Tác dụng của Glycoside Of Cistanche đối với sự biểu hiện của protein tiền thân ty thể và tế bào Keratin loại II 6A ở mô hình chuột bị sa sút trí tuệ mạch máu

Thông tin chi tiết vui lòng liên hệ:Joanna.jia@wecistanche.com

trừu tượng

Giới thiệu

Mạch máusa sút trí tuệlà loại sa sút trí tuệ phổ biến thứ hai (Neltner và cộng sự, 2014; Sachdev và cộng sự, 2014; Tatlisumak và cộng sự, 2014; Sinclair và cộng sự, 2015; Thomas và cộng sự, 2015; Reijmer và cộng sự, 2016 ). Tổn thương trí nhớ liên tục và không thể phục hồi xảy ra ở bệnh nhân sa sút trí tuệ mạch máu dẫn đến chất lượng cuộc sống giảm sút nghiêm trọng và gây gánh nặng kinh tế cho gia đình bệnh nhân (Barker và cộng sự, 2014; Burke và cộng sự, 2014; Chen và cộng sự cộng sự, 2014; Brandenburg và cộng sự, 2016). Việc phòng ngừa và điều trị bệnh ngày càng quan trọng ở các nước có dân số già. Vì vậy, ngày càng có nhiều nghiên cứu quan tâm đến việc tìm kiếm các loại thuốc hiệu quả để điều trị chứng sa sút trí tuệ mạch máu.

Cistanchelà một loài thực vật được sử dụng như một loại cây nootropic trong lý thuyết y học cổ truyền Trung Quốc (Chen và cộng sự, 2014; Szalárdy và cộng sự, 2015; Bạn và cộng sự, 2015). Glycoside củaCistanche(GC) là một chế phẩm được chiết xuất từCistanche. Có bằng chứng đáng kể ủng hộ ý tưởng rằng GC có thể cải thiện quá trình tái tạo sợi trục (Procaccio và cộng sự, 2014; Love và cộng sự, 2015; Brandenburg và cộng sự, 2016; Gu và cộng sự, 2016). Nhiều nghiên cứu trên động vật đã chỉ ra rằng GC giúp tăng cường chức năng nhận thức (Procaccio và cộng sự, 2014; Talarowska và cộng sự, 2014; Fischer và Maier, 2015).

Trước đây chúng tôi đã sử dụng tắc động mạch cảnh chung hai bên để thiết lập các mô hình chuột củamạch máusa sút trí tuệ. Trong mô hình này, khả năng học tập và trí nhớ trong không gian được cải thiện đáng kể sau khi can thiệp bằng GC (Chen và cộng sự, 2015). GC cũng có thể điều chỉnh và cải thiệnsự miễn nhiễmnhưng được biết đến nhiều nhất như một loại thuốc bổ thần kinh và tăng cường trí nhớ (Chen et al., 2014; Procaccio et al., 2014; Szalárdy et al., 2015; You et al., 2015; Brandenburg et al., 2016).

Tuy nhiên, một số nghiên cứu đã điều tra các cơ chế phân tử cơ bản tác động của GC trongmạch máusa sút trí tuệ. Ở đây, chúng tôi sử dụng proteomics để khám phá mối quan hệ giữa protein và chứng sa sút trí tuệ mạch máu, để xác định cơ chế cơ bản của tác dụng bảo vệ thần kinh của GC.

Cistanchesa mạc có nhiều tác dụng, bấm vào đây để biết thêm

Nguyên liệu và phương pháp

Loài vật

Chuột Wistar trưởng thành đực sáu tuần tuổi không có mầm bệnh cụ thể (n=37), nặng 230– 270 g, được cung cấp bởi Trung tâm Động vật Thực nghiệm, Tỉnh Hồ Bắc, Trung Quốc (số giấy phép: SYXK (E) { {7}}). Thử nghiệm tuân theo Hướng dẫn Quốc gia về Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm và Hướng dẫn của Tác giả Đồng thuận về Đạo đức và Phúc lợi Động vật do Hiệp hội các nhà biên tập thú y quốc tế đưa ra. Bản thảo được chuẩn bị theo hướng dẫn của Nghiên cứu Động vật: Báo cáo Thí nghiệm In Vivo (ARRIVE).

Chuột được nhốt theo nhóm ba con mỗi lồng ở 25 độ với chu kỳ sáng / tối 12 - giờ và được tiếp cận miễn phí thức ăn và nước uống. Chuột (n=37) được phân ngẫu nhiên vào nhóm đối chứng (n=10), nhóm sa sút trí tuệ mạch máu (n=12) và sa sút trí tuệ mạch máu cộng với nhóm GC (được điều trị bằng GC, n=15).

Thiết lập các mô hình chuột về chứng sa sút trí tuệ mạch máu

Dưới gây mê sâu với 10% chloral hydrat, các động mạch cảnh chung hai bên của chuột ở nhóm bệnh sa sút trí tuệ mạch máu và nhóm được điều trị bằng GC được tách cẩn thận khỏi các mô xung quanh, sau đó thắt chặt bằng cách sử dụng 10-0 chỉ khâu ở cả hai đầu và động mạch cảnh chung động mạch đã bị cắt. Những con chuột trong nhóm đối chứng được thực hiện cùng một quy trình phẫu thuật ngoại trừ việc các động mạch cảnh chung bị lộ ra ngoài nhưng không có dây chằng. Mê cung nước Morris được thực hiện theo các phương pháp đã mô tả trước đó để xác minh xem mô hình động vật đã được thiết lập thành công hay chưa (Chen và cộng sự, 2015).

Điều trị bằng thuốc

Cistanche bột(Giấy chứng nhận số Z20050216, Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., Hàng Châu, Trung Quốc) đã được trộn với nước siêu tinh khiết và được chiết xuất bởi TF -2000 C Ultrasonicator (Tuofen, Thượng Hải, Trung Quốc) (công suất 100 phần trăm, 30 độ, 40 phút). Nồng độ GC được đo bằng xét nghiệm glycoside phenylethanoid. Sau khi bị thương, tất cả chuột trong nhóm được điều trị bằng GC đều được dùng GC (10 mg / kg / ngày, 1 mL, trong phúc mạc, một lần mỗi ngày) trong 14 ngày liên tục. Chuột ở nhóm chứng và nhóm sa sút trí tuệ mạch máu được uống nước muối (1 mL, trong màng bụng).

Hóa mô miễn dịch

Sau 14 ngày sử dụng GC (hoặc nước muối), bảy con chuột từ mỗi nhóm được chặt đầu và tách não. Các vỏ não đã được loại bỏ và mô hồi hải mã được tách ra cẩn thận và cắt thành các đoạn dày 3- μm bằng cách sử dụng microtome đông lạnh. Các phần mô hải mã được cố định bằng 4% paraformaldehyde trong 30–60 phút, rửa sạch bằng PBS và ủ trong 3% H2O2 trong 10 phút, sau đó là huyết thanh dê trong 15 phút, tất cả đều ở nhiệt độ phòng.

Các phần sau đó được ủ trong kháng thể chính p-tau chống chuột được phosphoryl hóa ở thỏ

(1: 1, 000 ở PBS; Bioworld Technology, Inc., TX, USA) và kháng thể chính chống chuột amyloid-beta (A) của thỏ (1: 1, 000; Bioworld Technology, Inc.) trong hộp ẩm ướt ở 37 độ trong 2-3 giờ, trước khi ủ trong kháng thể thứ cấp (IgG chống chuột dê; Bioworld Technology, Inc.) trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Các mẫu vật được hình dung bằng 3,3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako, Tokyo, Nhật Bản). Hình ảnh được chụp bằng kính hiển vi ánh sáng (Olympus, Tokyo, Nhật Bản) và được xử lý bằng Photoshop (phiên bản 7. 0; Adobe, San Jose, CA, Hoa Kỳ).

Các hạt miễn dịch có màu nâu, vì vậy nhuộm màu nâu trong tế bào chất được chọn là phản ứng dương tính và việc bán định lượng được thực hiện bằng cách sử dụng hệ thống phân tích hình ảnh HMIAS -2000 (Qianpin Co., Vũ Hán, Trung Quốc). Trong mỗi mẫu vật, năm trường xem được chọn ngẫu nhiên và năm ô dương được chọn trong mỗi chế độ xem và giá trị xám trung bình được đo dưới dạng tập hợp các giá trị tương đối.

Cistanchecó thể nâng caosự miễn nhiễmvà ngăn chặntim mạchvàmạch máu nãobệnh tật

Điện di trên gel hai chiều (2- DE)

Sau 14 ngày sử dụng GC hoặc nước muối, tám con chuột từ mỗi nhóm được gây mê và chặt đầu, và các mô hải mã nhanh chóng được thu hoạch và ngay lập tức được đông lạnh trong nitơ lỏng. Tất cả các mô được đồng nhất trong nitơ lỏng bằng cối và chày và được thu thập trong dung dịch đệm ly giải (7 M urê, 2 M thiourea, 2% CHAPS, 20 mM Tris). Các hạt không hòa tan được loại bỏ bằng cách ly tâm ở 13, 000 × g trong 20 phút ở 4 độ. Axit nucleic bị ô nhiễm bị gián đoạn bởi dao động âm không liên tục trong 5 phút. Các mẫu được ly tâm một lần nữa trong điều kiện tương tự và phần nổi phía trên được thu thập. Nồng độ protein được đo bằng xét nghiệm Bradford (Beyotime Inc., Trung Quốc) và các mẫu được bảo quản ở -80 độ cho đến khi sử dụng.

Để điều tra cấu hình biểu hiện protein trong hải mã, 2- DE được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, Hoa Kỳ). Dung dịch protein (120 ug / mẫu) được điều chỉnh bằng dung dịch đệm bù nước để có thể tích cuối cùng là 350 μL. Lấy nét đẳng điện được thực hiện bằng cách sử dụng dải IPG (pH 4–7, kích thước 22 cm) trên hệ thống Ettan IPG hoặc II (tất cả của GE Ettan IPGphor3, GE Healthcare). Sau đó, các dải được cân bằng trong 15 phút.

{{0}} DE được thực hiện bằng cách sử dụng gel polyacrylamide natri dodecyl sulfat (SDS) 12,5% (24 cm × 19,5 cm × 1. 0 mm) với keo dán agarose 0,5% trong điện di Ettan DALTSix hệ thống (GE, Ettan DALTSix, GE Healthcare).

Điện di được thực hiện ở 2 W trong 45 phút, tiếp theo là tách ở 17 W trong 4 giờ cho đến khi màu xanh bromophenol gần chạm đến đáy của gel 2- DE.

Gel được nhuộm bằng cách sử dụng nitrat bạc (Nhà máy thuốc thử hóa học Damao, Thiên Tân, Trung Quốc) và hình ảnh được chụp trên hệ thống quét hình ảnh 2- DE (VT, Hoa Kỳ).

Phần mềm Image Master 2D Platinum 5. 0 (GE, Inc., PA, USA) được sử dụng để quét và phân tích hình ảnh 2- DE.

thông tin được thu thập bằng cách sử dụng khối phổ kế 4700 MALDI TOF / TOF (GE, Inc.).

Phép đo phổ khối lượng thời gian bay / thời gian ion hóa laser được hỗ trợ ma trận

Để lấy dấu vân tay khối lượng peptit và phân tích tiếp theo, gel được cắt lát và tuân theo quy trình trong gel được sửa đổi một chút như được mô tả trong hướng dẫn của nhà sản xuất. Có methanol (Fisher M / 4056/17), acetonitril (Fisher A / 0626/17), trypsin (Promega V5280), dung dịch phân giải trypsin (Promega V530), amoni bicarbonate (Sigma A6141), C -18 ZipTip (Millipore ZTC18M096) và axit trifluoroacetic (GE HealthCare).

Một cách ngắn gọn, các điểm protein bị hủy bằng dung dịch hủy (30 mM K3Fe (CN) 6: 100 mM NaS2O 3=1: 1) và được khử nước bằng 100 mm amoni bicacbonat và axetonitril, được khử bằng trichloromethyl phosphate trong 20 phút ở nhiệt độ phòng, và sau đó được alkyl hóa trong axit iodoacetic trong 30 phút trong bóng tối. Gel được ủ trong 50 μL dung dịch trypsin biến tính 12 ng / μL trong 25 mM amoni bicacbonat, pH 8,6, ở 37 độ qua đêm. Các peptit được chiết xuất từ ​​phích cắm gel với 1 phần trăm axit formic / 2 phần trăm axetonitril và được cô đặc bằng cách sử dụng C -18 Zip-Tips. Sau đó, các mẫu được chuẩn bị bằng cách sử dụng đích Prespotted AnchorChip (PAC96) với chất nền axit hydroxycinnamic alpha-cyano -4- cho 96 điểm mẫu và 24 điểm hiệu chuẩn. Thông tin về peptit khối phổ thu được bằng cách sử dụng khối phổ kế 4700 MALDI TOF / TOF. Dữ liệu kết quả được phân tích bằng cách sử dụng GPS Explorer (Applied Biosystems Inc., NY, USA), sử dụng tìm kiếm cơ sở dữ liệu MASCOT (Matrix Science, London, UK) bằng cách sử dụng một tập hợp con chuột của cơ sở dữ liệu Trung tâm Thông tin Công nghệ Sinh học Quốc gia.

Cistanchecó thể kháng khuẩn và ngăn ngừamạch máusa sút trí tuệ

Thử nghiệm Western blot

Vùng hải mã đã được chuẩn bị và đo nồng độ protein như mô tả ở trên. Các mẫu protein được nạp vào gel polyacrylamide SDS, được điện hóa, và được chuyển sang màng polyvinylidene difluoride. Màng được rửa trong nước muối đệm Tris và Tween 2 0, bị chặn trong 10 phần trăm sữa không béo và 0,05 phần trăm Tween trong nước muối đệm photphat. Các màng được ủ qua đêm ở 4 độ với kháng thể đa dòng protein tiền chất chống ti thể của thỏ (1: 2, 000; Proteintech Inc., Chicago, IL, USA) và tế bào xương chống sừng loại II 6A của thỏ (KRT6A) kháng thể đa dòng (1: 1, 000; Proteintech Inc.) trong sữa không béo 10%. Kháng thể thứ cấp, dê liên hợp peroxidase cải ngựa chống thỏ (Google Biotechnology Inc., Vũ Hán, tỉnh Hồ Bắc, Trung Quốc) được pha loãng (1: 2, 000) trong 10 phần trăm sữa không béo và ủ ở 25 độ trong 1 giờ. Kháng thể đơn dòng -actin chống chuột (1: 2, 000; Google Biotechnology Inc.) đã được sử dụng làm tham chiếu nội bộ. Một hệ thống quét Western blot (V300; EPSON, Nagano-ken, Nhật Bản) và AlphaEaseFC Adobe PhotoShop (Alpha Innotech, CA, Hoa Kỳ) đã được sử dụng để xác định protein tiền chất ty thể và mức độ biểu hiện KRT6A được biểu thị dưới dạng mật độ quang tích hợp được chuẩn hóa thành -actin.

Phân tích thống kê

Dữ liệu định lượng được biểu thị bằng giá trị trung bình ± SD. Phần mềm ImageMaster 2D Platinum 5. 0 (GE, Inc.) được sử dụng để quét và phân tích thông tin 2- DE. Phân tích phương sai hai chiều được thực hiện bằng GraphPad Prism 6. 0 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). P <0. 05="" được="" coi="" là="" có="" ý="" nghĩa="" thống="">

Kết quả

Ảnh hưởng của GC đối với phản ứng miễn dịch p-tau và A ở hồi hải mã của mô hình chuột mắc chứng sa sút trí tuệ mạch máu

Hóa mô miễn dịch cho thấy biểu hiện p-tau và A cao hơn sau 14 ngày điều trị với GC so với nhóm chứng. Tuy nhiên, sự biểu hiện của những protein này ở nhóm được điều trị bằng GC thấp hơn đáng kể so với ở nhóm sa sút trí tuệ mạch máu (P <0. 05;="" hình="">

GC điều chỉnh biểu hiện của protein tiền thân ty thể và KRT6A trong hồi hải mã của mô hình chuột mắc chứng sa sút trí tuệ mạch máu

Sự biểu hiện của hai loại protein khác nhau đáng kể ở nhóm được điều trị bằng GC so với nhóm bệnh sa sút trí tuệ mạch máu: protein tiền thân ty thể (còn được gọi là protein sốc nhiệt (HSP) 75 kDa) được điều hòa, và KRT6A được điều hòa (Hình Hình 22, 33 ). Thông tin về protein được liệt kê trong Bảng 1.

Thảo luận

Sa sút trí tuệ mạch máu là một hội chứng đặc trưng bởi sự suy giảm trí nhớ, hành vi và nhận thức, và chủ yếu do các bệnh mạch máu não gây ra (Barker và cộng sự, 2014; Burke và cộng sự, 2014; Oliveira và cộng sự, 2014; Szalárdy và cộng sự, 2015). Bệnh lý phổ biến đối với tất cả các loại sa sút trí tuệ, và chịu trách nhiệm cho sự tiến triển của nó, là thoái hóa thần kinh (Foster và cộng sự, 2014; Fischer và Maier, 2015; Kalaria và cộng sự, 2015;

Cistanchecó thể tăng cường khả năng miễn dịch vàngăn ngừamạch máusa sút trí tuệ

Chen và cộng sự, 2016; Pérez -Hernández và cộng sự, 2016). Nhiều chất chiết xuất từ ​​thực vật có đặc tính chữa bệnh. Hoạt tính sinh học của các hợp chất này chống lại sự thoái hóa thần kinh chủ yếu là do tác dụng chống oxy hóa và chống amyloidogenic của chúng (Fischer và Maier, 2015; You et al., 2015; Pérez -Hernández et al., 2016).

Cistanchelà một loại thảo mộc Trung Quốc được sử dụng như một loại thuốc an thần trong y học cổ truyền Trung Quốc. Nghiên cứu mới nổi chỉ ra rằngCistanchecó lợi trong chứng hay quên, đặc biệt trong việc ức chế sự tiến triển của mất trí nhớ (Procaccio et al., 2014; You et al., 2015; Pérez -Hernández et al., 2016). Có bằng chứng đáng kể cho thấy GC có thể thúc đẩy tái tạo sợi trục và hoạt động như một chất điều biến tăng trưởng thần kinh (Talarowska và cộng sự, 2014; Gu và cộng sự, 2016; Xu và cộng sự, 2016). Trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi bằng cách sử dụng mê cung nước Morris, chúng tôi nhận thấy rằng độ trễ thoát của các mô hình chuột mắc chứng sa sút trí tuệ mạch máu giảm sau khi điều trị bằng GC, cho thấy rằng GC cải thiện khả năng học tập trong không gian. Mặc dù GC đã được sử dụng rộng rãi vì tác dụng bảo vệ thần kinh của nó (Chen và cộng sự, 2015), cơ chế của tác dụng này vẫn chưa rõ ràng.

Ai cũng biết rằng peptit A và p-tau được biểu hiện nhiều trong các mảng già và đám rối sợi thần kinh. Các protein A và tau đóng vai trò quan trọng trong quá trình hình thành tế bào thần kinh, nhưng trong một số tình huống bệnh lý nhất định, chúng tạo ra các tập hợp sai lệch gây độc cho thần kinh (Love et al., 2015; Sadigh-Eteghad et al., 2015; Sinclair et al., 2015; Thomas và cộng sự, 2015; Wang và cộng sự, 2015; Reijmer và cộng sự, 2016). Các kết quả hóa mô miễn dịch hiện tại chỉ ra rằng biểu hiện protein p-tau và A trong mô hình chuột được điều trị bằng GC về chứng sa sút trí tuệ mạch máu cao hơn đáng kể so với ở chuột đối chứng nhưng thấp hơn so với mô hình không được điều trị. Do đó, tác dụng bảo vệ thần kinh của GC có thể xảy ra bằng cách giảm độc tính của A và p-tau.

Nghiên cứu proteomic của chúng tôi trên hải mã chuột cho thấy sự khác biệt lớn trong sự biểu hiện của protein tiền thân ty thể, keratin và KRT6A. Về chức năng, chúng tôi suy đoán rằng tác dụng bảo vệ thần kinh của GC có thể liên quan đến việc tu sửa cấu trúc gai đuôi gai.

Protein tiền thân ty thể thuộc họ HSP70 (Rao và cộng sự, 2014; Gutiérrez -Aguilar và Baines, 2015; McGeer và McGeer, 2015). HSP75 tham gia vào quá trình kích hoạt và trưởng thành chaperone phân tử và duy trì sự ổn định và chức năng bình thường của tế bào (Booth và cộng sự, 2014, 2016; Tavallai và cộng sự, 2015).

Protein tiền thân của ty thể được cho là đóng một vai trò quan trọng trong việc truyền một số con đường tín hiệu (Reid và cộng sự, 2014; Booth và cộng sự, 2015a, b). Các nghiên cứu gần đây đã tiết lộ rằng họ HSP90 điều chỉnh môi trường hoạt động của quá trình gấp protein ty thể (An và cộng sự, 2014; Liu và Landgraf, 2015; Roberts và cộng sự, 2015; Stary và Giffard, 2015). HSP75 khu trú trong ty thể và ức chế sự tạo ra các gốc oxy tự do (Radu và cộng sự, 2014; Holloway và cộng sự, 2016). Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng sự biểu hiện của HSP75 trong nhóm được điều trị bằng GC đã tăng gấp 2. 54- lần, cho thấy rằng GC đóng vai trò chống oxy hóa, cải thiện cân bằng oxy hóa tế bào và làm chậm quá trình chết rụng. Phát hiện này cung cấp những manh mối thú vị về sự tương tác của protein chaperone trong ty thể với các protein khác.

Một protein khác được biểu hiện khác là KRT6A. Các keratins, còn được gọi là cytokeratins, là các protein dạng sợi trung gian tạo ra một lưới dày đặc không hòa tan thông qua tế bào chất, hỗ trợ cấu trúc cho tế bào biểu mô (Haricharan và cộng sự, 2014; Rorke và cộng sự, 2015; Szymanski và cộng sự, 2015) . Tuy nhiên, cytokeratins cũng đóng một vai trò tích cực trong các quá trình tồn tại khác nhau của tế bào (tăng sinh và apoptosis) (Zhu và cộng sự, 2013; Schwingshackl và cộng sự, 2015; Popov và Komianos, 2016). Những protein này có thể trải qua quá trình phosphoryl hóa và cũng là một phần của sự tiếp xúc bắc cầu giữa tế bào biểu mô và môi trường vi mô của nó (Lessard và cộng sự, 2013; Gil Lorenzo và cộng sự, 2014; Zhou và cộng sự, 2014; Chakrabarti và cộng sự, 2015) . CK6a là đồng dạng chiếm ưu thế trong tuyến vú (Bramanti và cộng sự, 2015a, b, 2016) và được điều chỉnh tăng cường trong việc chữa lành các mép vết thương trên da, cho thấy cytokeratin có liên quan đến sự tăng sinh và di chuyển của tế bào. Tuy nhiên, chúng tôi là những người đầu tiên cho thấy sự điều hòa KRT6A ở vùng hải mã; Biểu hiện KRT6A đã giảm 1. 58- lần ở nhóm được điều trị bằng GC so với nhóm sa sút trí tuệ mạch máu.

Do đó, tác dụng bảo vệ thần kinh của GC có thể liên quan đến việc ức chế tăng sản thần kinh trong bệnh thiếu máu cục bộ mạch máu não.

Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy GC phát huy tác dụng học tập và tăng cường trí nhớ trong các mô hình chuột mắc chứng sa sút trí tuệ mạch máu bằng cách giảm sự biểu hiện của A và p-tau, do đó làm suy yếu sự tích tụ của hai loại protein độc hại này và do đó làm giảm nhiễm độc tế bào thần kinh. Hơn nữa, GC có thể điều chỉnh sự biểu hiện của protein tiền thân ty thể và KRT6A, có liên quan đến sự hình thành bộ xương tế bào tiếp hợp và chuyển hóa năng lượng của ty thể. Do đó, dữ liệu của chúng tôi cung cấp cái nhìn sâu sắc mới về cơ chế cơ bản của GC, làm nổi bật khả năng GC có nhiều mục tiêu, mang lại một lựa chọn điều trị mới đầy hứa hẹn để điều trị chứng sa sút trí tuệ mạch máu.

Chú thích

Kinh phí:Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi Quỹ Khoa học Tự nhiên Quốc gia Trung Quốc, số 30960520; Quỹ Khoa học Tự nhiên của Khu tự trị Nội Mông, Trung Quốc, số 2016MS0837.

Xung đột lợi ích: Không có tuyên bố nào.

Đạo đức nghiên cứu:Đề cương nghiên cứu đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật của Bệnh viện Đầu tiên của Vũ Hán. Quy trình thử nghiệm tuân theo Hướng dẫn của Viện Y tế Quốc gia về Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm (NIH Publications số 8023, sửa đổi năm 1978), và "Hướng dẫn của Tác giả Đồng thuận về Đạo đức và Phúc lợi Động vật" do Hiệp hội các nhà biên tập thú y quốc tế (IAVE ). Tất cả các nỗ lực đã được thực hiện để giảm thiểu số lượng và sự đau khổ của động vật được sử dụng trong các thí nghiệm. Bài báo được chuẩn bị theo "Nghiên cứu Động vật: Báo cáo Nguyên tắc Thí nghiệm In Vivo" (Hướng dẫn SẮP XẾP).

Thỏa thuận cộng tác viên: Một tuyên bố về "Thỏa thuận xuất bản" đã được ký bởi một tác giả được ủy quyền thay mặt cho tất cả các tác giả trước khi xuất bản.

Kiểm tra đạo văn: Bài báo này đã được kiểm tra hai lần bằng phần mềm kiểm tra sao chép iThenticate.

Đánh giá ngang hàng:Quy trình đánh giá đồng đẳng mù đôi và nghiêm ngặt đã được thực hiện để đảm bảo tính toàn vẹn, chất lượng và ý nghĩa của bài báo này.

Sao chép bởi Slone-Murphy J, Frenchman B, Yu J, Li CH, Qiu Y, Song LP, Zhao M

Người giới thiệu

1. An J, Haile WB, Wu F, Torre E, Yepes M. Chất hoạt hóa plasminogen loại mô làm trung gian cho sự kết nối thần kinh trong hệ thần kinh trung ương. Khoa học thần kinh. 2014; 257: 41–48.

2. Barker R, Ashby EL, Wellington D, Barrow VM, Palmer JC, Kehoe PG, Esiri MM, Love S. Sinh lý bệnh về tưới máu chất trắng trong bệnh Alzheimer và sa sút trí tuệ mạch máu. Não. 2014; 137: 1524–1532.

3. Gian hàng L, Roberts JL, Cruickshanks N, Grant S, Poklepovic A, Dent P. Quy định về độc tính của OSU -03012 bởi các protein gây căng thẳng ER và thuốc gây căng thẳng ER. Mol Cancer Ther. 2014; 13: 2384–2398.

4. Booth L, Roberts JL, Tavallai M, Nourbakhsh A, Chuckalovcak J, Carter J, Poklepovic A, Dent P. OSU -03012, và điều trị bằng Viagra ức chế hoạt động của nhiều protein chaperone và phá vỡ hàng rào máu não : ý nghĩa đối với các liệu pháp chống ung thư. J Cell Physiol. 2015a; 230: 1982–1998.

5. Gian hàng L, Roberts JL, Cash DR, Tavallai S, Jean S, Fidanza A, Cruz-Luna T, Siembiba P, Cycon KA, Cornelissen CN, Dent P. GRP78 / BiP / HSPA5 / Dna K là mục tiêu điều trị phổ biến đối với bệnh của con người. J Cell Physiol. 2015b; 230: 1661– 1676.

6. Booth L, Shuch B, Albers T, Roberts JL, Tavallai M, Proniuk S, Zukowski A, Wang D, Chen CS, Bottaro D, Ecroyd H, Lebedyeva IO, Dent P. Chất ức chế đa kinase có thể liên quan đến sốc nhiệt protein thông qua NH 2- termini mà chúng ngăn chặn chức năng chaperone. Mục tiêu riêng. 2016; 7: 12975–12996.

7. Bramanti V, Grasso S, Tibullo D, Giallongo C, Raciti G, Viola M, Avola R.

năng lực và các yếu tố tăng trưởng tiến bộ. J Tế bào thần kinh Res. 2015a; 93: 1378– 1387.

8. Bramanti V, Grasso S, Tomassoni D, Traini E, Raciti G, Viola M, Li Volti G, Campisi A, Amenta F, Avola R. Ảnh hưởng của các yếu tố tăng trưởng và hormone steroid lên biểu hiện heme oxygenase và cyclin D1 trong cơ thể nguyên phát nuôi cấy tế bào. J Tế bào thần kinh Res. 2015b; 93: 521–529.

9. Bramanti V, Grasso S, Tibullo D, Giallongo C, Pappa R, Brundo MV, Tomassoni D, Viola M, Amenta F, Avola R. Các phân tử hoạt tính thần kinh và các yếu tố tăng trưởng điều chỉnh biểu hiện protein tế bào trong quá trình tăng sinh và biệt hóa tế bào biểu mô trong nuôi cấy. J Tế bào thần kinh Res. 2016; 94: 90–98.

10. Brandenburg S, Muller A, Turkowski K, Radev YT, Rot S, Schmidt C, Bungert AD, Acker G, Schorr A, Hippe A, Miller K, Heppner FL, Homey B, Vajkoczy P. Thường trú microglia thay vì đại thực bào ngoại vi thúc đẩy quá trình tuần hoàn mạch máu trong các khối u não và là nguồn cung cấp các yếu tố tạo mạch thay thế. Acta Neuropathol. 2016; 131: 365–378.

11. Burke MJ, Nelson L, Slade JY, Oakley AE, Khundakar AA, Kalaria RN. Hình thái của vi mạch hồi hải mã trong bệnh sa sút trí tuệ sau đột quỵ và do tuổi tác. Neuropathol Appl Neurobiol. 2014; 40: 284–295.

12. Chakrabarti KR, Whipple RA, Boggs AE, Hessler LK, Bhandary L, Vitolo MI, Thompson K, Martin SS. Sự điều chỉnh dược lý của AMPK trong ung thư vú ảnh hưởng đến các đặc tính của tế bào liên quan đến sự hình thành và tái tạo vi trung tâm

tập tin đính kèm. Mục tiêu riêng. 2015; 6: 36292–36307.

13. Chen A, Akinyemi RO, Hase Y, Firbank MJ, Ndung'u MN, Foster V, Craggs LJ, Washida K, Okamoto Y, Thomas AJ, Polvikoski TM, Allan LM, Oakley AE, O'Brien JT, Horsburgh K , Ihara M, Kalaria RN. Tăng cường chất trắng ở trán, chứng xơ hóa cơ và các bất thường tân mạch trong quá trình lão hóa và sa sút trí tuệ sau đột quỵ. Não. 2016; 139: 242–258.

14. Chen J, Zhou SN, Zhang YM, Feng YL, Wang S. Glycosides của Cistanche cải thiện khả năng học tập và trí nhớ trên mô hình chuột mắc chứng sa sút trí tuệ mạch máu. Eur Rev Med Pharmacol Khoa học viễn tưởng. 2015; 19: 1234–1240.

15. Chen S, Yin ZJ, Jiang C, Ma ZQ, Fu Q, Qu R, Ma SP. Asiaticoside làm giảm chứng suy giảm trí nhớ do tái tưới máu não thoáng qua ở chuột thông qua cơ chế chống viêm. Pharmacol Biochem Behav. 2014; 122: 7–

16. Fischer R, Maier O. Mối tương quan giữa stress oxy hóa và viêm trong bệnh thoái hóa thần kinh: vai trò của TNF. Oxid Med Cell Longev. 2015; 2015: 610813.

17. Foster V, Oakley AE, Slade JY, Hall R, Polvikoski TM, Burke M, Thomas AJ, Khundakar A, Allan LM, Kalaria RN. Tế bào thần kinh hình tháp của vỏ não trước trong các bệnh sa sút trí tuệ sau đột quỵ, mạch máu và các chứng mất trí nhớ liên quan đến lão hóa khác. Não. 2014; 137: 2509– 2521.

18. Gil Lorenzo AF, Bocanegra V, Benardon ME, Cacciamani V, Valles PG. Điều hòa Hsp70 trên Nox4 / p22phox và tính toàn vẹn của tế bào như tác dụng của losartan trong tế bào cơ trơn mạch máu. Tế bào Căng thẳng Chaperones. 2014; 19: 115–134.

19. Gu C, Yang X, Huang L. Cistanches herba: một đánh giá về thần kinh. Mặt trước Pharmacol. 2016; 7: 289.

20. Gutiérrez -Aguilar M, Baines CP. Cơ chế cấu trúc của cyclophilin D- kiểm soát phụ thuộc vào lỗ chuyển tiếp tính thấm của ty thể. Biochim Biophys Acta. 2015; 1850: 2041–2047.

21. Haricharan S, Hein SM, Dong J, Toneff MJ, Aina OH, Rao PH, Cardiff RD, Li Y. Sự đóng góp của một tế bào phế nang có nguồn gốc đối với kiểu hình ác tính cấp cao của ung thư vú liên quan đến thai kỳ. Gen ung thư. 2014; 33: 5729–5739. [

22. Holloway KR, Sinha VC, Bu W, Toneff M, Dong J, Peng Y, Li Y. Nhắm mục tiêu ung thư vào một tập hợp con xác định của tế bào tuyến vú chứng tỏ rằng đột biến gây ung thư bắt đầu xác định kiểu hình khối u. Int J Biol

Khoa học. 2016; 12: 381–388.

23. Kalaria RN, Ferrer I, Love S. Bệnh mạch máu, thiếu oxy và các tình trạng liên quan. Trong: Love S, Perry A, Ironside J, Budka H, ​​biên tập viên. Bệnh học thần kinh của Greenfield. Luân Đôn: CRC; 2015.

24. Lessard JC, Pina-Paz S, Rotty JD, Hickerson RP, Kaspar RL, Balmain A, Coulombe PA. Keratin 16 điều chỉnh khả năng miễn dịch bẩm sinh để phản ứng với sự vi phạm hàng rào biểu bì. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 19537–19542.

25. Liu W, Landgraf R. Serine 13 được phosphoryl hóa và chưa được phosphoryl hóa của CDC37 ổn định các tương tác riêng biệt giữa các miền liên kết máy khách và HSP90 của nó. Hóa sinh. 2015; 54: 1493–1504.

26. Love S, Chalmers K, Ince P, Esiri M, Attems J, Kalaria R, Jellinger K, Yamada M, McCarron M, Minett T, Matthews F, Greenberg S, Mann D, Kehoe PG. Erratum: Phát triển, thẩm định, xác nhận và thực hiện một quy trình đồng thuận để đánh giá bệnh lý mạch não amyloid ở mô não sau khi chết. Am J Neurodegener Dis. 2015; 4: 49.

27. McGeer PL, McGeer EG. Nhắm mục tiêu microglia để điều trị bệnh Alzheimer. Mục tiêu của Chuyên gia Opin Ther. 2015; 19: 497–506.

28. Neltner JH, Abner EL, Baker S, Schmitt FA, Kryscio RJ, Jicha GA, Smith CD, Hammack E, Kukull WA, Brenowitz WD, Van Eldik LJ, Nelson PT. Xơ vữa động mạch ảnh hưởng đến nhiều vùng não có liên quan đến chứng xơ cứng hồi hải mã do lão hóa. Não. 2014; 137: 255–267.

29. Oliveira NR, Marques SO, Luciano TF, Pauli JR, Moura LP, Caperuto E, Pieri BL, Engelmann J, Scaini G, Streck EL, Lira FS, Pinho RA, Ropelle ER, Silva AS, De Souza CT. Tập luyện trên máy chạy bộ làm tăng mức độ protein alpha SIRT -1 và PGC -1 và quá trình phosphoryl hóa AMPK ở cơ tứ đầu của chuột trung niên theo cách phụ thuộc vào cường độ. Người trung gian Viêm. 2014; 2014: 987017. [Bài viết miễn phí của PMC]

30. Pérez -Hernández J, Zaldívar -Machorro VJ, Villanueva-Porras D, Vega-Ávila E, Chavarría A. Một thay thế tiềm năng chống lại các bệnh thoái hóa thần kinh: phytodrugs. Oxid Med Cell Longev. 2016; 2016: 8378613. [PMC miễn phí

bài viết] [PubMed] [Google Scholar]

31. Popov K, Komianos J. MEDIAN: mô phỏng cơ học về sự co và liên kết phân cực trong mạng actomyosin. PLoS Comput

Biol. 2016; 12: e1004877. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

32. Procaccio V, Bris C, Chao de la Barca JM, Oca F, Chevallier A, Amati-Bonneau P, Bonneau D, Reynier P. Quan điểm về bảo vệ thần kinh dựa trên thuốc nhắm vào ty thể. Rev Neurol (Paris) 2014; 170: 390–400. [PubMed] [Google Scholar]

33. Tín hiệu Radu M, Semenova G, Kosoff R, Chernoff J. PAK trong quá trình phát triển và tiến triển của ung thư. Nat Rev Ung thư. 2014; 14: 13–25. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

34. Rao VK, Carlson EA, Yan SS. Lỗ chân lông chuyển tiếp tính thấm của ty thể là một mục tiêu thuốc tiềm năng cho quá trình thoái hóa thần kinh. Biochim Biophys Acta. 2014; 1842: 1267– 1272. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

35. Reid SP, Shurtleff AC, Costantino JA, Tritsch SR, Retterer C, Spurgers KB, Bavari S. HSPA5 là yếu tố vật chủ cần thiết để lây nhiễm vi rút Ebola. Kháng virus Res. 2014; 109: 171–174. [PubMed] [Google Scholar]

36. Reijmer YD, van Veluw SJ, Greenberg SM. Tổn thương não do thiếu máu cục bộ trong bệnh lý mạch não do thiếu máu cục bộ. J Cereb Blood Flow Metab. 2016; 36: 40–54. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

37. Roberts JL, Tavallai M, Nourbakhsh A, Fidanza A, Cruz-Luna T, Smith E, Siembida P, Plamondon P, Cycon KA, Doern CD, Booth L, Dent P. GRP78 / Dna K là mục tiêu của Nexavar / stivarga / votrient trong điều trị các khối u ác tính ở người, nhiễm trùng do vi rút và các bệnh do vi khuẩn. J Cell Physiol. 2015; 230: 2552–2578. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

38. Rorke EA, Adhikary G, Young CA, Rice RH, Elias PM, Crumrine D, Meyer J, Blumenberg M, Eckert RL. Những thay đổi về cấu trúc và sinh hóa làm cơ sở cho kiểu hình giống như da sừng ở chuột thiếu chức năng yếu tố phiên mã AP1 siêu cấp. Cell Death Dis. 2015; 6: e1647. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

39. Sachdev P, Kalaria R, O'Brien J, Skoog I, Alladi S, Black SE, Blacker D, Blazer DG, Chen C, Chui H, Ganguli M, Jellinger K, Jeste DV, Pasquier F, Paulsen J, Prins N, Rockwood K, Roman G, Scheltens P. Hiệp hội Quốc tế về Rối loạn Nhận thức và Hành vi Mạch máu (2014) Tiêu chuẩn chẩn đoán rối loạn nhận thức mạch máu: một tuyên bố VASCOG. Rối loạn Alzheimer Dis PGS. 28: 206–218.

40. Sadigh-Eteghad S, Sabermarouf B, Majdi A, Talebi M, Farhoudi M, Mahmoudi J. Amyloid-beta: một yếu tố quan trọng trong bệnh Alzheimer. Med Princ Pract. 2015; 24: 1–10.

41. Schwingshackl A, Roan E, Teng B, Waters CM. TREK -1 điều chỉnh sự bài tiết cytokine từ các tế bào biểu mô phế nang được nuôi cấy độc lập với sự sắp xếp lại của tế bào. PLoS Một. 2015; 10: e0126781.

42. Sinclair LI, Tayler HM, Love S. Nồng độ protein ở khớp thần kinh bị thay đổi trong chứng sa sút trí tuệ mạch máu. Neuropathol Appl Neurobiol. 2015; 41: 533–543.

43. Stary CM, Giffard RG. Những tiến bộ trong phương pháp tiếp cận nhắm mục tiêu tế bào hình sao trong điều trị đột quỵ: một vai trò mới nổi đối với ti thể và microRNA. Neurochem Res. 2015; 40: 301–307.

44. Szalárdy L. Oxid Med Cell

Longev. 2015; 2015: 498401.

45. Szymanski WG, Zauber H, Erban A, Gorka M, Wu XN, Schulze WX. Các thành phần tế bào xác định vị trí của protein trên các vi miền của màng. Mol Proteomics của tế bào. 2015; 14: 2493–2509.

46. ​​Talarowska M, Bobinska K, Zajaczkowska M, Su KP, Maes M, Galecki P. Tác động của căng thẳng oxy hóa / nitrosative và viêm lên chức năng nhận thức ở bệnh nhân bị rối loạn trầm cảm tái phát. Med Sci Monit. 2014; 20: 110–115.

47. Tatlisumak T, Putaala J, Debette S. Nguyên nhân đột quỵ ít gặp hơn: chẩn đoán và xử trí. Trong: Norrving B, chủ biên. Sách giáo khoa Oxford về đột quỵ và bệnh mạch máu não. Oxford: Nhà xuất bản Đại học Oxford; 2014. trang 153–162. [Google Scholar]

48. Tavallai M, Hamed HA, Roberts JL, Cruickshanks N, Chuckalovcak J, Poklepovic A, Booth L, Dent P. Nexavar / Stivarga và viagra tương tác để tiêu diệt tế bào khối u. J Cell Physiol. 2015; 230: 2281–2298. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed] [Google Scholar]

49. Thomas T, Miners S, Love S. Đánh giá sau tử thi về tình trạng giảm tưới máu của vỏ não trong bệnh Alzheimer và sa sút trí tuệ mạch máu. Não. 2015; 138: 1059– 1069. [PubMed] [Google Scholar]

50. Wang Y, Lin J, Chen QZ, Zhu N, Jiang DQ, Li MX, Wang Y. Sự biểu hiện quá mức của ty thể Hsp75 bảo vệ tế bào gốc thần kinh chống lại độc tố thần kinh do yếu tố hòa tan có nguồn gốc microglia bằng cách điều chỉnh quá trình chuyển đổi tính thấm của ty thể mở lỗ chân lông trong ống nghiệm. Int J Mol Med. 2015; 36: 1487–1496.

51. Xu Q, Fan W, Ye SF, Cong YB, Qin W, Chen SY, Cai J. Cistanche tubulosa Bảo vệ các tế bào thần kinh Dopaminergic thông qua Quy chế Apoptosis và Yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc tế bào thần kinh: in vivo và in vitro. Lão hóa phía trước

Tế bào thần kinh. 2016; 8: 295.

52. Bạn SP, Zhao J, Ma L, Tudimat M, Zhang SL, Liu T. Tác dụng phòng ngừa của phenylethanol glycoside từ Cistanche tubulosa đối với bệnh xơ gan do albumin huyết thanh bò ở chuột. Daru. 2015; 23: 52.

53. Zhou Q, Anderson C, Zhang H, Li X, Inglis F, Jayagopal A, Wang S. Ức chế quá trình tân mạch hóa màng đệm thông qua con đường tế bào actin bởi microRNA -24. Mol Ther. 2014; 22: 378–389.

54. Zhu M, Lu C, Li W. Tiếp xúc thoáng qua với echinacoside là đủ để kích hoạt tín hiệu Trk và bảo vệ tế bào thần kinh khỏi rotenone. J Neurochem. 2013; 124: 571–580.