Ảnh hưởng của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa lên hệ vi sinh vật đường ruột của chuột bị rối loạn đường ruột

Xiaowei Bao, Dongwen Bai, Xiaolu Liu, Ying Wang, Lanjun Zeng, Chenye Wei và Weiquan Jin

Cao đẳng Khoa học Thực phẩm và Dược phẩm, Đại học Nông nghiệp Tân Cương, Urumqi 830052, Trung Quốc

Thư từ nên được gửi đến Xiaowei Bao; xiaoweibao0723@xjau.edu.cn

Nhận ngày 29 tháng 4 năm 2021; Được chấp nhận ngày 30 tháng 6 năm 2021; Xuất bản ngày 14 tháng 7 năm 2021

Đây là một bài báo truy cập mở được phân phối theo Giấy phép Ghi công Creative Commons, cho phép sử dụng, phân phối và sao chép không hạn chế trong bất kỳ phương tiện nào miễn là tác phẩm gốc được trích dẫn chính xác.

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

trừu tượng

Rối loạn hệ vi sinh vật đường ruột có liên quan đến nhiều bệnh. Nước chiết xuất từCistanchetubulosa(CT), một công thức thảo dược truyền thống của Trung Quốc, đã được báo cáo là có vai trò bảo vệ đường ruột của con người. Tuy nhiên, ít người biết về tác dụng của nó đối với hệ vi sinh vật đường ruột. Nghiên cứu hiện tại đã được thực hiện để xác định xem liệuCistancheTubulosachiết xuất nước có thể điều chỉnh hệ vi sinh vật đường ruột ở chuột bị rối loạn đường ruột. Chúng tôi nhận thấy rằng hình thái ruột bị tổn thương do điều trị bằng cefixime có thể được cứu vãn bằng cách sử dụngCistancheTubulosadung dịch nước. So sánh sự đa dạng của vi sinh vật giữa những con chuột được điều trị bằng chiết xuất Cistanche Tubulosa và những con chuột đối chứng cũng chỉ ra rằng rối loạn trong cộng đồng vi sinh vật của các nhóm mô hình có thể được phục hồi bằng cách điều trị với nồng độ cao và trung bình củaCistancheTubulosadung dịch nước. Điều trị bằng cefixime làm giảm đáng kể vi khuẩn axit lactic; tuy nhiên, việc bổ sungCistancheTubulosachiết xuất nước đã phục hồi sự phát triển của các vi khuẩn axit lactic này. Hơn nữa,CistancheTubulosachiết xuất nước có thể kiểm soát những thay đổi đáng kể trong các con đường trao đổi chất của hệ vi sinh vật đường ruột do cefixime gây ra. Những phát hiện này đã cung cấp một cái nhìn sâu sắc về tác dụng có lợi của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa đối với hệ vi sinh vật đường ruột và chúng cũng cung cấp một tài liệu tham khảo quan trọng cho sự phát triển của các loại thuốc liên quan trong tương lai.

Cistanchetubulosacó nhiều tác dụng, bấm vào đây để biết thêm

1. Giới thiệu

Các vi sinh vật đường ruột chủ yếu cư trú trong lòng ruột và lớp niêm mạc và tương hỗ với vật chủ thông qua quá trình trao đổi, chuyển hóa vật chất và năng lượng và các quá trình khác [1]. * ey là các trung tâm tín hiệu tích hợp các thông điệp môi trường, chẳng hạn như chế độ ăn uống, với các tín hiệu di truyền và miễn dịch, do đó ảnh hưởng đến quá trình trao đổi chất, miễn dịch, hệ thần kinh và phản ứng của vật chủ với các bệnh nhiễm trùng [2]. Bình thường, có sự cân bằng động giữa hệ vi khuẩn đường ruột và vật chủ; tuy nhiên, rối loạn sinh học đường ruột có thể dẫn đến thay đổi cân bằng sức khỏe / bệnh tật, rối loạn miễn dịch và vô số bệnh [3]. Những thay đổi vừa phải trong hệ vi sinh vật đường ruột có thể chấp nhận được đối với vật chủ; tuy nhiên, điều này vẫn có thể tạo cơ hội để khuếch đại những thay đổi trong các yếu tố trầm trọng khác, chẳng hạn như vi khuẩn, vi khuẩn và stress oxy hóa [4].

Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng chiết xuất ethanol của Cistanche tubulosa (CT), một công thức thảo dược truyền thống của Trung Quốc, có thể điều chỉnh thành phần vi khuẩn đường ruột ở chuột [5], và tổng số glycoside của Cistanche Tubulosa đã điều chỉnh hệ vi sinh vật đường ruột bị rối loạn [6]. Các loài Cistanche, chủ yếu ký sinh trên rễ của các loài Tamarix, còn được gọi là "nhân sâm của sa mạc," và một loại thuốc bổ bao gồm thân của Cistanche Desticola (CD) và Cistanche tubulosa (CT) được sử dụng như một phương thuốc thảo dược [7 ]. Các thành phần hóa học chính của Cistanche Tubulosa phenylethanol glycosides (PHGs), là những chất chống oxy hóa [8, 9], được tìm thấy để cải thiện rối loạn chức năng sinh sản [10], ngăn chặn sự hoạt hóa tế bào hình sao gan, ngăn chặn sự dẫn truyền của các con đường tín hiệu trong TGF {{6 }} / SMAD [11], và ngăn ngừa xơ hóa gan do albumin huyết thanh bò ở chuột [12]. Trong số hơn 100 thành phần có trong Cistanche Tubulosa, polysaccharid cũng là một trong những chất quan trọng với hàm lượng dồi dào [13, 14]. Các nghiên cứu trước đây đã chứng minh rằng các polysaccharid của C. Desticola tạo ra melanogenesis trong các tế bào hắc tố, giảm stress oxy hóa [15], giảm thiểu rối loạn chức năng nhận thức bằng cách điều chỉnh các quá trình chống oxy hóa và chống viêm ở chuột [16], bảo vệ các tế bàoPC12 chống lại tổn thương do OGD / RP gây ra [17] , tăng cường hấp thu echinacoside in vivo, và ảnh hưởng đến hệ vi sinh vật đường ruột [18].

Probiotics là những vi sinh vật sống không gây bệnh có lợi cho sức khỏe và mang lại sự cân bằng vi sinh vật trong đường tiêu hóa khi được sử dụng với lượng vừa đủ [19]. * ey có thể tăng cường các phản ứng miễn dịch tế bào không đặc hiệu được đặc trưng bởi sự hoạt hóa của các đại thực bào, tế bào tiêu diệt tự nhiên (NK) và tính đặc hiệu của kháng nguyên đối với các tế bào lympho T độc và giải phóng các cytokine khác nhau theo cách đặc hiệu và phụ thuộc vào liều lượng [20 ]. Các chủng probiotic cải thiện các đặc tính của biểu mô ruột thông qua điều biến TJ, và các chủng probiotic cụ thể đã được chứng minh là điều chỉnh sự biểu hiện của mucin, do đó ảnh hưởng đến các đặc tính của lớp chất nhầy và gián tiếp điều chỉnh hệ thống miễn dịch ruột [21]. Các chủng vi khuẩn axit lactic (LAB) và Bifidobacterium là những chế phẩm sinh học chính đã được sử dụng trong nhiều lĩnh vực [22–26]. Lợi ích sức khỏe của chúng là rất nhiều, với khả năng chống oxy hóa là một yếu tố quan trọng trong các chức năng liên quan đến sức khỏe của chúng [27]. Probiotics có thể chelate các ion kim loại để ngăn chúng xúc tác quá trình oxy hóa [28, 29]; chúng cũng có thể làm tăng biểu hiện của các enzym chống oxy hóa [30, 31], sản xuất các chất chuyển hóa khác nhau có hoạt tính chống oxy hóa [32, 33], làm trung gian cho các con đường tín hiệu chống oxy hóa [34–36], và điều chỉnh các enzym tạo ra các loại oxy phản ứng (ROS) và phản ứng của vi sinh vật đường ruột đối với stress oxy hóa [37].

hoa cistanche

Một nghiên cứu gần đây đã chứng minh rằng polysaccharides của Cistanche Deserticola có thể kích thích sự phát triển của một số vi khuẩn axit lactic, có thể có lợi cho sức khỏe con người [38]. Tuy nhiên, hàm lượng polysaccharid trong Cistanche Deserticola khác với Cistanche Tubulosa [7, 39], và sự khác biệt này có thể dẫn đến những ảnh hưởng khác nhau đối với vi sinh vật đường ruột. Hơn nữa, mặc dù polysaccharid Cistanche Deserticola có thể làm giảm stress oxy hóa bằng cách kích hoạt con đường NRF2 / HO -1 [15], tác dụng của một polysaccharid đơn lẻ có thể khác với tác dụng tổng thể của nhiều chế phẩm trong Cistanche Tubulosa. Vì vậy, cần phải xác định chính xác ảnh hưởng của các chất chiết xuất từ ​​nước Cistanche Tubulosa đối với vi sinh vật đường ruột. Ngoài ra, PHG cũng có thể chống lại stress oxy hóa [40] và ngăn chặn các phản ứng viêm qua trung gian lipopolysaccharide bằng cách kích hoạt con đường theKeap1 / Nrf2 / HO -1 [41]. Do đó, việc xác định tác dụng của dịch chiết nước Cistanche Tubulosa có giá trị rất lớn. Ngoài ra, tác động của một số thành phần của chiết xuất Cistanche Deserticola trong nước đối với stress oxy hóa và hệ vi khuẩn đường ruột cho thấy rằng khả năng chống lại stress oxy hóa có thể tương quan với những thay đổi của hệ thực vật đường ruột.

Để lấp đầy những lỗ hổng kiến ​​thức về các chủ đề nêu trên, chúng tôi đã tìm hiểu tác động của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa đối với hệ vi sinh vật đường ruột của chuột bị rối loạn hệ vi khuẩn đường ruột. Những kết quả này sẽ cung cấp thông tin có giá trị về các cơ chế có thể có mà qua đó Cistanche Tubulosa thay đổi hệ vi khuẩn đường ruột và cung cấp khả năng chống lại stress oxy hóa của ruột.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Động vật thí nghiệm.

Tổng cộng 18 con chuột đựcC57BL / 6J loại SPF, nặng 18–22 g, đã được mua từ Trung tâm Động vật Thí nghiệm của Đại học Y Tân Cương với số giấy phép SCXK (mới) 2018-0003. Chúng được nuôi trong lồng với các điều kiện tiêu chuẩn: chu kỳ ánh sáng / tối 12 giờ, nhiệt độ 23 ± 2 độ và độ ẩm 55 ± 5 phần trăm. * Động vật được cho ăn theo chế độ ăn thương mại (51% chiết xuất không chứa nitơ, 25% protein thô, 4,6% chất béo thô, 6,5% tro thô, 4. 0% chất xơ thô và 8,9% độ ẩm) và nước máy . * Động vật điện tử được điều trị theo các khuyến nghị được mô tả trong Hướng dẫn Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm của Viện Y tế Quốc gia.

2.2. Chiết xuất chất lỏng chiết xuất.

Các lát khô củaC. tubulosa do Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd. Các điều kiện chiết xuất như sau: tỷ lệ rắn-lỏng 1:19, nhiệt độ 8 0 độ, thời gian vi sóng là 6 phút, thời gian siêu âm là 16 phút, công suất vi sóng là 4 0 0 W và công suất siêu âm 400 W. Hàm lượng các thành phần chính của chiết xuất nước được đo bằng HPLC (Agilent 1260 Infinity II, California, USA). Tóm lại, các chất chuẩn của echinacoside (0,2 mg / mL) và acteoside (0,2 mg / mL) được hòa tan trong metanol 50% để dùng làm dung dịch chất đối chiếu. Sau đó, 1 g dịch chiết CT được hòa tan trong 100 mL metanol 50% và để yên trong 30 phút. Dung dịch chiết xuất được xử lý bằng sóng siêu âm ở 250 W và 35 kHz trong 10 phút và sau đó được ly tâm với tốc độ 12, 000 vòng / phút. Phần nổi phía trên được thấm qua bởi màng lọc vi xốp 0,45 μm. Dung dịch chất đối chiếu và dịch lọc sau đó được phát hiện bằng HPLC trong các điều kiện sau: silica gel liên kết octadecylsilan làm chất độn, metanol làm pha động A và 0,1% axit formic làm pha động B. Nhiệt độ của cột được đặt là 30 độ, bước sóng phát hiện được đặt là 330 nm và thể tích tiêm là 10 μL.

2.3. Thí nghiệm.

Sau một tuần thích nghi, 18 con chuột được chia ngẫu nhiên thành sáu nhóm: A (bình thường có bổ sung chiết xuất nước Cistanche Tubulosa liều trung bình), B (bình thường không có chiết xuất nước Cistanche Tubulosa), C (mẫu không có chiết xuất nước), D (mô hình có thêm chiết xuất nước Cistanche Tubulosa liều cao), E (mô hình có thêm chiết xuất nước Cistanche Tubulosa liều trung bình) và F (mô hình có thêm chiết xuất nước Cistanche Tubulosa liều thấp). Các nhóm được điều trị như sau: nhóm bình thường được làm ướt bằng dung dịch nước muối thông thường, nhóm mô hình được làm ướt bằng cefixime (30 mg / kg, Công ty TNHH Dược phẩm Shiyao Group, Thạch Gia Trang, Trung Quốc) và dung dịch nước muối thông thường, cao -Nhóm liều lượng được làm ướt bởi cefixime và 221,14 mg / kg chiết xuất nước Cistanche Tubulosa, nhóm liều trung bình được làm ướt bởi cefixime và 165,54 mg / kg chiết xuất nước, và nhóm liều thấp được làm ướt bởi cefixime và 110,57 mg / kg chiết xuất trong nước. Nhóm A được ngâm với 165,54 mg / kg chiết xuất nước, và không có cefixime được thêm vào. Cefixime được dùng hàng ngày lúc 12: 00 giờ và các chất khác được dùng hàng ngày lúc 15: 00 giờ. Trong quá trình thí nghiệm, các nhóm C, D, E và F được giữ ở trạng thái mô hình của các rối loạn đường ruột. * Phân e được thu thập cứ bảy ngày một lần trên bàn vô trùng có thể thao tác và được bảo quản ở -20 độ.

2.4. Quan sát mô bệnh học của ruột kết chuột.

Vào cuối thí nghiệm, những con chuột bị giết bằng cách tách cổ tử cung, và các chất chứa trong ruột kết của chúng được thu thập trên một chiếc bàn vô trùng có thể hoạt động và được bảo quản ở -80 độ; đồng thời, các mẫu mô ruột kết được cố định trong 10% formalin trung tính. Sau đó, các mẫu được khử nước bằng cách sử dụng nồng độ gradient của etanol, hyalin hóa bằng xylen, nhúng trong parafin, cắt nhỏ và nhuộm bằng hematoxylin-eosin. Những thay đổi về hình thái của niêm mạc đại tràng được quan sát và so sánh bằng kính hiển vi quang học. Chiều dài của lông nhung và độ sâu của hầm mộ trong ruột kết được đo, và tỷ lệ giữa chiều dài nhung mao với độ sâu hầm mộ (giá trị V / C) đã được tính toán (51).

2.5. Trích xuất DNA và Xây dựng Thư viện. DNA được chiết xuất từ ​​phân bằng cách sử dụng EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) theo quy trình của nhà sản xuất. Chất lượng DNA được xác định bằng cách sử dụng fluorometer (QuantiFluor ™ –ST, Promega Corporation, USA). Các đoạn mồi bắt cặp trong vùng V 3- V4 của rDNA 16s được thiết kế để khuếch đại vùng này và tạo ra các đoạn DNA 466 bp. * mồi chuyển tiếp e là 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG -3-) và mồi ngược là 806R (-5- GGACTACHVGGGTATCTAAT -3-). Mỗi thể tíchPCR là 25 μL, chứa 2,5 μL đệm 10 × PCR, 2 μL dNTP, 1 μL mỗi mồi và 20–30 ng DNA mẫu. * vi, các bộ điều hợp được lập chỉ mục đã được gắn vào phần cuối của amplicon để tạo ra các thư viện trình tự. Các thư viện đã được xác nhận bằng cách sử dụng máy đo lưu huỳnh QuantiFluor ™ và được định lượng thành 10 nmol.

acteoside trong cistanche có thể tăng cường hệ thống miễn dịch

2.6. 16s rRNA Giải trình tự gen và Phân tích cộng đồng vi sinh vật.

Nền tảng Illumina (Illumina MiSeq) đã được sử dụng để lấy dữ liệu đầu cuối ghép nối 2 × 250 bp. Các đơn vị phân loại hoạt động (OTU) thu được bằng cách sử dụng phần mềm Uparse thông qua phân nhóm tiêu chuẩn với độ tương đồng 97%. Thuật toán Bayesianassignment ngây thơ của bộ phân loại RDP được sử dụng để căn chỉnh các OTU với Bản phát hành 13.5 của cơ sở dữ liệu Greengene và thực hiện chú thích loài. Sự đa dạng alpha của hệ vi sinh vật đường ruột được tính toán bằng cách sử dụng chỉ số Shannon và Simpson, và sự khác biệt giữa các nhóm được phân tích bằng phân tích phân biệt tuyến tính Kích thước ảnh hưởng (LEfSe). Sự đa dạng beta được phân tích bằng phân tích tọa độ chính (PCoA) của sự khác biệt giữa Brady và Curtis. PICRUSt2 được sử dụng để ước tính khả năng trao đổi chất của vi sinh vật của hệ vi sinh vật đường ruột [42].

2.7. Phân tích dữ liệu thống kê.

SPSS 20 được sử dụng cho ANOVA một chiều và dữ liệu thử nghiệm được biểu thị bằng X ± S; X cho biết giá trị trung bình và S chỉ ra độ lệch chuẩn.

3. Kết quả

3.1. Ảnh hưởng của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa đối với hình thái ruột kết.

Các hợp chất đại diện (echinacoside và acteoside) và nồng độ của chúng trong chiết xuất Cistanche Tubulosa đã được xác nhận bởi HPLC (Hình S1). Để xác định ảnh hưởng của chiết xuất nước đối với ruột, chúng tôi đã khảo sát chiều dài của nhung mao ruột kết và độ sâu của các chỗ lõm sau khi điều trị bằng chiết xuất nước Cistanche Tubulosa. Các nhung mao ruột kết ở nhóm dùng liều cao và bình thường (A, B, và D) dài hơn và giống như ngón tay, trong khi nhung mao ruột kết ở nhóm mô hình và nhóm liều thấp (C và F) ngắn và các đầu ruột kết. nhung mao bị phá vỡ (Hình 1). Theo đó, chiết xuất nước Cistanche Tubulosa liều cao làm tăng đáng kể chiều dài của nhung mao ruột kết và giảm độ sâu lõm ở những con chuột bị rối loạn đường ruột so với những con chuột trong nhóm mô hình (P <0. 0="" 1).="" ngược="" lại,="" độ="" sâu="" giải="" lao="" không="" khác="" biệt="" có="" ý="" nghĩa="" giữa="" nhóm="" dùng="" liều="" cao="" và="" nhóm="" bình="" thường="" (p=""> 0,05) (Bảng S1). Những kết quả này chỉ ra rằng liều cao của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa có thể cải thiện hình thái bên trong ruột kết của những con chuột bị rối loạn đường ruột.

3.2. Ảnh hưởng của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa đối với sự đa dạng của hệ vi sinh vật sống.

Chúng tôi thực hiện giải trình tự gen 16s rRNA để điều tra nguyên nhân tiềm ẩn của những thay đổi hình thái bên trong ruột kết và điều tra những thay đổi trong hệ vi sinh vật đường ruột sau khi điều trị bằng chiết xuất nước CT. Trung bình 100.553 thẻ hiệu quả, nằm trong khoảng từ 77.734 đến 125.144, được lấy từ dữ liệu thô (Bảng S2). Các thẻ này được nhóm lại thành 4932 OTU (Bảng S3). Sau đó, chúng tôi phân tích sự đa dạng của hệ vi sinh vật đường ruột dựa trên Theseus. Các chỉ số Shannon và Simpson cho thấy không có sự khác biệt giữa nhóm A (bình thường với chiết xuất nước Cistanche Tubulosa) và nhóm B (bình thường không có chiết xuất nước CT) (Hình 2 (a)). * được chỉ ra rằng ở những con chuột không được điều trị cefixime, chiết xuất nước CT có thể không có thêm tác dụng có lợi hoặc có hại nào đối với tính đa dạng của hệ vi sinh vật đường ruột. Tuy nhiên, độ đa dạng ở nhóm mô hình (C) lại có xu hướng giảm so với ở các nhóm bình thường. * Những con chuột được điều trị bằng chiết xuất dung dịch nước CT liều cao và liều trung bình có dấu hiệu phục hồi-đa dạng, trong khi hiện tượng này không được quan sát thấy ở những con chuột được điều trị bằng chiết xuất nước CT liều thấp (Hình 2 (a)). Trong khi đó, PCoA tiết lộ rằng các nhóm bình thường (A và B) và nhóm rối loạn đường ruột được sử dụng các chất chiết xuất từ ​​bột bìm bịp liều cao (D) và liều trung bình (E) có xu hướng có khoảng cách giữa các mẫu ngắn hơn so với những người trong nhóm mô hình và trong nhóm bổ sung chiết xuất CTaqueous liều thấp (F) (Hình 2 (b)). Những kết quả này chỉ ra rằng chất chiết xuất từ ​​CT có thể giúp cải thiện sự đa dạng của hệ vi sinh vật đường ruột ở những con chuột bị rối loạn đường ruột.

3.3. Những thay đổi trong thành phần của hệ vi sinh vật đường ruột được xử lý bằng chiết xuất nước Cistanche Tubulosa.

Các cấu hình thành phần vi sinh vật được so sánh giữa các nhóm khác nhau. Ở cấp độ phylum, sự phong phú tương đối của vi khuẩn Proteobacteria trong nhóm mô hình cao hơn so với các nhóm khác (Hình 3 (a)). Sự gia tăng vi khuẩn Proteobacteria cho thấy rằng hệ vi sinh vật của chuột mô hình đã bị thay đổi bởi cefixime và chiết xuất nước CT có thể có lợi cho hệ vi sinh vật đường ruột vì sự gia tăng tỷ lệ vi khuẩn Proteobacteria là một dấu hiệu trung tâm của hệ vi khuẩn đường ruột bị rối loạn [43–45]. Ngoài ra, ở cấp độ chi, sự phong phú tương đối của Lactobacillus trong nhóm mô hình giảm so với ở nhóm thông thường và nhóm liều cao; tuy nhiên, nó tăng so với nhóm dùng liều trung bình và thấp (Hình 3 (b)). Những kết quả này chỉ ra rằng chiết xuất CTaqueous liều cao có thể thúc đẩy sự phát triển của một số vi khuẩn từ chi Lactobacillus.

Sự khác biệt giữa hệ vi sinh vật giữa các nhóm nghiên cứu được xác định thêm theo phân tích LEfSe. Phân tích này cho thấy rằng, sau khi điều trị bằng cefixime, sự phong phú tương đối của Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteria và Chloroflflexi tăng lên đáng kể, trong khi sự phong phú tương đối của lactobacillus, Eubacterium _ nút _, Pseudono cardiales, và nhóm Christensenellaceae _ R -7_ giảm đáng kể so với những người trong nhóm bình thường (Hình 4 (a)). Đáng chú ý, khi nhóm mô hình được bổ sung chiết xuất nước CT liều cao, sự phong phú tương đối của Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium no datum group, và Pedobacterwere đã tăng lên đáng kể so với những nhóm trong mô hình. Trong khi đó, sự phong phú tương đối của Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG _013, Roseburia, Ruminiclostridium _9, và Candidatus Stoquefifichus giảm đáng kể so với những loài trong nhóm mô hình (Hình 4 (b)).

3.4. Chức năng của hệ vi sinh vật đường ruột liên quan đến việc điều trị bằng chiết xuất nước Cistanche Tubulosa.

Chúng tôi sử dụng phần mềm PICRUSt2 để dự đoán các con đường trao đổi chất của hệ vi sinh vật đường ruột, và nhóm bình thường được sử dụng làm tài liệu tham khảo để phân tích những thay đổi ở các nhóm khác. Dưới điều trị cefixime, sự thoái hóa ethylbenzene tương đối phong phú, sinh tổng hợp các peptit không phải của nhóm gen phụ và chuyển hóa xenobiotics theo con đường cytochrome P450 tăng lên; sau khi điều trị với các chất chiết xuất từ ​​nước Cistanche Tubulosa liều cao và liều trung bình, sự phong phú tương đối của chúng trở lại mức bình thường. Trong khi đó, sự phong phú tương đối của con đường chuyển hóa axit amin cyano giảm xuống khi điều trị bằng cefixime; tuy nhiên, nó đã tăng lên sau khi điều trị bằng chiết xuất dung dịch nước CT liều cao. Hơn nữa, nói chung, những thay đổi trong các con đường chuyển hóa khác nhau sau khi điều trị bằng cefixime là đáng kể so với những người ở nhóm bình thường; tuy nhiên, việc bổ sung chiết xuất nước Cistanche Tubulosa có thể ngăn ngừa những thay đổi quá mức (Hình 5).

4. Thảo luận

Hình thái ruột kết có thể bị thay đổi do tăng trưởng, tiêu hóa và hấp thu, điều hòa miễn dịch và sửa chữa tổn thương ruột [46–50]. Tỷ lệ V / C có thể phản ánh toàn diện tình trạng tiêu hóa của đường ruột và tỷ lệ thuận với khả năng tiêu hóa và hấp thu của đường ruột [51, 52]. Trong nghiên cứu này, sinh thiết nhung mao và sinh thiết lõm và dữ liệu thống kê cho thấy chiết xuất dung dịch nước liều cao có thể cải thiện một phần hình thái khiếm khuyết bên trong ruột kết. Để điều tra cách chiết xuất nước thay đổi hình thái ruột và ảnh hưởng đến hệ vi sinh vật đường ruột, chúng tôi đã nghiên cứu ngược lại những thay đổi trong hệ vi khuẩn đường ruột. Chúng tôi nhận thấy rằng sự phong phú tương đối của Proteobacteria, một dấu hiệu trung tâm của hệ vi khuẩn đường ruột bị rối loạn tăng lên khi điều trị bằng cefixime so với khi không điều trị bằng cefixime. in vitro [56] và có thể thúc đẩy sự phát triển của một số vi khuẩn axit lactic, có thể có lợi cho sức khỏe vật chủ [43]. Song song, Muribaculaceae là những sinh vật có lợi khuẩn có liên quan đến tuổi thọ [57]. Những điều này cho thấy rằng cơ chế mà chất chiết xuất từ ​​nước CT cải thiện hệ vi sinh vật đường ruột có thể là sự thúc đẩy hoặc bảo vệ sự phát triển của các sinh vật probiotic. Một loại vi khuẩn khác đáng được lưu ý là vi khuẩn YE57. Mặc dù chiết xuất CTaqueous liều cao đã thúc đẩy sự phong phú tương đối của vi khuẩn YE57 trong nghiên cứu hiện tại (Hình 4), các nghiên cứu trước đây đã phát hiện ra rằng lượng vi khuẩn này trong ruột bình thường cao hơn so với trong ruột được xử lý bằng bã trà thảo mộc nồng độ cao [ 58] và sự phong phú của nó đã giảm sau khi can thiệp bằng Bacillus licheniformis kết hợp với XOS (xylooligosaccharides) [59]. Vì vậy, vai trò của vi khuẩn này đối với hệ vi sinh vật đường ruột đáng được nghiên cứu thêm. Bên cạnh đó, số lượng mẫu tương đối nhỏ trong nghiên cứu này có thể gây ra kết quả đo dương tính giả và âm tính giả, và nghiên cứu trong tương lai trên các mẫu lớn hơn được đề xuất để xác nhận các dấu hiệu vi khuẩn đã xác định.

Thành phần chiết xuất nước của Cistanche Tubulosa có thể quan trọng vì ảnh hưởng của nó đối với thành phần và những thay đổi chức năng trong hệ vi sinh vật đường ruột của chuột bị rối loạn đường ruột. Tubulosa [60]. Trong những thập kỷ qua, echinacoside đã được chứng minh là có nhiều hoạt tính dược lý, chẳng hạn như tác dụng chống ung thư và bảo vệ thần kinh, cải thiện chức năng tim, giảm tăng lipid máu và tăng đường huyết, và ngăn ngừa bệnh tiểu đường do béo phì và hội chứng chuyển hóa [53, 61–65] . Trên thực tế, chúng tôi đã phát hiện ra những thay đổi trong các con đường trao đổi chất của hệ vi sinh vật đường ruột. * Việc xử lý cefixime dẫn đến sự phong phú của vi khuẩn liên quan đến sự phân hủy ethylbenzene và sinh tổng hợp các peptide không phải của nhóm gen phụ, trong khi các phương pháp điều trị với Cistanche liều cao và liều lượng trung bình Chiết xuất nước Tubulosa có thể làm giảm bớt những thay đổi này, cho thấy rằng chiết xuất này đã điều chỉnh cộng đồng vi khuẩn liên quan đến các chức năng này. Ngoài ra, việc tăng cường làm giàu vi khuẩn liên quan đến con đường chuyển hóa axit cyanoamino trong quá trình điều trị với chiết xuất nước liều cao và giảm làm giàu ở chuột mô hình cho thấy rằng chiết xuất nước Cistanche Tubulosa có thể thúc đẩy sự chuyển hóa của axit cyanoamino. * Những thay đổi trong các chất chuyển hóa có liên quan có thể cung cấp cho chiết xuất nước này các hoạt động dược lý.

thảo mộc cistanche

Mặc dù cơ chế mà chiết xuất nước Cistanche Tubulosa thay đổi thành phần và chức năng của hệ vi sinh vật đường ruột là phức tạp, nhưng có một số manh mối để suy đoán về cơ chế tiềm năng. Người ta đã báo cáo rằng cả vi khuẩn axit lactic và chất chiết xuất từ ​​nước Cistanche Tubulosa đều có thể chống lại stress oxy hóa. Stress oxy hóa xảy ra trong quá trình viêm là một yếu tố phổ biến làm trầm trọng thêm tình trạng rối loạn đường ruột bằng cách làm giảm mạnh tính đa dạng của vi sinh vật đường ruột và thúc đẩy sự gia tăng của các vi khuẩn cụ thể (4). [66–68]; ví dụ, vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae có thể phát triển nhanh chóng do sự thay đổi thành phần của hệ vi khuẩn đường ruột trong điều kiện oxy hóa trong quá trình viêm [69, 70]. Hầu hết các sinh vật sống đều tiến hóa khả năng phòng thủ bằng enzym, phòng thủ chống oxy hóa không enzym và cơ chế sửa chữa để loại bỏ các gốc oxy [71]. Tuy nhiên, các hệ thống chống oxy hóa tự nhiên này nói chung không đủ để ngăn ngừa tổn thương oxy hóa trong cơ thể sống. Một số chất chống oxy hóa tổng hợp bổ sung, bao gồm butylated hydroxyanisole và butylated hydroxytoluene, đã được sử dụng rộng rãi để giảm quá trình oxy hóa, nhưng tính an toàn của chúng còn bị nghi ngờ [72, 73]. Do đó, các nhà nghiên cứu đã chuyển sang tìm kiếm các chất chống oxy hóa an toàn hơn và tự nhiên hơn thu được từ các chất có trong tự nhiên. Do khả năng của cả polysaccharides và vi khuẩn axit lactic để loại bỏ stress oxy hóa, việc xác định cơ chế chống oxy hóa chính xác của chiết xuất nước Cistanche Tubulosa trên hệ vi sinh vật đường ruột cần được nghiên cứu thêm trong tương lai.

Kết luận, chúng tôi phát hiện ra rằng chiết xuất nước Cistanche Tubulosa có thể cải thiện hệ vi sinh vật đường ruột ở những con chuột bị rối loạn đường ruột bằng cách thúc đẩy sự đa dạng, điều chỉnh các thay đổi trao đổi chất và sửa đổi cấu trúc của hệ vi sinh vật đường ruột và những kết quả này có thể cung cấp tài liệu tham khảo cho sự phát triển của các loại thuốc liên quan trong tương lai.

Tính sẵn có của dữ liệu

Thống kê về các đơn vị phân loại hoạt động trong mỗi dữ liệu mẫu được sử dụng để hỗ trợ các phát hiện của nghiên cứu này được bao gồm trong các tệp thông tin bổ sung và dữ liệu giải trình tự rRNA 16s được sử dụng để hỗ trợ các phát hiện của nghiên cứu này sẽ được công bố khi xuất bản.

Xung đột lợi ích

Các tác giả tuyên bố rằng họ không có xung đột lợi ích.

Sự nhìn nhận

Nghiên cứu này được hỗ trợ tài chính bởi các khoản tài trợ từ Quỹ Khoa học Tự nhiên Quốc gia Trung Quốc (81860766).

Nguyên liệu bổ sung

Hình S1: Phát hiện HPLC của chiết xuất nước Cistanche tubulosa. (a) Đỉnh của echinacoside và acteoside trong chất chuẩn xuất hiện ở 5,066 phút và 9,988 phút riêng biệt. (b) * đỉnh của echinacoside và acteoside trong dịch chiết nước xuất hiện ở 5,097 phút và 10,076 phút riêng biệt, và các nồng độ là 236 mg / g và 12,7 mg / g riêng biệt. Bảng S1: chiều dài của nhung mao đại tràng và độ sâu của các hốc. Bảng S2: Thông tin thống kê của dữ liệu giải trình tự rRNA 16S. Bảng S3: thống kê các đơn vị phân loại hoạt động trong mỗi mẫu. (tài liệu bổ sung).

Người giới thiệu

[1] A. Heintz-Butchart và P. Wilmes, "Hệ vi sinh vật đường ruột của con người: các vấn đề chức năng," Xu hướng trong vi sinh vật học, tập. 26, không. 7, trang 563–574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy và E. Elinav, "Hệ vi sinh vật và khả năng miễn dịch bẩm sinh," Nature, vol. 535, không. 7610, trang 65–74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti, và L. Masucci, "Cấy ghép hệ vi sinh vật trong phân: một công cụ tiềm năng để điều trị các bệnh đường sinh sản nữ ở người," Frontiers in Immunology, vol. 10, tr. 2653, 2019.

[4] GA Weiss và T. Hennet, "Cơ chế và hậu quả của chứng loạn khuẩn đường ruột," Khoa học Đời sống Tế bào và Phân tử, tập. 74, không. 16, trang 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma và cộng sự, "Tác dụng giống như chống trầm cảm của chiết xuất từ ​​Pakistanche tubulosa trên những con chuột căng thẳng mãn tính không thể đoán trước thông qua việc phục hồi cân bằng nội môi hệ vi sinh vật đường ruột," Frontiers in Pharmacology, vol. 9, tr. 967, năm 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao, và X. Li, "Totalglycosides từ thân cây Cistanche tubulosa làm giảm bớt các hành vi giống như trầm cảm: tương tác hai chiều của các chất hóa thực vật và hệ vi sinh vật đường ruột, "Phytomedicine, tập. 83, ID bài viết 153471, năm 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu và X. Li, "Sự chuyển hóa đường tiêu hóa của con người của chiết xuất nước cistanche herba invitro: làm sáng tỏ cấu trúc trao đổi chất dựa trên nhận dạng chất chuyển hóa toàn diện trong dịch vị, nước ép ruột, vi khuẩn đường ruột của con người, và các microsome ruột, "Tạp chí Hóa học Nông nghiệp và Thực phẩm, tập. 65, không. 34, trang 7447–7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye và cộng sự, "phenylethanoid chống oxy hóa và glycoside phenolic từ hệ thực vật Picrorhiza Scrophularia," Bản tin Hóa học và Dược phẩm, vol. 52, không. 5, trang 615–617, 2004.

[9] S.-L. Ji, K.-K. Cao, X.-X. Zhao và cộng sự, "Hoạt động chống oxy hóa của glycoside phenylethanoid đối với độc tính thần kinh do glutamate," Khoa học sinh học, Công nghệ sinh học và Hóa sinh, vol. 83, không. 11, trang 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu và cộng sự, "Phenylethanol glycoside từ Cistanche tubulosa cải thiện rối loạn chức năng sinh sản bằng cách điều chỉnh steroid tinh hoàn thông qua CYP 450-3 - HSDpathway," Tạp chí Ethnopharmacology, vol. 251, Bài viết ID112500, 2020.

[11] S.-P. Bạn, L.Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang và T. Liu, "Phenylethanol glycoside từ Cistanche tubulosa ngăn chặn sự hoạt hóa tế bào hình sao ở gan và ngăn chặn sự dẫn truyền của các con đường tín hiệu trong TGF - 1 / smad là chất chống xơ hóa gan tiềm năng", Molecules, vol. 21, không. 1, tr. 102 năm 2016.

[12] S.-P. Bạn, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang, và T. Liu, "Tác dụng phòng ngừa của phenylethanoid glycoside từ Cistanche tubulosa đối với bệnh xơ gan do albumin huyết thanh bò ở chuột," Tạp chí Khoa học Dược phẩm DARU, vol. 23, không. 1, tr. 52 năm 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan, et al., "Đánh giá về các sản phẩm tự nhiên có hoạt tính sinh học từ cây sa mạc Cistanche tubulosa," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, không. 7, trang 675–689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aspire, et al., "Phenylethanoid glycosides từCistanche tubulosa ức chế sự phát triển của tế bào B 16- F10 cả in vitro và in vivo bằng cách cảm ứng quá trình apoptosis qua ty thể- con đường phụ thuộc, "Tạp chí Ung thư, tập. 7, không. 13, trang 1877–1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li và cộng sự, "Polysaccharide Cistanche Desticola gây ra sự hình thành hắc tố trong tế bào hắc tố và giảm stress oxy hóa thông qua việc kích hoạt con đường NRF2 / HO -1," Tạp chí Y học Tế bào và Phân tử, vol. 24, không. 7, trang 4023–4035, năm 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu, và cộng sự, "Cistanches làm giảm bớt rối loạn chức năng nhận thức do sevoflurane gây ra bằng cách điều chỉnh chất chống oxy hóa và chống viêm phụ thuộc PPAR-c ở chuột," Tạp chí Y học Tế bào và Phân tử, vol. 24, không. 2, trang 1345–1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang, et al., "Polysaccharides Cistanche Desticola bảo vệ tế bào PC12 chống lại tổn thương do OGD / RP gây ra," Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, trang 671–680,2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang, và cộng sự, "Các polysaccharid cistanche tăng cường hấp thu echinacoside in vivo và ảnh hưởng đến hệ vi sinh vật đường ruột," International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149, trang 732–740, năm 2020.

[19] NT Williams, "Probiotics," American Journal of Health-System Pharmacy, tập. 67, không. 6, trang 449–458, 2010.

[20] R. Ashraf và NP Shah, "Kích thích hệ thống miễn dịch bằng vi sinh vật probiotic," Các đánh giá quan trọng trong Khoa học Thực phẩm và Dinh dưỡng, vol. 54, không. 7, trang 938–956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber, và MH Mohajeri, "Probiotics và hệ thống miễn dịch đường ruột: điều tiết gián tiếp," Probiotics và protein kháng khuẩn, vol. 10, không. 1, trang 11–21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini, và cộng sự, "Hiệu quả của lactobacillus GG trong việc duy trì sự thuyên giảm của bệnh viêm loét đại tràng," Ali Ohio Pharmacology và 8erapeutics, vol. 23, không. 11, trang 1567–1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz và A. Gil, "* vai trò của vi khuẩn axit lactic probiotic và vi khuẩn bifidobacteria trong việc ngăn ngừa và điều trị bệnh viêm ruột và các bệnh liên quan khác: một đánh giá có hệ thống về các thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên trên người, "BioMed Research International, vol. 2015, Bài báo ID 505878, 15 trang, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa, et al., "Ảnh hưởng của việc bổ sung Lactobacillus rhamnosus hoặc / và lactococcus lactis trong chế độ ăn uống đối với sự tăng trưởng, hệ vi sinh vật đường ruột và phản ứng miễn dịch của cá tráp biển đỏ, Pagrus major," & ShellfifishImmunology, vol. 49, trang 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert, và cộng sự, "Commensal bifidobacterium thúc đẩy khả năng miễn dịch kháng u và tạo điều kiện cho hiệu quả chống PD-L1," Science, vol. 350, không. 6264, trang 1084–1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel, và cộng sự, "Hiệu quả của lợi khuẩn Bifidobacterium được đóng gói ở trẻ sơ sinh là 35624 ở phụ nữ mắc hội chứng ruột kích thích," 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101, không. 7, trang 1581–1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang và cộng sự, "Đặc tính chống oxy hóa của vi khuẩn probiotic," Chất dinh dưỡng, vol. 9, không. 5, tr. 521 năm 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond, và B. Halliwell, "Ức chế sự hình thành xúc tác sắt của các gốc hydroxyl từ superoxide và quá trình peroxy hóa lipid bởi desferrioxamine," Tạp chí Sinh hóa, vol. 184, không. 2, trang 469–472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., "Vi khuẩn probiotic làm giảm sự xâm nhập của vi khuẩn salmonella Typhimurium trong ruột bằng cách cạnh tranh với sắt," Cell Host & Microbe, vol. 14, không. 1, trang 26–37, 2013.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, và cộng sự, "Hai chủng lactobacilli chống oxy hóa như là chế phẩm sinh học đầy hứa hẹn," International Journal of Food Microbiology, vol. 72, không. 3, trang 215–224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, và cộng sự, "Sử dụng superoxide dismutase và catalase sản xuất vi khuẩn axit lactic trong TNBS gây ra bệnh Crohn ở chuột," Tạp chí Công nghệ Sinh học, vol. 151, không. 3, trang 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti, và S. Raimondi, "Sản xuất folate bởi vi khuẩn probiotic," Nutrients, vol. 3, không. 1, trang 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, và cộng sự, "Quản lý vi khuẩn bifidobacteria sản xuất folate giúp tăng cường tình trạng folate ở chuột Wistar," 8e Journal of Nutrition, vol. 137, không. 12, trang 2742–2746, 2007.

[34] L.-X. Wang, K. Liu, DW Gao, và JK Hao, "Tác dụng bảo vệ của hai chủng Lactobacillus Plantarum ở chuột tăng lipid máu," Tạp chí Tiêu hóa Thế giới, vol. 19, không. 20, trang 3150–3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, và cộng sự, "Probiotics ức chế yếu tố hạt nhân-κB và tạo ra các protein sốc nhiệt trong tế bào biểu mô ruột kết thông qua ức chế proteasome," Gastroenterology, vol. 127, không. 5, trang 1474–1487, 2004.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk và RK Rao, "Probiotics cải thiện sự phá vỡ hàng rào biểu mô do hydrogen peroxide gây ra bởi cơ chế phụ thuộc PKC và MAP kinase," Tạp chí Sinh lý học-Tiêu hóa và gan của Mỹ , quyển sách. 294, không. 4, trang G1060 – G1069, 2008.

[37] M. G´omezGuzm´an, M. Toral, M. Romero, et al., "Tác dụng hạ huyết áp của chế phẩm sinh học Các chủng vi khuẩn Lactobacillus ở chuột tăng huyết áp tự phát," Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, không. 11, trang 2326–2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen, andK. Ding, "Một galactoglucan được phân lập từ Cistanchedeserticola YC Ma. Và hoạt tính sinh học của nó trên các chủng vi khuẩn đường ruột," Carbohydrate Polyme, vol. 223, ArticleID 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang và L. Huang, "Phân biệt hóa học và di truyền của cistanche herba dựa trên mã vạch UPC-QTOF / MS và DNA," PLoS One, vol. 9, không. 5, ID bài viết e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou, và cộng sự, "Tác dụng bảo vệ thần kinh của bốn glycoside phenylethanoid trên H2O 2- gây ra quá trình apoptosis trên tế bào PC12 thông qua con đường Nrf2 / ARE", Tạp chí Khoa học Phân tử Quốc tế , quyển sách. 19, không. 4, tr. 1135, năm 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang và cộng sự, "Các glycoside phenylethanoid tự nhiên được phân lập từ Callicarpa kwangtungensis sup ép phản ứng viêm qua trung gian lipopolysaccharide thông qua kích hoạt con đường Keap1 / Nrf2 / HO -1 trong RAW 264.7 tế bào đại thực bào, "Tạp chí Ethnopharmacology, vol. 258, ID bài viết 112857, năm 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffffei, JR Zaneveld, và các cộng sự, "PICRUSt2 để dự đoán các hàm số đo," Nature Biotechnology, vol. 38, không. 6, trang 685–688, năm 2020.

[43] H.-L. Li, L. Lu, X.-S. Wang và cộng sự, "Thay đổi hệ vi sinh vật đường ruột và cấu hình cytokine / chemokine gây viêm trong 5- bệnh viêm niêm mạc ruột do fluorouracil gây ra," Biên giới trong Vi sinh vật học tế bào và nhiễm trùng, vol. 7, tr. 455 năm 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, và cộng sự, "Rối loạn sinh dưỡng đường ruột ở trẻ sinh non trước khi bị viêm ruột hoại tử: một tổng quan hệ thống và phân tích tổng hợp," Microbiome, vol. 5, không. 1, tr. Ngày 31 năm 2017.

[45] N.-R. Shin, TW When và J.-W. Bae, "Proteobacteria: dấu hiệu vi sinh vật của chứng loạn khuẩn trong hệ vi sinh vật đường ruột," Xu hướng Công nghệ sinh học, vol. 33, không. 9, trang 496–503, 2015.

[46] M. de Oliveira Bel´em, C.P Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., "Điều chỉnh hình thái đường ruột do hạn chế chế độ ăn cải thiện tình trạng dinh dưỡng trong quá trình lão hóa của chuột," Experimental Gerontology, vol. 69, trang 85–93,2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco, và J. Neu, "Bổ sung và loại bỏ glutamine: ảnh hưởng đến hình thái ruột non của chuột nuôi nhân tạo," Nghiên cứu Nhi khoa, vol. 52, không. 3, trang 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington và RK Buddington, "Sự thích nghi của đường ruột với sự kết hợp của các chế độ ăn khác nhau có và không có tập luyện sức bền," Tạp chí của Hiệp hội Dinh dưỡng Thể thao Quốc tế, vol. 13, không. 1, tr. 35 năm 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. ´Ubeda và cộng sự, "Rối loạn điều hòa miễn dịch đường ruột do chứng loạn khuẩn gây ra thúc đẩy sự phá vỡ hàng rào và sự di chuyển của vi khuẩn ở chuột bị xơ gan," Hepatology, vol. 70, không. 3, trang 925–938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu và cộng sự, "Ảnh hưởng của nước sắc hetiao Jianping đối với tổn thương và sửa chữa đường ruột ở chuột bị tiêu chảy liên quan đến kháng sinh," Medical Science Monitor, vol. 26, Bài báo IDe921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di và cộng sự, "Tác động của chế độ ăn nhiều chất béo lên tế bào gốc ruột và chức năng hàng rào biểu mô ở chuột cái tuổi trung niên," Molecular Medicine Reports, vol. 21, không. 3, trang 1133–1144, 2020.

[52] BL Bivolarski và EG Vachkova, "Các sự kiện hình thái và chức năng liên quan đến cai sữa ở thỏ," Tạp chí Sinh lý Động vật và Dinh dưỡng Động vật, tập. 98, không. 1, trang 9–18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan và M.-H. Su, "* e tác dụng hạ cholesterol máu của chiết xuất Cistanchetubulosa, một loại thuốc thô truyền thống của Trung Quốc, trên chuột," 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, không. 6, trang 1125–1138, 2009.

[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein, và JI Gordon, "Vi khuẩn đường ruột của con người liên quan đến béo phì," Nature, vol. 444, không. 7122, tr. 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Kim, YM Kwon, I.-S. Kim và cộng sự, "Ảnh hưởng của việc bổ sung rong biển nâu laminaria japonica lên nồng độ IgG, triglyceride và cholesterol trong huyết thanh, và thành phần hệ vi sinh vật đường ruột ở chuột," Frontiers in Nutrition, vol. 5, tr. Ngày 23 năm 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang, et al., "Chiết xuất, tinh chế, đặc tính và các hoạt động chống oxy hóa của polysaccharid từ Cistanche tubulosa," International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, trang 448–458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. ¨Ozt¨urk, S. Yıldırım, vàT. Demircan, "Hệ vi sinh vật và tuổi thọ: rất nhiều Muribaculaceae liên quan đến tuổi thọ trong ruột của loài gặm nhấm Spalax leucodon sống lâu", OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24, không. 10, trang 592–601, năm 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang, và cộng sự, "Ảnh hưởng của bã trà thảo mộc lên men đối với đặc điểm hệ vi sinh vật đường ruột của bò cái hậu bị Holstein khi chịu áp lực nhiệt," Frontiers in Microbiology, vol. 11, tr. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu, et al., "Bổ sung đường uống kết hợp Bacillus licheniformis zhengchangsheng và xylooligosaccharides cải thiện chứng béo phì do chế độ ăn nhiều chất béo gây ra và điều chỉnh hệ vi sinh vật đường ruột ở chuột," BioMed Research International, vol . 2020, ID Bài viết 9067821, 17 trang, 2020.

[60] Y. Jiang và P.-F. Tu, "Phân tích các thành phần hóa học trong các loài cistanche," Tạp chí Sắc ký A, tập. 1216, không. 11, trang 1970–1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu, và cộng sự, "Echinacoside thúc đẩy quá trình tái tạo xương bằng cách tăng tỷ lệ OPG / RANKL trong MC3T 3- E1cells," Fitoterapia, vol. 83, không. 8, trang 1443–1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang và J. Qin, "Ảnh hưởng của echinacoside đối với xơ hóa thận bằng cách ức chế con đường tín hiệu TGF - 1 / Smads trong mô hình chuột DB / DB về bệnh thận do đái tháo đường , "Thiết kế, Phát triển và 8 liệu pháp Thuốc, vol. 11, trang 2813–2826, 2017.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun, và X. Liu, "Tác dụng hạ đường huyết và hạ lipid máu của Cistanche tubulosa ở chuột DB / DB tiểu đường loại 2," Tạp chí Ethnopharmacology, vol. 150, không. 3, trang 935–945, 2013.

[64] X.-x. Bảo, H.-h. Ma, H. Ding, W.-w. Li và M. Zhu, "Tối ưu hóa sơ bộ công thức thuốc thảo dược Trung Quốc dựa trên tác dụng bảo vệ thần kinh trên mô hình chuột mắc bệnh Parkinson do rotenone," Tạp chí IntegrativeMedicine, tập. 16, không. 4, trang 290–296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li và F. Li, "Thiết lập mô hình thực nghiệm đồng thời về loãng xương kết hợp với bệnh Alzheimer ở ​​chuột và tác dụng kép của echinacoside và acteoside từ Cistanche tubulosa," Tạp chí Ethnopharmacology, vol. 257, ID bài viết 112834, năm 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers, vàB. C. Berks, "* e cơ sở di truyền của hô hấp tetrathionate ở Salmonella Typhimurium," Molecular Microbiology, vol. 32, không. 2, trang 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter, và cộng sự, "Viêm ruột cung cấp chất nhận điện tử hô hấp cho salmonella," Nature, vol. 467, không. 7314, trang 426–429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier, et al., "Nitrat có nguồn gốc từ vật chủ thúc đẩy sự phát triển của E. coli trong ruột bị viêm," Science, vol. 339, không. 6120, trang 708–711, 2013.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham, et al., "Viêm qua trung gian vật chủ làm gián đoạn hệ vi sinh vật đường ruột và thúc đẩy sự phát triển quá mức của Enterobacteriaceae," Cell Host & Microbe, vol. 2, không. 2, trang 119–129, 2007.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker, và cộng sự, "Salmonellaenterica serovar Typhimurium khai thác chứng viêm để cạnh tranh với hệ vi sinh vật đường ruột," PLoS Biology, vol. 5, không. 10, trang e244–2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav, vàJ. Prajapati, "Probiotics như là chất chống oxy hóa tiềm năng: một đánh giá có hệ thống," Tạp chí Hóa học Nông nghiệp và Thực phẩm, tập. 63, không. 14, trang 3615–3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel, và cộng sự, "Chất chống oxy hóa hydroxyanisole butyl hóa làm tăng tác dụng độc hại của propylparaben trong tế bào động vật có vú được nuôi cấy," Food andChemical Toxicology, vol. 72, trang 195–203, 2014.

[73] RS Lanigan và TA Yamarik, "Báo cáo cuối cùng về đánh giá an toàn của BHT," International Journal of Toxicology, vol. 21, không. 2, trang 19–94, 2002.