Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Bệnh viện thứ 98 của Quân đội Giải phóng Nhân dân Trung Quốc, Hồ Châu, Chiết Giang 313000

2 Đại học Y học cổ truyền Trung Quốc Chiết Giang, Hàng Châu, Chiết Giang 310053

3 Bệnh viện chỉnh hình y học cổ truyền Trung Quốc Fuyang, thành phố Hàng Châu, tỉnh Chiết Giang, Hàng Châu 311400, Chiết Giang, Trung Quốc

Trừu tượng

Mục tiêu: Quan sát tác dụng củaCistanche ·chiết xuất nướcvề việc chữa bệnhloãng xươnggãy xương ở chuột và để khám phá cơ chế của nó. Phương pháp: Chuột cái SD cấp SPF được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng, nhóm mô hình và nhóm điều trị, và được mô hình hóa theo các phương pháp liên quan. 24 giờ sau khi mô hình hóa gãy xương, nhóm đối chứng và nhóm mô hình đã được đưa ra gavage nước muối bình thường, và nhóm điều trị được gavage vớiCistanche ·chiết xuất nước mỗi ngày một lần. Sau 2 tuần và 6 tuần can thiệp, máu được thu thập từ động mạch chủ bụng để phát hiện interleukin. TP (IL-1 B) và biến đổi mức độ yếu tố tăng trưởng-B l (TGF-8 1), thu thập mẫu gãy xương cùng một lúc, thực hiện chụp Micro-CT sau khi cố định, đo phần thể tích xương mô sẹo R0I (BV / TV) và các thông số liên quan khác Sau khi vôi hóa, mất nước và nhúng, nó đã được tạo thành các khối sáp để sử dụng. Kết quả: 6 tuần sau khi mô hình loãng xương được thiết lập, mật độ khoáng xương của chuột trong nhóm mô hình và nhóm điều trị thấp hơn so với nhóm đối chứng (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanche ·có thể thúc đẩy sự chữa lành củaloãng xươnggãy xương, và cơ chế của nó có thể liên quan đến sự ức chế của nóloãng xươnggãy xương. Sau huyết thanh chuột IL-1 B và thúc đẩy bài tiết TGF-8 1, có thể cải thiện loãng xương và thúc đẩy quá trình chữa lành gãy xương.

Từ khóa: gãy xương do loãng xương, Cistanche, chữa lành gãy xương, chuột

Loãng xương là một bệnh trong đó mật độ xương bị giảm, cấu trúc mịn của mô xương bị phá hủy và sự mỏng manh của xương được tăng lên. Bệnh nhân có thể gây gãy xương dưới ngoại lực nhẹ trong cuộc sống hàng ngày. Đây là một bệnh lâm sàng phổ biến và là một bệnh thường xuyên xảy ra. Hơn nữa, loại gãy xương này chủ yếu là bệnh nhân cao tuổi, thường liên quan đến các bệnh khác, và hầu hết các gãy xương đều bị gãy xương, với sự ổn định kém, và đôi khi chậm hoặc không chữa lành vết nứt xảy ra, và có tỷ lệ tàn tật và gây tử vong cao. Hiện tại, việc điều trị của nó chủ yếu thông qua phẫu thuật, phục hồi thủ công và điều trị chống loãng xương. Thiếu thuốc điều trị nhắm mục tiêu cho bệnh nhân mắc bệnhloãng xươnggãy xương. Y học cổ truyền Trung Quốc có một lịch sử lâu dài trong điều trị loãng xương và có tác dụng tích cực. Nhiều loại thuốc truyền thống của Trung Quốc đã được chứng minh là cải thiện xương. Nghèo cũng có thể thúc đẩy quá trình chữa lành gãy xương. Rongrong thường được sử dụng như một loại thuốc đại diện để nuôi dưỡng thận dương và có tác dụng nuôi dưỡng gan và thận. Y học cổ truyền Trung Quốc tin rằng thận chi phối xương, và việc điều trị gãy xương cũng không thể tách rời khỏi thận và tinh chất. Dược lý học hiện đại đã phát hiện ra rằng tro thịt cũng có tác dụng estrogen nhất định. Nghiên cứu này dự định sử dụng phép đo mật độ xương, Micro-CT và interleukin-13 trong huyết thanh (IL-10), biến đổi yếu tố tăng trưởng-P KTGF-P 1) quan sát mức độ và chiết xuất nước của bột thoát vị thịt khi chữa lành vết thươngloãng xươnggãy xương ở chuột

Cistanche ·

1 Vật liệu và phương pháp

1.1 Động vật thí nghiệm và thiết bị thuốc thử: 52 con chuột SD cái SPF nặng 210 ~ 250g được nuôi trong Trung tâm thí nghiệm động vật của Đại học Y học cổ truyền Trung Quốc Chiết Giang. Iốt phức tạp, Hàng Châu Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., số lô 20160720; Penicillin, North China Pharmaceutical Co., Ltd., số lô F3117217; Bộ IL-18 (số lô: 20160715), TGF-8 1 bộ (số lô: 20160722); Máy quét mật độ xương tia X năng lượng kép, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 Khai thácCistanche ·chiết xuất nước: ngâm đấtcistanche(Nhà máy dược phẩm của Đại học Y học Cổ truyền Trung Quốc Chiết Giang) 10 lần nước siêu tinh khiết trong 0,5 giờ, chiên thuốc sắc trong 1,5 giờ, lặp lại chiết xuất 2 lần và nồi hấp quay lỏng dược liệu hỗn hợp Cô đặc đến nồng độ 1,5g / ml và bảo quản trong tủ lạnh ở 4 ° C để sử dụng sau này.

1.3 Chuẩn bị mô hình hóa: Các điểm như sau.

1.3. 1 Mô hình loãng xương: Những con chuột được nuôi thích nghi trong 1 tuần trước khi lập mô hình và được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng, nhóm mô hình và nhóm điều trị, với 16 con chuột, 18 con chuột và 18 con chuột tương ứng, và mỗi nhóm dựa trên thời điểm 2 tuần và 6 tuần. Mỗi nhóm được chia thành hai nhóm. Cả nhóm điều trị và nhóm người mẫu đều được gây mê bằng 1% natri pentobarbital (0,4ml / 100g), da được gây mê, khử trùng, phủ và da bị cắt. Buồng trứng hai bên của chuột đã được cắt bỏ. Nhóm đối chứng chỉ có một vết mổ. Không

Cắt bỏ buồng trứng

1.3. 2 Mô hình gãy xương: 6 tuần sau khi chuẩn bị mô hình loãng xương, mô hình gãy xương sẽ được chuẩn bị. Sau khi chuột trong mỗi nhóm được gây mê, mật độ khoáng xương của xương đùi giữa được đo. , Rạch, tạo một mô hình gãy ngang xương đùi giữa, cố định nó bằng dây Kirschner 1mm, khử trùng và khâu da của vết mổ

1.4 Can thiệp thuốc: Phát hiện bằng tia X của xương đùi được thực hiện sau khi mô hình hóa, những con chuột chuẩn bị mô hình thất bại đã bị loại bỏ và 80.000 đơn vị penicillin được tiêm bắp sau khi mô hình hóa để ngăn ngừa nhiễm trùng. 24 giờ sau khi phẫu thuật, nhóm điều trị được cho uống chiết xuất nước của bột thoát vị thịt (nồng độ 1,5g / ml, lg / kg, mỗi ngày một lần). Nhóm đối chứng và nhóm mô hình được cho cùng một thể tích nước muối sinh lý bình thường.

1.5 Thu thập mẫu: Mẫu chuột được thu thập 2 và 6 tuần sau khi can thiệp. Sau 1% gây mê natri pentobarbital, 5-10ml máu được lấy từ động mạch chủ bụng để chuẩn bị huyết thanh và bảo quản trong tủ lạnh -20B. chừa. Sau đó, những con chuột đã bị hy sinh và các mẫu gãy xương đùi được thu thập và đặt trong 10% formaldehyd trung tính trong 72 giờ.

1.6 Các chỉ số kiểm tra: Các điểm như sau.

1.6. 1 Mật độ khoáng xương: Tất cả các con chuột sau mô hình loãng xương đã được gây mê trước khi mô hình gãy xương, và sau đó mật độ khoáng xương của xương đùi giữa được đo. Ba nhóm chuột đã nhận được mẫu sau 2 và 6 tuần can thiệp, và các mẫu được cố định trong 72 giờ và sau đó mật độ xương được đo lại.

1.6. 2 Micro-CT: Chụp micro-CT được thực hiện sau khi mẫu được cố định trong 72 giờ, với 200 hình ảnh trên và dưới đầu gãy là vùng quan tâm (R01), góc quét 360 °, dòng điện 555uA, điện áp 42kV, bộ lọc Al 0. 2mm, độ phân giải 8.73um, sau khi hoàn thành việc tái tạo hình ảnh ba chiều và phân tích mô sẹo. Các thông số phát hiện như sau: phần thể tích xương BV / TV, yếu tố mô hình cơ xương (Tb. Pf); chỉ số mô hình cấu trúc (SMI), v.v."

1.6.3 Xác định IL-1P và TGF-P1 huyết thanh: Làm tan huyết thanh chuột từ tủ lạnh ở -20 ° C, và thực hiện phát hiện từng bước theo hướng dẫn bộ IL-13 và TGF "1.

1.7 Phương pháp thống kê: sử dụng phần mềm phân tích thống kê SPSS.19 để xử lý. Dữ liệu thí nghiệm được thể hiện dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn (G±s) và mật độ khoáng xương của ba nhóm chuột. Các thông số micro-CT Mức JL-1 P JGF- P 1 được tính trung bình bằng phân tích phương sai một chiều và so sánh theo cặp giữa các nhóm được sử dụng Kiểm tra, mức kiểm tra là P<0.>

2 kết quả

2.1 Mật độ xương của ba nhóm: xem Bảng 1.

Bảng 1 Kết quả mật độ khoáng xương ở xương đùi giữa của từng nhóm chuột (x±s, g/cm²)

Lưu ý: So với nhóm mô hình, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Mặt cắt ngang hai chiều micro-CT: mặt cắt ngang hai chiều nhân mã chọn hình ảnh trục dọc của xương đùi tại mỗi thời điểm trong mỗi nhóm (xem Hình 1) và mặt cắt ngang hai chiều nằm ngang chọn hình ảnh thứ 100 dưới đường gãy để so sánh (Hình 2) ), có thể thấy từ hình rằng mô sẹo của mỗi nhóm tăng dần theo thời gian, nhưng nó là nhựa ở các mức độ khác nhau 6 tuần sau khi gãy xương; đồng thời, có thể thấy rằng mô sẹo trong nhóm đối chứng là lớn, và vỏ não dày và bò qua đường gãy xương sau 6 tuần, trong khi mô sẹo trong nhóm mô hình Có ít xương hơn trong mô sẹo sau 2 tuần, và vỏ não bị lỏng sau 6 tuần. Mặc dù thể tích mô sẹo trong nhóm điều trị không lớn sau 2 tuần, nhưng khối lượng xương trong mô sẹo nhiều hơn so với nhóm mô hình. Mô sẹo được định hình tốt hơn sau 6 tuần. Và đường gãy xương không rõ ràng.

Nhóm đối chứng Nhóm mô hình Nhóm điều trị

Hình 1 Mặt cắt ngang nhân mã của xương đùi giữa của mỗi nhóm

Hình 2 Mặt cắt ngang xương đùi giữa của mỗi nhóm

2.3 Tái tạo ba chiều Micro-CT: tái tạo ba chiều của mô sẹo ở đầu xương đùi bị gãy được thể hiện trong Hình 3. Có thể thấy từ Hình 3 rằng mô sẹo hình thành dọc theo màng ngoài tim ở cả hai đầu của đường gãy 2 tuần sau khi gãy xương ở mỗi nhóm, các sợi gãy ở mỗi nhóm vẫn rõ ràng, đặc biệt là ở nhóm mô hình và nhóm điều trị, trong khi mô sẹo ở nhóm đối chứng dày và dày, chủ yếu là với các tấm 6 tuần sau khi gãy xương. Xương cơ chiếm ưu thế và đường gãy biến mất, trong khi nhóm mô hình là xương lỏng lẻo và đường gãy mờ, nhưng nhóm điều trị có nhiều xương mô sẹo hơn, xương cơ đều đặn và dày, và đường gãy không rõ ràng.

Hình 3 Tái tạo ba chiều mô sẹo R0I ở đầu bị gãy

2.4 Thông số Micro-CT: Sử dụng phần mềm để phân tích mô sẹo ở đầu bị gãy. Xem Bảng 2 để biết các tham số liên quan.

Bảng 2 So sánh các thông số Micro-CT của từng nhóm (x±s)

Nhóm đối chứng Nhóm mô hình Nhóm điều trị

Lưu ý: So với nhóm mô hình, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Huyết thanh IL-1 P . Mức TGF-P 1: xem Bảng 3.

Bảng 3 So sánh il-1 P JGF-0 1 cấp độ trong mỗi nhóm G±s, n = 8)

Lưu ý: So với nhóm mô hình, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

Trong những năm gần đây, các loại thuốc truyền thống Trung Quốc Yinyangdian, Drynaria fortune và các hợp chất của nó (Thuốc thanh, Thuốc Liuwei Dihuang, v.v.) đã được chứng minh trong thực hành lâm sàng để cải thiện đáng kể bệnh loãng xương. Loại thuốc và hợp chất Trung Quốc này chủ yếu được sử dụng để nuôi dưỡng gan và thận. Điều này phù hợp với nguyên tắc nuôi dưỡng thận và làm mới các cơ ở giai đoạn giữa và cuối của gãy xương. "Mười ngày. Miếng dán chân tay thịt được xuất bản lần đầu tiên trong "Shen Nong's Materia Medica". , Ấm áp trong tự nhiên, có chức năng nuôi dưỡng thận và tăng cường dương, bổ sung tinh chất và tủy, nuôi dưỡng máu và giữ ẩm khô, màu sắc dễ chịu và kéo dài tuổi thọ.

Trong nghiên cứu này, mật độ khoáng xương của nhóm điều trị cao hơn so với nhóm mô hình sau 2 và 6 tuần can thiệp (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">loãng xươngchữa lành gãy xương. Nó phản ánh trực tiếp hàm lượng xương của mô sẹo. Điều này cho thấy Rouganrong có thể có tác dụng thúc đẩy quá trình tạo xương. Phân tích có thể có hiệu quả trong bột thoát vị thịt. Các thành phần có tác dụng điều chỉnh BMP2 và BMP2 là một trong những thành viên của gia đình TGF-8. Và kết quả này cũng được xác nhận bởi các thông số khác của quét Micro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp và SMI phản ánh các đặc tính cơ sinh học của mô sẹo, và các giá trị trong nhóm điều trị tốt hơn đáng kể so với Nhóm mô hình, điều này cũng cho thấy thêm rằng Roudongrong có tác dụng cải thiện mất xương, thúc đẩy quá trình tạo xương và đẩy nhanh quá trình chữa lành gãy xương.

Về nồng độ IL-1B và JGF-P 1 trong huyết thanh, sau 2 tuần và 6 tuần can thiệp, người ta thấy rằng mức IL-1P của nhóm điều trị thấp hơn hai nhóm còn lại ở tuần thứ 2 và sau 6 tuần. Mặc dù mức IL-1 B của nhóm điều trị cao hơn nhóm đối chứng, nhưng vẫn thấp hơn đáng kể so với nhóm mô hình (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistanche ·có thểcải thiện mất xương, thúc đẩy quá trình tạo xương và đẩy nhanh quá trình chữa lành gãy xương. Nó có thể làm giảm mức IL-13 trongloãng xươngchuột gãy xương và ức chế gãy xương. Hoạt động tế bào xương đạt được; Ngoài ra, nó cũng có thể liên quan đến thực tế làCistanche ·có thể làm tăng mức độ TGF-B 1 ở chuột bị gãy xương, thúc đẩy sự biệt hóa xương và sự trưởng thành và hình thành mô sẹo.

Tóm lại, dựa trên phân tích mật độ khoáng xương, thông số chụp Micro-CT và nồng độ IL-1 P, TGF "1" trong huyết thanh, người ta thấy rằng chiết xuất nước củaCistanche ·có thểcải thiện mất xươngvàthúc đẩy chữa lành gãy xương do loãng xương. Cơ chế có thể liên quan đến điều này. Nó có thể ức chế sự tiết ILT 8 trong huyết thanh và thúc đẩy sự bài tiết TGF-B 1 ở chuột sauloãng xươnggãy xương, do đó cải thiện bệnh loãng xương và thúc đẩy quá trình chữa lành gãy xương.

4 Tham khảo

[1] Mã Nguyên Chính, Wang Yipeng, Liu Qiang, et al. Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị loãng xương ở người cao tuổi ở Trung Quốc (2018) [J], Tạp chí Loãng xương Trung Quốc, 2018, 24 (12): 1541-1567.

[2] Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang, et al. Hiệu quả điều trị và cơ chế chiết xuất rượu của thoát vị thịt trên chuột cắt bỏ buồng trứng bị loãng xương [J]. Tạp chí của Đại học Cát Lâm (Ấn bản Y học), 2018, 44 (1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Chiết xuất gỗ tim từ Dalbergia sissoo thúc đẩy chữa lành gãy xương và ứng dụng của nó ở chuột osteoporotic do phẫu thuật cắt bỏ buồng trứng [J]. Tạp chí Dược và Dược lý học, 2017, 69 (10): 1381-1397.

[4] Kevin 0'Neill, Christopher M S, Nicholas A M, et al. Đánh giá chụp cắt lớp vi tính về sự tiến triển của quá trình lành gãy xương ở chuột[j]. Xương, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian, et al. Sự đồng thuận của chuyên gia về chẩn đoán phân loại và điều trị loãng xương nguyên phát bằng y học cổ truyền Trung Quốc ở tỉnh Chiết Giang (2017) [J], Tạp chí Y học cổ truyền Trung Quốc Chiết Giang, 2018, 53 (4): 237- 241.

[6] Mã Mạnh, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Tiến bộ nghiên cứu trong phòng ngừa và điều trị loãng xương bằng thuốc Trung Quốc đơn và hợp chất [J]. Hướng dẫn Y tế Trung Quốc, 2018, 20 (8) = 477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng, et al. Tác dụng của họ thịt sa mạc xay nhuyễn đối với biểu hiện protein BMP-2 ở chuột loãng xương lão hóa nhanh chóng [J]. Tạp chí Y khoa Ninh Hạ, 2014, 36 (12): 1114-1116