2 phương pháp thử nghiệm

2.1 Phân tích dược lý mạng

2.1.1 Hoạt chất của Cistanche Deserticola

Trên cơ sở các nghiên cứu hiện có [7, 22], "Echinacoside", "Verbascoside", "Cistanoside A", "Tubuloside A", "Isoacteoside", "2-Acetylacteoside" Và "Tubuloside B" đã được chọn làm thành phần hoạt tính sinh học để phân tích. Tìm dữ liệu cấu trúc hóa học ba chiều của bảy thành phần trên thông qua Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) và lưu chúng ở định dạng sdf.

2.1.2 Dự đoán và sàng lọc các mục tiêu tiềm năng

Nhập tệp cấu trúc ba chiều củathành phần hoạt chất vào cơ sở dữ liệu PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Chọn "chỉ mục tiêu protein của con người" làm loài mục tiêu và giữ các tùy chọn khác làm mặc định để thu được dữ liệu tương ứng của các thành phần khác nhau. Mục tiêu mục tiêu tương ứng.

Cơ sở dữ liệu UniProt (//www.uniprot.org/) đã được sử dụng để lấy thông tin về tên protein và tên gen tương ứng với từng mục tiêu. Hợp nhất các điểm mục tiêu tương ứng với 7 thành phần.

Trong cơ sở dữ liệu GeneCards (https://www.genecards.org/), sử dụng “bệnh viêm ruột” làm từ khóa để tìm kiếm các gen liên quan đến bệnh viêm ruột và sắp xếp kết quả tìm kiếm.

Thuốc bổ sung Cistanche Thuốc bổ sung hỗ trợ chống viêm PhGs75% Ech 30% Đạo luật 12%

2.1.3 Tương tác protein-protein (PPI)

Xây dựng mạng lưới Sử dụng jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) để vẽ biểu đồ Venn trực tuyến nhằm đạt được giao điểm giữa các mục tiêu hoạt chất Cistanche Deserticola và các mục tiêu IBD. Tải các mục tiêu giao lộ thu được lên cơ sở dữ liệu Chuỗi để phân tích sàng lọc PPI. Tải xuống tệp TSV của mạng PPI, nhập tệp đó vào Cytoscape 3.8.0, tính toán giá trị độ của mạng tương tác protein, sau đó làm đẹp sơ đồ mạng PPI dựa trên giá trị độ.

2.1.4 Bản thể gen (GO)

Làm giàu chức năng và phân tích con đường làm giàu từ Bách khoa toàn thư về gen và bộ gen (KEGG) của Kyoto đã được thực hiện bằng cơ sở dữ liệu DAVID (//david.ncifcrf.gov/) để xác định mục tiêu về tác dụng bảo vệ của hoạt chất Cistanche Deserticola trên IBD. Phân tích GO được thực hiện trên các điểm và sau đó cơ sở dữ liệu DAVID được sử dụng để tiến hành phân tích làm giàu con đường KEGG trên các mục tiêu trong đó các thành phần hoạt chất của Cistanche Deserticola đóng vai trò bảo vệ bệnh IBD.

2.1.5 Xây dựng mạng lưới "con đường-thành phần-mục tiêu-hoạt chất" Cistanche Deserticola

Các thành phần hoạt chất của Cistanche Deserticola, các mục tiêu giao nhau của các thành phần hoạt chất Cistanche Deserticola và IBD cũng như các con đường được làm giàu bởi KEGG đã được sử dụng để xây dựng mạng lưới con đường thành phần hoạt chất-mục tiêu-con đường.

2.2 Xác nhận mô hình động vật

2.2.1 Xây dựng mô hình động vật

Chuột BALB/c đực loại SPF (5 ~ 8 tuần, 18 ~ 21 g) đã được sử dụng, do Trung tâm Kiểm nghiệm Thực phẩm Y tế của Trường Khoa học và Nghệ thuật Ứng dụng, Đại học Liên minh Bắc Kinh cung cấp [Số Giấy phép Sử dụng Động vật Thí nghiệm: SYXK (Bắc Kinh) ) 2017-0038], Chúng được nuôi trong phòng động vật có cấp độ SPF với nhiệt độ (23±2) độ , độ ẩm tương đối từ 50% đến 70% và 12 giờ tiếp xúc với ánh sáng huỳnh quang xen kẽ ngày và đêm . Các quy trình thí nghiệm trên động vật đều được Phòng thí nghiệm Động vật của Trung tâm Kiểm nghiệm Thực phẩm Y tế, Trường Khoa học và Nghệ thuật Ứng dụng, Đại học Liên minh Bắc Kinh phê duyệt. Sau khi cho ăn thích nghi trong 3 ngày, 20 con chuột được chia ngẫu nhiên thành 4 nhóm theo trọng lượng cơ thể, mỗi nhóm 5 con. ①Nhóm đối chứng (CZ): uống nước vô trùng thoải mái và cho uống nước vô trùng trong 7 ngày liên tục; ②Nhóm kiểm soát DSS

(DZ): Miễn phí uống dung dịch DSS 3% pha hàng ngày trong 7 ngày liên tục; ③ Nhóm liều thấp tổng glycoside của Cistanche Deserticola (LZ) (nồng độ lỏng: 0.1 g/mL): Uống miễn phí dung dịch DSS 3% được pha hàng ngày trong 7 ngày; , súc miệng trong 7 ngày liên tục; ④ Nhóm liều cao Cistanche Deserticola tổng số glycoside (HZ) (nồng độ chất lỏng 0.4 g/

mL): Uống thoải mái dung dịch DSS 3% mới pha hàng ngày và cho dung dịch qua ống truyền trong 7 ngày liên tiếp. Sau 7 ngày làm mô hình liên tục, họ bị nhịn ăn trong 12 giờ và sau đó hy sinh do trật khớp cổ tử cung. Hồng cầu gà được tiêm vào màng bụng 4 giờ trước khi thực hiện. Ngay sau khi hành quyết, nhãn cầu được lấy ra để lấy máu. Dịch phúc mạc được rút ra và khoang bụng được mở ra. Chiều dài của đại tràng được đo và lá lách của chuột, nút Peyer và các cơ quan khác đã được cắt bỏ.

Bổ sung Cistanche Bổ sung hỗ trợ chống viêm

2.2.2 Chỉ số hoạt động bệnh (DAI)

Những con chuột được cân trước khi cho vào dạ dày vào một thời điểm cố định hàng ngày và quan sát trạng thái tinh thần cũng như đặc tính phân của chuột. Máu huyền bí trong phân được đo và cho điểm tương ứng. Các tiêu chuẩn tính điểm được thể hiện trong Bảng 1. Điểm DAI=(điểm trọng lượng cơ thể + điểm đặc tính trong phân + điểm máu ẩn trong phân)/3 (1)

Bảng 1 Tiêu chí chấm điểm của DAI

2.2.3 Phát hiện đường dẫn tín hiệu miễn dịch PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực (qRT-PCR)

Lá lách của chuột được thu thập, cắt thành các khối mô 0,5 cm và ngâm trong dung dịch ổn định RNA mô để bảo quản. Lấy mô ra và cắt thành từng miếng, thêm dung dịch chiết RNA và nghiền thành từng miếng để chiết ra RNA tổng số. Sau khi sao chép ngược và khuếch đại PCR, người ta đã phát hiện thấy sự kích hoạt của hai con đường truyền tín hiệu miễn dịch quan trọng là mTOR và TGF- ở lá lách của chuột. Trình tự mồi được sử dụng trong qRT-PCR được thể hiện trong Bảng 2.

Bảng 2 Bảng trình tự mồi