Nghiên cứu thực nghiệm về tác dụng bảo vệ của Cistanche Glycosides tiền điều trị đối với chấn thương do thiếu máu cục bộ ở thận do tái tưới máu

để biết thêm thông tin: ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Khoa phẫu thuật, Bệnh viện huyện Bảo Sơn về Y học phương Tây và Trung Quốc cổ truyền tổng hợp, Thượng Hải 201900)

【Trừu tượng】Mục tiêu Thiết lập mô hình hồi sức sốc xuất huyết ở chuột và quan sát hiệu quả bảo vệ củaCistancheglycosid toàn phần (CTG) trên tổn thương do thiếu máu cục bộ do tái tưới máu ở thận. Phương pháp SD chuột được chia ngẫu nhiên thành 3 nhóm: nhóm mổ giả, nhóm thí nghiệm (nhóm hồi sức chống sốc), nhóm điều trị CTG, mỗi nhóm 10 con chuột. Nhóm thực nghiệm và nhóm điều trị CTG đã thiết lập các mô hình tái tưới máu do thiếu máu cục bộ ở thận. Những con chuột trong nhóm điều trị được tiêm CTG 400 mg / kg vào màng bụng, và nhóm thí nghiệm và nhóm phẫu thuật giả được tiêm nước muối. Hàm lượng cơ tim trong máu, hàm lượng nitơ urê và cystatin C của mỗi nhóm được phát hiện để xác định chức năng thận, phân tích tế bào dòng chảy được sử dụng để phát hiện tỷ lệ apoptosis của tế bào thận; xét nghiệm miễn dịch liên kết enzym (ELISA) được sử dụng để phát hiện liên kết nhiễm sắc thể X ở chuộtquả thậnmô Biểu hiện của chất ức chế liên kết X của protein apoptosis (XIAP). Kết quả So sánh nhóm CTG với nhóm thí nghiệm, Cr, BUN và Cystatin C trong máu đều giảm đáng kể (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchecó tác dụng bảo vệ đối với tổn thương do thiếu máu cục bộ do tái tưới máu ở chuột, có thể liên quan đến việc thúc đẩy sự biểu hiện của XIAP.

[Từ khóa] quả thận; chấn thương do thiếu máu cục bộ-tái tưới máu; tổng số glycoside của cistanche; chất ức chế liên kết nhiễm sắc thể của protein apoptosis; sự chết tế bào; con chuột

[Số phân loại thư viện Trung Quốc] R692 [Mã đánh dấu tài liệu] A [Số bài viết] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Click để Cistanche EXTRACT POWDER bổ thận

Tổn thương do thiếu máu cục bộ-tái tưới máu (I / R) là một hiện tượng sinh lý bệnh phổ biến của tổn thương thận trong quá trình sốc xuất huyết, chấn thương nặng,quả thậncấy ghép, vàquả thậnphẫu thuật khối u. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng apoptosis là một phần quan trọng của tổn thương chức năng thận do tổn thương I / R (1). Chất ức chế liên kết X của protein tự chết (XIAP) là một trong những chất ức chế quá trình tự chết nội sinh mạnh nhất được tìm thấy cho đến nay (2). Có rất ít nghiên cứu về tác dụng chống apxe của XIAP trong mô thận sau chấn thương I / R.Cistanchetổng glycoside (CTG) là một hợp chất tổng glycoside phenylethanoid được chiết xuất từCistanche, có chức năng sinh học đa dạng. Có rất ít nghiên cứu về khả năng bảo vệ thận của nó sau chấn thương I / R. . Nghiên cứu này đã thiết lập một mô hình hồi sức sốc xuất huyết ở chuột và thiết lập một mô hình chấn thương I / R toàn thân để khám phá tác dụng bảo vệ của tổng số glycoside của khối thoát vị thịt trênquả thậnkhỏi chấn thương I / R và khám phá cơ chế có thể có của nó.

1Vật liệu và phương pháp

1.1 Động vật và phân nhóm

Có 30 con chuột đực sạch sẽ và khỏe mạnh do Trung tâm Thực nghiệm của Đại học Y học Cổ truyền Trung Quốc Thượng Hải cung cấp, có trọng lượng (320 ± 30) g. Chia ngẫu nhiên thành 3 nhóm: nhóm mổ giả, nhóm thí nghiệm (nhóm hồi sức chống sốc), nhóm CTG, mỗi nhóm 10 con chuột.

1.2 Thuốc thử và dụng cụ chính

Tổng số glycoside của gạo nếp (số lô: 20081516) được mua từ Công ty TNHH Dược phẩm Chiết Giang Hàng Châu Xinghui Tianli; natri pentobarbital, Hoechst 33258, và propionyl iodide được mua từ Sigma, Hoa Kỳ; Thuốc ức chế quá trình chết theo liên kết nhiễm sắc thể X của chuột Bộ xét nghiệm protein (XIAP) và Bộ ELISA được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Kemin Thượng Hải; đầu đọc vi tấm được mua từ Công ty Thermo, Hoa Kỳ; máy dò sinh lý đa thông số được mua từ Công ty Nihon Kohden, Nhật Bản; máy đo lưu lượng tế bào BDFACSAria được mua từ Công ty -Dickinson, Hoa Kỳ; 24G trocar được mua từ Công ty thiết bị y tế Shandong Jierui.

1.3 Phương pháp thực nghiệm

1.3.1 Chuẩn bị mô hình động vật Chuột SD được nhịn ăn 12h trước khi thí nghiệm và được gây mê bằng cách tiêm vào màng bụng natri pentobarbital (50 mg / kg).

Chuột được cố định ở tư thế nằm ngửa, rạch 3 cm ở bụng dưới bên trái, tách động mạch đùi, cấy trocar 24G, nối máy dò sinh lý đa thông số. Huyết áp trung bình của chuột được đo là (113 ± 15) mmHg, heparin ống tiêm 20 ml Huyết áp đã giảm xuống 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) bằng thiết bị ba chiều kết nối hóa học. Cơn sốc được coi là đã bắt đầu và huyết áp được duy trì trong 90 phút. Thể tích máu chảy ra là (13 ± 3) ml, và sau đó máu tự thân trong ống tiêm Tái truyền chậm mất khoảng 30 phút và huyết áp trở về hơn 90% giá trị cơ bản và việc hồi sức được coi là thành công (3) . Đã rút trocar, thắt động mạch đùi, khâu vết mổ. Sau khi chuột tỉnh táo, chúng được đưa về chuồng để quan sát và chúng được tự do ăn uống. 24 giờ sau khi hồi sức, tiêm vào màng bụng natri pentobarbital (50 mg / kg) để gây mê, mở ổ bụng, lấy 5 ml máu từ tĩnh mạch chủ dưới, chuột được hiến tế ngay lập tức, thận trái và phải được lấy ra. sử dụng.

1.3.2 Phương pháp dùng thuốc Nhóm điều trị CTG được cho uống CTG 2 giờ trước khi chuột hút máu và tiêm vào khoang bụng với liều 400 mg / kg. Nhóm thí nghiệm được tiêm trong màng bụng 3 ml nước muối sinh lý thông thường 2 giờ trước khi lấy máu; nhóm phẫu thuật giả chỉ tiến hành gây mê, mổ bụng và tách động mạch đùi, đặt trocar, khâu vết mổ nhưng không cầm máu hay hồi sức. Những người còn lại giống như nhóm thực nghiệm.

1. 4 chỉ số và phương pháp phát hiện

1.4.1 Xác định hàm lượng BUN, Cr và cystatin C trong máu Cystatin C là một dấu hiệu nội sinh của sự thay đổi mức lọc cầu thận. Khi chức năng thận bị suy giảm, mức lọc cầu thận giảm, nồng độ cystatin C trong máu có thể tăng lên 10 lần và độ chính xác chẩn đoán của cystatin C tốt hơn đáng kể so với nhiễm độc cơ huyết thanh. Hàm lượng BUN, Cr và Cystatin C trong máu đã được gửi đến phòng thí nghiệm của bệnh viện chúng tôi để xác định.

1.4.2 Xác định tốc độ chết của tế bào Phương pháp đo tế bào dòng chảy được sử dụng để phát hiện tốc độ chết của tế bào thận. Lấy một quả thận và cắt nhỏ bằng một lưỡi dao, thêm một ít PBS và chuyển nó vào một ống nghiệm. Thêm 0. 3 phần trăm trypsin để phân hủy trong nồi cách thủy 37 P, ủ trong 2 0 phút, khi chất trong ống nghiệm trở nên đục, thêm PBS 2 lần để ngừng phân hủy, lọc bằng lưới nylon 3 0 0 mesh, loại bỏ tạp chất và ly tâm trong máy ly tâm nhiệt độ thấp. Bán kính ly tâm 8 cm, 12, 000 vòng / phút, ly tâm trong 5 phút, loại bỏ phần nổi phía trên, điều chỉnh nồng độ tế bào thành 1 ~ 1,5 x 106 / ml, lấy 0,4 ml huyền phù tế bào ở trên và thêm 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil / ml), tối 37 t: ủ trong nồi cách thủy, đậy nắp ống nghiệm, tráng bằng PBS sau 5 phút, ly tâm bán kính 8 cm, 12 000 r / min, ly tâm trong 5 min , loại bỏ phần nổi phía trên, Rửa lại theo cách tương tự. Thêm 0,4 ml PI, nhuộm trong 5 phút và phát hiện tỷ lệ phần trăm tế bào bình thường, hoại tử và tế bào chết trong thận. Theo ái lực của hai thuốc nhuộm của các loại tế bào, người ta biết rằng chỉ có các tế bào có màu PI là tế bào chết, chỉ có các tế bào có màu Hoechst 33258 là tế bào apoptotic và cả hai đều không có màu là tế bào sống bình thường.

1.4.3 Xét nghiệm miễn dịch liên kết enzym (ELISA) để phát hiện biểu hiện XIAP trong mô thận chuột Lấy từng nhóm thận và xử lý các mô thận tươi bằng dịch ly giải mô. Ly tâm trong máy ly tâm nhiệt độ thấp ở 12 000 vòng / phút trong 5 phút. Lấy phần nổi phía trên và thao tác theo hướng dẫn của bộ kit XIAP ELISA Kit. Đại học Giao thông Thượng Hải Fenghe Technology Co., Ltd. chịu trách nhiệm thử nghiệm.

1.5 Xử lý thống kê

Dữ liệu thực nghiệm của mỗi nhóm được thể hiện bằng Yuan đất s và phần mềm SPSS 17. 0 được sử dụng để phân tích thống kê. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche có thể cải thiện chức năng tình dục

2 kết quả

Các chỉ số chức năng thận Giá trị Cr, BUN và Cystatin C có ý nghĩa thống kê (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Bảng 1 Chỉ số chức năng thận Giá trị Cr, BUN và Cystatin-C của chuột trong mỗi nhóm Tab. 1 Chỉ số chức năng thận trong ba nhóm

So với nhóm hoạt động giả mạo, * P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Cơ chế của tổn thương thận do thiếu máu cục bộ-tái tưới máu rất phức tạp. Đây là một quá trình bệnh lý xảy ra theo nhiều cách dưới tác động của nhiều yếu tố khác nhau, chẳng hạn như quá tải ion canxi, tổn thương peroxy hóa lipid, chết và hoại tử tế bào, trong đó apoptosis tế bào phụ thuộc caspase là một trong những dạng chính của tế bào biểu mô ống thận. tổn thương do chấn thương thận I / R gây ra (4). Chất ức chế thuộc họ protein apoptosis (IAP) là chất ức chế caspase nội sinh duy nhất được tìm thấy trong tế bào động vật có vú cho đến nay, có thể ngăn chặn hiệu quả sự xuất hiện của quá trình apoptosis của tế bào. XIAP là thành viên có tác dụng ức chế caspase mạnh nhất trong họ IAP. Nó có thể ức chế quá trình chết rụng của tế bào do nhiều kích thích bệnh lý gây ra và đóng vai trò bảo vệ các cơ quan bị tổn thương (5).

Hiện nay, hầu hết các phương pháp thiết lập mô hình động vật bị tổn thương I / R thận là cắt bỏ một quả thận và kẹp bên còn lại của cuống thận hoặc động mạch thận ⑹ để mô phỏng tình trạng ghép thận. Nghiên cứu này sử dụng mô hình hồi sức / sốc xuất huyết, gần với quá trình sinh lý bệnh của quá trình tái tưới máu do thiếu máu cục bộ toàn thân xảy ra trong sốc chấn thương lâm sàng. Trong thí nghiệm này, nồng độ BUN, Cr và cystatin C trong máu của chuột SD Cải thiện đáng kể, chức năng thận bị suy giảm nghiêm trọng, là mô hình động vật lý tưởng để nghiên cứu chấn thương thận I / R.

CTG là một thành phần dược liệu quan trọng của thuốc đông y cô gái thịt dán. Bột cà tím, có tính ấm, vị ngọt và mặn, trở lại kinh mạch thận và ruột già và ban đầu được chứa trong Thần nông của Materia Medica. “Kinh Bến”: Chính ngũ lao và bảy thương, dưỡng trung, dưỡng ngũ tạng, cường âm, dưỡng tinh, ích khí;Cistancheđã được sử dụng ở đất nước tôi trong hai nghìn năm. Nó đứng số 1 trong các công thức tăng cường sức mạnh trong quá khứ và đứng thứ 2 trong các công thức bổ dưỡng sau nhân sâm. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằngCistanchecó thểcải thiện chức năng tình dục, điều chỉnh nội tiết thần kinh, vàcải thiện chức năng miễn dịch. , Chất chống oxy hóa, thúc đẩy chuyển hóa vật chất, bảo vệ cơ tim thiếu máu cục bộ và các chức năng khác. Là dược liệu chính của cây nhuyễn họ thịt, CTG có nhiều chức năng. Nghiên cứu trên các mô hình tái tưới máu do thiếu máu cục bộ não cho thấy CTG có thể làm giảm các axit amin kích thích trong mô não sau khi tái tưới máu do thiếu máu cục bộ và bảo vệ mô não của chuột SD (7). CTG có mộttác dụng chống oxy hóatrên mô chuột và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với tình trạng thiếu oxy não cấp tính ở chuột và tổn thương cơ tim ở chuột (9). CTG có thể cải thiện đáng kể hành vi thần kinh củaParkinsonmô hình chuột và ức chế sự suy giảm số lượng tế bào thần kinh dopamine trong chất nền (9). Bằng cách tăng cường hoạt động của các enzym thu dọn gốc tự do, ngăn chặn quá trình peroxy hóa lipid, ức chế sự lắng đọng của peptide B-amyloid trong não và ức chế quá trình apoptosis của tế bào não, CTG cải thiện đáng kể khả năng học tập củaBệnh Alzheimerchuột gây ra bởi peptide B-amyloid Khả năng ghi nhớ w. Nghiên cứu này cho thấy rằng sau khi áp dụng tiền xử lý CTG, hàm lượng BUN, Cr và cystatin C trong máu của chuột giảm đáng kể, và tổn thương thận cũng giảm. CTG làm tăng protein XIAP ức chế quá trình apoptosis trong mô thận bị tổn thương I / R và quá trình apoptosis của tế bào bị chặn. Sự xuất hiện của cái chết có tác dụng bảo vệ những tổn thương ở thận.