH có thể có tiềm năng ứng dụng lâm sàng trong GIOP.

Hơn nữa, chúng tôi đã cố gắng khám phá cơ chế sơ bộ về tác dụng bảo vệ của ECH(echinacoside từ cistanche). Dexamethasone có thể tăng cường phiên mã p53, do đó gây ra quá trình chết rụng của nguyên bào xương và bắt giữ chu kỳ tế bào (8). p53 được điều chỉnh bởi ECH trong các ô SH-SY5Y (28). Ở đây, PFT- (một chất ức chế p53) có tác dụng bảo vệ tương tự như ECH, trong khi biểu hiện quá mức của p53 đảo ngược tác dụng bảo vệ của ECH. Những thay đổi của sự biểu hiện protein p53 trong các điều kiện khác nhau phù hợp với những thay đổi của quá trình chết rụng tế bào. Những kết quả này chỉ ra rằng ECH có thể phát huy tác dụng bảo vệ đối với quá trình chết rụng tế bào tạo xương do dexamethasone gây ra thông qua việc ức chế biểu hiện p53. Các protein họ Bcl -2, chẳng hạn như Bcl -2 và Bax, có thể thay đổi tính thấm của màng ty thể, kích hoạt các caspase của cơ quan tác động và gây ra hiện tượng chết tế bào (30). Ai cũng biết rằng p53 có thể điều chỉnh Bcl -2 và Bax (27). Ở đây, điều trị bằng PFT- hoặc ECH (echinacoside từ cistanche) làm giảm tác dụng ức chế của dexamethasone đối với mức protein Bcl -2 chống apoptosis cũng như tác dụng kích thích của dexamethasone đối với mức protein Bax pro-apoptosis, trong khi biểu hiện quá mức p53 làm đảo ngược tác dụng của ECH. Những kết quả này đã chứng minh thêm sự tham gia của p53 vào chức năng bảo vệ của ECH.

Tóm lại, chúng tôi đã chứng minh rằng ECH(echinacoside từ cistanche)có tác dụng bảo vệ đầy hứa hẹn đối với quá trình chết rụng tế bào tạo xương do dexamethasone gây ra, cho thấy rằng ECH có thể có tiềm năng ứng dụng lâm sàng trong điều trị GIOP.

Tác dụng của echinacoside từ cistanche

Người giới thiệu

1. Buttgereit F, Burmester GR và Lipworth BJ: Liệu pháp glucocorticoid được tối ưu hóa: Việc mài một ngọn giáo cũ. Lancet 365: 801-803, 2005.

2. Schäcke H, Döcke WD và Asadullah K: Cơ chế liên quan đến tác dụng phụ của glucocorticoid. Pharmacol Ther 96: 23-43, 2002.

3. Fukushima W, Fujioka M, Kubo T, Tamakoshi A, Nagai M và Hirota Y: Khảo sát dịch tễ học trên toàn quốc về chứng hoại tử xương vô căn ở chỏm xương đùi. Clin Orthop Relat Res 468: 2715-2724, 2010.

4. Civitelli R và Ziambaras K: Dịch tễ học của bệnh loãng xương do lạnh do glucocorti. J Endocrinol Invest 31 (Suppl): 2-6, 2008.

5. Gudbjornsson B, Juliusson UI, và Gudjonsson FV: Tỷ lệ điều trị steroid dài hạn và tần suất đưa ra quyết định để ngăn ngừa loãng xương do steroid trong thực hành lâm sàng hàng ngày. Ann Rheum Dis 61: 32-36, 2002.

6. van Staa TP, Geusens P, Pols HA, de Laet C, Leufkens HG, và Cooper C: Một điểm số đơn giản để ước tính nguy cơ gãy xương lâu dài ở bệnh nhân sử dụng glucocorticoid đường uống. QJM 98: 191-198, 2005.

7. Rickard DJ, Sullivan TA, Shenker BJ, Leboy PS và Kazhdan I: Cảm ứng quá trình biệt hóa nguyên bào xương nhanh chóng trong nuôi cấy tế bào mô đệm tủy xương chuột bằng dexamethasone và BMP -2. Dev Biol 161: 218-228, 1994.

8. Li H, Qian W, Weng X. PLoS One 7: e37030, 2012.

9. Stoch SA, Saag KG, Greenwald M, Sebba AI, Cohen S, Verbruggen N, Giezek H, West J và Schnitzer TJ: Uống alendronate 70 mg mỗi tuần một lần ở bệnh nhân mất xương do glucocorticoid: A 12- tháng thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, có đối chứng với giả dược. J Rheumatol 36: 1705-1714, năm 2009.

10. Wallach S, Cohen S, Reid DM, Hughes RA, Hosking DJ, Laan RF, Doherty SM, Maricic M, Rosen C, Brown J, et al: Ảnh hưởng của điều trị risedronate đối với mật độ xương và gãy xương đốt sống ở bệnh nhân điều trị bằng corticosteroid. Mô Calcif Int 67: 277-285, 2000.

11. Reid DM, Devogelaer JP, Saag K, Roux C, Lau CS, Reginster JY, Papanastasiou P, Ferreira A, Hartl F, Fashola T, et al; Các nhà nghiên cứu HORIZON: Zoledronic acid và risedronate trong phòng ngừa và điều trị loãng xương do glucocorticoid (HORIZON): Một thử nghiệm ngẫu nhiên có đối chứng đa trung tâm, mù đôi, giả kép. Lancet 373: 1253-1263, năm 2009.

12. Langdale BL, Rajzbaum G, Jakob F, Karras D, Ljunggren O, Lems WF, Fahrleitner-Pammer A, Walsh JB, Barker C, Kutahov A, et al: Giảm tỷ lệ gãy xương, đau lưng và tăng chất lượng cuộc sống ở phụ nữ sau mãn kinh được xử lý bằng teriparatide: 18- Dữ liệu tháng từ Nghiên cứu Quan sát Forster Châu Âu (EFOS). Mô Calcif Int 85: 484-493, 2009.

13. Saag KG, Zanchetta JR, Devogelaer JP, Adler RA, Eastell R, See K, Krege JH, Krohn K và Warner MR: Tác dụng của teriparatide so với alendronate để điều trị loãng xương do glucocorticoid: Kết quả của một nghiên cứu ngẫu nhiên trong 30 tháng, thử nghiệm mù đôi, có kiểm soát. Viêm khớp thấp khớp 60: 3346-3355, 2009.

14. Jia Y, Guan Q, Guo Y và Du C: Echinacoside kích thích tăng sinh tế bào và ngăn chặn quá trình chết rụng của tế bào trong các tế bào MODE-K biểu mô ruột bằng cách điều chỉnh sự biểu hiện của yếu tố tăng trưởng biến đổi - 1. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

15. Kuang R, Sun Y, Yuan W, Lei L và Zheng X: Tác dụng bảo vệ của echinacoside, một trong những glycoside phenylethanoid, đối với độc tế bào do H (2) O (2) gây ra trong tế bào PC12. Planta Med 75: 1499-1504, năm 2009.

16. Kuang R, Sun Y và Zheng X: Ức chế oxit nitric liên quan đến tác dụng bảo vệ của echinacoside đối với H2O 2- gây ra tổn thương tế bào PC12. Nat Prod Commun 5: 571-574, 2010.

17. Deng M, Zhao JY, Tu PF, Jiang Y, Li ZB và Wang YH: Echinacoside giải cứu các tế bào thần kinh SHSY5Y khỏi quá trình chết rụng do TNFalpha gây ra. Eur J Pharmacol 505: 11-18, năm 2004.

18. Geng X, Tian X, Tu P và Pu X: Tác dụng bảo vệ thần kinh của echinacoside trong mô hình MPTP của chuột bị bệnh Parkinson. Eur J Pharmacol 564: 66-74, 2007.

19. Zhao Q, Gao J, Li W và Cai D: Tác dụng dưỡng thần kinh và kích thích thần kinh của echinacoside trên mô hình chuột MPTP bán cấp của bệnh Parkinson. Brain Res 1346: 224-236, 2010.

20. Zhu M, Lu C và Li W: Tiếp xúc thoáng qua với echinacoside là đủ để kích hoạt tín hiệu Trk và bảo vệ tế bào thần kinh khỏi rotenone. J Neurochem 124: 571-580, 2013.

21. Wu Y, Li L, Wen T và Li YQ: Tác dụng bảo vệ của echinacoside đối với độc tính trên gan do carbon tetrachloride gây ra ở chuột. Độc chất học 232: 50-56, 2007.

22. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T và Wen T: Echinacoside ameliorates D-galactosamine cộng với tổn thương gan cấp tính do lipopolysaccharide gây ra ở chuột thông qua việc ức chế quá trình chết và viêm. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

23. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L và Zhao J: Bảo vệ echinacoside chống lại tổn thương phổi cấp tính do axit oleic gây ra ở chuột. Radic Res 41 miễn phí: 798-805, 2007.

    ---