Tác dụng của Echinoside đối với chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch ngoại bào của thể vân ở chuột bị thiếu máu não

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. Trường Dược, Đại học Shihezi, Phòng thí nghiệm trọng điểm về Thuốc thực vật đặc biệt Tân Cương, Bộ Giáo dục, Shihezi, Tân Cương 832002;2. Trung tâm nghiên cứu y học cổ truyền Trung Quốc hiện đại, Đại học Bắc Kinh, Bắc Kinh 100083)

Số phân loại sách Trung Quốc: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

ID tài liệu: A Bài viết số: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

trừu tượng: Mục tiêu Nghiên cứu ảnh hưởng củaEchinoside(ECH) trên chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch ngoại bào của thể vân ở chuột bị thiếu máu não cục bộ và để khám phá cơ chế có thể có của tác dụng bảo vệ thần kinh của ECH trên não. Phương pháp Chuột SD được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng, nhóm mô hình, nhóm liều cao và thấp ECH và nhóm ligustrazine (CXQ). Chuột ở mỗi nhóm được tiêm các loại thuốc tương ứng hoặc nước muối sinh lý vào màng bụng 1 lần/ngày trong 7 ngày. Vào ngày điều trị thứ ba, ống thăm dò được nhúng vào vùng não. Một giờ sau lần dùng cuối cùng, mô hình chuột bị thiếu máu não cục bộ (MCAO) đã được thực hiện. Sau khi mô hình được tạo ra, quá trình vi lọc được thực hiện ngay lập tức. Dịch thẩm tách được bơm vào detector điện hóa sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC-ECD) để xác định hàm lượng norepinephrine (NE), dopamine (DA), 5-hydroxytryptamine (5-HT), 3 ,4-axit dihydroxyphenylacetic (DOPAC), axit homovanillic (HVA), 5-axit hydroxy indole axetic (HIAA) trong dịch ngoại bào của thể vân của mỗi nhóm. Kết quả So với nhóm đối chứng, mức NE, DA và 5-HT trong nhóm mô hình tăng lên và các chất chuyển hóa có tính axit DOPAC, HVA và HIAA cũng tăng lên. So với nhóm mô hình, hàm lượng của sáu chất trong nhóm ECH liều cao và thấp (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) và nhóm CXQ đều giảm. Kết luận Tác dụng bảo vệ thần kinh của ECH có thể liên quan đến sự gia tăng chất dẫn truyền thần kinh monoamine sau thiếu máu não.

bột hồ đào

từ khóa: Echinoside; Thiếu máu cục bộ; vân; HPLC-ECD; Chất dẫn truyền thần kinh monoamine và chất chuyển hóa

Echinaceoside(ECH) là một thành phần hiệu quả của glycoside phenylethanoid được phân lập và tinh chế từquả hồ trăn sa mạc, một loại cây đặc biệt ở Tân Cương. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng ECH có tác dụng bảo vệ thần kinh như chống oxy hóa [1-2], bảo vệ thần kinh [3-4], chống lão hóa [5], đồng thời cải thiện khả năng học tập và trí nhớ [6-8]. Kết quả của Chen Hong et al. xác nhận rằng ECH có tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh DA trong bệnh Parkinson [9]. Chất dẫn truyền thần kinh monoamine là một loại chất quan trọng có chức năng điều hòa các hoạt động sinh lý của cơ thể.Nội dung trong mô có thể phản ánh các quá trình sinh tổng hợp, giải phóng, hấp thu và bất hoạt chất dẫn truyền thần kinh [10-11]. Hiện tại, không có báo cáo liên quan về tác dụng của ECH đối với chất dẫn truyền monoamine trong não của chuột bị thiếu máu não. Trong nghiên cứu này, tác dụng của ECH đối với hàm lượng chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch ngoại bào của thể vân của chuột bị thiếu máu não đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng công nghệ vi lọc não và cơ chế có thể có của ECH đối với việc bảo vệ thần kinh não đã được khám phá sơ bộ.

bột chiết xuất từ ​​quả hồ trăn

1.Vật liệu

1.1 Động vật thí nghiệm

Chuột SD, ♂, Khối lượng cơ thể 250~300g (mua từ Trung tâm Động vật Thực nghiệm Tân Cương, số giấy phép: 2009-0053).

1.2 Thuốc và thuốc thử

ECH được tặng bởi Giáo sư Tu Pengfei, Trường Dược, Đại học Bắc Kinh (độ tinh khiết trên 95 phần trăm); Norepinephrine (NE), dopamine (DA), 5-hydroxytryptamine (5-HT), 3,4-axit dihydroxyphenylacetic (DOPAC), axit homovanillic (HVA)

5-hydroxy indole axetic (HIAA) là Sigma; Tetramethylpyrazine hydrochloride để tiêm (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Xi măng phốt phát kẽm (sản phẩm của Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., gồm chất lỏng và bột, trộn với thời gian); Natri 1-alkyl sulfat (DIKMA); Axit citric hydrat (Viện nghiên cứu hóa chất tốt Thiên Tân Jinke); Trisodium citrate (Acros); Axit tetraacetic dinatri ethylenediamine (JTTakerChemicalco); Methanol (DIKMA); Axetonitril (DIKMA); Dịch truyền vi lọc não là hợp chất tiêm natri clorua (Công ty TNHH Dược phẩm Shuanghe Bắc Kinh); Tất cả nước được sử dụng là nước hấp lại.

1.3 Nhạc cụ

Bộ máy lập thể não chuột BAS4100 của Mỹ; Đầu dò và ống bọc đầu dò CMA/12; thiết bị động vật có ý thức CMA/120; máy bơm siêu nhỏ CMA/402; Bộ thu mẫu tự động nhiệt độ thấp CMA/150. máy bơm truyền dịch Esa 5600A; máy bơm truyền dịch Esa 5600A; thiết bị tiêm mẫu tự động Esa 542; máy dò điện hóa CoulArray của Esa; Điện cực làm việc carbon thủy tinh và điện cực tham chiếu Ag/AgCl; cột C18 (DIKMA, ODS5 μm,150mm × 4,6mm); máy trạm sắc ký CoulArraywin (công ty Esa); Máy trộn xoáy (loại QL-861); Máy kiểm tra độ axit để bàn (HANNA-211); Máy ly tâm tốc độ cao để bàn (loại XYJ-2).

2.Phương pháp

Cistanche bổ sung gần tôi—Imchứng minh trí nhớ

Nhấn vào đây để xem các sản phẩm Cistanche Cải thiện trí nhớ

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Phân nhóm và quản lý động vật

Ba mươi con chuột được chia ngẫu nhiên thành năm nhóm: ① Nhóm đối chứng: 1ml · kg-1 · d-1 nước muối sinh lý; ② Nhóm mẫu: nước muối sinh lý 1ml · kg-1 · d-1; ③ Model plus ligustrazine (CXQ) 30mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model cộng với nhóm ECH liều cao và thấp (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Tất cả các động vật trong mỗi nhóm được tiêm trong màng bụng trong 7 ngày.

2.2 Phương pháp mô hình hóa và vi lọc

Mỗi con chuột được chôn bằng ống thông vào ngày quản lý thứ ba: chuột được gây mê bằng 10 phần trăm chloral hydrat (3,5ml · kg-1), cố định trên BAS4100 thiết bị lập thể não và ống thông thăm dò được cấy vào thể vân bên trái (tọa độ AP: cộng 0,2mm; ML: - 3.0mm; DV: - 3.5mm) liên quan đến "Bản đồ lập thể não chuột" của George Paxinos “. Sau lần dùng cuối cùng, những con chuột được gây mê 1 giờ sau đó và những con chuột này được tạo ra một mô hình thiếu máu não cục bộ (mô hình MCAO) bằng phương pháp khâu Longa cải tiến của Yang Zanzhang [12]. Dây câu ở nhóm đối chứng chỉ được luồn 10mm, các bước khác giống như ở nhóm mổ. Sau khi lập mô hình, đưa đầu dò vi lọc vào trạng thái có ý thức và chuyển động tự do, đồng thời sử dụng dung dịch Ringer để μ Dịch lọc vi lọc não được thu thập ở 4 độ và một ống dịch lọc được thu thập sau 20 phút. Sau khi mỗi ống dịch thẩm tách được thu thập, nó phải được bảo quản ngay lập tức trong tủ lạnh - 20 độ và chuyển sang tủ lạnh - 70 độ sau khi lọc máu. Tốc độ phục hồi của đầu dò được đo trước khi sử dụng, được sử dụng để chuyển đổi nồng độ của chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch thẩm tách.

cistanche có tác dụng gì—Cải thiện trí nhớ

2.3 Phân tích HPLC-ECD

Cấu hình pha động: pha động chứa 829ml dung dịch đệm 0.15mol · L-1 axit xitric-natri citrate trên lít; 0.1mol · L-1 dinatri EDTA 1ml; Methanol 150ml; Natri {{10}}ankyl sunfat 0.283g. Đặt tốc độ dòng của pha động là 0.7ml · phút-1 và nhiệt độ của lò cột là 28 độ . Điện áp làm việc của máy dò điện hóa là 200mV, 400mV và 600mV với 2, 3 và 4 kênh tương ứng; Mức tăng là 2nA. Thể tích tiêm là 25 μl. Đường chuẩn được vẽ bằng dung dịch chuẩn hỗn hợp gradient 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5mg · L-1.

2.4 Xử lý thống kê

Dữ liệu thử nghiệm được thể hiện trong trường x ± s và dữ liệu đo lặp lại được phân tích bằng phần mềm thống kê SPSS13.0.

Hình. 1-6 mô tả những thay đổi về mức độ NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA và 5-HT trong dịch ngoại bào của thể vân chuột. Từ hình vẽ có thể thấy rằng sau khi thiếu máu não, các chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch ngoại bào của thể vân bị rối loạn chuyển hóa và hàm lượng của mỗi chất dẫn truyền thần kinh đều tăng lên. Trong một phạm vi nhất định, sự gia tăng rõ ràng hơn với sự kéo dài của thời gian thiếu máu cục bộ. Sau 90 phút thiếu máu cục bộ, nồng độ DA và NE trong dịch ngoại bào của thể vân cao hơn ba lần so với mức của nhóm đối chứng. Nồng độ NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA và 5-HT ở nhóm đối chứng giảm từ cao xuống thấp, điều này có thể liên quan đến tình trạng thiếu máu cục bộ não trái tạm thời sau khi thắt động mạch cảnh chung trái và thiệt hại do chèn đầu dò. Từ đường cong thay đổi, ECH và CXQ có thể làm giảm nồng độ đỉnh của DA, DOPAC, HIAA, HVA và 5-HT sau thiếu máu não, còn CXQ và ECH liều cao thì rõ ràng hơn. Sự dịch chuyển xuống dưới của đường cong thời gian của từng chất dẫn truyền thần kinh cho thấy ECH có thể ức chế sự gia tăng các chất dẫn truyền thần kinh và các chất chuyển hóa của chúng trong não chuột bị thiếu máu não.

                                                                           Hình 2 Tác dụng của Echinoside đối với mức độ ngoại bào của DA trong khối của chuột

Hình3 Ảnh hưởng củaEchinosideở cấp độ ngoại bào của DOPAC trong nhóm chuột Hình 4Tác dụng củaEchinosideMức độ HIVV ngoại bào trong thể vân của chuột

Hình5 Ảnh hưởng củaEchinosidevề mức độ ngoại bào của HVA trong nhóm chuột Hình 6 Ảnh hưởng củaEchinosideở cấp độ ngoại bào của 5-HT instritum của chuột

4.Cuộc thảo luận

Siêu nhân thảo mộc cistanche—Improbộ nhớ

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Cơ chế chấn thương sọ não do thiếu máu não rất phức tạp. Trong trường hợp thiếu máu não, các chất dẫn truyền thần kinh monoamin trong não bị rối loạn và hàm lượng NE, DA và 5-HT giảm đáng kể. Thiếu máu não càng nặng thì hàm lượng NE, DA và 5-HT trong mô não càng thấp [13]. Phương pháp vi lọc nội sọ đã chứng minh rằng hàm lượng chất dẫn truyền thần kinh monoamine tăng trong dịch ngoại bào trong quá trình thiếu máu não, kéo dài trong toàn bộ thời kỳ thiếu máu cục bộ và tăng thêm khi kéo dài thời gian thiếu máu cục bộ. Kết quả thí nghiệm phù hợp với báo cáo [14].Echinosidelà một thành phần hiệu quả của glycoside phenylethanoid được phân lập và tinh chế từ Cistanche Deserticola, một loại cây đặc biệt ở Tân Cương. Nó có nhiều tác dụng bảo vệ thần kinh như chống lão hóa, cải thiện khả năng học tập và trí nhớ, chống quá trình chết theo chương trình của tế bào thần kinh.. Trong nghiên cứu này, phương pháp vi lọc não tiên tiến trong nước kết hợp với công nghệ phát hiện HPLC-ECD đã được sử dụng để khám phá sơ bộ tác dụng củaEchinosidetrên chất dẫn truyền thần kinh monoamine và các chất chuyển hóa của chúng trong dịch ngoại bào của thể vân của chuột thí nghiệm bị thiếu máu não. Kết quả cho thấy ECH có thể làm giảm sự gia tăng của chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong dịch ngoại bào của thể vân do thiếu máu não gây ra và có tác dụng cải thiện tổn thương mô thiếu máu cục bộ não tốt hơn.

thẩm quyền giải quyết:

［1］ Pellati F,Benvenuti S,Magro L,và cộng sự． Phân tích các hợp chất phenolic và hoạt động nhặt gốc tự do của Echinacea spp［J］． JPharm Biomed Anal,2004,35( 2): 289．

［2］ Kuang R,Sun YG,Deng TL,Zheng XX． Tác dụng và cơ chế bảo vệ của echinacoside đối với H2O2 -làm tổn thương tế bào PC12［J］． Chin Pharmacol Bull,2009,25( 4): 515 － 8．

［3］ Zhao X,Pu XP,Geng XC． Ảnh hưởng của echinacoside đối với biểu hiện protein từ chất anigra và mô tiền sản trong mô hình MPTP của chuột đối với bệnh Parkinson bằng cách sử dụng phân tích điện di theo chiều［J］． Chin Pharmacol Bull,2008,24( 1): 28 － 32．

［4］ Koo KA,Sung SH,Park JH,và những người khác． Các hoạt động bảo vệ thần kinh trong ống nghiệm của phenylethanoid glycoside từ callicarpa dichotoma［J］． Planta Med,2005,25( 4): 356．

［5］ Lý Y,Tống YY,Zhong HQ． Tác dụng của Echinacoside đối với chức năng miễn dịch và hàm lượng DNA ty thể tương đối của chuột già ［J］． Chin Pharmacol Bull,2010,26( 6): 810 － 3．

［6］ GLNE,Lei L,Tu PF, et al． Nghiên cứu cơ chế phân tử của echi nacoside chống lão hóa［J］． Acta Biophysica Sitica,2004,20 ( 3): 184．

［7］ Gao C,Wang CS,Wu GZ,et al． Tác dụng của Cistanche glycoside đối với việc học tập và suy giảm trí nhớ ở chuột sa sút trí tuệ mạch máu［J］． Thuốc thảo mộc Chin Tradit,2005,36( 12): 1852．

［8］ Tian F,Zhang K,Kang AJ,et al． Tác dụng và cơ chế của echinacoside đối với khả năng ghi nhớ và học tập của SAM-P /8［J］． Lab orat Anim Sci Manag,2006,2( 23): 510．

［9］ Chen H,Jing FC,Li CL,et al． Echinacoside ngăn chặn sự suy giảm nồng độ ngoại bào của chất dẫn truyền thần kinh monoamine ở 6-chuột bị tổn thương hydroxydopamine［J］． J Ethnopharmacol, 2007,114( 3): 285．

［10］ Amara SG． Những tiến bộ gần đây về vận chuyển chất dẫn truyền thần kinh［J］． Annu Rev Neurosci,1993,16( 1): 73 － 93．

［11］ Wu GX,Su RB,Li J． Vai trò của chất vận chuyển dopamine trong sự phụ thuộc vào chất kích thích tâm thần［J］． Chin Pharmacol Bull,2010,26 ( 2 ) : 141 － 3．

［12］ Dương ZZ,Trần H． Cải thiện và kinh nghiệm trong các phương pháp khâu cho mô hình chuột thiếu máu não khu trú［J］． Lishlzhen Med Mat Med Res,2008,19( 9): 2189 － 90．

［13］ Tanaka K,Wada N,Ogawa N． Giảm tưới máu não mãn tính gây ra những thay đổi đơn chất amin có thể đảo ngược thoáng qua trong não chuột ［J］． Neurochem Res,2000,25( 2): 313．

［14］ Lý H． Tác dụng của Puerarin đối với chất dẫn truyền thần kinh monoamine trong thể vân của chuột［J］． J Đại học Khoa học Công nghệ Chiết Giang,2005,17( 1): 13 － 7．