Tác dụng của Cistanche Deserticola Polysacarit đối với sự tăng sinh tế bào lympho

Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, Li Xiaohong, Yang Meihua, Shi Yue

(Viện Cây thuốc, Đại học Y Liên minh Bắc Kinh, Viện Khoa học Y tế Trung Quốc, Bắc Kinh 100193)

Khách quanTo Nghiên cứu ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharid(CDPS) về sự tăng sinh tế bào lympho ở chuột. 

phương phápXét nghiệm MTT được sử dụng để phát hiện sự tăng sinh tế bào lympho lách ở chuột. Cyclophosphamide (Cy) đã được sử dụng để tái tạo mô hình động vật của động vật bị suy giảm miễn dịch, và các chỉ số lá lách và tuyến ức của động vật bình thường và động vật bị suy giảm miễn dịch đã được đo. Hoạt động của interleukin-2 (IL-2) được đo bằng xét nghiệm tăng sinh tế bào tuyến ức. Kết quảCistanche Deserticola polysaccharidđã thúc đẩy đáng kể sự tăng sinh của các tế bào lympho được kích hoạt bằng nguyên phân (ConA và LPS) và các tế bào bình thường không được kích hoạt, đồng thời thúc đẩy quá trình tiết IL-2 trong tế bào lympho. Quản lý trong phúc mạc cho thấy rằngCistanche Deserticola polysaccharidlàm tăng đáng kể chỉ số lá lách của chuột bình thường và chuột suy giảm miễn dịch, đồng thời có tác dụng đối kháng rõ rệt với sự giảm chỉ số tuyến ức do Cy. Phần kết luậnCistanche Deserticola polysaccharidcó thể thúc đẩy đáng kể sự tăng sinh tế bào lympho lách ở chuột, điều này có thể liên quan đến việc thúc đẩy bài tiết IL-2 của nó.

Cistanche sống ở sa mạc

[Từ khóa]Cistanche Deserticola polysaccharid; Chỉ số lá lách; Chỉ số tuyến ức; tăng sinh tế bào lympho; Interleukin-2

Polysacarit thực vật đã thu hút sự chú ý rộng rãi do tác dụng điều hòa miễn dịch phổ biến và độc tính tương đối thấp [1].Cistanche Deserticola ma, được gọi là "Nhân sâm sa mạc", là thân cây có vảy, khô, nhiều thịt của cây Cistanche Deserticola, một loại cây thuộc họ Orobaceae, có nhiều tác dụng dược lý.Nước sắc của nó có thể làm tăng đáng kể tỷ lệ thực bào và chỉ số thực bào của đại thực bào.Các nghiên cứu sâu hơn đã chỉ ra rằng cơ sở vật chất của nó là tổng số polysacarit của Cistanche Deserticola[3]. Zeng Qunli et al. [4] đã phát hiện ra rằng một thành phần duy nhất củaCistanche Deserticola polysaccharidcó tác dụng tăng sinh đáng kể đối với tế bào lympho tuyến ức chuột trong ống nghiệm. Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề sự tăng sinh tế bào lympho đã được quan sát in vivo và in vitro.

Công thức phân tử của Cistanche Deserticola

1. Vật liệu và phương pháp

1.1 Thuốc và thuốc thử

Polysacarit từ Cistanche Deserticola được cung cấp bởi Phòng Thực vật và Hóa chất của Viện Thực vật và Y học, Đại học Y khoa. Nó được chiết xuất từbột chiết xuất từ ​​quả hồ trăn, và hàm lượng polysacarit là 87 phần trăm .

bột chiết xuất từ ​​quả hồ trăn

Trước khi sử dụng cho các thí nghiệm in vivo, hòa tan và pha loãng với nước muối sinh lý đến nồng độ cần thiết, đun sôi để khử trùng. Trước khi sử dụng các thí nghiệm trong ống nghiệm, môi trường nuôi cấy RPMI-1640 đã được hòa tan và pha loãng, đồng thời tiến hành khử trùng bằng áp suất cao. Lipopolysacarit (LPS), concanavalin (ConA), dexamethasone (DEX) và MTT đều là sản phẩm của Tập đoàn Sigma. Cyclophosphamide, một liên doanh Trung-Mỹ của Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Huyết thanh bào thai bò, môi trường nuôi cấy RPMI1640 và trypsin đều là sản phẩm của Gibco. Thuốc thử khác là thuốc thử phân tích trong nước.

1.2 Động vật

Chuột non BALB c (mức SPF) được cung cấp bởi Công ty TNHH Công nghệ Động vật Thí nghiệm Viton Lihua [SCXK (Bắc Kinh) 2002-2003]. Động vật cấp SPF được nuôi trong phòng và tự do cho ăn và uống.

1.3 Bộ máy

Chất đánh dấu men Multikan Ascent, sản phẩm của Công ty Thermo Electron, Mỹ. Máy đo pH chính xác Leici PHS-3B, Công ty TNHH Thiết bị khoa học chính xác Thượng Hải. Tủ ấm carbon dioxide Napco 5410, NAPCO, Hoa Kỳ. BCN-1360 Bàn làm việc siêu sạch, Công ty TNHH sản xuất dụng cụ Donglianhar Bắc Kinh XDS-1Kính hiển vi đảo ngược B, Công ty TNHH thiết bị quang điện tử Trùng Khánh

1.4 Phương pháp

1.4.1 Ảnh hưởng đến sự tăng sinh tế bào lympho [5]:

Chuẩn bị thường quy các tế bào lympho lá lách từ chuột BALL c, sử dụng RPMI-1640 để điều chỉnh nồng độ tế bào thành 1 × 107 mL, được cấy trên đĩa nuôi cấy 96 giếng, với 100 huyền phù tế bào được thêm vào mỗi giếng μ 50. Đó là đồng -Nuôi cấy với các nồng độ khác nhauCistanche Deserticola polysaccharid(nồng độ cuối cùng củaCistanche Deserticola polysaccharidđối với sự tăng sinh của các tế bào lympho không hoạt động theo thứ tự là 6,25, 12,5, 25, 50 và 100 mg/L; nồng độ cuối cùng củaCistanche Deserticola polysaccharidđối với sự tăng sinh của các tế bào lympho T được kích hoạt bởi ConA theo thứ tự là 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 và 62,5 mg/L; và nồng độ cuối cùng củaCistanche Deserticola polysaccharidđối với sự tăng sinh của tế bào lympho B đã hoạt hóa LPS theo thứ tự là 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 và 25 mg/L) và ConA hoặc LPS, môi trường RPMI-1640 được sử dụng làm đối chứng. Tổng thể tích của mỗi lỗ là 200 μL, khi thêm mitogen ConA và LPS (đối chứng là RPMI-1640 chứa nồng độ ConA hoặc LPS tương ứng), nồng độ cuối cùng của cả hai là 2,5 mg L và 10 mg L, tương ứng. Ba lỗ song song đã được thực hiện cho các phương pháp điều trị khác nhau. Đặt đĩa nuôi cấy vào tủ ấm 37 độ, độ ẩm bão hòa CO2 5% trong 68 giờ, thêm MTT và tiếp tục nuôi cấy trong 4 giờ. Đo giá trị A540 nm bằng chất đánh dấu enzyme bằng phương pháp MTT để phát hiện sự tăng sinh. Khi so sánh từng nhóm, quy đổi giá trị A540nm thành tốc độ tăng sinh tế bào lympho theo công thức sau:tỷ lệ tăng sinh tế bào lympho=Đối chứng mẫu A × 100 phần trăm .

Tác dụng của Cistanche—Cải thiện khả năng miễn dịch

1.4.2 Ảnh hưởng đến trọng lượng cơ quan miễn dịch ở chuột bình thường [6,7]:

Chuột BALB c trẻ (đực, 4-tuần tuổi, với trọng lượng cơ thể là 10-15 g) được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng trống (nước muối) và các nhóm liều lượng khác nhau (125 mg (kg · bw) và 250 mg (kg · bw)), với 11 con chuột trong mỗi nhóm. Thuốc được tiêm trong màng bụng mỗi ngày một lần trong 7 ngày liên tiếp. Những con chuột đã bị giết sau khi trật khớp cổ tử cung. Lá lách và tuyến ức được lấy ra, mô mỡ và cân được loại bỏ, và chất lỏng bề mặt được làm khô bằng giấy lọc. Sau khi cân, chỉ số lách=100 × Trọng lượng lá lách (mg) Trọng lượng cơ thể (mg); Chỉ số tuyến ức=100 × Trọng lượng tuyến ức (mg) Trọng lượng cơ thể (mg) Tính chỉ số lá lách và chỉ số tuyến ức tương ứng cho mỗi 100 mg trọng lượng cơ thể.

1.4.3 Ảnh hưởng đến trọng lượng cơ quan miễn dịch ở chuột suy giảm miễn dịch [7,8]:

Chuột BALB c trẻ (đực, 6 tuần tuổi, trọng lượng cơ thể 15-20 g) được chia ngẫu nhiên thành 12 nhóm theo trọng lượng cơ thể. Ngoại trừ nhóm đối chứng bình thường (tiêm trong màng bụng một lượng nước muối sinh lý tương đương), các nhóm khác được tiêm Cy 50 mg (kg · bw) trong màng bụng hàng ngày và dung dịch thuốc thử nghiệm được tiêm trong màng bụng [125 và 250Mg (kg · bw)], nhóm đối chứng bình thường và nhóm người mẫu được cho một lượng nước muối sinh lý như nhau trong 13 ngày liên tục, mỗi ngày một lần. Những thay đổi về trọng lượng động vật đã được quan sát trong quá trình thí nghiệm. 24 giờ sau lần dùng cuối cùng, các chỉ số của lá lách và tuyến ức được đo và tính bằng phương pháp tương tự như trong 1.4.2.

1.4.4 Tác động đối với hoạt động IL-2:

① Cảm ứng IL-2 [9]: Thêm 50 vào mỗi giếng trong 96-tấm tế bào giếng μ L Các nồng độ khác nhau củaCistanche Deserticola polysaccharid(nồng độ cuối cùng theo thứ tự: 3.91, 7.82, 15.63, 31.25, 62.5, 125 mg/L, thêm 50 mg/L vào môi trường nuôi cấy μL giếng đối chứng) và 50 μL ConA (nồng độ cuối cùng 5 mg/L), thêm Thêm 1 mỗi giếng × 106 tế bào lá lách. Ủ trong tủ ấm có độ ẩm bão hòa 5% CO2 ở nhiệt độ 37 độ trong 24 giờ, ly tâm trong 20 phút ở tốc độ 2500 vòng r phút, lấy phần nổi phía trên tế bào và bảo quản ở - 20 độ để chờ. ② IL-2 phát hiện hoạt động [9,10]: Phương pháp cơ bản dựa trên tài liệu [9] và các điều chỉnh thích hợp được thực hiện theo tài liệu [10]. Chuẩn bị thông thường hỗn dịch tế bào tuyến ức chuột BALB c, đĩa nuôi cấy tế bào 96 giếng, cấy 1 lần mỗi giếng × 106 tế bào tuyến ức, đồng thời thêm 50 tế bào mỗi giếng μ L ConA (nồng độ cuối cùng 2,5 mg/L), sau đó thêm IL{{34 đã chuẩn bị }} 50 μL nổi phía trên (thêm 50 μL dung dịch nuôi cấy lỗ kiểm soát trống), ủ cùng nhau trong 54 giờ, thêm MTT, tiếp tục ủ trong 4 giờ, ly tâm trong 10 đến 15 phút ở 1000 r phút, loại bỏ phần nổi phía trên, và thêm DMSO 100 mỗi giếng μ L, lắc bằng bộ tạo dao động vi mô trong 8 phút và đo giá trị A540 nm bằng chất đánh dấu enzyme.

1.5 Phân tích thống kê

Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình và độ lệch chuẩn (x ± s). Phần mềm Microsoft Excel đã được sử dụng để đối chiếu dữ liệu và tiến hành kiểm tra t. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2.Kết quả

2.1 Ảnh hưởng đến sự tăng sinh tế bào lympho

Như có thể thấy từ Bảng 1, thêmCistanche Deserticola polysaccharidvới môi trường nuôi cấy tế bào lympho lách chuột được nuôi cấy in vitro ở nồng độ trên 25 mg/L có thể kích thích đáng kể sự tăng sinh tế bào lympho, cho thấy rằngCistanche Deserticola polysaccharidbản thân nó có tác dụng phân bào. Đồng thời,có thể thấy từ Bảng 2 và Bảng 3 rằng CDPS có tác dụng thúc đẩy đáng kể đối với sự tăng sinh tế bào lympho T do ConA gây ra hoặc tế bào lympho B do LPS gây ra.

Tab.1 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề sự tăng sinh của tế bào lympho không hoạt động (x ±s, n =3)

Lưu ý: so với nhóm chứng,＊P <0.05. 

Tab.2 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề sự tăng sinh tế bào lympho do ConA gây ra (x ±s, n =3)

Lưu ý: so với nhóm ConA,＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề sự tăng sinh tế bào Blympho gây ra bởi LPS (x ±s, n =3)

Lưu ý: so với nhóm LPS,＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 Ảnh hưởng đến trọng lượng cơ quan miễn dịch ở chuột bình thường

Như có thể thấy từ Bảng 4,Cistanche Deserticola polysaccharidcó thể làm tăng đáng kể chỉ số lá lách của chuột cống non BALB c bình thường nhưng không có tác dụng đối với tuyến ức.

2.3 Ảnh hưởng đến trọng lượng cơ quan miễn dịch ở chuột suy giảm miễn dịch

Từ Bảng 5,có thể thấy các chỉ số cơ quan lá lách và tuyến ức của chuột ở nhóm ức chế miễn dịch Cy thấp hơn so với nhóm đối chứng vàCistanche Deserticola polysaccharid(125, 250 mg/kg) có thể cải thiện đáng kể các chỉ số của lá lách và tuyến ức.

2.4 Ảnh hưởng đến hoạt động IL-2

Như có thể thấy từ Bảng 6,khi liều lượngCistanche Deserticola polysaccharidđạt 7,82 mg/L, nó có thể làm tăng đáng kể việc giải phóng IL-2 từ các tế bào lá lách của chuột.

Tab.4 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidtrên trọng lượng của các cơ quan miễn dịch ở chuột bình thường (x ± s, n =11)

Lưu ý: so với nhóm chứng,＊＊P <0.01.

Tab.5 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề trọng lượng của các cơ quan miễn dịch ở chuột suy giảm miễn dịch ( x ±s, n =12)

Ghi chú: so với nhóm chứng,## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Tab.6 Ảnh hưởng củaCistanche Deserticola polysaccharidvề quá trình sản xuất IL-2 bởi các tế bào lympho lách ở chuột ( x ±s, n =3)

Lưu ý: so với nhóm chứng,＊＊P <0.01. 

3. Thảo luận

Sự tăng sinh tế bào lympho lách do ConA và LPS gây ra ở chuột là một thí nghiệm trong ống nghiệm để phát hiện chức năng của tế bào lympho T và B và là một chỉ số quan trọng về khả năng miễn dịch cụ thể. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng khi nồng độ cuối cùng củaCistanche Deserticola polysaccharidtrên 25 mg/L, nó có thể thúc đẩy đáng kể sự tăng sinh tế bào lympho, cho thấy nó có tác dụng phân bào nhất định. Với sự hiện diện của mitogen (ConA hoặc LPS), một liều lượng nhỏ hơn củaCistanche Deserticola polysaccharidcó thể cải thiện khả năng miễn dịch của cơ thể, hiển thị hoạt động tăng sinh đáng kể. Chúng tôi biết rằng ConA và LPS chủ yếu gây ra sự tăng sinh của tế bào lympho T hoặc tế bào lympho B tương ứng. Các nghiên cứu đã chỉ rabột cistanche lợi ích sức khỏe: Cistanche Deserticola polysaccharidcó thể thúc đẩy cả tăng sinh tế bào lympho T và tăng sinh tế bào lympho B, nhưng tác dụng tăng sinh của nó đối với tế bào lympho B mạnh hơn đáng kể so với tế bào lympho T.

Lợi ích sức khỏe của bột hồ trăn—Immprovmiễn dịch điện tử

Nhấn vào đây để xem các sản phẩm Cistanche Immprove Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Tuyến ức và lá lách là cơ quan miễn dịch chính ở động vật. Các tế bào miễn dịch trong lá lách chủ yếu là tế bào lympho B trưởng thành, trong khi tuyến ức chủ yếu là tế bào lympho T chưa trưởng thành. Các chỉ số của tuyến ức và lá lách có thể phản ánh sự phát triển của các cơ quan miễn dịch và tình trạng chức năng của các tế bào miễn dịch. Tiêm Cistanche Deserticola polysacarit trong phúc mạc có thể làm tăng đáng kể chỉ số lá lách của chuột bình thường và chuột bị ức chế miễn dịch và có tác dụng đối kháng đáng kể đối với chứng teo tuyến ức do Cy gây ra ở chuột.Cistanche Deserticola polysaccharidkhông có ảnh hưởng đáng kể đến chỉ số tuyến ức ở động vật bình thường, điều này phù hợp với kết quả của các thí nghiệm trong ống nghiệm trong đóCistanche Deserticola polysaccharidthúc đẩy sự tăng sinh tế bào lympho B hơn là tế bào lympho T.

Cthực phẩm bổ sung istanche gần tôi—Cải thiệnkhả năng miễn dịch

IL-2 là một cytokine được sản xuất bởi các tế bào lympho T từ giai đoạn G1 của chu kỳ tế bào đến giai đoạn S. Nó là một yếu tố tăng trưởng tế bào T chính hoạt động như một yếu tố tăng trưởng autocrine. Ngoài ra, IL-2 có thể thúc đẩy sự tăng sinh tế bào B và tổng hợp kháng thể [11,12].Cistanche Deserticola polysaccharidthúc đẩy giải phóng IL-2 từ các tế bào lympho, rõ ràng là có liên quan đếnCistanche Deserticola polysaccharidthúc đẩy sự tăng sinh tế bào lympho lách.

Nghiên cứu y học cho thấy Cistanche chứa polysacarit,Echinacoside và Acteoside, có thể kích hoạt tế bào lympho và immprove khả năng miễn dịch của cơ thểy; các thành phần chức năng của cistanche Phenylethanoid Glycoside có tác dụng đáng kể trong việc phục hồi tế bào sau tổn thương do tia gamma 60 Co, đồng thời có thể cải thiện chức năng miễn dịch để chống lại tác hại của bức xạ.Uống bổ sung Cistanche Deserticola hàng ngày có thể đạt được hiệu quả cải thiện khả năng miễn dịch.

Cbổ sung istanche gần tôi—Cải thiện khả năng miễn dịch

thẩm quyền giải quyết

[1] Schepetkin IA,Quinn MT .Botanical polysaccharid: Điều hòa miễn dịch đại thực bào và tiềm năng điều trị [ J ]. Int Immunopharmacol, 2006 ,6(3):317-333.

[2] He Wei, Shu Xiaofen, Zong Guizhen, et al. Nghiên cứu tác dụng bổ thận tráng dương của cây Sa kê sa mạc trước và sau khi chế biến [J]. Tạp chí Dược học Trung Quốc, 1996, 21 (9): 534-537

[3] Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, et al. Kích hoạt đại thực bào của polysacarit Cistanche Deserticola [J]. Bản tin Dược lý Trung Quốc, 2009, 25 (6): 421-424

[4] Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lv Zhiliang. Hoạt động miễn dịch và cơ chế của Cistanche Deserticola polysaccharide [J]. Tạp chí Đại học Chiết Giang (Ấn bản Y học), 2002, 31 (4): 284-287

[5] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Phương pháp thí nghiệm dược lý [M]. Tái bản lần thứ 3, Bắc Kinh: Nhà xuất bản Y tế Nhân dân, 2002, 1427-1428

[6] Zhang Xu, Zhang Guorong, Che Wei, et al. Tác dụng của chelate collagen polypeptide crom (Ⅲ) đối với khả năng miễn dịch của chuột mắc bệnh tiểu đường [J]. Tạp chí Động vật thí nghiệm Trung Quốc, 2008, 16 (1): 10-14

[7] Trần Kỳ. Phương pháp nghiên cứu dược lý của y học cổ truyền Trung Quốc [M]. Ấn bản đầu tiên. Bắc Kinh: Nhà xuất bản Y tế Nhân dân, 1993:779

[8] Guo Jing, Xu Jianning, Wang Quankai, et al. Tác dụng của chiết xuất đậu tương (CKBN) đối với chức năng miễn dịch ở chuột bị suy giảm miễn dịch [J]. Tạp chí Y học So sánh Trung Quốc, 2008, 18 (12): 45-49

[9] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Phương pháp thí nghiệm dược lý [M]. Ấn bản thứ 3, Bắc Kinh: Nhà xuất bản Y tế Nhân dân, 2002: 1440-1441

[10] Zhou Daohong, Shen Yuanshan, Zhao Manrui. Một phương pháp mới để xác định sự biến đổi tế bào lympho và hoạt động của interleukin 2 chuột - phân tích so màu MTT [J]. Tạp chí Miễn dịch học Trung Quốc, 1986, 2 (1): 39-43

[11] Wang MQ , Guilbert LJ, Li J, và cộng sự. Một chiết xuất độc quyền từ nhân sâm Bắc Mỹ (Panax quiquefolium) giúp tăng cường sản xuất IL-2 và IFN- trong các tế bào lá lách của chuột do Con-A [ J] gây ra. Int Immunopharmacol, 2002 , 4(2):311-315.

[12] Tingjun H , Rongliang Z . Thúc đẩy polysacarit sophora subprosrate trên oxit nitric và sản xuất interleukin-2 trong tế bào lympho T ở chuột: Ca 2 plus và protein kinase C [ J].Int Immunopharmacol, 2004 , 4(1):109-118.