Thành phần hiệu quả của Cistanche: Phương pháp tách và tinh lọc của Phenylethanoid Glycoside

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com

Phân lập và tinh chế Phenylethanoid Glycoside từ Cistanche Deserticola bằng sắc ký phản dòng tốc độ cao

Li a, b, Rong Tsao b, *, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Khoa Hóa học, Đại học Sư phạm Trường Xuân, Trường Xuân 130032, Trung Quốc

b Trung tâm Nghiên cứu Thực phẩm Guelph, Nông nghiệp và Thực phẩm Nông nghiệp Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Canada N1G 5C9

Nhận ngày 31 tháng 5 năm 2007; nhận được trong mẫu sửa đổi ngày 16 tháng 10 năm 2007; chấp nhận ngày 29 tháng 10 năm 2007

Trừu tượng:

Nămphenylethanoid glycoside(PhGs),echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside và 20- acetylacteoside, đã được phân lập và tinh chế từCistanche Desticolalần đầu tiên bằng sắc ký ngược dòng tốc độ cao (HSCCC) sử dụng hai hệ thống hai pha, một hệ gồm etyl axetat – etanol-nước (5: 0. 5: 4,5, v / v / v) và một hệ khác của etyl axetat – n-butanol – etanol-nước ({{1 0}}. 5: 0. 5: 0,1: 1, v / v / v / v). Tổng cộng 28,5 mg echinacoside, 18,4 mgcistanoside A14,6 mgacteoside, 30,1 mg isoacteoside và 25,2 mg 20- acetylacteoside được tinh chế từ 1412 mg chiết xuất n-butanol củaCistanche Desticola, mỗi loại có độ tinh khiết trên 92,5 phần trăm được xác định bởi HPLC. Các cấu trúc được xác định bằng thời gian lưu của chúng, UV, LC – ESI-MS ở chế độ ion âm, và xác định bằng các thí nghiệm NMR. Mô hình phân mảnh LC-ESI-MSn đặc trưng của năm hợp chất đã được thảo luận, và được coi là một công cụ rất cụ thể và hữu ích để xác định cấu trúc của PhGs từ cây thuốc quan trọng này.

Crown Bản quyền © 2007 Được xuất bản bởi Elsevier Ltd. Mọi quyền được bảo lưu.

Từ khóa:Cistanche Desticola; Phenylethanoid;Echinacoside; Cistanoside A;Acteoside; Isoacteoside; 20- Acetylacteoside; HSCCC; LC – ESI-MS; NMR

1. Giới thiệu

Cistanche DesticolaYC Ma là một loại thuốc thảo dược nổi tiếng của Trung Quốc và đã được sử dụng rộng rãi trong các chế phẩm truyền thống tương tự như các thành phần thực phẩm chức năng hoặc thực phẩm bổ sung ngày nay (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Các thành phần hoạt tính sinh học chính trong C. sa mạc làphenylethanoidglycoside (PhGs), bao gồmechinacoside, acteoside, isoacteoside, 20- acetylacteoside, vàcistanoside A(Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi và cộng sự, 1987). PhGs phân bố rộng rãi trong giới thực vật và đã được nghiên cứu rộng rãi về các chức năng sinh học khác nhau của chúng như bảo vệ gan (Xiong và cộng sự, 1998), hoạt động chống kích thích, chống ung thư (Schapoval và cộng sự, 1998), và các hoạt động chống oxy hóa (Cheng , Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), cải thiện chức năng tình dục (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996), và an thần vv (Lu, 1998) .

Do hoạt tính sinh học đáng kể ở trên, cần khẩn cấp một lượng lớn các hợp chất tinh khiết làm tiêu chuẩn tham chiếu và cho các nghiên cứu in vitro và in vivo khác nhau liên quan đến việc sử dụng các loại thuốc truyền thống của Trung Quốc. Do đó, các phương pháp hiệu quả để phân lập, tinh chế và mô tả đặc điểm cấu trúc của PhGs trở nên cần thiết. Tuy nhiên, công việc như vậy thường yêu cầu sử dụng nhiều bước đồ họa màu để làm sạch và cô lập mẫu (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), thường dẫn đến tỷ lệ thu hồi thấp do sự hấp phụ không thể đảo ngược của PhG vào giá đỡ vững chắc trong quá trình phân tách (Lei và cộng sự, 2001). Ngược lại, sắc ký phản dòng tốc độ cao (HSCCC) đã trở thành một giải pháp thay thế điện tử cho các kỹ thuật sắc ký thông thường để tách một số PhG từ dịch chiết thực vật (Lei và cộng sự, 2001; Li và cộng sự, 2005). Lei và cộng sự. tách thành côngacteosidevà 20- acetylacteoside từ Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck bằng cách sử dụng HSCCC (Lei và cộng sự, 2001). Các tác giả của bài báo này trước đây đã báo cáo về việc táchacteosidevà isoacteoside từ Plantago psyllium L. của HSCCC (Li và cộng sự, 2005). Tuy nhiên, không có báo cáo nào được công bố về việc tách và tinh chế nhiều PhG từCistanche Desticolasử dụng HSCCC. Do thiếu tiêu chuẩn, phương pháp LC-MS đã được phát triển và sử dụng như một công cụ phân tích mạnh mẽ để xác định đặc tính và xác định nhanh chóng một số PhG trong chiết xuất thực vật (Li và cộng sự, 2005; Wang và cộng sự, 2000).

Trong bài báo này, chúng tôi báo cáo một phương pháp HSCCC được phát triển để điều chế echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside và 20- acetylacteoside từCistanche Desticola. Việc xác định đặc tính và phân tích các PhG được tách ra đã được thực hiện bằng cách sử dụng LC kết hợp với các thí nghiệm khối phổ ESI và NMR trong dòng. Thời gian lưu, trọng lượng phân tử và các ion mảnh đặc trưng của các PhG được trình bày và thảo luận trong bài báo này. Cấu trúc của năm PhG được xác định trong cuộc điều tra này được trình bày trong Hình 1.

echinacosideở cistanche

2. Thực nghiệm

2.1. Hóa chất và thuốc thử

Acteosideđược mua từ Sigma – Aldrich (Oak- Ville, ON), echinacoside được mua từ ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteoside được phân lập từ P. psyllium L. (Li và cộng sự, 2005).Cistanche Desticolađược mua từ Cửa hàng thuốc Bắc Kinh TongRenTang (Trung Quốc). Tất cả các dung môi đều thuộc loại HPLC và được mua từ Công ty TNHH Phòng thí nghiệm Caledon (Georgetown, ON).

2.2. Chuẩn bị mẫu

Cistanche Desticola(20 g) được chiết xuất nhiều lần ở nhiệt độ phòng trong 12 giờ mỗi lần với 100 mL etanol dạng nước 80%. Mỗi lần hỗn hợp chiết xuất được lọc qua giấy lọc Whatman No.1 (Whatman International Ltd., Maidstone, Anh). Tỷ lệ kết hợp được cô đặc đến 100 mL trong chân không ở <40 độ.="" dung="" dịch="" nước="" thu="" được="" được="" khử="" chất="" béo="" hai="" lần,="" mỗi="" lần="" bằng="" 100="" ml="" hexan,="" và="" sau="" đó="" chiết="" liên="" tiếp="" nhiều="" lần,="" mỗi="" lần="" bằng="" 100="" ml="" n-butanol.="" các="" lớp="" n-butanol="" được="" kết="" hợp="" và="" cô="" đặc="" đến="" khô="" trong="" chân="" không="" ở=""><40 độ,="" thu="" được="" 2,2="" g="" chiết="" xuất="" n-butanol.="" phần="" chiết="" xuất="" được="" lưu="" trữ="" ở="" -20="" độ="" trước="" khi="" tách="">

2.3. Quy trình tách HSCCC

HSCCC chuẩn bị được thực hiện trong sắc ký phản dòng tốc độ cao Model CCC {{0}} (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland Hoa Kỳ). Thiết bị này có ba cuộn dây chuẩn bị, mắc nối tiếp (tổng thể tích, 325 mL). Tốc độ quay của thiết bị có thể được điều chỉnh trong khoảng từ 0 đến 2000 vòng / phút. Hệ thống HSCCC được trang bị một máy bơm HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, Hoa Kỳ), một máy dò UV Model 450 (Alltech, Hoa Kỳ), một máy ghi tại giường Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, Hoa Kỳ), một bộ thu thập phân đoạn (Advantec MFS Inc., Hoa Kỳ) và một van bơm mẫu có vòng mẫu 10- mL.

Hỗn hợp gồm etyl axetat – etanol-nước (5: 0. 5: 4.5, v / v / v) được lắc mạnh trong phễu chiết và để yên và tách ở nhiệt độ phòng. Hai giai đoạn được sử dụng trong HSCCC sau khi chúng đạt đến trạng thái cân bằng. Toàn bộ cột cuộn đầu tiên được lót bằng lớp trên, đóng vai trò là pha tĩnh. Sau đó, lớp dưới (pha động) được bơm vào đầu cột với tốc độ 1,5 mL / phút. Tốc độ quay được đặt ở 1 0 5 0 vòng / phút. Một mẫu (khoảng 230 mg mỗi lần) được phân giải trong 8 ml hỗn hợp etyl axetat-etanol-nước (5: 0,5: 4,5, v / v / v) được nạp vào van phun sau khi hệ thống đạt thủy động lực học. trạng thái cân bằng. Hệ dung môi hai pha này được chọn dựa trên hệ số phân vùng (K), là 0,87, 1,11 và 1,32 choacteoside, isoacteoside, và 20 acetylacteoside, tương ứng. Giá trị K là tỷ lệ của nồng độ trong lớp trên cùng và lớp dưới cùng của cùng một hợp chất được xác định bởi HPLC (Hình 2). E-uent từ đầu ra của cột được theo dõi liên tục bằng detector UV ở bước sóng 254 nm và được thu vào các ống nghiệm với bộ thu phân đoạn được đặt ở 4 min cho mỗi ống.

2.4. Điều kiện LC

bộ lấy mẫu tự động tĩnh và bộ dò mảng diode quang (DAD) được sử dụng để phân tích PhG trong chiết xuất n-butanol củaCistanche Desticolavà các phân số thu được từ việc tách HSCCC. Việc phân tách được thực hiện trong cột Phenomenex ODS-C18 (250 × 4,6 mm, 5 lm) với cột bảo vệ C18. Pha động nhị phân bao gồm axetonitril (dung môi A) và nước chứa 2 phần trăm axit axetic (dung môi B). Tất cả các dung môi đã được lọc qua một

{{0}}. 45 lít trước khi sử dụng. Tốc độ fl ow được giữ không đổi ở 1. 0 mL / phút trong tổng thời gian chạy là 25 phút. Hệ thống được chạy với chương trình gradient: 0 - 2 0 min: 90 phần trăm B đến 60 phần trăm B; 20–22 phút: 60 phần trăm B đến 0 phần trăm B; và 22-25 phút, 0 phần trăm B đến 90 phần trăm B. Thể tích tiêm mẫu là 10 lL. Các đỉnh quan tâm được theo dõi ở bước sóng 320 nm bằng máy dò DAD.

2.5. Thử nghiệm LC – ESI-MS

Các thí nghiệm LC-MS được thực hiện bằng cách sử dụng khối phổ kế bẫy ion Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, Hoa Kỳ) được trang bị nguồn ion hóa tia điện tử (ESI). Các mẫu được phân tích trong cùng một điều kiện sắc ký. Một mô hình phủ định đã được sử dụng để thu thập dữ liệu. Tỷ lệ khí vỏ bọc và tỷ lệ phụ trợ được đặt lần lượt là 96 và 7 (đơn vị tùy ý). Điện áp mao quản được đặt ở 29 V và nhiệt độ của nó được kiểm soát ở 350 độ. Điện áp thấu kính lối vào được xác định ở 40 V và biên độ RF đa cực được đặt ở 540 V. Điện áp kim ESI được kiểm soát ở 4,5 kV. Thấu kính đa cực đặt ở bộ là 16 V, thấu kính đa cực đặt 1 là 8,20 V và thấu kính đa cực đặt 2 o ff là 10,5 V. Điện áp nhân electron được đặt ở 980 V để phát hiện ion.

2.6. NMR để nhận dạng

Phổ NMR được ghi lại trên máy quang phổ kế Bruker Avance -600 (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Canada). Chỉ có các hợp chất 2 và 5 (không có tiêu chuẩn nào) được thực hiện các thí nghiệm NMR. Các mẫu được hòa tan trong CD3OD.

3. Kết quả và thảo luận

3.1. HSCCC tách

Chiết xuất n-butanol củaCistanche Desticolavà các phần tương ứng với mỗi pic phân lập bằng HSCCC được phân tích bằng HPLC, và kết quả được đưa ra trong Hình 2. Năm hợp chất chính (pic 1–5) được tách ra và phát hiện với thời gian lưu là 9,2 phút, 10,7 phút, 12,3 phút ,

Lần lượt là 13,3 phút và 16,2 phút.

Việc tách HSCCC thành công phụ thuộc phần lớn vào hệ dung môi hai pha phù hợp cung cấp hệ số phân vùng lý tưởng (K) khoảng 1 cho hợp chất mong muốn. Một hệ thống hai pha như vậy cũng sẽ mang lại thời gian giải quyết ngắn hợp lý (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Trong thử nghiệm của chúng tôi, chúng tôi đã chọn bốn loạt hệ dung môi theo độ hòa tan của các hợp chất đích trongCistanche Desticola. HPLC được sử dụng để đo nồng độ trong mỗi pha, từ đó giá trị K của các hợp chất đích được tính toán. Hai hệ, etyl axetat – n-butanol – etanol-nước (4: 0. 6: 0. 6: 5, v / v / v / v) và etyl axetat – nước (1: 1, v / v), trước đây đã được sử dụng trong HSCCC để phân táchacteosidevà 20- acetylacteoside từC. điệu Salsa,acteoside, và isoacteoside từ P. Psyllium, tương ứng (Lei và cộng sự, 2001; Li và cộng sự, 2005). Mặc dù hệ thống đầu tiên có thời gian lắng tương đối ngắn, nhưng nó có hiệu suất kém trong việc tách các PhG củaCistanche Desticola, do giá trị K thấp đối với hợp chất 1 và 2, và giá trị K cao đối với hợp chất 3–5. Giá trị K rất thấp đối với các hợp chất 1-4 trong hệ thứ hai, nhưng rất cao đối với hợp chất 5 (Bảng 1). Một hệ đã sửa đổi chứa etyl axetat – etanol-nước (5: {{1 0}}. 5: 4,5, v / v / v), cho giá trị K lý tưởng cho các hợp chất 3–5 ở 0,87, 1,11, và 1,32, và dẫn đến sự phân tách tốt của ba hợp chất này (Hình 3A và B). Hệ thống này, tuy nhiên, sản xuất

giá trị K quá nhỏ đối với hợp chất 1 và 2, khiến hai hợp chất này đồng rửa giải gần phía trước dung môi (phần 1 trong Hình 3A). Một modi khác cho hệ thống (etyl axetat – n-butanol – etanol-nước (0. 5: 0. 5: 0. 1: 1, v / v / v / v) đã nâng giá trị K cho hợp chất 1 và 2 lên 0. 52 và 0. 92, và dẫn đến sự phân tách hoàn toàn (Hình 3C). Hình 3A cho thấy sự phân tách HSCCC của một mẫu chứa 230 mg chiết xuất n-butanol củaCistanche Desticolasử dụng etyl axetat – etanol-nước (5: 0. 5: 4,5, v / v / v). Các phân đoạn đã được HPLC xác định để chỉ chứa các hợp chất 3, 4 hoặc 5 được kết hợp riêng biệt, và các phân đoạn chứa các hợp chất 3 và 4 được gộp lại, làm khô đông lạnh và lại chịu HSCCC để tách thêm (Hình 3B). Việc tách HSCCC hai bước được mô tả ở trên thu được tổng cộng 14,6 mg, 3 0. 1 mg và 25,2 mg các hợp chất 3–5 từ chiết xuất n-butanol 1412 mg. Hình 3C cho thấy sự phân tách HSCCC của một mẫu chứa các hợp chất 1 và 2 (phần 1 trong lần phân tách đầu tiên) bằng cách sử dụng etyl axetat – n-butanol – etanol-nước (0. 5: 0. 5 : 0,1: 1, v / v / v / v). Tổng cộng thu được 28,5 và 18,4 mg hỗn hợp 1 và 2. Độ tinh khiết sắc ký của các hợp chất đông khô 1–5 là hơn 92,5%, được sử dụng trực tiếp cho các phân tích LC-ESI-MS và NMR.

3.2. Định danh cấu trúc bằng LC – ESI-MS và NMR

Việc xác định dự kiến ​​các hợp chất 1, 3 và 4 đã đạt được bằng thời gian lưu đồng thời và dữ liệu phổ UV với dữ liệu của echinacoside đích thực,acteoside, và isoacteoside (Hình 2). Các hợp chất 2 và 5 chưa được biết đến, tuy nhiên, phổ UV của tất cả các hợp chất rất giống nhau, cho thấy các đặc điểm cấu trúc tương tự.

Để nghiên cứu sâu hơn về cấu trúc của các hợp chất này, các thí nghiệm LC-ESI-MSn đã được thử và kết quả được thể hiện trong Hình 4 và Bảng 2. Các hợp chất liên quan đến các đỉnh (1–5) trong Hình 2 biểu hiện các ion phân tử được khử ion mạnh. [MH] - lần lượt tại m / z 785, 799, 623, 623 và 665 ở chế độ âm. Các ion dimeric [2M H] - cũng được quan sát thấy đối với các đỉnh 1–4 trong Hình 2. Các ion này đã điều chỉnh trọng lượng phân tử của các đỉnh 1–5 lần lượt là 786, 800, 624, 624 và 666. Dữ liệu LC-MSN (Bảng 2) cung cấp thông tin cấu trúc rất hữu ích cho năm PhG, chẳng hạn như sự mất mát trung tính của

Quy trình thí nghiệm: khoảng 1 mg mỗi mẫu được cân trong ống nghiệm 10 mL, trong đó 1 mL mỗi pha của hệ dung môi hai pha đã được cân bằng trước đã được thêm vào. Đậy nắp và lắc mạnh ống nghiệm trong 1 min, và để yên cho đến khi tách hoàn toàn. Một phần 100 lL của mỗi lớp được lấy ra và làm bay hơi riêng biệt đến khô trong chân không ở<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

gốc caffeoyl (162), gốc glucose (162), gốc rhamnose (146), gốc CH2 (14), và nhóm COCH2 (42).

LC – ESI-MS của đỉnh 1 được thể hiện trong Hình 4A. Ion phân tử deproto hóa [MH] - ở m / z 785 với mức độ phong phú cao và phân tử dio hóa đioxit

ion [2M H] - ở m / z 1571 được quan sát ở chế độ âm, gợi ý về trọng lượng phân tử là 786, giống như của echinacoside. Điều tra sâu hơn trong thí nghiệm LC – MS2 của các ion m / z 785 đã tạo ra một ion con chính ở m / z 623 (Hình 4B) được tạo ra trực tiếp từ m / z 785 do mất gốc ca ff eoyl hoặc gốc hexose là [M 162 H] -. Phổ LC – MS3 của m / z 623 thể hiện hai ion chính ở m / z 477 và 461, và hai ion phụ ở m / z 315 và 179 (Hình 3C, Bảng 2). Khối lượng khác nhau giữa m / z 623 và các ion mảnh m / z 477 và 461 lần lượt là 146 và 162, tương ứng với sự mất mát của một đơn vị rhamnose và một gốc glucose hoặc một gốc caf-feel [M 162 H] -. Các ion m / z 623 cũng mất một gốc caffeoyl và một gốc rhamnose để tạo ra các ion m / z 315. Ion ở m / z 179 được tạo ra từ sự phân cắt của phần eoyl, với điện tích âm còn lại trên phần của phần eoyl. Thử nghiệm LC – ESI-MSN trên echinacoside đích thực cho thấy cùng một kiểu phân mảnh. Đỉnh 1 do đó được xác định là echinacoside.

Đối với đỉnh 2, LC – ESI-MS cho thấy m / z 799 là ion phân tử được khử ion [MH] - và m / z 1599 là ion dio của nó, cho thấy khối lượng phân tử là 800. Trong các thí nghiệm MS2, m / z 799 ion tạo thành ba con

các ion ở m / z 637, 623 và 475 (Bảng 1). Ion ở m / z 637 lại được tạo ra trực tiếp từ ion mẹ của m / z 799 do sự mất trung tính của ca ff eoyl [M — 162 — H] - hoặc một gốc glucose [M — 162 — H] -. Ion ở m / z 623 là kết quả của sự mất gốc CH2. Ion ở m / z 475 được hình thành từ sự mất trung tính của cả gốc ca ff eoyl [M 162 H] - và gốc glucose từ ion mẹ. Thí nghiệm MS3 trên m / z 637 tạo ra ba ion ở m / z 619, 491 và 475, tương ứng với sự mất mát của một nước, một đơn vị rhamnose và một gốc glucoza, tương ứng. Ion con m / z 623 tạo ra m / z 461 và 315 trong nghiên cứu MS3, theo con đường phân mảnh tương tự như echinacoside như đã thảo luận ở trên. Dữ liệu LC– ESI-MSN hỗ trợ một định danh dự kiến ​​cho đỉnh 2 làcistanoside A.

Các thí nghiệm LC – ESI-MS cũng được thực hiện cho các đỉnh

3 và 4 (tR 12,49 và 13,46 phút trong Hình 2). Cả hai cực đại cho thấy ion [MH] giống nhau ở m / z 623 và lặn ở m / z 1247 ở chế độ âm (Bảng 1), cho thấy chúng có thể là đồng phân với cùng khối lượng phân tử của

624, giống nhưacteosidevà isoacteoside. Phổ MS2 của các ion [MH] - cũng cho thấy một ion con tương tự là m / z 461, biểu thị sự mất gốc ca ff eoyl từ ion mẹ m / z 623 (Bảng 1). Phổ MS3 tương tự thu được đối với hai hợp chất. Đối với đỉnh 3, phổ MS3 của ion tại m / z 461 tạo thành ba ion ở m / z 315, 161 và 135. M / z 315 được hình thành sau khi mất rhamnose như đã thảo luận trước đó. Ion m / z 161 được tạo ra từ sự phân cắt của gốc caffeoyl, tiếp theo là sự mất thêm một nước; điện tích vẫn còn trên một phần của gốc ca eoyl. Ion ở m / z 135 [agly- nón 18 H] - sinh ra từ sự phân cắt của liên kết glycosidic ở vị trí C1 với sự mất thêm một nước, để lại điện tích trên một phần của gốc aglycone. Phổ MS3 của đỉnh 4 theo cùng một con đường phân mảnh như đỉnh 3 ngoại trừ ion bị thiếu ở m / z 135. Ion phân tử và dạng phân mảnh của hai hợp chất này phù hợp với dữ liệu tài liệu vềacteosidevà isoacteoside (Wang và cộng sự, 2000), mặc dù một ion bổ sung m / z 153 đã được tìm thấy và

được gán là [aglycone H] - bởi Wang và cộng sự. (Wang và cộng sự, 2000). Ion này có thể không ổn định và bị mất nước để tạo ra m / z 135 trong thí nghiệm của chúng tôi. Dựa trên dữ liệu MS và thời gian lưu đồng dư của các đỉnh 3 và 4 với các tiêu chuẩn, do đó chúng được xác định làacteosidevà isoacteoside, tương ứng.

Dữ liệu LC – ESI-MS của đỉnh 5 được thể hiện trong Bảng 2. Một ion phân tử đã khử ion [MH] - (m / z 665) là ion duy nhất được tìm thấy ở chế độ âm, ngụ ý khối lượng phân tử là 666. Ba ion con được quan sát ở m / z 623, 503 và 461 trong thí nghiệm MS2 (Bảng 2). Các ion con ở m / z 623 và 503 được hình thành trực tiếp từ ion mẹ bằng cách mất đi một nhóm COCH2 và một gốc ca ff eoyl, tương ứng. Ion ở m / z 461 đến từ sự mất cả gốc ca ff eoyl và COCH2 [M 162 42 H] - từ ion mẹ. Trong thí nghiệm MS, m / z 623 tạo ra m / z 461 và m / z 503 tạo ra ba ion tại m / z 485, 461 và 315. Phổ MS3 của ion con m / z 461 cho hai ion ở 443 và 315. Bằng cách so sánh mô hình phân mảnh LC– MSN của đỉnh 5 với các hợp chất khác được báo cáo trong nghiên cứu này và với các báo cáo khác (Li và cộng sự, 2005; Wang và cộng sự, 2000), chúng tôi kết luận rằng đỉnh 5 có liên quan cao về mặt cấu trúc để acteoside với sự khác biệt duy nhất là đơn vị COCH3 trên vị trí R3. Do đó, một nhận dạng dự kiến ​​được đưa ra cho đỉnh 5 là 20- acetylacteoside (Hình 1).

Cấu trúc của hai hợp chất được xác định một cách tạm thời, đỉnh 2 (dưới dạng cistanoside A) và đỉnh 5 (dưới dạng 20- acetyl- acteoside) đã được xác nhận về cấu trúc của chúng bằng 1H NMR. Sự thay đổi hóa học và hằng số liên kết của tất cả các proton trong hợp chất 2 và 5, như được thể hiện trong Bảng 3., khớp với dữ liệu NMR được báo cáo chocistanoside Avà 20- acetylacteoside, tương ứng (Kobayashi và cộng sự, 1984, 1987). Các thí nghiệm 2D NMR (tương quan COSY, ROESY và CH tầm xa) cũng được thực hiện trong nghiên cứu này và chúng tiếp tục xác định giá trị nhận dạng (dữ liệu không được hiển thị).

phenylethanoidglycoside trong cistanche

4.Kết luận

Trong bài báo này, HSCCC đã được sử dụng thành công để phân lập và tinh chế echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside, và 20- acetylacteoside từ chiết xuất n-butanol của C. sa mạc. Do đó, nó là một phương tiện đã được chứng minh để phân tách bán chuẩn bị hoạt tính sinh học. Trong khi đó, cấu trúc của năm PhG ở Cistanche Desticola đã được điều tra bằng LC – ESI-MSN; một số tính năng đặc trưng của PhGs đã được tìm thấy, cho phép chúng tôi xác định các nhóm chức năng trong cấu trúc. Do đó, phương pháp LC-ESI-MSN là một công cụ mạnh mẽ để xác định nhanh chóngphenylethanoidsvà glycoside của chúng trongCistanche Desticolachiết xuất, đặc biệt khi được chứng minh bằng dữ liệu NMR.

Nhìn nhận

Các tác giả xin cảm ơn Jun Gu của Trung tâm Cộng hưởng Từ Hạt nhân, Đại học Guelph, Ontario, Canada vì sự hỗ trợ của cô ấy trong các thí nghiệm NMR. Dự án này được hỗ trợ một phần bởi nguồn tài trợ từ tỉnh Cát Lâm, Trung Quốc (số 20060904).

Người giới thiệu

Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Phân lập và xác định bốn thành phần flavonoid từ hạt Oroxylum Indicum bằng phương pháp sắc ký phản dòng tốc độ cao. Tạp chí Sắc ký A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005).Cistanche Desticolanuôi cấy huyền phù tế bào:Phenylethanoidhoạt động tổng hợp sinh học và chống oxy hóa glycosides. Hóa sinh quy trình, 40, 3119– 3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Sắc ký phản dòng: thiết bị đo, lựa chọn dung môi, và một số ứng dụng gần đây đối với tinh chế sản phẩm tự nhiên. Tạp chí Sắc ký A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, một glycoside phenylpropanoid từ Teucrium Chamaedrys. Hóa chất thực vật, 27, 1459–1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000).

Hoạt động chống oxy hóa củaphenylethanoidglycoside từ cơ hội Brandisia. Tạp chí Ethnopharmacology, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Nghiên cứu về các thành phần của Cistanchis Herba. III. Phân lập và cấu trúc của glycoside phenylpropanoid mới,Cistanoside Avà B. Bản tin Hóa chất & Dược phẩm, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (Năm 1987). Mớiphenylethanoidglycoside từCistanchetubulosa (Schrenk) Móc. FI Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001).

Cô lập so sánh và tinh chế củaacteosidevà 2'-acetyl acteoside từ Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck bằng phương pháp sắc ký ngược dòng. Tạp chí Sắc ký A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Cô lập và tinh chếacteosidevà isoacteoside từ Plantago psyllium L. bằng phương pháp sắc ký ngược dòng tốc độ cao. Tạp chí Sắc ký A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Quá trình peroxy hóa antilipid và hoạt động chống truyền bệnh của glycoside trong cây herba Cistanches. Tạp chí Trung Quốc của Trung Quốc Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Bảo vệ glycoside phenylpropanoid khỏi Pedicularis chống lại quá trình tan máu oxy hóa trong ống nghiệm. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Các nghiên cứu về thuốc an thần ect ofCistanche Desticola.Journal of Ethnopharmacology, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Chín glycoside rượu phenethyl từ Stachys szeboldzz. Hóa chất thực vật, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Tìm kiếm một cách có hệ thống các hệ dung môi hai pha thích hợp cho sắc ký dòng ngược tốc độ cao. Tạp chí Sắc ký, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Các hợp chất phenolic từ Plantago Asiatica. Hóa chất thực vật, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Các hoạt động chống kích thích và chống ung thư của các chất chiết xuất và hợp chất được phân lập từ Stachytarpheta cayennensis. Tạp chí Dân tộc học, 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Các glycoside phenolic từ rễ bị bệnh của Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Hóa chất thực vật, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY & Wang, XF (2001). Thu gom từng loại glycoside củaCistanche Desticolachống lại các gốc tự do và sự bảo vệ của nó chống lại sự phá hủy DNA do OH gây ra trong ống nghiệm. Tạp chí Dược học Trung Quốc, 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y., & Wang, HJ (2000). Phân tíchphenylethanoidglycoside trong chiết xuất của thảo mộc Cistanchis bởi LC / ESI-MS / MS. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W., & Chen, F. (2006). Một cuộc khảo sát có hệ thống về hoạt động chống oxy hóa của 30 cây thuốc Trung Quốc bằng cách sử dụng thử nghiệm năng lượng chống oxy hóa khử sắt. Hóa thực phẩm, 97, 705–711. Xie, JH, & Wu, CF (1993). Ect của chiết xuất etanolic củaCistanche Desticolavề nội dung của chất dẫn truyền thần kinh monoamine ở chuột

não. Thuốc cổ truyền và thảo dược Trung Quốc, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., & Kadota, S. (1998). Hoạt động bảo vệ gan củaphenylethanoidstừCistanche Desticola. Planta Medica, 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T., & Namba, T. (1996). Các chất chống oxy hóa của phenylethanoids từCistanche Desticola. Bản tin Sinh học & Dược phẩm, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL, & Chen, LH (1996). So sánh giữaCistanche DesticolaYC Ma vàCistanchehình ống (Schenk) Wight trên một số hoạt động dược lý. Tạp chí Y học Cổ truyền Trung Quốc, 21, 436–438.