HydroZitLa ức chế sự hình thành sỏi canxi oxalat ở chuột bị sỏi thận và kéo dài tuổi thọ ở tuyến trùng Caenorhabditis Elegans Phần 2

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có khả năng loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra, đồng thời cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.

Bấm vào Cistanche Norge

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Dựa trên những phát hiện hiện tại của chúng tôi, HydroZitLa đã thực hiện chức năng kháng mầm bệnh thông qua ít nhất hai con đường. Đầu tiên, nó làm giảm bài tiết oxalat trong nước tiểu, giảm khả năng kết tinh CaOx trong nước tiểu và cung cấp citrate. Thứ hai, nó chứa các polyphenol thảo dược có khả năng làm giảm căng thẳng oxy hóa và viêm nhiễm, do đó ức chế quá trình tạo thạch CaOx. Về cơ bản, oxalate được tổng hợp nội sinh trong gan bằng cách sử dụng glyoxylate như một tiền chất nổi bật41. Glyoxylate được tổng hợp từ glycolate bởi enzyme glycolate oxidase (GO), và nó tiếp tục được chuyển đổi thành oxalate bởi lactate dehydrogenase (LDH). Chúng tôi thấy rằng HydroZitLa làm giảm đáng kể bài tiết oxalat trong nước tiểu ở chuột được điều trị bằng EG. Chúng tôi đã suy đoán rằng HydroZitLa đã ức chế con đường tổng hợp oxalat ở gan thông qua quá trình điều hòa giảm các enzym gan tham gia vào quá trình chuyển hóa glyoxylate, đặc biệt là LDH và GO. Nghiên cứu trước đây của Kailash và Varalakshmi đã chứng minh rằng chiết xuất thân chuối làm giảm nồng độ GO và LDH ở gan ở chuột hyperoxaluric do natri glycolate gây ra27. Poonguzhali và Chegu cũng báo cáo rằng chiết xuất thô từ thân chuối làm giảm oxalat niệu, axit glycolic và axit glyoxylic ở chuột hyperoxaluric do glycolate gây ra30. Gần đây, Patankar et al. đã chứng minh rằng công thức thảo dược của họ, được gọi là Herbmed Plus (chứa thân chuối), làm giảm mức độ hoạt động của LDH trong các mô gan và thận42. Để xác minh suy đoán của chúng tôi, sự biểu hiện của các enzym gan và thận liên quan đến tổng hợp oxalat ở chuột EG được điều trị bằng HydroZitLa nên được khám phá thêm.

Một số dòng bằng chứng ủng hộ mạnh mẽ rằng stress oxy hóa, viêm và tổn thương ống thận có liên quan nghiêm trọng đến quá trình tạo thạch CaOx3,4,15,43–45. Stress oxy hóa gây ra bởi các tinh thể oxalate và/hoặc CaOx gây ra tổn thương ống thận tạo ra các vị trí tạo mầm tinh thể, kết dính, lưu giữ, tập hợp và cuối cùng là hình thành ổ43,46,47. Hơn nữa, stress oxy hóa kích hoạt phản ứng viêm, từ đó đẩy nhanh quá trình tạo thạch4,47,48. Do đó, dược liệu thực vật có đặc tính chống oxy hóa và chống viêm là một biện pháp đầy hứa hẹn để ngăn ngừa hình thành sỏi thận24. Aggarwal và cộng sự. đã được chứng minh trong mô hình chuột bị sỏi thận do EG gây ra rằng bergenin (hợp chất phenol hoạt tính sinh học được phân lập từ Bergenia ligulata) có tác dụng kháng mầm bệnh mạnh để giảm thiểu stress oxy hóa, cải thiện rối loạn chức năng ty lạp thể và giảm tổn thương và viêm ống thận49. Rutin và curcumin (các chất hóa học thực vật bản địa nổi tiếng có đặc tính chống oxy hóa và chống viêm) đã được chứng minh là có tác dụng ức chế tổn thương ống kẽ thận và lắng đọng tinh thể ở chuột bị sỏi thận do EG50. Polyphenol từ hạt nho cũng đã được chứng minh là có tác dụng ức chế sự lắng đọng tinh thể CaOx trong thận ở chuột bị bệnh sỏi do EG gây ra, một cách hợp lý thông qua hoạt động chống oxy hóa của chúng51. Một công thức thảo dược Ayurveda Herbmed đã được chứng minh là làm giảm tổn thương do viêm và lắng đọng tinh thể trong thận của chuột bị sỏi thận do EG gây ra42. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng HydroZitLa làm giảm căng thẳng oxy hóa trong thận, viêm và lắng đọng tinh thể CaOx, cho thấy rằng HydroZitLa đã thực hiện các hoạt động chống oxy hóa và chống viêm để ngăn ngừa sự hình thành sỏi thận CaOx.

Một số polyphenol thực vật đã được chứng minh bằng thực nghiệm là có lợi cho việc kéo dài tuổi thọ và trì hoãn lão hóa52. Resveratrol là hợp chất polyphenolic kéo dài tuổi thọ đặc trưng nhất. Nó chủ yếu hoạt động thông qua kích hoạt sirtuin và giảm căng thẳng oxy hóa53. Tác dụng kéo dài tuổi thọ của resveratrol được thử nghiệm trong mô hình C. elegans khác nhau giữa các nghiên cứu với sự gia tăng tuổi thọ trung bình từ 10 đến 65 phần trăm 54,55. HydroZitLa đã kéo dài đáng kể tuổi thọ của C. elegans hoang dã lên đến 34 phần trăm mà không có dấu hiệu độc tính, cho thấy rằng tác dụng kéo dài tuổi thọ của HydroZitLa tương đương với tác dụng của resveratrol. Hạn chế chế độ ăn uống là một cơ chế quan trọng được biết đến để kéo dài tuổi thọ56. Tốc độ bơm vào hầu họng được so sánh giữa giun HydroZitLa và giun đối chứng là tương đương nhau, cho thấy rằng việc kéo dài tuổi thọ nhờ HydroZitLa không phải là kết quả của việc hạn chế chế độ ăn uống.

HydroZitLa làm giảm đáng kể sự tích tụ lipofuscin sắc tố tuổi tự phát huỳnh quang ở C. Elegans, cho thấy tác dụng chống lão hóa. ROS và stress oxy hóa là những tác nhân gây SIPS nổi tiếng và stress oxy hóa đẩy nhanh quá trình rút ngắn telomere57. Gần đây, chúng tôi đã chứng minh rằng oxalat, COM và nước tiểu từ bệnh nhân bị sỏi CaOx gây ra lão hóa sớm, tái điều hòa p16 và tiêu hủy telomere trong các tế bào ống thận thông qua stress oxy hóa 58. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng HydroZitLa đã ức chế sự tiêu hao telomere, tái điều hòa p16 và lão hóa sớm trong các tế bào HK-2 tiếp xúc với H2O2, oxalat và COM. Mặc dù cơ chế phân tử cho tác dụng chống lão hóa này chưa được giải thích chi tiết, nhưng HydroZitLa được đề xuất để ngăn chặn sự lão hóa sớm một cách cơ học thông qua việc ức chế quá trình rút ngắn telomere và điều chỉnh giảm biểu hiện p16.

Mặc dù các biện pháp chữa bệnh bằng thảo dược và thuốc từ thực vật dần dần trở nên phổ biến và được chấp nhận trên toàn cầu, nhưng bằng chứng khoa học về hiệu quả và độ an toàn phải được cung cấp và không được thỏa hiệp. Sự tương tác giữa thảo dược và thuốc hầu như không thể dự đoán được vì nó rất khác nhau giữa các cá nhân, tùy thuộc vào một số yếu tố như tính đa hình của enzym cytochrom P450 và chất vận chuyển thuốc, và các điều kiện y tế hiện có59. Các tác dụng phụ của việc sử dụng đồng thời thảo dược và thuốc phải được theo dõi chặt chẽ để xác định các tương tác tiềm ẩn giữa thảo mộc và thuốc. Các loại thảo mộc được biết đến nhiều nhất có tương tác nghiêm trọng với thuốc bao gồm tỏi, Baizhi, Danggui, nhân sâm, bạch quả, cam thảo, St John's wort, Kava, hạt tiêu đen và dài, Danshen, Huangqin và cây kế sữa59. Theo hiểu biết của chúng tôi, không có tác dụng phụ nghiêm trọng hoặc tương tác thuốc nào được báo cáo đối với thân cây chuối, hoa đậu xanh bướm và gỗ sappan. Ở Thái Lan, thân chuối được tiêu thụ như một nguyên liệu thực phẩm. Uống quá nhiều (uống quá mức) nước ép thân chuối có thể gây dị ứng, đau bụng và nôn mửa, do đó nên uống vừa phải. Hoa đậu xanh thường được sử dụng trong thực phẩm như một chất tạo màu tự nhiên, và nó cũng được dùng để pha trà. Tác dụng phụ của việc tiêu thụ quá nhiều trà hoa đậu biếc, chẳng hạn như đau bụng, buồn nôn và phản ứng dị ứng, hiếm khi được báo cáo. Gỗ sappan cũng thường được sử dụng làm chất tạo màu thực phẩm tự nhiên và trong các cộng đồng (bao gồm cả các cộng đồng ở Thái Lan), nó thường được tiêu thụ như một thức uống tốt cho sức khỏe. Tuy nhiên, chức năng tránh thai (chống khả năng sinh sản ở nam giới) của chiết xuất gỗ sappan được chứng minh trên mô hình chuột, vì nó cản trở quá trình sinh tinh60. Mặt khác, tâm gỗ của Caesalpinia sappan L. được dùng làm thuốc điều trị các triệu chứng phụ khoa, bao gồm thiểu kinh và vô kinh61. Do đó, sự an toàn của việc tiêu thụ HydroZitLa lâu dài ở người vẫn phải được xác định chắc chắn trong thử nghiệm lâm sàng.

Nghiên cứu này có một số hạn chế. Các hợp chất hoạt động chính xác chịu trách nhiệm về chức năng ức chế đá CaOx không được xác định và mô tả. Cơ chế chính xác của HydroZitLa để ức chế sự hình thành sỏi CaOx ở chuột chưa được nghiên cứu rộng rãi. Tác dụng kháng mầm bệnh phụ thuộc vào liều lượng của HydroZitLa chưa được nghiên cứu. Liều HydroZitLa có thể làm tăng đáng kể nồng độ citrate trong nước tiểu ở chuột bị sỏi thận chưa được khám phá. Hồ sơ phenolic của HydroZitLa cần được nghiên cứu thêm. Cơ chế thúc đẩy tuổi thọ của HydroZitLa ở C. Elegans không được khám phá chuyên sâu. Cuối cùng, các hợp chất cụ thể trong HydroZitLa chịu trách nhiệm về tuổi thọ và chống lão hóa đã không được xác định và mô tả.

Tóm lại, HydroZitLa được phát triển để đồng thời bình thường hóa các yếu tố nguy cơ hình thành sỏi CaOx bằng cách cung cấp chất lỏng, citrate và chất chống oxy hóa tự nhiên. Về mặt thực nghiệm, HydroZitLa đã ức chế sự lắng đọng CaOx trong thận ở chuột bị sỏi thận. Hiệu quả ức chế tạo sỏi CaOx của HydroZitLa tương đương với Kali citrat (Uralyt-U) đang được sử dụng hiện nay. HydroZitLa làm giảm căng thẳng oxy hóa một cách hiệu quả cả trong ống nghiệm và trong cơ thể sống. Đáng chú ý, HydroZitLa đã kéo dài tuổi thọ và trì hoãn quá trình lão hóa ở C. elegans. Hơn nữa, HydroZitLa ức chế đáng kể quá trình rút ngắn telomere, biểu hiện p16 và lão hóa sớm ở tế bào thận người. Những phát hiện tiền lâm sàng này cho thấy HydroZitLa là một giải pháp thay thế đầy hứa hẹn về mặt lâm sàng để điều trị sỏi thận CaOx kèm theo các lợi ích về tăng tuổi thọ và chống lão hóa. Các thử nghiệm lâm sàng là cần thiết để đảm bảo hiệu quả điều trị của HydroZitLa ở người.

Nguyên liệu và phương pháp

Sản xuất HydroZitLa, hàm lượng chất chống oxy hóa và thực tế dinh dưỡng. HydroZitLa là một loại nước giải khát cô đặc có nguồn gốc từ cây thuốc có bán tại địa phương ở Tailand32. Đồ uống được chuẩn bị bằng cách pha loãng HydroZitLa đậm đặc (55 mL đựng trong túi kín) với nước uống (đến thể tích cuối cùng là 500 mL). Nó có màu tím hồng với vị chua ngọt thơm ngon. Thành phần chính của HydroZitLa là chiết xuất nước từ thân chuối (Musa sapientum L.) và axit xitric (16 mEq/túi). Các cây thuốc truyền thống của người Thái bao gồm Clitoria ternatea L. (bột hoa đậu biếc) và Caesalpinia sappan L. (bột gỗ sappan) được sử dụng làm chất tạo màu tự nhiên. Stevia và sucralose là chất làm ngọt. Sản phẩm đã được Tai FDA phê duyệt vào ngày 10 tháng 4 năm 2019, thuộc danh mục đồ uống đựng trong hộp kín (Sê-ri thực phẩm số 10–1-02,244–5-0005).

Tổng khả năng chống oxy hóa (TAC) của HydroZitLa là 21,87 ± 7,96 mg khả năng chống oxy hóa tương đương vitamin C trên mỗi túi (Hình bổ sung 8). Tổng hàm lượng phenolic (TPC) là 19,99 ±0,83 mg đương lượng axit gallic/100 g. Hàm lượng favonoid tổng (TFC) là 4,59± 0,31 mg catechin đương lượng/100 g. Để kiểm soát chất lượng, TAC, TPC và TFC đã được sử dụng làm thông số kiểm soát chất lượng. Hàm lượng TAC, TPC và TFC trong thân chuối, hoa đậu biếc và chiết xuất gỗ sappan giữa các lô và thời điểm bảo quản không có sự khác biệt đáng kể. Trong quá trình sản xuất HydroZitLa, giá trị TAC, TPC, TFC và brix (17±2) được sử dụng làm thông số kiểm soát chất lượng để duy trì tính nhất quán giữa các lô.

Tổng năng lượng của HydroZitLa trên mỗi túi (khẩu phần) là 25 kcal. Không phát hiện hàm lượng protein, chất béo và cholesterol. Tổng carbohydrate là 6 g, đường là<1 g, and sodium was 10 mg. The potassium content was 240 mg/100 g. Soluble and insoluble dietary fibers were 0.74 and 0.43 g/100 g, respectively. Te pH of  HydroZitLa was 3.4.

Đánh giá độc tính.Sự hiện diện của Escherichia coli, Clostridium spp., Salmonella spp., và Staphylococcus aureus trong HydroZitLa đã được phân tích bởi Cục Chất lượng và An toàn Thực phẩm, Bộ Y tế Công cộng, Thái Lan. Hồ sơ kim loại của HydroZitLa đã được phân tích bởi ICP-OES.

Độc tính cấp tính in vivo của HydroZitLa trên chuột đã được thử nghiệm bởi Viện Nghiên cứu Cây thuốc, Bộ Y tế Công cộng, Thái Lan. HydroZitLa hoặc nước (đối chứng) được cho chuột uống với liều 20 mL/kg (n=10 mỗi nhóm). Chuột được quan sát trong 14 ngày trước khi khám nghiệm tử thi. Các tổn thương lớn ở các cơ quan nội tạng đã được kiểm tra và so sánh giữa nhóm HydroZitLa và nhóm đối chứng.

Xét nghiệm tổng hợp CaOx.Tinh thể COM giống đã được điều chế62 và pha loãng thành 50 mg/mL trong 0.05 M Tris/0.15 NaCl, pH 6,5. HydroZitLa, hoặc BSA, hoặc nước cất (để trống) (200 µL) được thêm vào huyền phù COM hạt giống đang hoạt động mới được chuẩn bị (2 mL). Sau khi trộn, độ hấp thụ ở bước sóng 620 nm được đo như đường nền (AT0). Sau khi ủ ở 37 độ trong 10 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 620nm được đo lại (AT10). Hệ số tổng hợp (AC) được tính như sau: AC=((AT0− AT10)/10)×1000. Giá trị AC cao hơn cho biết tổng hợp COM cao hơn.

Dòng tế bào, độc tính tế bào và xác định ROS nội bào.Các tế bào HK{{0}} (ATCC, VA, USA) được duy trì trong DMEM bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò và 1% Pen-Strep trong điều kiện 37 độ, 5% CO2 và 95% độ ẩm. Độc tính tế bào của HydroZitLa trong các tế bào HK-2 được đánh giá bằng xét nghiệm MTT63. Các tế bào HK-2 được gieo hạt (200 tế bào/giếng), được nuôi cấy qua đêm trong đĩa giếng 96-và được xử lý bằng các nồng độ khác nhau của HydroZitLa (0 làm đối chứng, 1,25 phần trăm , 2,5 phần trăm , 5 phần trăm , 10 phần trăm , 20 phần trăm , 40 phần trăm , 50 phần trăm , 80 phần trăm và 100 phần trăm v/v) trong 24 giờ. Sau khi rửa, dung dịch MTT được thêm vào, ủ trong 1 giờ rồi loại bỏ. Dimethyl sulfoxide được thêm vào để hòa tan các tinh thể formazan. Độ hấp thụ ở 570nm đã được đo. Khả năng tồn tại của tế bào ( phần trăm ) được tính toán bằng cách sử dụng các ô chưa được xử lý làm đối chứng (khả năng tồn tại 100 phần trăm).

Sự ức chế sản xuất ROS nội bào bởi HydroZitLa được xác định bằng xét nghiệm dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) trong đĩa giếng 96-64,65. Các tế bào HK-2 được kết hợp với dung dịch 0.1 M DCFH-DA và được ủ ở 37 độ trong 30 phút. Sau khi rửa, các tế bào được thử thách với H2O2 hoặc COM (có và không có 10 phần trăm v/v HydroZitLa). Cường độ huỳnh quang (được kích thích ở bước sóng 485nm và phát ra ở bước sóng 535nm) được đo lúc bắt đầu (T0) và 60 phút (T60). Đơn vị huỳnh quang tùy ý (AFU), cho biết mức tạo ROS, được tính toán như sau: AFU= T60/T0.

Đo lượng carbonyl hóa protein.Hàm lượng protein carbonyl, như một chỉ số về quá trình oxy hóa protein, được đo theo các báo cáo trước đây của chúng tôi64–66. Các tế bào HK-2 đã xử lý (trong đĩa 100-mm) được ly giải bằng dung dịch đệm xét nghiệm phản ứng ức chế miễn dịch phóng xạ có chứa cocktail ức chế protease. Tổng nồng độ protein được đo bằng xét nghiệm Bradford. Lysate của tế bào được ủ với dung dịch dinitrophenylhydrazine (DNPH) 10 mM hoặc HCl 2 N trong 1 giờ trong bóng tối. Axit trichloroacetic 20% lạnh đã được thêm vào và ủ trong 10 phút trên băng. Các viên nhỏ được thu thập bằng cách ly tâm, rửa bằng etyl axetat: etanol (1:1) và hòa tan lại bằng guanidine HCl 6 M. Đo độ hấp thụ (A) ở bước sóng 375 nm. Hàm lượng protein carbonyl được chuẩn hóa theo nồng độ protein tổng số được tính như sau: ((ADNPH – AHCl)×45,45)/nồng độ protein.

Mô hình chuột cho bệnh sỏi thận CaOx.EG (1 phần trăm v/v) được bổ sung trong nước uống (truy cập miễn phí quảng cáo tự do, trong 35 ngày) đã được sử dụng để gây ra bệnh sỏi thận CaOx ở chuột. Chuột Wistar đực (6–8 tuần tuổi, 180–300 g) được chia thành bốn nhóm, cụ thể là EG (n=6), EG cộng với HydroZitLa (n=6), EG cộng với Uralyt-U (n=6) và nhóm kiểm soát bình thường (n=2). Tất cả chuột được nhốt trong lồng thép không gỉ ở 25 độ trong chu kỳ tối 12:12 giờ. Hai con chuột đối chứng chỉ được sử dụng có mục đích để so sánh lượng CaOx lắng đọng trong thận chuột và hóa mô miễn dịch, không phải cho hóa học nước tiểu. HydroZitLa và Uralyt-U được cho ăn hai lần mỗi ngày (sáng và tối) với tổng liều citrate là 2 mEq mỗi ngày. Liều citrate được sử dụng này tương đương với 60,8 mEq citrate ở người được tính toán dựa trên sự chuyển đổi liều do Reagan-Shaw và cộng sự đề xuất.67. 24-h mẫu nước tiểu được thu thập vào cuối can thiệp (ngày 35) sử dụng thymol làm chất bảo quản. Chuột được gây mê bằng isoflurane và hy sinh. Cả hai quả thận đã được cắt bỏ, cắt và cố định trong dung dịch đệm formalin trung tính 10% để nghiên cứu mô học.

Tất cả chuột được mua từ Trung tâm Động vật Phòng thí nghiệm Quốc gia, Đại học Salaya Campus Mahidol, Nakhonpathom, Thái Lan. Các quy trình thí nghiệm được thực hiện theo hướng dẫn dành cho động vật thí nghiệm của Hội đồng Nghiên cứu Quốc gia Thái Lan và được phê duyệt bởi Ủy ban Chăm sóc & Sử dụng Động vật Thể chế, Khoa Y, Đại học Chulalongkorn (Số 022/2560). Nghiên cứu của chúng tôi đã được thực hiện tuân thủ các nguyên tắc ARRIVE.

Sự lắng đọng CaOx ở các phần thận bằng kính hiển vi phân cực.Các phần thận chuột nhúng parafin cố định bằng parafin đã được chuẩn bị bằng bộ xử lý mô tự động. Nhuộm H & E được thực hiện theo quy trình chuẩn. Các tinh thể CaOx lưỡng chiết trong các phần nhuộm màu H & E được hiển thị bằng kính hiển vi ánh sáng phân cực (OLYMPUS BX50, Nhật Bản).

Nhuộm Yasue cho hóa mô CaOx.Các phần mô thận được khử chất paraffin, bù nước, ngâm trong axit axetic 5% trong 30 phút để loại bỏ canxi photphat và canxi cacbonat, và rửa bằng nước cất 68. Các phần này được ủ với AgNO3 5% trong 12 phút, rửa sạch và ủ với rubeanic bão hòa axit trong amoni 10 phần trăm trong 1 phút. Các phần nhuộm màu được rửa bằng ethanol 50 phần trăm, rửa bằng nước cất, khử nước, làm sạch và gắn kết. Kết tủa CaOx màu đen được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng69.

nhuộm hóa mô miễn dịch.Sau khi khử paraffin và bù nước, quá trình thu hồi kháng nguyên được thực hiện bằng cách đun sôi trong dung dịch đệm natri xitrat bằng lò vi sóng. H2O2 nội sinh bị bất hoạt bằng cách ủ với 0.3% H2O2 trong 30 phút. Liên kết không đặc hiệu đã bị chặn bằng cách ủ với huyết thanh ngựa bình thường trong 20 phút. Sau đó, các phần được ủ với kháng thể sơ cấp 1:1,000 4-HNE (ab46545, Abcam, Cambridge, UK) hoặc caspase phân cắt-3 (5A1E, Cell Signaling Technology, MA, USA) ở 4 độ qua đêm, sau đó ủ với kháng thể thứ cấp ở 37 độ trong 30 phút. Sau khi rửa, các phần được ủ với thuốc thử ABC (bộ VECTASTAIN® ABC) trong 30 phút, ngâm trong thuốc thử nhuộm diaminobenzidine 1% trong 5 phút và nhuộm ngược với hematoxylin trong 5 phút. Cuối cùng, các phần được khử nước, làm sạch, gắn kết và hiển thị dưới kính hiển vi ánh sáng.

Các phép đo citrate, oxalate, axit uric và iCOCI trong nước tiểu. Nồng độ citrate trong nước tiểu được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (Varian Medical Systems, CA, USA) sử dụng cột ROAorganic Acid H plus (300×7,8 mm) (Phenomenex, CA, USA) và rửa giải bằng 5 mM H2SO4 với tốc độ dòng 0,5 mL/phút. Nồng độ oxalate và axit uric trong nước tiểu được đo bằng điện di mao quản (Beckman Coulter, CA, USA) được phân tách ở 25 độ với điện áp −20 kV. Xét nghiệm iCOCI trong nước tiểu được thực hiện theo báo cáo trước đây của chúng tôi 38.

C. elegans chủng và bảo trì.Chủng loại hoang dã C. Elegans Bristol N2 và nguồn thực phẩm trong phòng thí nghiệm của nó là E. coli OP50 được lấy từ Trung tâm Di truyền Caenorhabditis, Đại học Minnesota, Hoa Kỳ. Chúng được nuôi và duy trì trong các đĩa thạch có môi trường phát triển tuyến trùng với một bãi cỏ E. coli OP50 ở 20 độ 70. Tất cả các thí nghiệm được tiến hành ở những con giun trưởng thành đồng bộ về lứa tuổi.

Xét nghiệm tuổi thọ.Phân tích tuổi thọ được thực hiện trong môi trường lỏng71. Tóm lại, 10 tuyến trùng trưởng thành non được đồng bộ hóa theo độ tuổi đã được chuyển vào đĩa giếng 24-có đệm M9 cùng với E. coli OP50 và 5-fuoro-2′- deoxyuridine để ngăn chặn quá trình sản xuất thế hệ con cháu. Các nồng độ khác nhau của HydroZitLa đã được thêm vào bằng cách sử dụng nước cất để kiểm soát phương tiện. Tuyến trùng còn sống được đếm cứ sau 24 giờ. Tuyến trùng được coi là đã chết khi chúng không phản ứng với việc chọc nhẹ bằng vòng bạch kim.

Xét nghiệm bơm hầu họng.Sự bơm vào hầu họng (một chỉ số về khả năng hấp thụ thức ăn) được đo ở tuyến trùng trưởng thành trẻ (~10) so với giữa đối chứng và bổ sung HydroZitLa, bằng cách theo dõi sự co thắt của hầu họng trong 30 giây trong mỗi 24 giờ dưới kính hiển vi soi nổi (SMZ{ {3}}, Motic, Trung Quốc) vào các ngày 0 (trước khi bổ sung), 5, 10 và 1572.

Xét nghiệm lipofuscin.Sự tích lũy lipofuscin trong tuyến trùng dại sau khi bổ sung HydroZitLa ở các nồng độ khác nhau (20 phần trăm , 30 phần trăm , 40 phần trăm v/v) trong 5 ngày đã được theo dõi. Giun E. coli OP50-được cho ăn đã được sử dụng làm đối chứng. Sau can thiệp, giun được rửa bằng dung dịch đệm M9 nhiều lần và được đặt trên một phiến kính trong một giọt natri azide. Hình ảnh huỳnh quang được thực hiện bằng kính hiển vi đồng tiêu ZEISS LSM 700. Hình ảnh được phân tích sâu hơn bằng phần mềm Image J và cường độ huỳnh quang được trình bày dưới dạng đơn vị tùy ý (AU)72.

Đo chiều dài telomere tương đối. Độ dài telomere tương đối (RTL) được đo trong các tế bào HK-2 được xử lý bằng H2O2 (25 µM), natri oxalate (NaOx, 900 µM) và COM (25 µg/cm2 ) có hoặc không có HydroZitLa (10 phần trăm v /v). RTL được xác định bằng phản ứng chuỗi polymerase định lượng thời gian thực (qPCR)73. Nó được tính toán dựa trên tỷ lệ giữa số bản sao của đoạn lặp lại telomeric với số bản sao của gen một bản sao (gen 36B4) tỷ lệ với chiều dài trung bình của telomere. Các đoạn mồi được sử dụng như sau: Telomere (chuyển tiếp) 5′-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3′, Telomere (đảo ngược) 5′-GGC TTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT-3′, 34B4 (chuyển tiếp) 5′-CAGCAAGTGGGAAGGTGT AATCC{{23 }}′ và 36B4 (đảo ngược) 5′-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA-3′. PCR được khuếch đại ở 95 độ trong 10 phút, sau đó là 40 chu kỳ 95 độ trong 15 giây và 54 độ trong 1 phút.

Nhuộm kép SA‑‑gal và p16.Các tế bào HK{0}} phát triển trên các tấm phủ được xử lý bằng H2O2, NaOx và COM có và không có 10 phần trăm v/v HydroZitLa trong 72 giờ để tạo ra SIPS. Sau khi xử lý, các tế bào được cố định và nhuộm bằng dung dịch X-gal mới chuẩn bị (Vivantis, Malaysia) trong 12–16 giờ, rửa sạch, thấm bằng 0,1% Triton X-100 (Amresco, TX, USA) trong 3 phút và bị chặn vì liên kết không đặc hiệu với huyết thanh ngựa bình thường 1% (Gibco, MA, USA) ở 37 độ trong 1 giờ. Sau đó, các tế bào được ủ với kháng thể sơ cấp 1:10,000 p16 (ab108349, Abcam) ở 4 độ qua đêm, tiếp theo là 1:10,000 Alexa Fluor® 488-kháng thể thứ cấp liên hợp ( Cell Signaling Technology) ở 37 độ trong 30 phút. Tấm phủ đã nhuộm màu được gắn bằng phương tiện gắn Fluoroshield với 4′,6-diamidino-2-phenylindole (Abcam). SA- -tế bào bạch cầu dương tính với gal (màu xanh lam) và tế bào p16-biểu hiện (màu xanh lá cây) được hiển thị và chụp ảnh bằng hệ thống hình ảnh EVOS FL Auto 2 (Thermo Fisher Khoa học, MA, Hoa Kỳ).

Phân tích thống kê.Tất cả dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn hoặc trung vị (phạm vi liên dải), nếu phù hợp. Thử nghiệm t-test hoặc Mann–Whitney hai mẫu được thực hiện để kiểm tra sự khác biệt giữa hai nhóm. Phân tích phương sai một chiều hoặc thử nghiệm Kruskal–Wallis, sau đó là thử nghiệm so sánh nhiều lần, được sử dụng để kiểm tra sự khác biệt giữa ba nhóm trở lên. Phần mềm GraphPad Prism phiên bản 9 (GraphPad Sofware Inc., CA, USA) đã được sử dụng để tính toán và vẽ đồ thị. P<0.05 was considered significant.

Người giới thiệu

1. Michell, AR Urolithzheim–các khía cạnh lịch sử, so sánh và sinh lý bệnh: Đánh giá. JR Sóc. y tế. 82, 669–672 (1989).

2. Shah, J. & Whitfield, HN Sỏi niệu qua các thời kỳ. Quốc tế BJU 89, 801–810 (2002).

3. Boonla, C. et al. Biểu hiện RNA thông tin của protein hóa học đơn nhân-1 và interleukin-6 trong thận chứa sỏi. Quốc tế BJU 101, 1170–1177 (2008).

4. Boonla, C. et al. Xơ hóa và bằng chứng cho sự chuyển đổi biểu mô-trung mô ở thận của bệnh nhân bị sỏi staghorn. Quốc tế BJU 108, 1336–1345 (2011).

5. Chuang, TF và cộng sự. Nguy cơ mắc bệnh thận mãn tính ở bệnh nhân sỏi thận-một nghiên cứu đoàn hệ toàn quốc. BMC Nephrol. 21, 292 (2020).

6. Dhondup, T. et al. Nguy cơ ESRD và tử vong ở những người tạo sỏi thận và bàng quang. Là. J. Thận Dis. 72, 790–797 (2018).

7. Kum, F. và cộng sự. Đá có còn giết người không? Một phân tích về cái chết do bệnh sỏi đá 1999–2013 ở Anh và xứ Wales. Quốc tế BJU 118, 140–144 (2016).

8. Geraghty, RM, Cook, P., Walker, V. & Somani, BK Đánh giá gánh nặng kinh tế của bệnh sỏi thận ở Anh: Một nghiên cứu đoàn hệ hồi cứu với thời gian theo dõi trung bình là 19 năm. Quốc tế BJU 125, 586–594 (2020).

9. C. Türk (Chủ tịch), AN, A. Petrik, C. Seitz, A. Skolarikos (Phó chủ tịch), K. Tomas & Các cộng sự của Hướng dẫn: NF Davis, JFD, R. Lombardo, N. Grivas, Y. Ruhayel. Hướng dẫn của Hiệp hội Tiết niệu Châu Âu (EAU) về Sỏi niệu.

10. Jendle-Bengten, C. & Tiselius, HG Theo dõi lâu dài các chất tạo sỏi được điều trị bằng natri kali citrate liều thấp. quét. J.Urol. Nephrol. 34, 36–41 (2000).

11. Schwille, PO, Herrmann, U., Wolf, C., Berger, I. & Meister, R. Citrate và sỏi niệu canxi vô căn tái phát. Một nghiên cứu thí điểm theo chiều dọc về tác dụng chuyển hóa của kali citrate đường uống được sử dụng trong thời gian ngắn hạn, trung bình và dài hạn đối với bệnh nhân nam bị sỏi. Urol. độ phân giải 20, 145–155 (1992).

12. Tracy, CR & Pearle, MS Cập nhật về quản lý y tế bệnh sỏi. Curr. ý kiến. Urol. 19, 200–204 (2009).

13. Mechlin, C., Kalorin, C., Asplin, J. & White, M. Splenda(R) cải thiện khả năng dung nạp khi bổ sung kali citrate qua đường uống để ngăn ngừa hình thành sỏi: Kết quả của một thử nghiệm mù đôi ngẫu nhiên. J. Endourol. 25, 1541–1545 (2011).

14. Boonla, C. Stress oxy hóa trong sỏi tiết niệu, Các loài oxy phản ứng (ROS) trong tế bào sống, Cristiana Filip và Elena Albu, IntechOpen.

15. Boonla, C., Wunsuwan, R., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. 8-hydroxydeoxyguanosine tiết niệu tăng cao ở những bệnh nhân bị sỏi thận. Urol. độ phân giải 35, 185–191 (2007).

16. Khan, SR Căng thẳng oxy hóa do Hyperoxaluria gây ra và các chất chống oxy hóa để bảo vệ thận. Urol. độ phân giải 33, 349–357 (2005).

17. Khan, SR Các loại oxy phản ứng như là chất điều biến phân tử của sự hình thành sỏi thận oxalat canxi: Bằng chứng từ các nghiên cứu lâm sàng và thực nghiệm. J.Urol. 189, 803–811 (2013).

18. Kittikowit, W. et al. Tăng tổn thương DNA oxy hóa được thấy trong sinh thiết thận gần sỏi ở bệnh nhân sỏi thận. Sỏi tiết niệu 42, 387–394 (2014).

19. Yasui, T. et al. Điều trị sỏi tiết niệu dựa vào sinh lý bệnh học. quốc tế J.Urol. 24, 32–38 (2017).

20. Huang, HS, Ma, MC & Chen, J. Chế độ ăn ít vitamin E làm trầm trọng thêm sự hình thành tinh thể canxi oxalate thông qua tăng cường oxy hóa ở thận tăng oxy máu của chuột. Là. J. Vật lý. thận. vật lý. 296, F34-45 (2009).

21. Huang, HS, Chen, J., Chen, CF & Ma, MC Vitamin E làm giảm sự hình thành tinh thể ở thận chuột: Vai trò của chất ức chế sự chết và kết tinh của tế bào ống thận. Thận Int. 70, 699–710 (2006).

22. Tamilselvan, S. & Menon, M. Liệu pháp vitamin E ngăn ngừa sự lắng đọng tinh thể canxi oxalat do tăng oxy máu gây ra ở thận bằng cách cải thiện tình trạng chống oxy hóa của mô thận. Quốc tế BJU 96, 117–126 (2005).

23. Tamilselvan, S. & Selvam, R. Tác dụng của vitamin E và mannitol đối với việc giữ canxi oxalate ở thận trong bệnh sỏi thận thực nghiệm. Ấn Độ J. Biochem. lý sinh học. 34, 319–323 (1997).

24. Butterweck, V. & Khan, SR Thuốc thảo dược trong điều trị sỏi niệu: Thay thế hay bổ sung? Thực vật Med. 75, 1095–1103 (2009).

25. Kasote, DM, Jagtap, SD, Tapa, D., Khyade, MS & Russell, WR Các phương pháp điều trị sỏi tiết niệu bằng thảo dược được sử dụng ở Ấn Độ và Trung Quốc: Đánh giá. J. Dược phẩm dân tộc. 203, 55–68 (2017).

26. Abu Zarin, M., Tan, JS, Murugan, P. & Ahmad, R. Điều tra hoạt động chống sỏi tiết niệu tiềm năng từ các loại chiết xuất thân giả Musa khác nhau trong việc ức chế kết tinh canxi oxalat. BMC bổ sung Med. Ter. 20, 317 (2020).

27. Kailash, P. & Varalakshmi, P. Tác dụng của nước ép thân chuối đối với những thay đổi sinh hóa trong gan của chuột bình thường và chuột bị tăng oxy máu. Ấn Độ J. Exp. sinh học. 30, 440–442 (1992).

28. Prasad, KV, Bharathi, K. & Srinivasan, KK Đánh giá Musa (giống Linn. giống thiên đường)– Nước ép thân cây "Puttubale" cho hoạt động chống sỏi ở chuột bạch tạng. Người Ấn Độ J. Physiol. dược phẩm. 37, 337–341 (1993).

29. Panigrahi, PN, Dey, S., Sahoo, M. & Dan, A. Hiệu quả chống sỏi niệu và chống oxy hóa của Musa paradisiaca pseudostem đối với bệnh sỏi thận do ethylene glycol gây ra ở chuột. Ấn Độ J. Pharmacol. 49, 77–83 (2017).

30. Poonguzhali, PK & Chegu, H. Te ảnh hưởng của chiết xuất thân chuối đối với các yếu tố nguy cơ tiết niệu đối với sỏi ở chuột bình thường và chuột bị tăng oxy máu. anh J.Urol. 74, 23–25 (1994).

31. Pillai, RG Cốt lõi của thân giả Musa trong điều trị sỏi tiết niệu. Cuộc sống khoa học Anc. 15, 2–6 (1995).

32. Lordumrongkiat, N., Chotechuang, N., Madared, N., Jindatip, D. & Boonla, C. Tổng phenolics, tổng flavonoid và tổng khả năng chống oxy hóa của nước giải khát có nguồn gốc từ cây thuốc: HydroZitLa. Chula Med. J. 64, 381–388 (2020).

33. Sakhaee, K. Dược lý bệnh sỏi. quảng cáo Bệnh thận mãn tính. 16, 30–38 (2009).

34. Baumann, JM & Afolter, B. Vai trò nghịch lý của các đại phân tử nước tiểu trong quá trình tổng hợp canxi oxalate: Một biện pháp nữa để tăng lợi tiểu trong điều trị sỏi. Sỏi tiết niệu 44, 311–317 (2016).

35. Reddy, AJ và cộng sự. Tác dụng chống co giật và chống oxy hóa của chiết xuất thân cây Musa sapientum trên các mô hình thí nghiệm cấp tính và mãn tính của bệnh động kinh. Dược hiệu độ phân giải 10, 49–54 (2018).

36. Jaafar, NF, Ramli, ME & Mohd Salleh, R. Điều kiện chiết xuất tối ưu của Clitorea ternatea fower về hoạt tính chống oxy hóa, hàm lượng phenolic tổng số, flavonoid tổng số và anthocyanin tổng số. nhiệt đới. Khoa học đời sống độ phân giải 31, 1–17 (2020).

37. Nirmal, NP, Rajput, MS, Prasad, RG & Ahmad, M. Brazilin từ lõi gỗ Caesalpinia sappan và các hoạt tính dược lý của nó: Đánh giá. Á Pác. J. Trop. y tế. 8, 421–430 (2015).

38. More-Krong, P. et al. Xác nhận lâm sàng xét nghiệm chỉ số kết tinh canxi oxalate phản ứng indole (iCOCI) trong nước tiểu để chẩn đoán sỏi niệu canxi oxalate. Khoa học. Dân biểu 10, 8334 (2020).

39. Yasui, T. et al. Tác dụng của citrate đối với sự hình thành sỏi thận và biểu hiện loãng xương trong mô hình sỏi tiết niệu ở chuột. Urol. độ phân giải 29, 50–56 (2001).

40. Ghaeni, FA, Amin, B., Hariri, AT, Meybodi, NT & Hosseinzadeh, H. Tác dụng chống sỏi của crocin đối với bệnh sỏi do ethylene glycol gây ra ở chuột. Sỏi tiết niệu 42, 549–558 (2014).

41. Holmes, RP & Assimos, tổng hợp DG Glyoxylate, điều chế và ảnh hưởng của nó đối với quá trình tổng hợp oxalat. J.Urol. 160, 1617–1624 (1998).

42. Patankar, S., Fanthome, B. & Bhalerao, SS Hiệu quả của cỏ cộng với ở chuột sỏi niệu: Một nghiên cứu thực nghiệm. J. Tích hợp Ayurveda. y tế. 11, 250–255 (2020).

43. Chaiyarit, S. & Tongboonkerd, V. Rối loạn chức năng ty lạp thể và bệnh sỏi thận. Vật lý phía trước. 11, 566506 (2020).

44. Holoch, PA & Tracy, CR Chất chống oxy hóa và tiền sử tự báo cáo về sỏi thận: Khảo sát Kiểm tra Sức khỏe và Dinh dưỡng Quốc gia. J. Endourol. 25, 1903–1908 (2011).

45. Khan, SR Có phải stress oxy hóa, mối liên hệ giữa sỏi thận và béo phì, tăng huyết áp, tiểu đường, bệnh thận mãn tính, hội chứng chuyển hóa? Urol. độ phân giải 40, 95–112 (2012).

46. ​​Hirose, M. et al. Tổn thương tế bào biểu mô ống thận và stress oxy hóa gây ra sự hình thành tinh thể canxi oxalate ở thận chuột. quốc tế J.Urol. 17, 83–92 (2010).

47. Khan, SR Các loại oxy phản ứng, viêm và sỏi thận oxalate canxi. Bản dịch. Androl. Urol. 3, 256–276 (2014).

48. Boonla, C. et al. Đồng minh protein gây viêm và xơ hóa được xác định là thành phần protein chính trong nước tiểu và ma trận sỏi của bệnh nhân bị sỏi thận. lâm sàng. Chim. Acta 429, 81–89 (2014).

49. Aggarwal, D., Gautam, D., Sharma, M. & Singla, SK Bergenin làm giảm tổn thương thận bằng cách đảo ngược rối loạn chức năng ty thể trong mô hình chuột tăng oxy máu do ethylene glycol gây ra. Ơ. J. Dược phẩm. 791, 611–621 (2016).

50. Ghodasara, J., Pawar, A., Deshmukh, C. & Kuchekar, B. Tác dụng ức chế của rutin và curcumin đối với sỏi niệu canxi oxalate gây ra trên thực nghiệm ở chuột. Dược hiệu độ phân giải 2, 388–392 (2010).

51. Grases, F. et al. Tác dụng của polyphenol từ hạt nho đối với bệnh sỏi thận. oxi. y tế. Tế bào. Longev. 2015, 813737 (2015).

52. Cherniack, EP Ảnh hưởng tiềm năng của polyphenol thực vật đối với quá trình lão hóa. Forsch Komplemented. 17, 181–187 (2010).

53. Gỗ, JG et al. Các chất kích hoạt Sirtuin bắt chước hạn chế calo và trì hoãn quá trình lão hóa ở metazoans. Thiên nhiên 430, 686–689 (2004).

54. Bonkowski, MS & Sinclair, DA Làm chậm lão hóa theo thiết kế: Sự gia tăng của NAD(cộng) và các hợp chất kích hoạt sirtuin. tự nhiên Mục sư Mol. Tế bào. sinh học. 17, 679–690 (2016).

55. Bhullar, KS & Hubbard, BP Kéo dài tuổi thọ và sức khỏe bằng resveratrol. sinh học. lý sinh học. Acta. 1852, 1209–1218 (2015).

56. von Frieling, J. & Roeder, T. Các yếu tố ảnh hưởng đến việc chuyển chế độ ăn kiêng hạn chế thành một cuộc sống lâu hơn. IUBMB Life 72, 814–824 (2020).

57. von Zglinicki, T. Căng thẳng oxy hóa làm rút ngắn telomere. Xu hướng Khoa học Hóa sinh. 27, 339–344 (2002).

58. Chuenwisad, K. et al. Lão hóa sớm và rút ngắn telomere gây ra bởi stress oxy hóa từ oxalate, canxi oxalate monohydrat và nước tiểu từ bệnh nhân mắc bệnh sỏi thận oxalate canxi. Đằng trước. miễn dịch. 12, 696486 (2021).

59. Hu, Z. et al. Tương tác thuốc-thảo dược: Một đánh giá tài liệu. Thuốc 65, 1239–1282 (2005).

60. Susanti, S. & Imannura, P. Tác dụng của chiết xuất gỗ Secang (Ceasalpinia Sappan L.) đối với hình thái của tinh trùng và quá trình đảo ngược ở chuột cống đực. Trong Kỷ yếu các Hội nghị Quốc tế chung lần thứ 2. ISBN: 978-602-5842-03-0 (2018).

61. Kim, BS và cộng sự. Caesalpinia sappan gây chết tế bào apoptotic trong các tế bào 12Z nội mạc tử cung ngoài tử cung bằng cách ức chế biểu hiện pyruvate dehydrogenase kinase 1. hết hạn Ter. y tế. 21, 357 (2021).

62. Boonla, C., Youngjermchan, P., Pumpaisanchai, S., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Hoạt tính sinh sỏi và sự liên quan lâm sàng của lipid chiết xuất từ ​​nước tiểu và sỏi của bệnh nhân sỏi thận. Urol. độ phân giải 39, 9–19 (2011).

63. Kloypan, C., Srisa-art, M., Mutirangura, A. & Boonla, C. Quá trình hypometyl hóa LINE-1 gây ra bởi các loại oxy phản ứng được trung gian thông qua sự cạn kiệt S-adenosylmethionine. Hóa sinh tế bào. chức năng. 33, 375–385 (2015).

64. Whongsiri, P., Phoyen, S. & Boonla, C. Stress oxy hóa trong quá trình sinh ung thư tiết niệu: Đo lường quá trình carbonyl hóa protein và sản xuất nội bào của các loại oxy phản ứng. Phương pháp Mol. sinh học. 1655, 109–117 (2018).

65. Whongsiri, P. et al. Căng thẳng oxy hóa và kích hoạt lại LINE-1 trong ung thư bàng quang được liên kết về mặt di truyền thông qua sự hình thành chất nhiễm sắc hoạt động. Radic tự do. sinh học. y tế. 134, 419–428 (2019).

66. Whongsiri, P. et al. LINE-1 Protein ORF1 được điều chỉnh tăng bởi các loại oxy phản ứng và có liên quan đến sự tiến triển của ung thư biểu mô tiết niệu bàng quang. Bộ gen ung thư. Proteom. 15, 143–151 (2018).

67. Reagan-Shaw, S., Nihal, M. & Ahmad, N. Bản dịch liều lượng từ nghiên cứu trên động vật sang người được xem xét lại. FASEB J. 22, 659–661 (2008).

68. Yasue, T. Xác định mô hóa học của canxi oxalat. Acta Histochem. tế bào học. 2, 83–95 (1969).

69. Evan, AP và cộng sự. Mảng Randall của bệnh nhân sỏi thận bắt đầu ở màng đáy của quai Henle mỏng. J. Lâm sàng. Đầu tư. 111, 607–616 (2003).

70. Prasanth, MI, Santoshram, GS, Bhaskar, JP & Balamurugan, K. Ultraviolet-A kích hoạt quá trình quang hóa trong mô hình tuyến trùng Caenorhabditis elegans theo con đường phụ thuộc vào DAF-16. Tuổi (Dordr) 38, 27 (2016).

71. Brimson, JM, Prasanth, MI, Plaingam, W. & Tencomnao, T. Bacopa monnieri (L.) wettst. Chiết xuất bảo vệ chống lại độc tính glutamate và tăng tuổi thọ của Caenorhabd viêm Elegans. J. Truyền thống. Tổ hợp. y tế. 10, 460–470 (2020).

72. Prasanth, MI, Brimson, JM, Chuchawankul, S., Sukprasansap, M. & Tencomnao, T. Chống lão hóa, chống căng thẳng và hiệu quả bảo vệ thần kinh của Cleistocalyx nervosum var. chiết xuất từ ​​quả bách bệnh sử dụng mô hình Caenorhabditis elegans. oxi. y tế. Tế bào. Longev. 2019, 7024785 (2019).

73. Cawthon, RM Đo Telomere bằng PCR định lượng. Axit nucleic Res. 30, e47 (2002).

Sự nhìn nhận

Nghiên cứu được hỗ trợ tài chính bởi Quỹ Khoảng cách Nghiên cứu của Bộ Khoa học và Công nghệ, Cơ quan Phát triển Khoa học và Công nghệ Quốc gia (NSTDA) và Đại học Chulalongkorn (GB-rgf_60_2905_0003 to CB), và bởi Cơ quan Nghiên cứu và Phát triển Khoa học Thái Lan. Đổi mới, Bộ phận Công nghiệp (RDG6150088 đến CB) và Khoa Y, Đại học Chulalongkorn (Quỹ đối sánh). NL nhận Quỹ kỷ niệm 90 năm Đại học Chulalongkorn (Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund). Các tác giả xin chân thành cảm ơn sự hỗ trợ về nghiên cứu và đổi mới do Trung tâm Công nghệ Đại học Chulalongkorn và Quỹ Đổi mới và Nghiên cứu Khoa học Thái Lan (TSRI) (CU_FRB640001_01_2) cung cấp. Cảm ơn cô Natcha Madared vì sự hỗ trợ tuyệt vời của họ. Hãy biết ơn các nhân viên trong cơ sở động vật của Khoa Y, Đại học Chulalongkorn. Xin cảm ơn Trợ lý GS. TS. Sitthichai Ukritchon và GS. TS. Manathip Osiri đã hỗ trợ việc sử dụng kính hiển vi phân cực.

Sự đóng góp của tác giả

NL: Thực hiện các thí nghiệm trên tế bào và chuột, đồng thời thu thập dữ liệu. NC: Thu thập dữ liệu và giúp hình thành ý tưởng nghiên cứu và phân tích dữ liệu. MP: Lên ý tưởng và thực hiện thí nghiệm C. Elegans, đồng thời thực hiện phân tích dữ liệu C. Elegans. DJ: Đã giúp đỡ trong các thí nghiệm hóa mô miễn dịch và hình ảnh. CM: Giúp đỡ trong việc cắt mô. KC: Thực hiện các thí nghiệm rút ngắn và lão hóa telomere. AL: Được quản lý để tiếp cận cơ sở động vật để thí nghiệm trên chuột. TT: Đã giúp hình thành và thiết kế thí nghiệm C. Elegans. CB: Lên ý tưởng và thiết kế nghiên cứu, thực hiện phân tích thống kê và viết bản thảo. Tất cả các tác giả đã xem xét bản thảo.

Lợi ích cạnh tranh

CB, NC và NL là những người phát minh ra HydroZitLa. Đại học Chulalongkorn và các nhà phát minh sở hữu tài sản trí tuệ cho HydroZitLa. Không ai trong số các tác giả khác có bất kỳ xung đột lợi ích nào để tuyên bố về tác phẩm hiện tại.

Thông tin thêm

Thông tin bổ sungPhiên bản trực tuyến chứa tài liệu bổ sung có sẵn trên trang web.

Thư tínvà các yêu cầu về tài liệu nên được gửi đến CB

In lại và thông tin quyềncó sẵn trên trang web.

ghi chú của nhà xuất bảnSpringer Nature vẫn giữ thái độ trung lập về các tuyên bố về quyền tài phán trong các bản đồ đã xuất bản và các tổ chức liên kết.

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】