Chiết xuất của Cistanche Deserticola có thể đối kháng với sự phát triển miễn dịch và kéo dài tuổi thọ ở chuột Senescence-Accelerated Mouse Prone 8 (SAM-P8)

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

Chuột 8 con (SAM-P8) dễ bị lão hóa, được chấp nhận rộng rãi như một mô hình động vật để nghiên cứu các loại thuốc chống lão hóa và lão hóa, đã được sử dụng để kiểm tra tác dụng của việc bổ sung chế độ ăn uống với chiết xuất từ ​​Cistanche Desticola (ECD) đã được sử dụng rộng rãi trong y học cổ truyền Trung Quốc vì nhận thấy khả năng thúc đẩy chức năng miễn dịch ở người cao tuổi. Những con chuột đực SAM-P8 tám tháng tuổi được điều trị ECD bằng đường uống hàng ngày trong 4 tuần. Kết quả cho thấy rằng việc bổ sung l50 mg / kg và 450 mg / kg ECD trong chế độ ăn uống có thể kéo dài thời gian sống được đo bằng phân tích Kaplan-Meier phụ thuộc vào liều lượng. Việc bổ sung chế độ ăn uống cho chuột SAM-P8 trong 4 tuần với 100.500 và 2500 mg / kg ECD đã được chứng minh là làm tăng đáng kể cả tế bào T ngây thơ và tế bào giết tự nhiên trong quần thể tế bào máu và lá lách. Ngược lại, tế bào T nhớ ngoại vi và cytokine tiền viêm, IL -6 trong huyết thanh, đã giảm đáng kể ở những con chuột ăn 100 và 500 mg / kg ECD hàng ngày. Ngoài ra, Sca -1 tế bào dương tính, các tổ chức sinh sản được công nhận củangoại vi ngây thơTế bào T, được khôi phục song song. Kết quả của chúng tôi cung cấp hỗ trợ thực nghiệm rõ ràng cho các nghiên cứu quan sát lâm sàng lâu dài cho thấy rằngCistancheDesticola có tác dụng đáng kể trong việc kéo dài tuổi thọ và cho thấy điều này đạt được bằng cách đối khángsự phát sinh miễn dịch.

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

1. Giới thiệu

Cistanchesa mạc, một trong những sản phẩm chăm sóc sức khỏe / thuốc thảo dược truyền thống Trung Quốc phổ biến nhất, đã được mô tả trong một số dược thảo lịch sử của Trung Quốc là có đặc tính chống lão hóa. Do đó, nó đã được sử dụng rộng rãi ở Trung Quốc để điều trị các rối loạn khác nhau liên quan đến tuổi tác bao gồm sa sút trí tuệ do tuổi già, bất lực, vô sinh, nhiễm trùng mãn tính và rối loạn tạo máu ở người cao tuổi [1]. Các phương pháp tiếp cận hóa học hiện đại đã cho phép phân lập được hai loại hợp chất chính là phenylethanoid glycoside và oligosaccharides như là những thành phần hoạt động chính của Cistanche Desticola [1]. Trong thập kỷ qua, Cistanche Desticola và các chất chiết xuất của nó đã được nghiên cứu chuyên sâu và cho thấy có khả năng bảo vệ tế bào thần kinh khỏi tổn thương do độc tố thần kinh gây ra [2], ức chế carbon tetrachloride gây ranhiễm độc gan[2], và thúc đẩy sự phục hồi của các tế bào tủy xương khỏi tổn thương do bức xạ Co60 gây ra [3]. Nó cũng đã được chứng minh là có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa và chống lão hóa [4]. Tuy nhiên, liệu Cistanche Desticola có thể tăng tuổi thọ hay không và các cơ chế phân tử cơ bản [3] liên quan đến các đặc tính chống lão hóa của nó là gì vẫn chưa được kiểm tra nghiêm ngặt.

Tăng sinh miễn dịch, tức là sự thay đổi của hệ thống miễn dịch theo tuổi tác tạo nền tảng làm tăng tính nhạy cảm với các bệnh nhiễm trùng, ung thư, bệnh thoái hóa thần kinh và các bệnh tự miễn ở người cao tuổi đã được ghi nhận [5]. Các can thiệp trị liệu, chẳng hạn như hạn chế calo [6] và bổ sung vitamin E, đã được báo cáo là có hiệu quả trong việc trì hoãn sự tiến triển của quá trình phát sinh miễn dịch và do đó làm giảm tỷ lệ mắc một số bệnh liên quan đến tuổi tác cũng như kéo dài tuổi thọ của cả người và động vật gặm nhấm. [7, 8]. Tuy nhiên, các nghiên cứu trong lĩnh vực này rất phức tạp bởi thực tế là lão hóa có liên quan đến nghịch lý là đồng thời suy giảm miễn dịch và viêm mãn tính [9]. Điều này có nghĩa là kích thích đơn thuần tăng sinh tế bào lympho hoặc chống viêm không đại diện cho các can thiệp điều trị lý tưởng trong việc đối phó với lão hóa và các tình trạng liên quan đến tuổi tác [10]. Do đó, việc tìm kiếm các can thiệp y tế có khả năng ngăn ngừa hoặc giảm bớt các tình trạng liên quan đến tuổi tác bao gồm nhiễm trùng, ung thư, bệnh tự miễn dịch, xơ vữa động mạch và các bệnh thoái hóa thần kinh là những nguyên nhân hàng đầu gây tử vong và tàn tật, và việc sửa chữa các khiếm khuyết của hệ thống miễn dịch phải đi kèm với việc ức chế phản ứng viêm. Chuột tăng tốc độ lão hóa [11] là một mô hình chuột lai tạo, có nguồn gốc từ chủng AKR / J, được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu về lão hóa. Con P8 (SAM-P8) của những con chuột này có tuổi thọ ngắn hơn rõ rệt khi so sánh với con R1 (SAM-R1), cũng cho thấy quá trình lão hóa chậm hơn [12]. Song song với sự lão hóa sớm của chúng, chuột SAM-P8 cũng có biểu hiện tăng lão hóa thần kinh, tăng sinh miễn dịch và liên quan đến tuổi táctạo máuthâm hụt gần giống với đặc điểm lão hóa điển hình của con người [13, 14]. Phân tích các cơ chế cơ bản gây ra quá trình lão hóa nhanh và các rối loạn liên quan đến tuổi tác chỉ ra rằng rối loạn chức năng ty thể [15], stress oxy hóa và tăng tỷ lệ đột biến DNA soma đều có liên quan [16, 17]. Do đó, hệ thống chuột này, với nền tảng di truyền đồng nhất của nó, cung cấp một mô hình thực nghiệm tuyệt vời để nghiên cứu quá trình điều trị lão hóa và chống lão hóa [12]. Nghiên cứu này tập trung vào việc điều tra xem liệu chiết xuất từ ​​Cistanche Desticola có thể kéo dài tuổi thọ của chuột SAM-P8 và đảo ngược tình trạng phát sinh miễn dịch của chúng hay không.

Cistanche có thể cải thiện khả năng miễn dịch và chống mệt mỏi

2. Vật liệu và phương pháp
2.1. Vật liệu. Cistanche Desticola YC MA tươi được thu thập từ các khu vực khác nhau ở tây bắc Trung Quốc bao gồm các khu tự trị Tân Cương, Neimenggu và Ninh Hạ. Các mẫu được sử dụng để điều chế chiết xuất đã được xác thực bởi Giáo sư Pengfei Tu, một chuyên gia về dược lý học tại Khoa Thuốc tự nhiên, Trường Khoa học Dược phẩm, Đại học Bắc Kinh. Mẫu chứng từ của loài Cistanche Desticola (số CD -2007-03-08) được sử dụng đã được gửi vào phòng thảo mộc của Trường Khoa học Dược phẩm, Đại học Bắc Kinh, Trung Quốc. 2.2. Chuẩn bị các chất chiết xuất của Cistanche Desticola (ECD) và Phân tích HPLC. Cistanche Desticola (2. 0 kg) được làm khô trong không khí và cắt lát được thành bột và chiết xuất hai lần với 7 0 phần trăm etanol trong 1 giờ. Tỷ lệ thực vật / etanol được sử dụng là 1/6 (w / w) trong lần chiết xuất đầu tiên và 1/4 (w / w) trong lần chiết xuất thứ hai. Hai chất chiết xuất được kết hợp và lọc trước khi được cô đặc đến tỷ trọng tương đối 1,1 0 - 1,15 dưới áp suất giảm ở 6 0 ∘ C. Sau đó, chất cô đặc này được làm khô chân không và bột thu được là chất chiết của Cistanche Desticola (ECD) được sử dụng trong suốt nghiên cứu này. Các thành phần của ECD được phân tích bằng HPLC như đã mô tả trước đây [1]. Tóm lại, 1 0 0 mg bột ECD được hòa tan trong 10,0 mL H2O và sau khi lọc được bơm vào HPLC. Phân tích HPLC được thực hiện trên hệ thống sắc ký lỏng Agilent 1100 (Agilent Co., USA) Pha động bao gồm hỗn hợp metanol (A) và 0,10% axit methanoic (B). Một chương trình sắc ký gradient đã được sử dụng; con số này là 26,5 phần trăm (A) và 73,5 phần trăm (B) trong 0–7 phút, 26,5– 29,5 phần trăm (A) và 73,5–70,5 (B) trong 8–10 phút, và 29,5 phần trăm (A) và 70,5 phần trăm (B ) trong 20–27 phút. Tốc độ dòng được giữ không đổi ở 1,0 mL / phút, thể tích tiêm là 10 mL, và nhiệt độ cột được duy trì ở 25 ° C. Một detector UV đặt ở bước sóng 330 nm được sử dụng để theo dõi dòng chảy ra của cột và tạo sắc ký đồ. Phenylethanoid glycoside và oligosaccharide được xác định từ thời gian lưu và phổ hấp thụ của chúng. Việc định lượng được thực hiện bằng các đường chuẩn bên ngoài. Sản lượng chiết xuất của Cistanche Desticola (ECD) là khoảng 3,33 phần trăm và hàm lượng của phenylethanoids là 17,94 phần trăm. Acteoside và echinacoside là hai thành phần chính trong phần này, với hàm lượng của chúng lần lượt là 3,80 phần trăm và 8,25 phần trăm. Các oligosaccharide chiếm 82% tổng số ECD. Nồng độ của các thành phần hoạt động chính của ECD được thể hiện trong Bảng 1. 2.3. Phân tích tuổi thọ của động vật. Chuột SAM-P8 đực và chuột SAM-R1 đối chứng được mua từ Trung tâm Nghiên cứu và Nhân giống Động vật trong Phòng thí nghiệm thuộc Trung tâm Khoa học Sức khỏe Đại học Bắc Kinh (Bắc Kinh, Trung Quốc). Nghiên cứu này đã được phê duyệt bởi Ủy ban Nghiên cứu Động vật của Đại học Bắc Kinh và được thực hiện theo hướng dẫn về Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm tại Đại học Bắc Kinh. Số chứng nhận của những con chuột này là SCXK 2001-2008. Những con chuột được giữ trong lồng trao đổi chất tiêu chuẩn trong điều kiện môi trường được kiểm soát (22 ± 2∘ C, độ ẩm 45–60 phần trăm và chu kỳ sáng / tối 12 giờ) và được phép tiếp cận tự do với thức ăn và nước uống. Sau 2 tuần thích nghi, động vật được chia thành 5 nhóm: 3 nhóm điều trị ECD, một nhóm kiểm soát SAM-R1 và một nhóm kiểm soát SAM-P8 không điều trị. Chế độ ăn của 3 nhóm điều trị được bổ sung chế độ ăn hỗn hợp với

các nồng độ khác nhau của ECD: năng suất của liều trung bình (5 {0 mg / kg), trung bình (15 {0 mg / kg) và cao (45 0 mg / kg) liều trung bình của ECD hằng ngày. SAM-R1 và SAM-P8 không có nhóm đối chứng điều trị nào được cho ăn với cùng một chế độ ăn không có ECD. Việc đo lượng thức ăn của tất cả các động vật được thực hiện ba ngày một lần trong suốt thí nghiệm. Theo dõi huyết áp và nhịp tim được thực hiện không xâm lấn ba tháng một lần trong suốt thời gian thí nghiệm để xác định tình trạng sức khỏe của chuột. Tuổi thọ của mỗi con chuột được ghi lại cho đến khi tất cả các con vật chết. 2.4. Phân tích Tế bào T ngây thơ, Tế bào T bộ nhớ, Tế bào NK và Tế bào Sca -1 Dương tính trong Máu ngoại vi và Quần thể Tế bào Lách bằng Phép đo dòng chảy. Chuột SAM-P8 đực tám tháng tuổi và chuột SAM-R1 đối chứng được chia thành 5 nhóm: 3 nhóm điều trị ECD của chuột SAM-P8, một nhóm đối chứng không điều trị SAM-P8 và một nhóm đối chứng SAM-R1. Chế độ ăn uống của 3 nhóm điều trị được bổ sung bằng lượng ECD hàng ngày với liều 1 0 0 mg / kg, 500 mg / kg hoặc 2500 mg / kg. Sau 4 tuần điều trị, gia súc được buộc chặt trong 12 giờ và sau đó được gây mê bằng dung dịch natri pentobarbital (50 mg / kg, tiêm phúc mạc, ip), và máu được thu thập và xử lý bằng chất chống đông máu, natri xitrat (2 mg / mL ). Các tế bào lympho trong máu được thu thập và phân tích. Sau đó, những con chuột được tẩm cồn 75% và các khoang bụng được mở trong một tủ siêu mỏng (tủ hút). Các lá lách được rửa bằng PBS; sau đó được nghiền và lọc bằng máy lọc tế bào (70 𝜇m). Hỗn dịch tế bào lách thu được được rửa và tiếp tục trong môi trường PRMI 1640 ở nồng độ 2 × 106 / mL. Tế bào lách của mỗi con chuột được lấy ra thành 6 ống để phân tích tế bào dòng chảy. Nồng độ cuối cùng của huyền phù tế bào lách trong mỗi ống là 2 × 105/100 𝜇L. Tế bào lympho máu ngoại vi và tế bào lympho lách được ủ riêng với FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b / màu hồng và FITC-ly -6 A / E ( Sca -1) (tất cả được mua từ BD Biosciences, San Diego, CA, Hoa Kỳ) kháng thể đơn dòng ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Dung dịch ly giải, được thiết kế đặc biệt để ly giải các tế bào hồng cầu trong khi phục vụ trước bạch cầu, do đó loại bỏ các tế bào cản trở để phân tích tế bào dòng chảy, được ủ với máu trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Sau khi ly tâm ở 500 × g trong 5 phút, phần nổi phía trên được gạn. Sau đó, các tế bào dạng viên được rửa 3 lần bằng PBS, tiếp tục ngâm trong nước muối đệm phosphat lạnh (PBS, pH 7,4) có chứa 0,01% natri azit, và chịu FCM. phân tích. Các quần thể tiểu tế bào lympho được phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy sử dụng máy đo tế bào dòng FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, Hoa Kỳ) và phần mềm phân tích BD CellQuest. 2.5. Đánh giá khả năng tồn tại của tế bào của tế bào lympho T ngoại vi bằng Annexin V-FITC và PI nhuộm kép và phân tích FACS. Sau khi bổ sung chế độ ăn uống cho những con chuột SAM P8 với ba liều ECD trong 4 tuần, những con vật này được buộc chặt trong 12 giờ và sau đó được gây mê, và máu được thu thập và phân tích. Các tế bào lympho chết và hoại tử có thể tồn tại được định lượng bằng bộ kit Annexin V-FITC (Công ty TNHH Công nghệ sinh học Biosea Bắc Kinh, Bắc Kinh, Trung Quốc). Các tế bào bạch huyết được nhuộm kép với huỳnh quang isothiocyanate liên hợp với annexin V (Annexin V-FITC) và propidium iodide (PI). Tóm lại, huyền phù tế bào lympho chứa khoảng 106 tế bào / mL được rửa hai lần bằng PBS và lơ lửng trong 200 𝜇L dung dịch đệm liên kết (10 mM HEPES / NaOH, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2,5 mM CaCl2) và 10 𝜇L Annexin V-FITC đã được thêm vào huyền phù tế bào. Sau 15 phút ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng, thêm 300 𝜇L dung dịch đệm liên kết và 5 𝜇L PI. Ngay sau khi ủ thêm 5 phút trong bóng tối, các mẫu tế bào lympho đã nhuộm kép được phân tích bằng máy đo dòng chảy, FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). 2.6. Xác định Cytokine trong huyết tương bằng xét nghiệm miễn dịch Cytometric Bead Array (CBA). Mức độ cytokine trong huyết tương được định lượng bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm chuỗi hạt tế bào (CBA) (BD Biosciences, San Diego, CA, Hoa Kỳ) có khả năng phát hiện đồng thời IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL -6, IL {{96 }}, IL -10, GM-CSF và IL -3 trong một mẫu duy nhất. Do đó, xét nghiệm miễn dịch đa hợp này cho phép phát hiện các cytokine kích thích miễn dịch (IL -2), các cytokine tiền viêm (IFN-𝛾, TNF- 𝛼 và IL -6), các cytokine ức chế viêm (IL {{105 }}) và các cytokine tạo máu (IL -3 và GM-CSF). Tóm lại, 50 𝜇L huyết tương được trộn với 50 𝜇L hạt bắt cytokine liên hợp PE đã được phủ bằng các kháng thể bắt giữ đặc hiệu cho IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL -6, IL -2, IL Protein -10, GM-CSF và IL -3. Sau 2 giờ ủ ở nhiệt độ phòng, các mẫu được rửa trong nước muối đệm photphat lạnh lạnh (PBS, pH 7,4) có chứa 0,01% natri azit, sau đó được cố định trong 0,5 mL paraformaldehyde 1% trong PBS và giữ ở 4∘ C trong bóng tối cho đến khi phân tích, và sau đó được phân tích bằng máy đo lưu lượng FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, Hoa Kỳ). 2.7. Phân tích thống kê. Dữ liệu được hiển thị dưới dạng giá trị trung bình ± SD So sánh giữa các nhóm khác nhau được thực hiện bởi ANOVA một chiều với một bài kiểm tra sau hoc. Trong nghiên cứu về tuổi thọ, dữ liệu đã trải qua phân tích tỷ lệ sống sót của Kaplan-Meier, bao gồm việc sử dụng cả kiểm tra Log-rank (Mantel-Cox) và Gehan-Breslow Wilcoxon. Phân tích thống kê được thực hiện bằng Gói Thống kê Khoa học Xã hội dành cho Windows (SPSS, Chicago, IL) và giá trị 𝑃 nhỏ hơn 0,05 được coi là có ý nghĩa.

3. Kết quả
3.1. Phân tích các thành phần hoạt động tiềm năng trong chiết xuất của Cistanche Desticola (ECD). Như thể hiện trong Bảng 1, ECD được cấu tạo chủ yếu từ hai loại hợp chất, phenylethanoid glycoside và oligosaccharides. Trong các glycoside phenylethanoid, echinacoside, acetonide và 8- axit epiloganic đã được xác định, trong khi ở các oligosaccharide, chỉ có galactitol được xác định.

Hình 1: Ảnh hưởng của chất chiết xuất từ ​​Cistanche Desticola (ECD) lên tuổi thọ của chuột SAM-P8. Chuột đực 8 tháng tuổi tăng tốc độ lão hóa / chuột 8 (SAM-P8) được chia ngẫu nhiên thành 4 nhóm (trong mỗi nhóm, 𝑛 {{1 0}}): 3 nhóm điều trị và không - nhóm kiểm soát điều trị. Chất nền không phát sáng (SAM-R1) của chuột được sử dụng như một đối chứng thử nghiệm. Lượng thức ăn của tất cả các con vật được theo dõi trong suốt quá trình thử nghiệm trong khoảng thời gian 3- ngày. 3 nhóm điều trị được cho ăn ad libitum trên chế độ ăn được bổ sung với liều thấp (5 0 mg / kg), trung bình (15 0 mg / kg) và cao (450 mg / kg) liều Cistanche Desticola trích xuất (ECD). Hai nhóm động vật đối chứng được cho ăn với chế độ ăn giống nhau mà không bổ sung ECD. (a) Đường cong sống sót Kaplan-Meier của chuột SAM-P8 đã ăn kiêng ECD hoặc điều khiển phương tiện. Phân tích sự sống sót của Kaplan-Meier được thực hiện bằng cách sử dụng các bài kiểm tra Log-rank (Mantel-Cox) và Gehan-Breslow-Wilcoxon. (b) Biểu đồ tuổi thọ trung bình của các nhóm chuột. Các thanh lỗi cho thấy độ lệch chuẩn so với giá trị trung bình và ý nghĩa thống kê được thực hiện bằng cách sử dụng phân tích ANOVA, sau đó là bài kiểm tra hậu kỳ. ### 𝑃 <0,001 sam-p8="" so="" với="" sam-r1;="" ∗∗="" 𝑃=""><0,01 nhóm="" điều="" trị="" liều="" cao="" so="" với="" sam-p8;="" ∗="" 𝑃=""><0,05 nhóm="" điều="" trị="" liều="" trung="" bình="" so="" với="" sam-p8="" (trong="" mỗi="" nhóm,="" 𝑛="">

3.2 Tác động của chất chiết xuất từ ​​Cistanche Desticola đến Tuổi thọ trung bình của Chuột SAM-P8. Đối với nghiên cứu này và các nghiên cứu tiếp theo, những con chuột SAM-P8 đực tám tháng tuổi được chia thành 4 nhóm. Trong số đó, một nhóm chuột được cho ăn theo chế độ ăn bình thường không có ECD, 3 nhóm còn lại đã ăn các chế độ ăn có chứa tỷ lệ ECD khác nhau. Những con chuột từ mạng con SAM-R1, có quá trình lão hóa và tuổi thọ bình thường, được sử dụng làm nhóm đối chứng trong tất cả các thí nghiệm. So với nhóm SAM-R1 đối chứng, tuổi thọ trung bình của chuột SAM-P8 bị rút ngắn đáng kể (Hình 1 (a); 𝑃 <0. 0="" 0="" 1).="" mặc="" dù="" việc="" bổ="" sung="" chế="" độ="" ăn="" uống="" với="" liều="" thấp="" (50="" mg="" kg)="" ecd="" không="" tạo="" ra="" sự="" gia="" tăng="" đáng="" kể="" tuổi="" thọ="" của="" chuột="" sam-p8,="" ở="" mức="" bổ="" sung="" trung="" bình="" (150="" mg="" kg)="" và="" cao="" (450="" mg="" ml).="" liều="" lượng="" có="" sự="" gia="" tăng="" thời="" gian="" sống="" phụ="" thuộc="" vào="" liều="" lượng="" (hình="" 1="" (a)="" và="" 1="" (b);="" 𝑃=""><0,05–0,01) đã="" được="" xác="" nhận="" bởi="" phân="" tích="" tỷ="" lệ="" sống="" sót="" kaplan-meier,="" bao="" gồm="" việc="" sử="" dụng="" cả="" log-rank="" (="" mantel-cox)="" và="" gehan-breslow-wilcoxon="" thử="" nghiệm.="" 3.3.="" sự="" đảo="" ngược="" của="" sự="" phát="" triển="" miễn="" dịch="" ở="" chuột="" sam-p8="" bởi="" chất="" chiết="" xuất="" từ="" ​​cistanche="" desticola="" (ecd).="" giảm="" tế="" bào="" lympho="" t="" ngây="" thơ="" ngoại="" vi="" và="" tăng="" đồng="" thời="" tế="" bào="" lympho="" t="" nhớ="" ngoại="" vi="" là="" những="" đặc="" điểm="" nổi="" bật="" của="" quá="" trình="" phát="" sinh="" miễn="" dịch="" được="" nhiều="" người="" coi="" là="" lý="" do="" cơ="" bản="" chính="" gây="" ra="" các="" bất="" thường="" miễn="" dịch="" liên="" quan="" đến="" tuổi.="" sự="" phát="" sinh="" miễn="" dịch="" này="" ở="" sam-p8="" so="" với="" động="" vật="" sam-r1="" được="" thể="" hiện="" rõ="" ràng="" khi="" phân="" tích="" facs="" được="" sử="" dụng="" để="" liệt="" kê="" các="" tế="" bào="" lympho="" (cd3="" cộng="" với="" cd44low="" cd45rbhigh)="" như="" một="" chỉ="" thị="" của="" các="" tế="" bào="" t="" ngây="" thơ="" và="" các="" tế="" bào="" lympho="" (cd3="" cộng="" với="" cd44="" cao="" cd45brlow)="" như="" một="" chỉ="" số="" của="" bộ="" nhớ="" t="" tế="" bào.="" do="" đó,="" ở="" cả="" quần="" thể="" máu="" ngoại="" vi="" (hình="" 2)="" và="" tế="" bào="" lá="" lách="" (hình="" 3)="" đã="" giảm="" mức="" độ="" tế="" bào="" t="" ngây="" thơ="" và="" tăng="" mức="" độ="" tế="" bào="" t="" ghi="" nhớ="" đã="" được="" thấy="" ở="" chuột="" sam-p8.="" việc="" bổ="" sung="" chế="" độ="" ăn="" uống="" của="" chuột="" sam-p8="" với="" ecd="" được="" phát="" hiện="" là="" có="" thể="" đảo="" ngược="" các="" chỉ="" số="" phát="" sinh="" miễn="" dịch="" này="" theo="" kiểu="" phụ="" thuộc="" vào="" liều="" lượng="" ở="" cả="" máu="" ngoại="" vi="" (hình="" 2)="" và="" quần="" thể="" tế="" bào="" lá="" lách="" (hình="" 3).="" là="" một="" chỉ="" số="" bổ="" sung="" về="" sự="" đảo="" ngược="" quá="" trình="" hình="" thành="" miễn="" dịch="" bằng="" cách="" bổ="" sung="" ecd="" vào="" chế="" độ="" ăn="" uống,="" mức="" độ="" của="" tế="" bào="" tiêu="" diệt="" tự="" nhiên="" [18],="" một="" dấu="" hiệu="" tế="" bào="" chính="" của="" hệ="" thống="" miễn="" dịch="" bẩm="" sinh,="" đã="" được="" phân="" tích.="" điều="" này="" cho="" thấy="" rằng="" việc="" bổ="" sung="" chế="" độ="" ăn="" uống="" ecd="" dẫn="" đến="" sự="" gia="" tăng="" phụ="" thuộc="" vào="" liều="" lượng="" các="" tế="" bào="" nk="" (cd3="" cộng="" với="" cd49="" cộng)="" trong="" cả="" quần="" thể="" tế="" bào="" lympho="" ở="" máu="" ngoại="" vi="" (hình="" 4)="" và="" tế="" bào="" lá="" lách="" (hình="" 5).="" 3.4.="" chiết="" xuất="" từ="" ​​cistanche="" desticola="" tăng="" cường="" cường="" độ="" huỳnh="" quang="" tương="" đối="" của="" tế="" bào="" sca="" {68}}="" dương="" tính="" ở="" chuột="" sam-p8.="" kháng="" nguyên="" tế="" bào="" gốc="" -1="" (sca="" -1)="" là="" một="" trong="" những="" dấu="" ấn="" sinh="" học="" nổi="" bật="" nhất="" của="" tế="" bào="" gốc="" tạo="" máu="" (hsc)="" trong="" quần="" thể="" tế="" bào="" tủy="" xương.="" tế="" bào="" sca="" {73}}="" dương="" tính="" cũng="" đại="" diện="" cho="" các="" tiền="" thân="" tế="" bào="" lympho="" mới="" được="" xuất="" từ="" ​​tủy="" xương="" vào="" máu="" ngoại="" vi="" nơi="" chúng="" trải="">

4. Thảo luận

Việc bảo vệ miễn dịch chống lại các vi sinh vật mới xâm nhập hoặc các tế bào khối u nội sinh phụ thuộc vào sự đa dạng của các tế bào T, do đó dựa vào việc tạo ra và duy trì các tế bào T ngây thơ [19]. Trong quá trình lão hóa, tính đa dạng của danh mục tế bào T đã được chứng minh là giảm đi đáng kể do sự suy giảm dần dần của các tế bào T ngây thơ trong vùng dự trữ ngoại vi. Chính sự thiếu hụt các tế bào T ngây thơ đáp ứng này đã được cho là nguyên nhân khiến người cao tuổi dễ bị nhiễm trùng, ung thư và kết quả kém sau khi tiêm chủng [2 0]. Các biện pháp can thiệp khác nhau, bao gồm hạn chế calo [7], tập thể dục [21] và bổ sung vitamin E [8], đều đã được sử dụng để bổ sung thành công các tế bào T còn non và do đó kéo dài tuổi thọ và giảm sự khởi phát của nhiễm trùng và ung thư ở người cao tuổi. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chứng minh rằng ECD có thể làm tăng mức độ tế bào T ngây thơ ở vùng ngoại vi và đồng thời kéo dài tuổi thọ và giảm tần suất hình thành khối u ở chuột được tăng tốc độ lão hóa (nhóm điều trị ECD so với SAM-P8, 0 so với 1/6). Do đó, có vẻ hợp lý khi kết luận rằng khả năng của ECD trong việc đảo ngược sự suy giảm phụ thuộc vào tuổi của các tế bào T ngoại vi có thể góp phần vào các tác dụng đã biết của nó trong việc giảm thiểu bệnh liên quan đến tuổi tác xuất phát từ các quan sát lâm sàng lâu dài.

5. Vật liệu và Phương pháp

5.1. Vật liệu. Trong phản ứng miễn dịch bình thường, sau khi ngăn chặn và loại bỏ kháng nguyên lạ, hầu hết các tế bào T được nhân bản mở rộng đều trải qua quá trình apoptosis và chỉ một phần nhỏ được giữ lại làm tế bào T nhớ. Do đó, khi một sinh vật có thẩm quyền miễn dịch già đi, các tế bào T bộ nhớ ngoại vi tích tụ do cả đời tiếp xúc với các kháng nguyên ngoại lai, chuyển đổi các tế bào T ngây thơ thành các tế bào nhớ [22, 23]. Một số nghiên cứu đã gợi ý rằng các khiếm khuyết của quá trình apoptosis tế bào lympho ở động vật già và người cũng góp phần vào việc mở rộng ngăn tế bào T bộ nhớ [24, 25]. Ngoài ra, một nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng sự dư thừa của các tế bào T nhớ ngoại vi có thể ức chế sự tăng sinh nội môi của các tế bào T ngây thơ [26]. Những nghiên cứu gần đây cũng cho thấy rằng các tế bào T bộ nhớ có thể tiết ra lượng cytokine tiền viêm cao, có thể góp phần gây ra tình trạng viêm dai dẳng ở các mô khác nhau của người cao tuổi. Do đó, việc giảm mức độ tế bào T ghi nhớ sẽ có lợi cho cả sự tăng sinh nội môi của các tế bào T ngây thơ và cũng giúp giảm bớt tình trạng viêm quá mức thường thấy ở các sinh vật già hơn. Trong nghiên cứu này, việc bổ sung ECD trong chế độ ăn uống đã được chứng minh là có thể làm giảm mức độ tế bào T nhớ ngoại vi và tăng mức độ tế bào T ngây thơ. Ngoài ra, việc bổ sung ECD làm tăng quá trình apoptosis trong quần thể tế bào lympho ngoại vi, có khả năng tạo không gian cho các tế bào lympho mới. Sự hoại tử ở các tế bào lympho ngoại vi, chủ yếu gây ra bởi stress oxy hóa ở động vật cao tuổi, cũng bị ức chế. Có nhiều bằng chứng cho thấy sự lão hóa ở một sinh vật không chỉ được đặc trưng bởi sự suy giảm miễn dịch mà còn do sự gia tăng tình trạng viêm mãn tính [27]. Tình trạng tiền viêm được biểu hiện rõ ràng nhất ở mức độ tăng của các cytokine tiền viêm, bao gồm IL -6, TNF- 𝛼 và IL -1 𝛽, trong tuần hoàn cùng với sự gia tăng tần suất các bệnh viêm mãn tính liên quan đến lão hóa như Bệnh Alzheimer, bệnh Parkinson và xơ vữa động mạch. Một trong những chất gây viêm tế bào IL -6 nổi bật nhất và nồng độ trong huyết tương của nó tăng lên khi lão hóa và các bệnh liên quan đến tuổi tác [18, 28, 29] và các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy IL -6 là một dấu hiệu sinh học tốt về tuổi thọ vì nó có liên quan chặt chẽ đến tỷ lệ tử vong ở nhóm bệnh nhân cao tuổi [30, 31]. Phù hợp với điều này, một số can thiệp điều trị làm giảm nồng độ IL -6 có thể làm giảm bớt các bệnh liên quan đến tuổi tác [18]. Trong bối cảnh đó, điều quan trọng là trong nghiên cứu này, việc bổ sung chế độ ăn uống với ECD có thể làm giảm nồng độ IL -6 ngoại vi, với ngụ ý rằng tác dụng này có thể góp phần vào các cơ chế cơ bản của việc giảm tần suất các bệnh liên quan đến tuổi tác. đã thu được thông qua việc sử dụng lâu dài ECD trong thực hành lâm sàng. Cùng với những thay đổi về phản ứng miễn dịch thích ứng xảy ra theo tuổi, cũng có những thay đổi lớn về miễn dịch bẩm sinh khi sinh vật già đi. Trong số này, những thay đổi trong tế bào tiêu diệt tự nhiên [18], dòng thành phần tế bào đầu tiên cung cấp khả năng ly giải độc tế bào trực tiếp của tế bào khối u và tế bào nhiễm vi rút, đã diễn ra rộng rãi vì những người cao tuổi cho thấy sự nhạy cảm tăng lên đối với cả sự phát triển của khối u và nhiễm vi rút [ 32]. Nghiên cứu này chỉ ra rằng CD3 cộng với Ly49 cộng với tế bào NK có mặt ở mức độ thấp hơn đáng kể ở chuột SAM P8 tuổi già so với động vật đối chứng SAM-R1, có thể là một yếu tố cơ bản khác làm tăng tính nhạy cảm của chuột già với bệnh ung thư và nhiễm vi rút. Do đó, sự gia tăng mức độ tế bào NK được thấy trong nghiên cứu này sau khi bổ sung chế độ ăn uống với ECD do đó có thể có lợi cho các sinh vật cao tuổi về khả năng tăng khả năng chống lại sự phát triển của khối u và nhiễm vi rút. Tuy nhiên, cần có những nghiên cứu sâu hơn để làm rõ vai trò ảnh hưởng của ECD đối với tế bào NK ở các sinh vật già. Kết luận, nghiên cứu này đã chỉ ra rằng việc điều trị con chuột dễ bị lão hóa, SAM P8, với ECD có thể tạo ra sự đảo ngược đáng kể các thay đổi miễn dịch liên quan đến tuổi. Sự thiếu hụt ở cả quần thể tế bào ngoại vi và lá lách của tế bào T ngây thơ và tế bào NK đều giảm, trong khi mức độ tế bào T nhớ dư thừa cũng giảm. Ngoài ra, chế độ ăn uống bổ sung ECD có thể ngăn chặn cả hoại tử ở tế bào lympho ngoại vi và mức cytokine tiền viêm, IL -6. Cuối cùng, ngoài việc mang lại những thay đổi trong hệ thống miễn dịch tuổi già, việc bổ sung chế độ ăn uống ECD kéo dài đáng kể tuổi thọ của chuột SAM-P8 về già.

Người giới thiệu
[1] Y. Jiang và P.-F. Tu, "Phân tích các thành phần hóa học ở các loài Cistanche," Tạp chí Sắc ký A, tập. 1216, không. 11, trang 1970–1979, 2009.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, và S. Kadota, "Hoạt động bảo vệ gan của phenylethanoids từ Cistanche Desticola," Planta Medica, vol. 64, không. 2, trang 120–125, 1998.
[3] "Miễn dịch học và lão hóa ở Châu Âu. Kỷ yếu Hội nghị lần thứ 2 về Sinh học cơ bản và Tác động Lâm sàng của Sự phát triển Miễn dịch. Tháng 3 22-26, 2001, Cordoba, Spain," Experimental Gerontology, vol. 37, không. 2-3, trang 183–473, 2002.
[4] G.-D. Xuan and C.-Q. Liu, "Nghiên cứu về tác dụng của phenylethanoid glycoside (PEG) của Cistanche Desticola đối với việc chống lão hóa ở chuột già do D-galactose gây ra," Tạp chí Dược liệu Trung Quốc, vol. 31, không. 9, trang 1385–1388, 2008.
[5] D. Aw, AB Silva và DB Palmer, "Miễn dịch phát triển: những thách thức đang nổi lên đối với dân số già", Miễn dịch học, tập. 120, không. 4, trang 435–446, 2007.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein, và G. Pawelec, "Nuôi cấy dài hạn tế bào lympho T đơn dòng của người: mô hình phát sinh miễn dịch?" Cơ chế của Lão hóa và Phát triển, vol. 83, không. 3, trang 171–183, 1995.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy, và M. Segre, "Điều chế sự phát sinh miễn dịch ở chó bằng cách hạn chế calo trong suốt cuộc đời," Miễn dịch học Thú y và Miễn dịch bệnh, tập. 111, trang 287–299, 2006.
[8] SN Meydani, SN Han, và D. Wu, "Vitamin E và phản ứng miễn dịch ở người già: cơ chế phân tử và ý nghĩa lâm sàng," Đánh giá miễn dịch, vol. 205, trang 269–284, 2005.
[9] SG Deeks, "Nhiễm HIV, viêm nhiễm, tăng sinh miễn dịch và lão hóa," Tạp chí Y học hàng năm, tập. 62, trang 141– 155, 2011.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli và cộng sự, "Sự phức tạp của các chiến lược chống phát sinh miễn dịch ở người," Các cơ quan nhân tạo, tập. 30, không. 10, trang 730–742, 2006.