Chuyển hóa glutathione góp phần tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo

Trừu tượng:

Hệ thống miễn dịch bẩm sinh hiển thị các đặc điểm bộ nhớ dị loại, được đặc trưng bởi các phản ứng mạnh mẽ hơn đối với thử thách thứ cấp. Hiện tượng này được gọi là khả năng miễn dịch được đào tạo dựa trên sự tái tạo biểu sinh và trao đổi chất của các tế bào miễn dịch bẩm sinh. Vì việc sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS) có liên quan đến kiểu hình miễn dịch được đào tạo, chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng nồng độ ROS tăng lên và glutathione phân tử oxy hóa khử nội bào chính đóng vai trò tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo. Ở đây chúng tôi chỉ ra rằng sự ức chế dược lý của ROS trong mô hình miễn dịch được đào tạo trong ống nghiệm không ảnh hưởng đến khả năng đáp ứng của tế bào; việc điều chỉnh nồng độ glutathione làm giảm sản xuất cytokine gây viêm trong tế bào đơn nhân của con người. Đa hình đơn nucleotide (SNPs) trong các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione được phát hiện là có liên quan đến những thay đổi trong khả năng sản xuất cytokine tiền viêm khi miễn dịch được huấn luyện.

Ngoài ra, nồng độ glutathione trong huyết tương có liên quan tích cực với quá trình sản xuất IL-1 ex vivo, một dấu ấn sinh học của khả năng miễn dịch đã được đào tạo, được sản xuất bởi các tế bào đơn nhân của những người được tiêm vắc-xin BCG. Tóm lại, quá trình chuyển hóa glutathione có liên quan đến việc tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo và các nghiên cứu trong tương lai được đảm bảo để khám phá các hậu quả chức năng của nó đối với các bệnh ở người.

Khả năng miễn dịch của con người rất quan trọng vì nó bảo vệ chúng ta khỏi bệnh tật và nhiễm trùng. Hệ thống miễn dịch là một hệ thống phức tạp bao gồm nhiều tế bào, mô và cơ quan khác nhau. Họ làm việc cùng nhau để đối phó với các mầm bệnh khác nhau bên trong và bên ngoài. Trong nghiên cứu, chúng tôi phát hiện ra rằng polysacarit và verbascoside Cistanche Deserticola có thể cải thiện hoạt động của các enzym mô tim và não, đồng thời củng cố khoang bụng. Chức năng thực bào của tế bào và phản ứng tăng sinh của tế bào lympho có tác dụng rõ ràng trong việc cải thiện khả năng miễn dịch.

Click vào sản phẩm bổ sung cistanche Deserticola

từ khóa:

glutathione; miễn dịch được đào tạo; đại thực bào; sự trao đổi chất; trí nhớ miễn dịch bẩm sinh.

1. Giới thiệu

Cho đến gần đây, khả năng miễn dịch thích ứng được cho là thành phần duy nhất của sự bảo vệ vật chủ được đặc trưng bởi khả năng lưu giữ bộ nhớ, điều chỉnh các phản ứng của tế bào T và B đối với một kháng nguyên cụ thể.

Tuy nhiên, ngày càng có nhiều nghiên cứu gần đây cũng quy các đặc điểm của trí nhớ dị loại cho hệ thống miễn dịch bẩm sinh, một quá trình được gọi là miễn dịch được huấn luyện [1]. Các bạch cầu đơn nhân tiếp xúc trong một thời gian ngắn với Candida albicans, thành phần vách tế bào nấm -glucan, hoặc thậm chí là các kích thích vô trùng dưới dạng lipoprotein tỷ trọng thấp bị oxy hóa (ox-LDL), cho thấy sự tăng cường sản xuất các cytokine gây viêm khi có một kích thích thứ cấp không liên quan kéo dài sau đó. kích thích ban đầu đã được loại bỏ [2,3].

Ngoài ra, các nghiên cứu dịch tễ học đã chỉ ra rằng vắc-xin Bacillus Calmette-Guérin (BCG) chống lại bệnh lao giúp tăng cường chức năng kháng khuẩn của các tế bào miễn dịch bẩm sinh, sau đó tạo ra sự bảo vệ không đặc hiệu chống lại các bệnh nhiễm trùng không liên quan và giảm tỷ lệ tử vong do mọi nguyên nhân [4].

Khả năng miễn dịch được đào tạo bắt nguồn từ những thay đổi biểu sinh điều chỉnh khả năng tiếp cận của các gen của phản ứng tiền viêm đối với bộ máy phiên mã của tế bào. Tái tạo biểu sinh trong các tế bào miễn dịch bẩm sinh được đào tạo đi kèm với những thay đổi trao đổi chất thúc đẩy các quá trình như đường phân, phosphoryl hóa oxy hóa và sinh tổng hợp cholesterol [5,6]. Các chất chuyển hóa có nguồn gốc từ các con đường này là các phân tử tín hiệu và đồng yếu tố có thể lần lượt điều chỉnh hoạt động của các enzym biến đổi chất nhiễm sắc. Glutathione (GSH) là chất chống oxy hóa chính duy trì sự cân bằng oxy hóa khử nội bào và được cho là góp phần thay đổi biểu sinh [7].

Ngoài ra, các kích thích tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo, chẳng hạn như BCG và oxLDL, làm tăng sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS) của đại thực bào khi kích thích thứ cấp [8–10]. Chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng hoạt động trao đổi chất tăng lên của các đại thực bào được đào tạo cũng sẽ làm tăng mức độ ROS và điều chỉnh GSH, do đó sẽ ảnh hưởng đến sức mạnh của các phản ứng miễn dịch được đào tạo.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Phân lập tế bào đơn nhân máu ngoại vi của con người (PBMC) và tế bào đơn nhân

Áo khoác đệm từ những người hiến tặng khỏe mạnh đã được lấy sau khi có sự đồng ý bằng văn bản (Ngân hàng máu Sanquin, Nijmegen, Hà Lan). Phê duyệt về mặt đạo đức được lấy từ CMO Arnhem-Nijmegen (NL32 357.091.10). Quá trình phân lập được thực hiện bằng phương pháp ly tâm mật độ khác biệt trên Ficoll-Paque (GE Healthcare, Chalfont St Giles, UK). Sau đó, việc phân lập các tế bào đơn nhân được thực hiện bằng phương pháp ly tâm gradient mật độ siêu thẩm thấu Percoll (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Hoa Kỳ) và rửa một lần bằng dung dịch muối đệm phốt phát lạnh không chứa pyrogen (PBS). Các tế bào được tái huyền phù và sau đó được nuôi cấy trong môi trường RPMI 1640 của Hà Lan (Invitrogen, Waltham, MA, USA) được bổ sung 5 µg/mL gentamicin (Centraform, Etten-Leur, Hà Lan), 2 mM Glutamax (Gibco, Waltham, MA, USA) ) và 1 mM pyruvate (Gibco). Để đảm bảo độ tinh khiết tối đa, các tế bào đơn nhân được phân lập bằng Percoll được để dính vào các tấm đáy phẳng bằng polystyrene (Corning, Sigma-Aldrish, New York, NY, USA) trong 1 giờ ở 37 °C 5% CO2 và sau đó được rửa một lần bằng PBS ấm.

2.2. Mô hình miễn dịch được đào tạo trong ống nghiệm

Bạch cầu đơn nhân kết dính được nuôi cấy như mô tả trước đây [11]. Tóm lại, 105 bạch cầu đơn nhân được gieo vào các đĩa giếng 96-đáy phẳng (Greiner, Kremsmünster, Austria) và được ủ với 1 µg/mL -glucan hoặc 5 µg/mL vắc xin BCG (InterVax, Toronto, ON, Canada) trong RPMI với 10% huyết thanh tổng hợp của con người. -1,3-(D)-glucan ( -glucan) từ nấm Candida albicans được cung cấp bởi Giáo sư David Williams (Đại học Y khoa, Thành phố Johnson, TN, Hoa Kỳ).

Khi được chỉ định, các tế bào được ủ trước với {{0}}}.5µM diphenyleneiodonium (DPI), 50µM a-tocopherol (AT) (Sigma-Aldrich), 0,5µM axit ascorbic (AA), 1 mM N-acetyl cysteine ​​(NAC) (Sigma-Aldrich) hoặc 100 µM DL-buthionine sulfoximine (BSO) (Sigma-Aldrich) trong 1 giờ trước khi bổ sung -glucan. Sau 24 giờ, các tế bào được rửa một lần bằng PBS ấm và để phân biệt trong RPMI được bổ sung 10% huyết thanh người tổng hợp trong 5 ngày. Môi trường đã được làm mới vào ngày nuôi cấy thứ 3. Vào ngày thứ 6, các đại thực bào được mô phỏng lại với 10 ng/mL Escherichia coli lipopolysacarit (LPS; kiểu huyết thanh 055:B5, Sigma-Aldrich) trong 24 giờ nữa.

2.3. Định lượng các loại oxy phản ứng (ROS)

Tế bào đơn nhân/đại thực bào được nuôi cấy trong 2 giờ, 24 giờ hoặc 6 ngày, rửa sạch, tách ra bằng PBS lạnh và ủ với 5 µM H2DCFDA (Life Technologies, Waltham, MA, USA) trong PBS trong 30 phút ở 37 ◦C. Các tế bào được phân tích bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (CytoFlex, Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm Kaluza 2.1. Các tập hợp tế bào được kiểm soát dựa trên biểu đồ chiều cao phân tán thuận (FSC) so với khu vực FSC và quần thể bạch cầu đơn nhân/đại thực bào được kiểm soát theo FSC và phân tán bên (SSC). Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± SEM và được phân tích bằng phép thử Friedman, sau đó là phép thử so sánh nhiều lần của Dunn. Giá trị p dưới 0,05 được coi là có ý nghĩa thống kê, như được biểu thị bằng dấu hoa thị (* p < 0,05).

2.4. Dữ liệu giải trình tự RNA của tế bào đơn nhân ở người được kích thích trong ống nghiệm

Phân tích biểu hiện gen của bạch cầu đơn nhân tiếp xúc trong ống nghiệm với -glucan được thực hiện bằng cách sử dụng dữ liệu RNA-seq đã được công bố trước đó [12]. Tóm lại, PBMC được phân lập bằng cách ly tâm trong Ficoll-Paque (GE Health). Các bạch cầu đơn nhân được tinh chế bằng cách sử dụng phương pháp chọn lọc âm tính với các hạt đối với các tế bào dương tính với CD3 plus (tế bào T), CD19 plus (tế bào B) và CD56 plus (tế bào NK) (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Đức). Các tế bào được nuôi cấy theo mô hình miễn dịch được đào tạo trong ống nghiệm đã mô tả và tiếp xúc với 5 µg/mL -glucan. Tế bào đơn nhân được thu thập vào lúc 4 giờ và 24 giờ sau khi tiếp xúc. Các gen liên quan đến phản ứng chống oxy hóa và chuyển hóa glutathione được chiết xuất từ ​​danh sách các gen năng động đáng kể (p < 0.05, FC > 2.5, RPKM > 1) trong mô hình miễn dịch được đào tạo từ tế bào đơn nhân đến đại thực bào trong ống nghiệm. Dữ liệu được trình bày dưới dạng log10 của tỷ lệ giữa bạch cầu đơn nhân được điều trị bằng -glucan và bạch cầu đơn nhân không kích thích.

2.5. Định lượng Glutathione

Phân tích định lượng glutathione khử nội bào (GSH) và glutathione oxy hóa (GSSG) được thực hiện bằng phương pháp quang phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) như đã mô tả trước đây [13].

Tóm lại, môi trường tăng trưởng được loại bỏ và các tế bào nuôi cấy được rửa bằng PBS ấm (37 ◦C) và làm nguội bằng nitơ lỏng để ngăn chặn quá trình trao đổi chất. Sau đó, các tế bào được cạo ra khỏi các đĩa và được chiết xuất bằng cách sử dụng dung dịch lạnh (−80 ◦C) của metanol/chloroform/nước, 8.1:0.9:1 (vol/vol/vol) . Các chất chiết xuất được giữ đông lạnh trên đá khô trong ít nhất 30 phút và sau đó được ly tâm trong 20 phút ở 18,{{1{{30}}}}× g ở −4 ◦C. Viên protein được giữ để định lượng protein trong khi phần nổi phía trên chứa các chất chuyển hóa nội bào được làm khô dưới dòng khí nitơ thổi nhẹ và các mẫu NMR được chuẩn bị bằng cách hòa tan vật liệu đã sấy khô với 0,22 mL dung dịch đệm phosphat 0,15 M (pH 7,4) trong nước đã khử màu có chứa 0,05 mM trimethylsilyl propionic-d4-muối natri làm chất chuẩn nội để tham chiếu và định lượng NMR. Phổ 1D 1H NMR được thu thập cho từng mẫu trên Bruker Avance II NMR 14,1 T (600 MHz cho 1H), sử dụng chuỗi xung noesygppr1d (Topspin v3.0, Bruker Biospin Ltd, Karlsruhe, Đức). Tất cả các quang phổ đã được xử lý và nhập vào bộ Chenomx NMR 8.4 (bộ Chenomx NMR, v8.0, Edmonton, AB, Canada) để định lượng glutathione.

Tất cả các nồng độ đã được chuẩn hóa thành tổng khối lượng protein của từng mẫu. Loại thứ hai được định lượng bằng cách hòa tan viên protein trong dung dịch đệm (1:1, 1 phần trăm SDS: 8M Urea (0.25M Tris pH:8)) bằng sóng siêu âm. Nồng độ protein sau đó được đo bằng bộ xét nghiệm protein PierceTM BCA (Thermo Fisher Khoa học, Waltham, MA, Hoa Kỳ) theo hướng dẫn sử dụng.

2.6. Các mô hình miễn dịch được đào tạo in Vitro và In Vivo để phân tích di truyền và trao đổi chất

Trong mô hình in vitro, các bạch cầu đơn nhân kết dính được ủ với môi trường nuôi cấy chỉ làm đối chứng âm tính, 2 µg/mL của -1,3-(D)-glucan hoặc 5 µg/mL BCG (đoàn hệ 300BCG : Chủng BCG-Bulgaria, Intervax, Canada), trong 24 giờ ở 37 ◦C với sự có mặt của 10% huyết thanh người gộp lại. Vào ngày thứ 6, các tế bào được kích thích lại trong 24 giờ với 200 µL RPMI hoặc LPS 10 ng/mL (kiểu huyết thanh 055: B5; Sigma-Aldrich).

Trong mô hình in vivo, những người trưởng thành khỏe mạnh được tiêm vắc-xin với liều tiêu chuẩn 0.1 mL BCG trong da ở cánh tay trên bên trái và máu được thu thập trước, 14 và 90 ngày sau khi tiêm vắc-xin. Trong mỗi lần truy cập, 5 × 105 PBMC được kích thích bằng Staphylococcus aureus đã bị tiêu diệt bằng nhiệt (106 CFU/mL) hoặc không được kích thích ở 37 ◦C với 5% CO2. Các cytokine được tiết ra đã được đo ở cả hai mô hình sau 24 giờ kích thích và khả năng đáp ứng của cytokine tăng gấp lần do các kích thích huấn luyện gây ra được sử dụng như một thước đo cho khả năng miễn dịch được huấn luyện [14].

2.7. Phân tích di truyền

Phân tích di truyền được thực hiện bằng cách sử dụng một nhóm các cá nhân khỏe mạnh gốc Tây Âu từ Dự án Bộ gen Chức năng Con người [15]. Nhóm thuần tập 300BCG bao gồm 325 người trưởng thành đến từ Hà Lan (44% nam và 56% nữ, độ tuổi từ 18–71). Nghiên cứu đã được phê duyệt bởi ủy ban đạo đức địa phương CMO khu vực Arnhem-Nijmegen, NL58553.091.16. Các mẫu DNA của các cá nhân (n=325) đã được xác định kiểu gen bằng cách sử dụng chip SNP có bán trên thị trường, Infinium Global Screening Array MD v1.0 từ Illumina. Quang học 0.7.0 với cài đặt mặc định đã được sử dụng để gọi kiểu gen [16]. Các mẫu có tỷ lệ cuộc gọi Nhỏ hơn hoặc bằng 0.99 đã bị loại trừ, cũng như các biến thể có trạng thái cân bằng Hardy-Weinberg (HWE) Nhỏ hơn hoặc bằng 0,0001 và tần số alen phụ (MAF) Nhỏ hơn hoặc bằng đến 0,001. Các chuỗi biến thể được căn chỉnh và xác định dựa trên bảng tham chiếu 1000 Genome bằng cách sử dụng Genotype Harmonizer [17]. Sau đó, chúng tôi đã quy nạp các mẫu trên máy chủ quy nạp Michigan bằng cách sử dụng tập đoàn tham chiếu con người (HRC r1.1 2016) làm bảng tham chiếu và chúng tôi đã lọc ra các biến thể di truyền có chất lượng quy nạp R2 < 0,3 và MAF < 5 phần trăm [18], dẫn đến khoảng 4 triệu đa hình đơn nucleotide (SNP) để lập bản đồ QTL tiếp theo. Cả dữ liệu về kiểu gen và cytokine về các phản ứng miễn dịch được huấn luyện trong ống nghiệm đã thu được trên tổng số 267 cá thể từ đoàn hệ 300 BCG. Ba mẫu bị loại do sử dụng thuốc (trong đó một mẫu được xác định là ngoại lai di truyền) và một mẫu là do khởi phát bệnh tiểu đường loại 1 trong quá trình nghiên cứu.

Đầu tiên, sự thay đổi lần lượt của việc sản xuất cytokine giữa các tế bào được đào tạo và không được đào tạo được coi là phép đo mức độ của phản ứng miễn dịch được đào tạo. Sau khi kiểm tra chất lượng phân phối cytokine và sau khi loại trừ các ngoại lệ di truyền, chúng tôi đã ánh xạ các thay đổi về nếp gấp được chuyển đổi bằng nhật ký của quá trình sản xuất cytokine thành dữ liệu kiểu gen bằng mô hình hồi quy tuyến tính với độ tuổi và giới tính dưới dạng đồng biến để điều chỉnh sự phân phối của sự thay đổi nếp gấp của quá trình sản xuất cytokine. Chúng tôi đã sử dụng ngưỡng p < 9,99 × 10−3 để xác định các mối liên hệ định vị đặc điểm định lượng (QTL) gợi ý ảnh hưởng đến các phản ứng miễn dịch được đào tạo. Sử dụng mô hình miễn dịch được đào tạo in vivo, cả dữ liệu về kiểu gen và cytokine đã thu được cho tổng số 296 cá thể.

Ngoài các ngoại lệ được mô tả cho bản đồ QTL trong ống nghiệm, 18 cá nhân được tiêm phòng vào buổi tối đã bị loại trừ, dẫn đến 278 mẫu trước khi lập bản đồ QTL. Đầu tiên, mức độ cytokine thô được chuyển đổi log và tỷ lệ sản xuất cytokine giữa các lần truy cập được coi là sự thay đổi lần lượt của quá trình sản xuất cytokine. Sự thay đổi lần lượt của quá trình sản xuất cytokine được ánh xạ tới dữ liệu kiểu gen bằng mô hình hồi quy tuyến tính với tuổi và giới tính là đồng biến. Chúng tôi đã sử dụng ngưỡng p < 9,99 × 10−3 để xác định các hiệp hội QTL gợi ý ảnh hưởng đến các phản ứng miễn dịch được đào tạo. Gói R Matrix-eQTL đã được sử dụng để ánh xạ QTL của cytokine [19].

2.8. Phân tích trao đổi chất

Mức độ trao đổi chất của các cá nhân từ nhóm thuần tập 300 BCG đã được đo trước khi tiêm vắc-xin BCG. Các tính năng trao đổi chất được đo lường và chú thích bởi General Metabolics (Zurich, Thụy Sĩ) bằng phép đo phổ khối lượng thời gian bay (tiêm dòng chảy TOF-M) [20]. Các chất chuyển hóa không nhắm mục tiêu đã được chú thích theo cơ sở dữ liệu các chất chuyển hóa của con người (HMDB). Tất cả các phép đo chuyển hóa được thực hiện trong các bản sao và giá trị trung bình được tính cho từng mẫu trên mỗi chất chuyển hóa. Phân tích tương quan Spearman đã được thực hiện trên các chất chuyển hóa và thay đổi nếp gấp của cytokine ex vivo về các phản ứng trước khi tiêm chủng. Để kiểm tra mối quan hệ giữa mức độ glutathione và SNP quan tâm được xác định trong phân tích di truyền, phân tích hồi quy tuyến tính với tuổi và giới tính bao gồm dưới dạng đồng biến được thực hiện cho mỗi SNP.

2.9. Định lượng và phân tích Cytokine

Việc sản xuất Cytokine được xác định bằng cách sử dụng bộ ELISA thương mại cho IL{{0}} , IL-6 và TNF (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± SEM và được phân tích bằng các biện pháp lặp lại hai chiều ANOVA, sau đó là các thử nghiệm so sánh nhiều lần của Sidak. Giá trị p dưới 0,05 được coi là có ý nghĩa thống kê, được biểu thị bằng dấu hoa thị (* p < 0,05).

3. Kết quả

3.1. -Glucan- và BCG kích hoạt khả năng miễn dịch được đào tạo kích hoạt sản xuất các loài oxy phản ứng bền vững

Tăng giải phóng ROS đã được mô tả trước đây như là một tính năng của kiểu hình miễn dịch được đào tạo [21]. Tế bào đơn nhân tiếp xúc với -glucan hoặc BCG trong 2 giờ và 24 giờ biểu hiện ROS tăng lên. Thật thú vị, sự gia tăng này được duy trì và hiện diện sau 5 ngày nghỉ ngơi trong môi trường nuôi cấy (Hình 1A). Nồng độ ROS tăng cường đi kèm với sự thay đổi phiên mã của các gen chống oxy hóa khác nhau trong tế bào đơn nhân tiếp xúc với -glucan trong 24 giờ (Hình 1B). Superoxide dismutase của ty thể SOD2 và các phân tử chứa thiol khác nhau được điều chỉnh tăng, cụ thể là các chất khử peroxide phụ thuộc thioredoxin 1-6 (PRDX 1-6) và sulfiredoxin 1 (SRXN1). Sự biểu hiện của thioredoxin (TXN) và thioredoxin reductase (TXNRD), những chất nhặt rác ROS có chứa thiol có liên quan, cũng được tăng cường.

Hình 1. Tăng mức độ ROS của bạch cầu đơn nhân được đào tạo không góp phần vào việc sản xuất cytokine tiền viêm tăng cường của chúng. (A) Nồng độ ROS lúc 2 giờ, 24 giờ và 6 ngày sau khi bạch cầu đơn nhân tiếp xúc với -glucan và BCG (n=6/9 người hiến tặng, tổng hợp từ 2/3 thí nghiệm độc lập. Thử nghiệm Fridman thử nghiệm so sánh nhiều lần của Dunn) . (B) Mức độ biểu hiện của các gen liên quan đến việc bảo vệ chống oxy hóa trong bạch cầu đơn nhân tiếp xúc với -glucan trong 24 giờ so với các tế bào chưa được kích thích. Biểu thức được trình bày dưới dạng log10(tỷ lệ). TNF và IL-6 được tạo ra bởi các đại thực bào được huấn luyện bằng -glucan sau 1 giờ tiền xử lý với (C) 0.5µM DPI (n=6 người cho, gộp từ 2 thí nghiệm độc lập) và (D ) 1 mM NAC, 50 µM AT hoặc 0,5 µM AA (n=6 người cho, tổng hợp từ hai thử nghiệm độc lập, ANOVA hai chiều, thử nghiệm so sánh nhiều lần của Sidak). (trung bình ± SEM, * p <0,05).

Tuy nhiên, cả việc ức chế NADPH oxidase của nhà sản xuất ROS chính với diphenyleneiodonium (DPI) cũng như việc bổ sung các phân tử chống oxy hóa -tocopherol (AT) và axit ascorbic (AA) trước khi ủ với -glucan, điều chỉnh khả năng đáp ứng của đại thực bào tăng lên. Trong các đại thực bào tiếp xúc với -glucan, TNF và IL-6 bài tiết 24 giờ sau khi tái kích thích LPS không bị thay đổi bởi phương pháp dược lý này (Hình 1C, D).

Tuy nhiên, chỉ riêng việc tiếp xúc với DPI đã tăng sản xuất IL-6 khi kích thích LPS. (Hình 1C). Tiền xử lý với chất nhặt rác ROS chung N-acetyl cysteine ​​(NAC) đã làm giảm sản xuất TNF và IL-6 khi so sánh với các tế bào chỉ tiếp xúc với glucan (Hình 1D). Kết hợp lại với nhau, chúng tôi cho thấy rằng việc tăng sản xuất ROS đóng một vai trò nhỏ trong việc tăng sản xuất cytokine của khả năng miễn dịch được đào tạo do -glucan gây ra. Ngoài ra, khả năng miễn dịch được đào tạo duy trì mức độ ROS tăng lên có thể được liên kết với quá trình điều chế glutathione chống oxy hóa tế bào, vì NAC không chỉ là chất nhặt rác ROS mà còn có thể đóng vai trò là tiền chất để tổng hợp glutathione.

3.2. Chuyển hóa glutathione ảnh hưởng đến phản ứng miễn dịch được đào tạo

Các bạch cầu đơn nhân tiếp xúc với -glucan trong 24 giờ cho thấy mức độ cao hơn của dạng glutathione bị oxy hóa (GSSG), tức là do mức độ ROS cao hơn được tìm thấy tại thời điểm này (Hình 2A). Sau giai đoạn nghỉ ngơi, dạng glutathione khử (GSH) có xu hướng tăng lên trong các đại thực bào đã được huấn luyện mà không làm thay đổi nồng độ của dạng oxy hóa.

Hình 2. Mức glutathione được điều chỉnh khi tiếp xúc với -glucan. (A) Nồng độ glutathione nội bào bị giảm và bị oxy hóa trong bạch cầu đơn nhân sau 24 giờ tiếp xúc với 1 µg/mL -glucan và 5 ngày sau giai đoạn nghỉ ngơi (n=4 người cho, gộp từ hai thí nghiệm độc lập). (B) Biểu hiện của các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione trong bạch cầu đơn nhân tiếp xúc với -glucan trong 4 giờ và 24 giờ. Biểu thức được trình bày dưới dạng log10(tỷ lệ). (C) TNF và IL-6 được tạo ra bởi các đại thực bào được huấn luyện bằng -glucan sau 1 giờ tiền xử lý với 100 µM BSO (n=9 người cho, gộp từ ba thử nghiệm độc lập, * p < 0,05 ANOVA hai chiều , kiểm tra so sánh nhiều lần của Sidak) (trung bình ± SEM).

Các gen mã hóa cho các tiểu đơn vị của enzyme giới hạn tốc độ glutamate cysteine ​​ligase (GCLC và GCLM) cho thấy biểu hiện gia tăng vào lúc 4 giờ sau khi kích thích -glucan so với các tế bào đơn nhân đối chứng. Glutathione reductase (GSR), glutathione peroxidase 7 (GPX7) và các enzym thuộc họ glutaredoxin (GLRX, 2, 5) cũng được điều chỉnh tăng ở mốc thời gian 24 giờ (Hình 2B), cho thấy không chỉ có sự gia tăng tổng hợp mà còn cao hơn tỷ lệ tái chế glutathione. Ức chế dược lý hoạt động của GCL bằng buthionine sulfoximine (BSO) trước khi tiếp xúc với -glucan dẫn đến giảm sản xuất IL-6 sau khi tái kích thích LPS (Hình 2C). Do đó, sự điều chỉnh ngoại sinh nồng độ glutathione, hoặc bổ sung bằng cách bổ sung tiền chất NAC, hoặc giảm nó bằng cách ngăn chặn enzyme GCL bằng BSO, làm giảm -glucan làm tăng khả năng đáp ứng với kích thích thứ cấp.

Để điều tra thêm liệu biến thể di truyền trong các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione có ảnh hưởng đến khả năng miễn dịch đã được đào tạo hay không, bản đồ QTL được thực hiện bằng cách sử dụng một nhóm gồm 325 người khỏe mạnh. Chúng tôi đã kiểm tra xem các SNP phổ biến có tần số alen nhỏ (MAF) > 0.05 trong các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione có liên quan đến những thay đổi về khả năng sản xuất cytokine tiền viêm của bạch cầu đơn nhân khi huấn luyện -glucan và BCG trong ống nghiệm hay không (Hình 3A, C).

Tương tự, chúng tôi cũng đánh giá tác động của các biến thể di truyền này đối với khả năng miễn dịch được huấn luyện in vivo do tiêm vắc-xin BCG cho 278 người khỏe mạnh (Hình 3B, C). Một số SNP trong một cửa sổ 250 kb của các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione được gợi ý liên kết (giá trị p < 9,99 × 10−3 ) với sự điều hòa tăng bài tiết IL-1 , TNF và IL-6 sau khi tập luyện (Hình 3A, B).

Trong cùng một nhóm thuần tập, chúng tôi đã đo các chất chuyển hóa trong huyết tương liên quan đến chuyển hóa glutathione trước khi tiêm vắc-xin BCG. SNP được xác định trong các phân tích in vitro và in vivo có liên quan đáng kể với nồng độ glutathione lưu hành (giá trị p < 0.05) (Hình 3D). Ngoài ra, chúng tôi đã tìm thấy mối liên hệ tích cực giữa nồng độ glutathione trong huyết tương và sản xuất ex vivo IL-1 90 ngày sau khi tiêm vắc-xin BCG khi tiếp xúc trong ống nghiệm với Staphylococcus aureus kích thích dị loại (Hình 3E). Việc điều chỉnh tăng sản xuất IL-1 bằng cách tiêm vắc-xin BCG cũng có liên quan tích cực với nồng độ lưu hành của các chất chuyển hóa khác liên quan đến chuyển hóa glutathione, chẳng hạn như methionine, cysteine, glutamate và glycine (Hình 3E). Nhìn chung, các gen liên quan đến quá trình chuyển hóa glutathione chứa các QTL cho các phản ứng dị loại bẩm sinh, với LPS (Hình 3A) hoặc S. aureus (Hình 3B) và mối tương quan giữa nồng độ glutathione trong huyết thanh với quá trình sản xuất IL-1 ex vivo, cả hai đều chỉ ra một vai trò của con đường này trong việc thiết lập khả năng miễn dịch được đào tạo.

Hình 3. Glutathione được kết hợp với các tính năng miễn dịch được đào tạo. Sơ đồ nhiệt của các giá trị p liên kết (p < 9,99 × 10−3 ) giữa các SNP được ánh xạ tới các gen liên quan đến chuyển hóa glutathione và mức độ của khả năng sản xuất cytokine bởi các tế bào đơn nhân được đào tạo trong ống nghiệm với (A) -glucan và BCG (n=251 tình nguyện viên khỏe mạnh cho IL-6 và n=238 tình nguyện viên khỏe mạnh cho TNF ) và (B) phản hồi đào tạo BCG in vivo (n {{10}} tình nguyện viên khỏe mạnh). (C) Boxplot của SNP giá trị p thấp nhất trên mỗi phân tích (rs7768134, rs35568915). (D) Các ô vuông biểu thị nồng độ glutathione trong huyết tương (đã điều chỉnh theo độ tuổi và giới tính) được phân tầng theo kiểu gen cho rs2233294 (GPX3) và rs10136944 (GLRX5, n=302). Giá trị p cho mỗi SNP được lấy từ mô hình hồi quy tuyến tính với SNP quan tâm là biến độc lập và glutathione (đã hiệu chỉnh theo tuổi và giới tính) là biến phụ thuộc. (E) Mối tương quan của Spearman giữa các chất chuyển hóa tuần hoàn ở đường cơ sở liên quan đến chuyển hóa glutathione so với những thay đổi về nếp gấp của các phản ứng IL-6, IL-1, IL-1, IL-1, IL-1 và S. aureus có nguồn gốc từ PBMC được đo sau 14 hoặc 90 ngày sau Tiêm phòng BCG so với ban đầu (n=297 tình nguyện viên khỏe mạnh). Bảng trình bày hệ số rho của Spearman cho từng mối tương quan và các mối tương quan màu đỏ làm nổi bật các mối tương quan tích cực đáng kể (* p < 0,05, ** p < 0,01). Mối tương quan giữa nồng độ glutathione và sự thay đổi lần sản xuất IL-1 sau 90 ngày so với ngày 0 được đưa ra làm ví dụ trong biểu đồ phân tán.

4. Thảo luận

Đại thực bào là các tế bào nhựa thích ứng kiểu hình của chúng với các kích thích môi trường khác nhau. Các đại thực bào đã được huấn luyện dựa vào quá trình chuyển hóa năng lượng cao, với sự gia tăng quá trình đường phân, chu trình TCA và quá trình phosphoryl hóa oxy hóa, để đáp ứng với việc tăng cường sản xuất cytokine tiền viêm [6,22].

Ngoài việc sản xuất cytokine, sự bùng nổ oxy hóa với quá trình sản xuất ROS nhanh chóng được tăng lên trong các đại thực bào được huấn luyện lại BCG [8]. Bạch cầu trung tính ở lách được phân lập từ những con chuột được điều trị bằng BCG cũng cho thấy sự gia tăng sản xuất ROS [23]. Để phù hợp với tốc độ trao đổi chất tăng lên và khả năng tăng cường quá trình oxy hóa, chúng tôi đã quan sát thấy rằng các tế bào đơn nhân và đại thực bào tiếp xúc với -glucan hoặc BCG cho thấy sự gia tăng sản xuất ROS cơ bản. Sự gia tăng tương tự trong việc giải phóng ROS đã được báo cáo trước đây trong các tế bào đơn nhân được đào tạo bằng oxLDL [9]. ROS có chức năng tác động trong việc loại bỏ mầm bệnh nhưng cũng có thể làm trung gian truyền tín hiệu [24]. Sự ức chế dược lý của enzyme sản xuất ROS NOX hoặc điều trị bằng các phân tử chống oxy hóa -tocopherol và axit ascorbic không làm mất đi -glucan làm tăng sản xuất cytokine. Tuy nhiên, NAC của ROS scavenger đã ức chế quá trình sản xuất TNF được tăng cường bởi -glucan, cho thấy vai trò có thể có của ROS trong khả năng miễn dịch được đào tạo.

Thật thú vị, NAC không chỉ là một phân tử chống oxy hóa mà còn hoạt động như một tiền chất của glutathione, phân tử chống oxy hóa nội sinh chính. Có hai hệ thống oxy hóa khử tế bào chính, pyridine nucleotide, chẳng hạn như NAD cộng với / NADH, và hệ thống thiol, bao gồm glutathione và thioredoxin. Tỷ lệ NAD cộng với /NADH được tăng lên trong các tế bào đơn nhân tiếp xúc với glucan một cách bền vững sau giai đoạn biệt hóa trong các đại thực bào được đào tạo [22], tương tự như những gì chúng tôi báo cáo về mức độ ROS. Ở đây chúng tôi chỉ ra rằng nồng độ GSH cũng được điều chỉnh trong khả năng miễn dịch được đào tạo.

Đáng chú ý nhất, nồng độ của dạng giảm GSH chỉ được tăng cường trong các đại thực bào được đào tạo khác biệt, trong khi mức độ của GSSG bị oxy hóa là ổn định. Điều này cho thấy rằng các đại thực bào được đào tạo đã tăng lượng dự trữ GSH, trái ngược với NAD cộng với / NADH không hợp tác với việc sản xuất ROS bền vững. Sự đóng góp của quá trình chuyển hóa glutathione đối với khả năng miễn dịch đã được đào tạo được tăng cường hơn nữa bằng phân tích di truyền và chuyển hóa của một nhóm thuần tập gồm những người khỏe mạnh (300BCG). Các đa hình di truyền phổ biến trong các gen liên quan đến GSH đã được tìm thấy có ảnh hưởng đến mức độ sản xuất cytokine đối với khả năng miễn dịch được huấn luyện in vitro và in vivo ( p < 9,99 × 10−3 ). Ngoài ra, hai trong số các locus QTL này, GPX3 ở chr5 và GLRX5 ở chr14, được phát hiện có liên quan đến nồng độ GSH trong huyết tương (p < 0,05).

GSH là một phân tử chống oxy hóa, nhưng nó cũng được biết là điều chỉnh biểu hiện gen thông qua các cơ chế biểu sinh khác nhau. GSH tham gia vào các sửa đổi sau dịch mã, như được quan sát thấy trong quá trình S-glutathionylation của nucleosome protein histone H3, và được cung cấp bởi con đường methionine mà cuối cùng dẫn đến sản xuất s-adenosyl methionine (SAM). Đổi lại, SAM là chất cho methyl chính được sử dụng cho quá trình methyl hóa DNA và histone [7]. Chất chuyển hóa chu trình TCA fumarate tích lũy trong các đại thực bào đã được huấn luyện, và dẫn xuất monomethyl fumarate của nó tạo ra một kiểu hình miễn dịch đã được huấn luyện [5]. Trong tế bào hình sao, tiếp xúc cấp tính với dẫn xuất dimethyl fumarate làm cạn kiệt GSH nội bào nhưng làm tăng tổng GSH ở các thời điểm sau đó [25]. Khả năng miễn dịch đã được đào tạo được củng cố bằng các sửa đổi biểu sinh mang lại trí nhớ dài hạn [26]. Hàm lượng GSH tăng lên được quan sát ở đây của các đại thực bào được đào tạo có thể tạo điều kiện thuận lợi cho việc tái tạo biểu sinh cần thiết để thiết lập bộ nhớ miễn dịch bẩm sinh.

Ở đây, chúng tôi chỉ ra rằng sự điều biến dược lý của glutathione và trạng thái oxi hóa khử của tế bào làm giảm phản ứng dị loại của đại thực bào, như đã thấy qua tác dụng của BSO hoặc NAC đối với việc sản xuất cytokine được tăng cường -glucan. Ngoài ra, trong một nhóm người khỏe mạnh, quá trình chuyển hóa GSH có liên quan đến các đặc điểm miễn dịch đã được đào tạo. Các cơ chế miễn dịch được đào tạo được hình thành bởi quá trình trao đổi chất GSH vẫn còn được khám phá thêm, nhưng sự tham gia tiềm năng của cả cảnh quan trao đổi chất và biểu sinh làm cho trung tâm trao đổi chất này trở thành một con đường thú vị để điều tra trong các nghiên cứu trong tương lai. Những hiểu biết sâu sắc này góp phần làm sáng tỏ hệ thống trao đổi chất và biểu sinh của khả năng miễn dịch được đào tạo, cho phép hiểu rõ hơn về tác động miễn dịch bẩm sinh đối với sức khỏe và bệnh tật. Cuối cùng, sự hiểu biết tốt hơn sẽ giúp xác định các mục tiêu điều trị mới trong các bệnh đặc trưng bởi sự rối loạn điều hòa của các quá trình miễn dịch bẩm sinh.

Sự đóng góp của tác giả:

Khái niệm hóa: AVF và JD-A.; phương pháp: AVF, VACMK, VM và JCA-B., MAG; phân tích chính thức: AVF, VACMK, VM và JCA-B.; điều tra AVF, JCA-B., SK, LCJdB, SJCFMM, VPM và BN; quản lý dữ liệu: AVF, VACMK, VM và BN; viết—chuẩn bị bản thảo gốc, AVF; viết—đánh giá và chỉnh sửa: tất cả các đồng tác giả; giám sát: MAG, MGN và JD-A.; mua tài trợ: MAG và MGN Tất cả các tác giả đã đọc và đồng ý với phiên bản đã xuất bản của bản thảo.

Kinh phí:

JD-A. được hỗ trợ bởi Tổ chức Nghiên cứu Khoa học Hà Lan (VENI cấp 09150161910024). MGN. được hỗ trợ bởi Khoản tài trợ nâng cao ERC (833247) và Khoản tài trợ Spinoza của Tổ chức nghiên cứu khoa học Hà Lan. AVF được hỗ trợ bởi Fundação para a Ciência ea Tecnologia (FCT, Ph.D. cấp PD/BD/135449/2017). JCAB được hỗ trợ bởi một khoản trợ cấp từ Phòng Hành chính Khoa học, Công nghệ và Đổi mới, COLCIENCIAS, ở Colombia (Gọi 756/2016). BN được hỗ trợ bởi Trợ cấp Điều tra viên của NHMRC (Úc) (APP1173314).

Tuyên bố của Ủy ban Đánh giá Thể chế:

Nghiên cứu 300BCG đã được phê duyệt bởi ủy ban đạo đức địa phương CMO khu vực Arnhem- Nijmegen, NL58553.091.16.

Tuyên bố đồng ý có hiểu biết:

Tất cả các đối tượng tham gia nghiên cứu đã nhận được sự đồng ý có hiểu biết, theo sự chấp thuận của ủy ban đạo đức Arnhem-Nijmegen (nr. 2010-104).

Tuyên bố về tính khả dụng của dữ liệu:

Dữ liệu giải trình tự RNA được trình bày trong nghiên cứu này có sẵn trong NCBI Gene Expression Omnibus dưới số gia nhập GSE85243.

Sự nhìn nhận:

Các tác giả xin cảm ơn tất cả các tình nguyện viên đã tham gia vào nghiên cứu 300BCG.

Xung đột lợi ích:

MGN là nhà sáng lập khoa học của TTxD. Các tác giả còn lại tuyên bố không có xung đột lợi ích. Các nhà tài trợ không có vai trò gì trong việc thiết kế nghiên cứu; trong việc thu thập, phân tích hoặc giải thích dữ liệu; trong quá trình viết bản thảo, hoặc trong quyết định công bố kết quả.

Người giới thiệu

1. Netea, MG; Domínguez-Andrés, J.; Barreiro, LB; Chavakis, T.; Divangahi, M.; Fuchs, E.; Joosten, PHÒNG THÍ NGHIỆM; van der Meer, JWM; Mhlanga, MM; Mulder, WJM; et al. Xác định khả năng miễn dịch được đào tạo và vai trò của nó đối với sức khỏe và bệnh tật. tự nhiên Mục sư Immunol. 2020, 20, 375–388. [Tham khảo chéo]

2. Quintin, J.; Saeed, S.; Martens, JHA; Giamarellos-Bourboulis, EJ; Ifrim, DC; Đăng nhập, C.; Jacobs, L.; Jansen, T.; Kullberg, BJ; Wijmenga, C.; et al. Nhiễm trùng Candida albicans giúp bảo vệ chống tái nhiễm thông qua tái lập trình chức năng của bạch cầu đơn nhân. Cell Host Microbe 2012, 12, 223–232. [Tham khảo chéo]

3. Bekkering, S.; Quintin, J.; Joosten, LA; Van Der Meer, JW; Netea, MG; Riksen, Lipoprotein mật độ thấp bị oxy hóa NP tạo ra sự sản xuất Cytokine tiền viêm dài hạn và sự hình thành tế bào bọt thông qua việc tái lập trình biểu sinh của các tế bào đơn nhân. Arter. cục máu đông. Mạch máu sinh học. 2014, 34, 1731–1738. [CrossRef] [PubMed]

4. Benn, CS; Netea, MG; Selin, LK; Aaby, P. A Small Jab-A Big Effect: Điều hòa miễn dịch không đặc hiệu bằng vắc xin. Xu hướng Miễn dịch. 2013, 34, 431–439. [Tham khảo chéo]

5. Nghệ thuật, RJW; Novakovic, B.; ter Horst, R.; Carvalho, A.; Bekkering, S.; Lachmandas, E.; Rodrigues, F.; Silvestre, R.; Trừng, SC; Vương, SY; et al. Glutaminolysis và Tích lũy Fumarate Tích hợp các chương trình chuyển hóa miễn dịch và biểu sinh trong khả năng miễn dịch được đào tạo. Metab tế bào. 2016, 24, 807–819. [CrossRef] [PubMed]

6. Keating, S.; Groh, L.; van der Heijden, C.; Rodriguez, H.; Dos Santos, J.; Fanucchi, S.; Okabe, J.; Kn, H.; van Puffelen, J.; Người giữ, L.; et al. Set7 Lysine Methyltransferase điều chỉnh độ dẻo trong quá trình photphoryl hóa oxy hóa cần thiết cho khả năng miễn dịch được đào tạo do Beta-Glucan gây ra. Cell Rep. 2020, 31, 107548. [CrossRef] [PubMed]

7. García-Giménez, JL; Romá-Mateo, C.; Pérez-Machado, G.; Peiró-Chova, L.; Pallardó, FV Vai trò của glutathione trong việc điều chỉnh các cơ chế biểu sinh trong bệnh tật. Radic tự do. sinh học. y tế. 2017, 112, 36–48. [CrossRef] [PubMed]

8. Bekkering, S.; khối, cử nhân; Joosten, PHÒNG THÍ NGHIỆM; Riksen, NP; Van Crevel, R.; Netea, MG Mô hình thử nghiệm trong ống nghiệm về khả năng miễn dịch bẩm sinh được đào tạo ở người. lâm sàng. Vắc xin Miễn dịch. 2016, 23, 926–933. [Tham khảo chéo]

9. Sohrabi, Y.; Chậm trễ, SMM; Schnack, L.; Godfrey, R.; Kahles, F.; Bruemmer, D.; Waltenberger, J.; Findeisen, HM mTOR. Căng thẳng oxy hóa phụ thuộc điều chỉnh khả năng miễn dịch bẩm sinh được đào tạo do oxLDL gây ra trong các tế bào đơn nhân của con người. Đằng trước. miễn dịch. 2019, 9, 3155. [CrossRef] [PubMed]

10. Van Der Heijden, CDCC; Keating, ST; Groh, L.; Joosten, PHÒNG THÍ NGHIỆM; Netea, MG; Riksen, NP Aldosterone tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo: Vai trò của quá trình tổng hợp axit béo. Tim mạch. độ phân giải 2020, 116, 317–328. [Tham khảo chéo]

11. Domínguez-Andrés, J.; Nghệ thuật, RJW; Bekkering, S.; Bahrar, H.; khối, cử nhân; de Bree, LCJ; Bruno, M.; Bulut, Ö.; Debisarun, PA; Dijkstra, H.; et al. Cảm ứng in vitro của khả năng miễn dịch được đào tạo trong bạch cầu đơn nhân của con người. Giao thức STAR. 2021, 2, 100365. [CrossRef] [PubMed]

12. Novakovic, B.; Habibi, E.; Wang, S.-Y.; Nghệ thuật, RJW; Davar, R.; Megchelenbrink, W.; Kim, B.; Kuznetsova, T.; Kox, M.; Zwaag, J.; et al. -Glucan đảo ngược trạng thái biểu sinh của khả năng dung nạp miễn dịch do LPS gây ra. Ô 2016, 167, 1354–1368.e14. [Tham khảo chéo]

13. Kostidis, S.; Addie, RD; Morreau, H.; Mayboroda, viêm khớp; Giera, M. Phân tích NMR định lượng về chuyển hóa trong và ngoài tế bào của tế bào động vật có vú: Hướng dẫn. hậu môn. Chim. Acta 2017, 980, 1–24. [Tham khảo chéo]

14. Koeken, VACM; de Bree, LCJ; Mouris, VP; Moorlag, SJCFM; Đi bộ, J.; Cirovic, B.; Nghệ thuật, RJW; Jaeger, M.; Dijkstra, H.; Lemmers, H.; et al. Tiêm phòng BCG ở người ức chế viêm toàn thân theo cách phụ thuộc vào giới tính. J. Lâm sàng. điều tra. 2020, 130, 5591–5602. [Tham khảo chéo]

15. Dự án Bộ gen Chức năng Con người. Có sẵn trực tuyến: http://www.humanfunctiongenomics.org/site/ (được truy cập vào ngày 19 tháng 4 năm 2021).

16. Shah, TS; Lưu, JZ; Floyd, JAB; Morris, JA; Với, N.; Barret, JC; Anderson, CA OptiCall: Thuật toán gọi kiểu gen mạnh mẽ cho các biến thể phổ biến, tần số thấp và hiếm gặp. Tin sinh học 2012, 28, 1598–1603. [Tham khảo chéo]

17. Deelen, P.; Trái phiếu, MJ; Van Der Velde, KJ; Tây, HJ; Winder, E.; Hendriksen, D.; Franke, L.; Swertz, MA Bộ điều hòa kiểu gen: Tự động căn chỉnh chuỗi và chuyển đổi định dạng để tích hợp dữ liệu kiểu gen. BMC Res. Ghi chú 2014, 7. [CrossRef]

18. McCarthy, S.; Das, S.; Kretzschmar, W.; Delaneau, O.; Gỗ, AR; Teumer, A.; Kang, HM; Fuchsberger, C.; Danecek, P.; sắc nét, K.; et al. Một bảng tham chiếu gồm 64.976 haplotypes cho việc cắt bỏ kiểu gen. tự nhiên gien. 2016, 48, 1279–1283. [Tham khảo chéo]

19. Shabalin, AA Matrix eQTL: Phân tích eQTL cực nhanh thông qua các phép toán ma trận lớn. Tin sinh học 2012, 28, 1353–1358. [Tham khảo chéo]

20. Quốc trưởng, T.; Heer, D.; Begemann, B.; Zamboni, N. Hồ sơ chuyển hóa khối lượng chính xác, thông lượng cao của chiết xuất tế bào bằng phép đo khối phổ thời gian tiêm dòng chảy. hậu môn. hóa học. 2011, 83, 7074–7080. [Tham khảo chéo]

21. Kalafati, L.; Kourtzelis, tôi.; Schulte-schrepping, J.; Verginis, P.; Mitroulis, I. Đào tạo miễn dịch bẩm sinh của Granulopoiesis thúc đẩy hoạt động chống khối u. Ô 2020, 183, 771–785.e12. [Tham khảo chéo]

22. Thành, SC; Quintin, J.; Cramer, RA; Shepardson, KM; Saeed, S.; Kumar, V.; Giamarellos-Bourboulis, EJ; Martens, JHA; Rao, NA; Aghajanirefah, A.; et al. Quá trình đường phân hiếu khí qua trung gian MTOR- và HIF-1 -làm cơ sở trao đổi chất cho khả năng miễn dịch đã được huấn luyện. Khoa học 2014, 345, 1250684. [CrossRef]

23. Moorlag, SJCFM; Rodriguez-Rosales, YA; Gillard, J.; Fanucchi, S.; Theunissen, K.; Novakovic, B.; de Bont, CM; Negishi, Y.; Fok, TBD; Kalafati, L.; et al. Tiêm chủng BCG tạo ra sự tái lập trình chức năng dài hạn của bạch cầu trung tính ở người. Đại diện di động 2020, 33. [CrossRef]

24. Forrester, SJ; Kikuchi, DS; Hernandes, MS; Từ, Q.; Griendling, KK Các loại oxy phản ứng trong chuyển hóa và truyền tín hiệu viêm. Vòng tròn. độ phân giải 2018, 122, 877–902. [Tham khảo chéo]

25. Brennan, MS; Matos, tiền vệ; Lý, B.; Hronowski, X.; Cao, B.; Juhasz, P.; Rhodes, KJ; Scannevin, RH Dimethyl fumarate và monoethyl fumarate thể hiện tác dụng khác biệt đối với hoạt hóa KEAP1, NRF2 và sự suy giảm glutathione trong ống nghiệm. PLoS MỘT 2015, 10, e0120254. [Tham khảo chéo]

26. Kaufmann, E.; Sanz, J.; Dunn, JL; khan, N.; Mendonça, LÊ; Pacis, A.; Tzelepis, F.; Pernet, E.; Dumaine, A.; Grenier, J.-C.; et al. BCG giáo dục các tế bào gốc tạo máu để tạo ra khả năng miễn dịch bẩm sinh bảo vệ chống lại bệnh lao. Ô 2018, 172, 176–190.e19. [Tham khảo chéo]

Anaisa V. Ferreira 1,2,* , Valerie ACM Koeken 1,3,4 , Vasiliki Matzaraki 1 , Sarantos Kostidis 5 , Juan Carlos Alarcon-Barrera 5 , L. Charlotte J. de Bree 1 , Simone JCFM Moorlag 1 , Vera P .Mourits 1 , Boris Novakovic 6,7, Martin A. Giera 5 , Mihai G. Netea 1,8 và Jorge Domínguez-Andrés.

1 Khoa Nội và Trung tâm Bệnh truyền nhiễm Radboud (RCI), Trung tâm Y tế Nijmegen Đại học Radboud, 6500 HB Nijmegen, Hà Lan;

Valerie.Koeken@radboudumc.nl (VACMK); Vasiliki.Matzaraki@radboudumc.nl (VM);

Charlotte.deBree@radboudumc.nl (LCJdB); Simone.Moorlag@radboudumc.nl (SJCFMM);

Vera.Mourits@radboudumc.nl (VPM); Mihai.Netea@radboudumc.nl (MGN).

2 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar (ICBAS), Đại học Porto, 4050-313 Porto, Bồ Đào Nha.

3 TWINCORE, một liên doanh giữa Trung tâm Nghiên cứu Nhiễm trùng Helmholtz (HZI) và Trường Y khoa Hannover (MHH), 30625 Hannover, Đức.

4 Trung tâm Y học Nhiễm trùng Cá nhân hóa (CiiM), Khoa Sinh học Tính toán cho Y học Nhiễm trùng Cá nhân hóa, liên doanh giữa Trung tâm Nghiên cứu Nhiễm trùng Helmholtz (HZI) và Trường Y khoa Hannover (MHH), 30625 Hannover, Đức.

5 Trung tâm Proteomics và Trao đổi chất, Trung tâm Y tế Đại học Leiden (LUMC),2333 ZA Leiden, Hà Lan; s.kostidis@lumc.nl (SK); jcalarcon_barrera@lumc.nl (JCA-B.);m.a.giera@lumc.nl (MAG)

6 Nghiên cứu Biểu sinh, Viện Nghiên cứu Trẻ em Murdoch, Parkville, VIC 3052, Australia;boris.novakovic@mcri.edu.au.

7 Khoa Nhi, Đại học Melbourne, Melbourne, VIC 3052, Australia.

8 Khoa Hệ gen & Điều hòa Miễn dịch, Viện Khoa học Đời sống và Y học (LIMES), Đại học Bonn, 53115 Bonn, Đức.

* Thư từ: anaisa.validoferreira@radboudumc.nl (AVF); Jorge.dominguezandres@radboudumc.nl (JD-A.); Tel.: plus 31-2436-16636 (JD-A.).

For more information:1950477648nn@gmail.com