ABSTＲACT

Mục tiêu: Làm rõ liệu khái quátcistanosit(GC) cải thiệnRối loạn chức năng nhận thứcchuột bị lão hóa nhanh chóng ( SAMP8) bằng cách trung gian thụ thể androgen cụ thể ( AＲ) trongđiều hòa biểu hiện protein synap． 

Phương pháp: Tổng số chuột SAMP8 đực 76 7-tháng tuổi được chia ngẫu nhiên thành nhóm mô hình, nhóm GC, nhóm GC + flutamide ( F), nhóm GC + fulvestrant ( ICI), nhóm F và nhóm ICI. Chức năng học tập và trí nhớ của chuột trong mỗi nhóm đã được thử nghiệm với mê cung nước Morris. Phương pháp Western blot và RT-PCR được sử dụng để kiểm tramức độ biểu hiện của synolinehysin( SYN), mật độ sau khớp thần kinh － 95 ( PSD － 95) và yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc từ não ( BDNF) của chuột trong mỗi nhóm.

Kết quả:GC cải thiện đáng kể chức năng học tập và nhận thức của chuột SAMP8.

So với nhóm GCs, chức năng học tập và trí nhớ của chuột trong nhóm GCs + F và nhóm GCs + ICI đã giảm đi đáng kể. Kết quả Western blot và RT-PCR cho thấy mức độ biểu hiện của BDNF, SYN và PSD－ 95 tăng đáng kể ở mức protein và mức gen trong nhóm GC so với nhóm Model ( P ＜ 0． {{ 11}}5) ． Mức độ biểu hiện SYN đã tăng lên trong nhóm GCs + F và GCs + ICI, và mức độ biểu hiện của BDNF và PSD － 95 đã giảm đáng kể trong nhóm GCs + F và GCs + ICI so với nhóm GCs ( P ＜ 0． 05) ．

Kết luận: GC có thể làm trung gian cụ thể cho AＲ để tăng cường tính dẻo khớp thần kinh ở chuột SAMP8, từ đó cải thiện chức năng học tập và nhận thức.

TỪ KHÓA:Cistanosides chung; Thụ thể Androgen; Dẻo khớp thần kinh; chuột SAMP8

Bổ sung Cistanche Cải thiện chức năng nhận thức Bổ sung chế độ ăn uống PhGs75% Ech 30% Đạo luật 12%

Bệnh Alzheimer(AD) là phổ biếnbệnh thoái hóa thần kinh, đặc trưng lâm sàng bởi sự suy giảm chức năng nhận thức tiến triển và thay đổi trạng thái tâm thần và tâm lý [1]. Các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng nồng độ testosterone ở bệnh nhân nam AD thấp hơn đáng kể so với nam giới bình thường.

Cácchức năng nhận thức của bệnh nhânđã được cải thiện ở các mức độ khác nhau sauliệu pháp thay thế xeton[2], điều này chỉ ra rằng sự giảm nồng độ androgen liên quan đến tuổi tác có thể là một yếu tố nguy cơ gây ra AD ở nam giới lớn tuổi.

Cistanche Deserticola tổng glycoside (cistanosides chung, GC) là một trong những chiết xuất chính của Cistanche Deserticola, có thể cải thiện việc học tập và điều trị liên quan đến AD.Rối loạn chức năng nhận thức[3]. Ngoài ra, việc sử dụng GC bằng ống thông làm tăng đáng kể nồng độ testosterone ở động vật [4]. GC cũng có chức năng thúc đẩy dương và có thể phát huy tác dụng

Tác dụng dược lực học giống Androgen. Các nghiên cứu trước đây đã báo cáo rằng testosterone có thể cải thiện chức năng học tập và nhận thức của động vật mô hình AD và quá trình này phụ thuộc vào thụ thể androgen cụ thể (thụ thể androgen, AR) qua trung gian [5].

Người ta biết rằng rối loạn chức năng nhận thức ở bệnh nhân AD có liên quan chặt chẽ đến độ dẻo của khớp thần kinh. Tuy nhiên, cơ chế cụ thể mà qua đó GC điều chỉnh độ dẻo của khớp thần kinh và từ đó cải thiện chức năng học tập và nhận thức vẫn chưa rõ ràng. Nghiên cứu này nhằm mục đích khám phá xem liệu GC có làm trung gian cho ARＲ cụ thể có ảnh hưởng đến độ dẻo của khớp thần kinh và do đó cải thiện chức năng học tập và nhận thức ở bệnh AD hay không.

1 Vật liệu và phương pháp

1.1 Động vật và thiết bị thí nghiệm

Chuột SAMP8 đực 3-tháng tuổi được mua từ Trường Y thuộc Đại học Bắc Kinh (SCXK [Bắc Kinh] 2016-0010) và được nuôi cho đến khi chúng được 7 tháng tuổi. Động vật được nuôi trong môi trường sạch sẽ ở nhiệt độ (24 ± 1) độ và

Các động vật được cung cấp ánh sáng tự nhiên, được tiếp cận miễn phí thức ăn và nước uống, đồng thời được chăm sóc nhân đạo theo nguyên tắc 3R đối với việc sử dụng động vật thí nghiệm. Nghiên cứu thực nghiệm này đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật Thực nghiệm của Trường Cao đẳng Y tế Baotou (Trường Cao đẳng Y tế Baotou số 20201102).

Các thuốc thử chính trong thí nghiệm là:Cistanche Deserticola tổng glycoside(GC, Công ty TNHH Sinh học Tây An Ciyuan); Thuốc đối kháng thụ thể androgen-flutamide (Công ty Sigma, Hoa Kỳ); chất đối kháng thụ thể estrogen (ICI 182780, Hoa Kỳ) Med Chem Express); Kháng thể BDNF chống chuột của thỏ,

kháng thể PSD-95, kháng thể SYN, kháng thể -actin (Công ty Proteintech của Hoa Kỳ); dung dịch điện di protein, dung dịch chuyển protein, TEMED, đệm acrylamide, amoni persulfate, Tris (Công ty TNHH Công nghệ Solebao Bắc Kinh); Bộ tổng hợp cDNA, Phát hiện định lượng huỳnh quang tài năng

Bộ thuốc thử (Công ty TNHH Công nghệ sinh hóa Tiangen), v.v. Thiết bị thí nghiệm chính bao gồm bể điện di dạng tấm đứng, thiết bị điện di, bể chuyển, máy lắc định lượng (Công ty TNHH Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh), hệ thống phân tích hình ảnh gel protein (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), thiết bị PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực (USA Roche), v.v.

1. 2 Phân nhóm và quản trị

Hai con chuột chết tự nhiên trong quá trình cho ăn và 78 con chuột còn lại được chia ngẫu nhiên vào nhóm mô hình, nhóm GC, nhóm GC + flutamide (F), nhóm GC + Fulvestrant (ICI), nhóm F, ICI

Mỗi nhóm có 13 con vật. Ngoại trừ nhóm mô hình, nhóm F và nhóm ICI, các nhóm khác được sử dụng GC liên tục với liều 50 mg/(kg·d) trong 30 ngày.

Từ ngày thứ 24 sau khi dùng GC, nhóm GC + flutamide (F) và nhóm GC + fulvestrant (ICI) đã được tiêm F (5 mg/kg/d) trong phúc mạc 30 phút sau khi dùng GC bằng ống thông. ), ICI (1 mg/kg/ngày), tiêm liên tục trong 7 ngày. Điều chỉnh nồng độ liều dùng để đảm bảo thể tích dạ dày tối đa của chuột là 0,5 mL, 1 lần/ngày.

1. 3 Thử nghiệm mê cung nước Morris

Chuột thích nghi với môi trường nước trước một ngày. Mê cung nước Morris kéo dài 6 ngày. 5 ngày đầu tiên là bài kiểm tra định vị và điều hướng. Những con chuột được huấn luyện mỗi ngày một lần ở mỗi góc phần tư trong 1 phút mỗi lần. Mỗi khoảng thời gian đào tạo là 15 phút và hồ sơ được ghi lại cùng lúc. Độ trễ thoát của thử nghiệm định vị và điều hướng động vật; vào ngày thứ 6, lấy bệ ra khỏi mặt nước và tiến hành thử nghiệm khám phá không gian. Ghi lại số lần đi qua nền tảng và phần trăm thời gian dành cho góc phần tư mục tiêu của chuột. góc phần tư mục tiêu) và quỹ đạo bơi khám phá không gian (Quỹ đạo bơi của bài kiểm tra thăm dò không gian) và các chỉ số khác.

1. 4 Phát hiện Western blot

Biểu hiện của các protein liên quan đến khớp thần kinh SYN, PSD-95 và BDNF. Sau thử nghiệm mê cung nước Morris, tất cả những con chuột đều được gây mê thường xuyên, đầu của chúng bị chặt, não bị cắt bỏ và vùng đồi thị của chúng bị loại bỏ. Mô hồi hải mã bị ly giải protein, bị phá vỡ bằng siêu âm ở 4 độ, để trên đá trong 30 phút và ly tâm ở tốc độ 12,000 vòng/phút trong 15 phút ở 4 độ. Phần nổi phía trên được lấy và nồng độ protein được đo bằng phương pháp BCA. Sau khi nạp protein, thực hiện điện di xếp chồng gel ở điện áp không đổi 80 V, điện di tách gel ở điện áp không đổi 120 V và chuyển ướt ở dòng không đổi 300 mA; Lấy màng PVDF ra, chặn bằng sữa gầy 5% trong 80 phút ở nhiệt độ phòng và rửa màng ba lần bằng TBST. 15 phút/lần, kháng thể sơ cấp được ủ qua đêm trên bàn lắc ở 4 độ; ngày hôm sau rửa màng 3 lần bằng TBST.

15 phút/lần, kháng thể thứ cấp được ủ ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ, sau đó thực hiện phát triển màu ECL và thực hiện chụp ảnh bằng hệ thống chụp ảnh phát quang hóa. -actin được sử dụng làm tham chiếu nội bộ và giá trị mật độ quang của dải được phân tích bằng phần mềm Image J.

1. Phát hiện 5ＲRT－PCRＲ

Biểu hiện mRNA của SYN, PSD{0}} và BDNF được chiết xuất từ ​​tổng số RNA của mô vùng đồi thị theo phương pháp chiết Trizol và cDNA được tạo ra sau khi phiên mã ngược. Bộ phát hiện định lượng huỳnh quang Talent được sử dụng để phát hiện định lượng huỳnh quang tương đối. Thí nghiệm được lặp lại ba lần và kết quả được chuyển đổi thành 2 - ΔΔCT đã được phân tích. Các đoạn mồi Mouse -actin, SYN, PSD-95 và BDNF được thiết kế bởi Công ty Sangon Thượng Hải và trình tự mồi được trình bày trong Bảng 1.

1. 6 Phân tích thống kê

Thông qua phần mềm thống kê SPSS 25. 0 để xử lý, phần mềm Graphpad Prism 8 được sử dụng để vẽ biểu đồ thống kê và ANOVA một chiều được sử dụng để so sánh các phương tiện theo cặp của nhiều mẫu. P < 0. 05 có nghĩa là sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.