Cistanche: Echinacoside ngăn chặn sự phát triển của tế bào ung thư biểu mô tuyến tụy bằng cách gây ra quá trình chết rụng thông qua con đường kích hoạt protein Kinase của Mitogen

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

WEI WANG, JINBIN LUO, YINGHUI LIANG và XINFENG LI

Trừu tượng.

Ứng dụng lâm sàng của các sản phẩm tự nhiên có nguồn gốc từ y học cổ truyền Trung Quốc đã thu hút được sự chú ý trong hóa trị liệu ung thư.Echinacoside(ECH), một trong những phenylethanoids, được phân lập từ thân củaCistanche(một loại thuốc thảo dược của Trung Quốc) có tác dụng bảo vệ mô và chống apxe trên hệ thần kinh trung ương. Tuy nhiên, vẫn còn rất khó nắm bắt liệu ECH có hoạt động ức chế khối u hay không. Trong nghiên cứu này, nó đã được chứng minh rằng ECH có thể ức chế rõ rệt sự tăng sinh của tế bào ung thư biểu mô tuyến tụy bằng cách tạo ra các loại oxy phản ứng và sự xáo trộn của điện thế màng ty thể và do đó kích hoạt quá trình apoptosis. Hơn nữa, người ta đã làm sáng tỏ rằng ECH(Echinacoside)ngăn chặn sự phát triển của tế bào khối u thông qua điều chỉnh hoạt động MAPK. Kết luận, nghiên cứu này cho thấy một chức năng mới của ECH (Echinacoside) trong việc ngăn ngừa sự phát triển của ung thư, và ngụ ý rằng việc sử dụng ECH có thể là một chiến lược hóa trị liệu tiềm năng cho bệnh ung thư.

Giới thiệu

Con đường ức chế khối u p53 thông qua cảm ứng của chất ức chế khối u, ARF làm giảm thiểu sự phân hủy p53 qua trung gian của chuột E 3- gây ung thư đôi phút (MDM) 2- qua trung gian p53 (3). Đây là một cơ chế tự bảo vệ, tự điều chỉnh để ngăn chặn các tế bào khỏi sự biến đổi ác tính. Đáng chú ý, p53 có thể ngăn chặn hoạt động của Myc bằng cách kích hoạt phiên mã, ví dụ: miR -145 nhắm mục tiêuMycmRNA làm im lặng dịch mã (4,5), do đó hình thành một vòng điều hòa phản hồi tiêu cực.

Chiến lược đơn giản và hiệu quả nhất để điều trị ung thư là tiêu diệt các tế bào ung thư. Các loại thuốc chống ung thư thường được sử dụng, chẳng hạn như cisplatin (6), actinomycin D (7) và adriamycin (8) được chứng minh là có thể ức chế sự phát triển của khối u bằng cách thúc đẩy quá trình apoptosis. Gần đây, bằng chứng ngày càng tăng đã chứng minh rằng một số sản phẩm tự nhiên và các dẫn xuất từ ​​thực vật, đặc biệt là từ các cây thuốc được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc (TCM), có chức năng ức chế khối u bằng cách gây ra quá trình tự chết của tế bào ung thư và có tiềm năng ứng dụng lâm sàng. trong liệu pháp điều trị ung thư (9). Ví dụ, emodin anthraquinon tự nhiên được phân lập từ nhiều loại tế bào ung thư (10,11). Camptothecin, có nguồn gốc từ 'cây hạnh phúc' của Trung Quốc,Camptotheca thành công, là một sản phẩm tự nhiên có giá trị giúp ức chế sự thắt chặt của DNA sau khi đứt gãy sợi qua trung gian topo I (12). Trong một nghiên cứu thuần tập dựa trên dân số hồi cứu khác trên tổng số 729 bệnh nhân ung thư vú giai đoạn muộn, người ta cho rằng liệu pháp TCM có thể góp phần điều trị ung thư. Trong nhóm thuần tập này, 115 bệnh nhân là người sử dụng TCM trong khi 614 bệnh nhân không sử dụng TCM. Phân tích đa biến chứng minh rằng, so với những người không sử dụng, việc sử dụng TCM có liên quan đến việc giảm đáng kể nguy cơ tử vong do mọi nguyên nhân (13). Tất cả những phát hiện nói trên chỉ ra rằng TCM là một loại thuốc bổ sung và thay thế quan trọng có thể được sử dụng trong điều trị ung thư.

chuột bị thương phổi cấp tính (16,17). Ngoài ra, ECH(Echinacoside)đã được chứng minh là có tác dụng bảo vệ mô thần kinh và cải thiện các rối loạn hành vi ở các mô hình chuột mắc bệnh Parkinson (18). Đáng chú ý, người ta đã phát hiện ra rằng ECH thúc đẩy tăng sinh tế bào và ức chế quá trình apoptosis ở tế bào MODE-K biểu mô ruột chuột (19). Tuy nhiên, cho đến nay, người ta ít chú ý đến vai trò tiềm năng của ECH trong phòng chống ung thư.

Trong nghiên cứu này, người ta đã khám phá liệu điều trị ECH có ảnh hưởng đến sự phát triển và tăng sinh của tế bào khối u hay không và liệu ECH có(Echinacoside)gây ra quá trình apoptosis, tăng cường sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS) và giảm điện thế màng ty thể (MMP), và do đó ngăn chặn sự phát triển của tế bào khối u. Hơn nữa, nghiên cứu này nhằm xác định các cơ chế phân tử chịu trách nhiệm cho việc ức chế tăng trưởng tế bào qua trung gian ECH.

Vật liệu và phương pháp

Tế bào hàng, thuốc thử, và các kháng thể.SW199 0 tế bào ung thư biểu mô tuyến tụy (ATCC, Manassas, VA, Hoa Kỳ) được nuôi cấy trong môi trường Eagle đã sửa đổi của Dulbecco bổ sung 10% huyết thanh bò thai, 50 U / ml penicilin và 0,1 mg / ml streptomycin ở 37˚C trong một Khí quyển làm ẩm 5% CO2. ECH(Echinacoside)được mua từ Jrdun Biotechnology Corp. (Thượng Hải, Trung Quốc). Các kháng thể chống lại AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38 và GAPDH được mua từ Công nghệ Tín hiệu Tế bào (Danvers, MA, USA); anti-Bax và anti-Bcl -2 được mua từ Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, USA); và anti-Caspase -3 đã được mua từ Abcam (Thượng Hải, Trung Quốc).

Tế bào khả năng tồn tạikhảo nghiệm. Để đánh giá tốc độ phát triển của tế bào khối u, bộ công cụ Đếm tế bào {{0}} (CCK -8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, USA) đã được sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Huyền phù tế bào được cấy ở 5, 000 tế bào mỗi giếng với xử lý ECH trong 0, 12, 24, 48 hoặc 72 giờ trong 96 - đĩa nuôi cấy giếng. Sự ức chế sự phát triển của tế bào được xác định bằng cách thêm thuốc thử WST -8 từ bộ CCK-8 với nồng độ cuối cùng là 10 phần trăm vào mỗi giếng, và độ hấp thụ của các mẫu được đo ở bước sóng 450 nm bằng đầu đọc vi tấm (Multiskan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, Hoa Kỳ).

Hoechst 33342 sự nhuộm màu.Tế bào (60 phần trăm hợp lưu) được xử lý bằng Hoechst 33342 (Viện Công nghệ Sinh học Beyotime, Haimen, Trung Quốc) ở nồng độ cuối cùng là 1µg / ml, ủ trong tủ ấm 37 ° C trong 15 phút, rửa bằng dung dịch muối đệm phosphat hai lần, cố định trong 4% paraformaldehyde trong 30 phút ở nhiệt độ phòng, và gắn lên lam. Sự thay đổi hình thái của nhân tế bào được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang (Olympus BX51, Melville, NY, USA). Các hạt nhân bình thường có hình tròn và có màu xanh nhạt, trong khi các hạt nhân apoptotic bị co lại và có màu xanh lam sáng.

Huỳnh quang ‑ được kích hoạt tế bào sắp xếp (FACS) phân tích.Để đánh giá quá trình tự chết, sử dụng bộ phát hiện apxe huỳnh quang isothiocyanate (FITC) -Annexin V (BD Biosciences, Thượng Hải, Trung Quốc) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Một cách ngắn gọn, 5x1 0 4 tế bào được rửa bằng PBS lạnh đá, ngâm lại trong dung dịch đệm liên kết 0,1 ml (Viện Công nghệ Sinh học Beyotime) và nhuộm bằng 10 ml Annexin V liên hợp FITC (10 mg / ml) và 10 ml propidium iodide (PI) (50 mg / ml). Sau khi ủ trong 15 phút ở nhiệt độ phòng trong bóng tối và thêm dung dịch đệm liên kết 400 ml, các tế bào được phân tích bằng máy đo dòng chảy (C6; BD Biosciences, Thượng Hải, Trung Quốc).

Đo đạc của hồi đáp nhanh ôxy loài (ROS).Để đánh giá việc sản xuất ROS, người ta đã sử dụng bộ kit Thử nghiệm các loài oxy phản ứng (Công nghệ sinh học mạnh mẽ, Bắc Kinh, Trung Quốc) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Tóm lại, các tế bào (80% hợp lưu) được thu hoạch và rửa sạch bằng PBS trước khi nhuộm bằng dung dịch dihydroethidium (DHE) (Viện Công nghệ Sinh học Beyotime). Tế bào sau đó được phân tích bằng phân tích tế bào dòng chảy.

Đo đạc của ty thể màng tiềm năng (MMP).

Bộ xét nghiệm tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) (ImmunoChemistry Technologies, Bloomington, MN, USA) đã được sử dụng để phát hiện những thay đổi trong MMP. Một cách ngắn gọn, các tế bào (80% hợp lưu) được thu hoạch, rửa sạch bằng PBS và nhuộm bằng TMRM trong 15‑20 phút trong tủ ấm 37˚C. Sau đó, các tế bào được rửa một lần bằng PBS và được phân tích tế bào dòng chảy.

Kiểm tra miễn dịchphân tích. Các tế bào (8 0 phần trăm hợp lưu) được thu hoạch và ly giải trong đệm RIPA (Công nghệ sinh học Jrdun) bao gồm 50 mM Tris-HCl, pH 7,4; 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 phần trăm NP ‑ 40, 1 phần trăm natri deoxycholic acid và 0,1 phần trăm SDS và các chất ức chế proteasome mới được bổ sung. Số lượng bằng nhau của lysate tế bào trong đã được sử dụng để phân tích miễn dịch hấp thụ như đã mô tả trước đây (20).

Thống kê phân tích.Dữ liệu định lượng được biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn. Sự khác biệt về thống kê được đánh giá bằng bài kiểm tra t của Học sinh không ghép đôi sử dụng phần mềm thống kê SPSS 15. 0. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Kết quả

ECH (Echinacoside)đàn áp khối u tế bàosự phát triển. Mặc dù đã có báo cáo rằng ECH(Echinacoside)thể hiện vai trò bảo vệ bằng cách ức chế quá trình apoptosis và các tín hiệu viêm trong tế bào soma, chẳng hạn như tế bào biểu mô tế bào thần kinh và ruột (16-19), nó vẫn khó nắm bắt được liệu ECH có kiểm soát sự phát triển và tăng sinh của tế bào ung thư hay không. Để kiểm tra điều này, một thử nghiệm sống sót của tế bào đã được tiến hành bằng cách xử lý các tế bào SW1990, có nguồn gốc từ ung thư biểu mô tuyến tụy cấp II, với liều lượng chuẩn độ của ECH như trong Hình 1. Đáng chú ý, nó đã được chứng minh rằng ECH làm chậm đáng kể sự tăng sinh tế bào khối u trong một liều lượng -cách thức phụ thuộc trong khoảng thời gian nuôi cấy 5- ngày (Hình 1).ECH gây nênsự chết tế bào. Vì mất apoptosis là một trong những cơ chế gây bệnh chính gây ra sự tăng sinh không kiểm soát của các tế bào ung thư tuyến tụy (21), nghiên cứu hiện tại đã thực hiện một loạt các thí nghiệm để xác định xem liệu ECH có kích hoạt apoptosis hay không. Đầu tiên, bằng cách nhuộm nhân của các tế bào khối u với Hoechst 33342, người ta đã chứng minh rằng ECH dẫn đến quá trình apoptosis phụ thuộc vào liều lượng (Hình 2A). Ngoài ra, các phân tích FACS được thực hiện bằng cách sử dụng phương pháp nhuộm Annexin V / PI để xác nhận thêm hiệu ứng apoptotic của ty ECH (Hình 2B). Tỷ lệ trung bình của tế bào apoptotic là 1,1% trong điều kiện nuôi cấy bình thường, trong khi tỷ lệ này tăng đáng kể lên 10,6, 21,4 và 51,3% khi đáp ứng với điều trị ECH phụ thuộc vào liều lượng (Hình 2C). Những kết quả này, cùng với xét nghiệm khả năng sống sót của tế bào được trình bày trong Hình 1, chứng minh rằng điều trị ECH ngăn chặn sự gia tăng của các tế bào khối u bằng cách kích hoạt quá trình apoptosis.

tạo ra ethidium xen kẽ với DNA, được sử dụng trong nghiên cứu này để đánh giá sản xuất ROS. Người ta thấy rằng, giống như các loại thuốc chống ung thư khác, ECH cũng kích thích sản xuất ROS theo cách phụ thuộc vào liều lượng như được thể hiện bằng cường độ huỳnh quang tăng lên khi điều trị bằng ECH (Hình 3).

ECH (Echinacoside)giảm bớt MMP.Rối loạn chức năng ti thể đã được chứng minh là có liên quan đến việc khởi phát quá trình apoptosis. Việc mở lỗ chuyển tiếp tính thấm của ty thể đã được chứng minh là có thể gây ra sự khử cực của điện thế xuyên màng và giải phóng các yếu tố gây chết tế bào (23). Do đó, người ta đã thử nghiệm liệu ECH có thể gây mất MMP trong tế bào khối u hay không bằng cách thực hiện xét nghiệm TMRM, đây là một phương pháp đã được thiết lập tốt, vì cường độ huỳnh quang TMRM tỷ lệ thuận với điện thế màng. Nó đã được chứng minh rằng điều trị ECH làm giảm đáng kể MMP theo cách phụ thuộc vào liều lượng (Hình 4).ECH điều khiển khối u tế bào sự phát triển thông qua protein hoạt hóa mitogencơ sở phân tử của sự chết tế bào khối u qua trung gian ECH, hoạt động của một số con đường tín hiệu quan trọng, chẳng hạn như MAPK và AKT (24,25), kiểm soát sự sống và chết của tế bào đã được kiểm tra. Các MAPK được bảo tồn về mặt tiến hóa, kinase protein Ser / Thr hướng proline, bao gồm các kinase điều chỉnh tín hiệu ngoại bào (ERK), kinase đầu cuối c-Jun NH 2- (JNK) và các thành viên gia đình p38 được kích hoạt thông qua ba- các tầng tín hiệu tier kinase (26,27). Trong nghiên cứu này, sự biểu hiện của MAPK và AKT, cũng như các dạng phosphoryl hóa hoạt hóa của chúng, được đánh giá và cho thấy rằng ECH ngăn chặn rõ rệt hoạt động của JNK và ERK1 / 2, nhưng tăng cường hoạt động của p38 (Hình 5). Đáng chú ý, nó đã được chứng minh rằng hoạt động AKT, cũng rất quan trọng đối với sự tăng sinh tế bào, không bị ảnh hưởng bởi điều trị ECH (Hình 5). Ngoài ra, nó được chỉ ra rằng điều trị ECH làm tăng biểu hiện của Bax và Caspase -3 trong khi giảm biểu thức Bcl -2 (Hình 5), phù hợp với Hình 2. Do đó, kết quả chỉ ra rằng ECH kích hoạt quá trình apoptosis của tế bào khối u thông qua con đường MAPK.

Thảo luận

Theo hiểu biết tốt nhất của chúng tôi, đây là nghiên cứu đầu tiên cho thấy ECH có chức năng ức chế khối u bằng cách kích hoạt quá trình apoptosis (Hình 2), thúc đẩy sản xuất ROS (Hình 3) và gây khử cực điện thế màng ty thể (Hình 4) , do đó dẫn đến ức chế sự phát triển của tế bào khối u (Hình 1). Hơn nữa, cơ sở phân tử của sự chết tế bào khối u qua trung gian ECH đã được chứng minh là xảy ra bằng cách điều chỉnh các con đường tín hiệu MAPK (Hình 5). Những phát hiện này chứng minh một chức năng mới của ECH trong việc ngăn ngừa sự hình thành khối u và do đó gợi ý rằng nó có thể là một tác nhân ứng cử cho liệu pháp điều trị ung thư.

Phần lớn các loại thuốc chống ung thư có thể gây ra quá trình chết rụng tế bào khối u, lão hóa và / hoặc bắt giữ chu kỳ tế bào, dẫn đến ức chế sự phát triển và tăng sinh của tế bào khối u. Bắt giữ chu kỳ tế bào là phản ứng của tế bào đối với các tín hiệu căng thẳng nhẹ cho phép tế bào sửa chữa DNA bị hư hỏng trước khi bắt đầu tổng hợp DNA sao chép hoặc nguyên phân, trong khi quá trình chết rụng và lão hóa (bắt giữ chu kỳ tế bào vĩnh viễn) xảy ra để đáp ứng với các tín hiệu căng thẳng loại bỏ các tế bào không thể sửa chữa hoặc ác tính ( 28,29). Do đó, chỉ đánh giá tác dụng tự chết của ECH đối với tế bào khối u trong nghiên cứu này, vì tiêu diệt tế bào ung thư là tiêu chí chính để đánh giá hiệu lực của chất chống ung thư. Đáng chú ý, nó đã được chứng minh rằng ECH tạo ra biểu thức củaBax(Hình 5), một gen pro-apoptotic, được kích hoạt phiên mã bởi chất ức chế khối u p53 (30). Do đó, cần phải kiểm tra xem ECH có thể kích hoạt đường truyền tín hiệu p53 hay không. Nếu vậy, ECH cũng có thể tạo ra chu kỳ tế bào phụ thuộc 53- bắt giữ, lão hóa, chết rụng hoặc tự chết. Trong nghiên cứu này, chức năng ức chế khối u của ECH trong dòng tế bào ung thư biểu mô tuyến tụy SW1990 đã được làm sáng tỏ. Tuy nhiên, cần phải có các nghiên cứu sâu hơn quan sát thêm các dòng tế bào ung thư tuyến tụy. Người ta đã chỉ ra rằng các đột biến trong protein gây ung thư RAS và chất ức chế khối u p53 có liên quan đến sự phát triển của ung thư tuyến tụy (31); tuy nhiên, dòng tế bào SW1990 không chứa bất kỳ đột biến p53 nào, theo cơ sở dữ liệu IARC p53 (http://p53.iarc.fr/CellLines.aspx). Do đó, điều quan trọng là phải điều tra xem liệu ECH có thể ảnh hưởng đến sự phát triển và tăng sinh của các dòng tế bào ung thư tuyến tụy khác với các đột biến p53 khác nhau hay không. Ngoài ra, sẽ rất thú vị khi xác định liệu ECH có thể thúc đẩy quá trình apoptosis và ức chế sự phát triển của các loại khối u khác hay không.

Tăng ROS và giảm MMP, gây ra bởi điều trị ECH, được chứng minh là rất cần thiết trong quá trình cảm ứng apoptosis (22). Ngoài ra, người ta đã phát hiện ra rằng ROS có thể gây ra quá trình oxy hóa các lỗ chân lông của ty thể góp phần giải phóng cytochromec, một chất trung gian trong quá trình apoptosis, do sự gián đoạn của MMP (22). Do đó, vẫn phải xác định xem ECH có gián tiếp làm gián đoạn MMP thông qua cảm ứng ROS hay không. Hơn nữa, stress oxy hóa do ROS gây ra cũng được chứng minh là có liên quan đến việc điều chỉnh vô số tín hiệu kiểm soát tăng trưởng tế bào, bao gồm p53, NF-κB, HIFs và PI3K (32). Vẫn còn phải xác định xem và nếu có, ECH điều chỉnh các đường dẫn tín hiệu quan trọng này như thế nào. Đáng chú ý, căng thẳng oxy hóa gây ra các bệnh thoái hóa thần kinh khác nhau do tiêu thụ nhiều oxy, hệ thống chống oxy hóa yếu và các đặc điểm biệt hóa đầu cuối của hệ thần kinh trung ương (33). Tuy nhiên, một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng ECH có tác dụng bảo vệ và chống lại sự chết trên mô thần kinh. Về vấn đề này, có thể đưa ra giả thuyết rằng ECH có thể làm giảm sản xuất ROS trong các tế bào thần kinh biệt hóa ở giai đoạn cuối. Do đó, vẫn phải xác định xem liệu quy định sản xuất ROS của ECH có phụ thuộc vào tình trạng biệt hóa của tế bào hay không. Do đó, các kết quả hiện tại cùng với các nghiên cứu khác cho thấy rằng ECH, bệnh TCM được sử dụng rộng rãi, có thể là một chiến lược hóa trị liệu quan trọng không chỉ để điều trị các bệnh thoái hóa thần kinh mà còn cả ung thư biểu mô ác tính.

Gần đây, sử dụng TCM trong điều trị ung thư ngày càng được chú ý nhiều hơn. Tiềm năng của các sản phẩm tự nhiên từ cây thuốc được sử dụng trong TCM đã được giới khoa học ngay cả ở phương Tây công nhận (9). Cần có những nỗ lực để làm sáng tỏ các cơ chế hoạt động cơ bản của các sản phẩm tự nhiên này, cuối cùng có thể dẫn đến việc phát triển các loại thuốc hiệu quả và an toàn để điều trị ung thư.

Kết luận, nghiên cứu này đã chứng minh chức năng ức chế khối u của ECH và cũng giải thích cơ sở phân tử của việc ức chế khối u qua trung gian ECH, do đó đề xuất ứng dụng lâm sàng tiềm năng của ECH trong điều trị ung thư.

Sự nhìn nhận

Nghiên cứu này được tài trợ và hỗ trợ bởi Chương trình Nghiên cứu Khoa học Trọng điểm của FMU (tài trợ số 09ZD014). Nhóm tác giả xin cảm ơn Biomedworld (Thượng Hải, Trung Quốc) đã giúp chỉnh sửa bản thảo.

Người giới thiệu

1. Hanahan D và Weinberg RA: Dấu hiệu của ung thư: Thế hệ tiếp theo. Ô 144: 646-674, 2011.

2. Alderton GK: Phiên mã: Tác dụng phiên mã của MYC. Nat Rev Cancer 14: 513, 2014.

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ và Roussel MF: Tín hiệu Myc thông qua bộ ức chế khối u ARF điều chỉnh quá trình chết và bất tử phụ thuộc p 53-. Genes Dev 12: 2424-2433, 1998.

4. Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K và Mo YY: p53 ức chế c-Myc thông qua cảm ứng của bộ ức chế khối u miR -145. Proc Natl Acad Sci Hoa Kỳ 106: 3207-3212, 2009.

5. Liao JM, Cao B, Zhou X và Lu H: Những hiểu biết mới về các chức năng của p53 thông qua các microRNA đích của nó. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB và Lippard SJ: Sửa chữa Cisplatin và DNA trong hóa trị liệu ung thư. Xu hướng Khoa học Hóa sinh 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H và Korc M: Actinomycin D gây apoptosis và ức chế sự phát triển của tế bào ung thư tuyến tụy. Int J Cancer 86: 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P và Dass CR: Doxorubicin: Cập nhật về hoạt động phân tử chống ung thư, độc tính và hệ thống phân phối thuốc mới. J Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Efferth T, Li PC, Konkimalla VS và Kaina B: Từ y học cổ truyền Trung Quốc đến liệu pháp điều trị ung thư hợp lý. Xu hướng Mol Med 13: 353-361, 2007.