Xác định các EST đáp ứng Hydrogen Peroxide liên quan đến sinh tổng hợp Glycoside Phenylethanoid trong nuôi cấy tế bào Cistanche Salsa

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN và cộng sự

Trừu tượng
Hydrogen peroxide là một elicitor phi sinh học hiệu quả có thể gây ra sinh tổng hợp chất chuyển hóa thứ cấp ở thực vật. Chúng tôi chỉ ra rằng trong nuôi cấy huyền phù tế bào của một cây thuốc chịu mặnCistanche ·Salsa, sản xuất các thành phần hoạt tính sinh họcphenylethanoidglycoside(PeGs) đã được tăng lên sau khi điều trị H2O2. Để xác định các gen liên quan đến PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp bị ảnh hưởng bởi H2O2, chúng tôi đã xây dựng một thư viện lai trừ ức chế các gen đáp ứng H2O2 bằng cách sử dụngCistanche ·Salsadòng tế bào và xác định 105 thẻ trình tự biểu hiện (EST) và 85 gen. Chú thích chức năng thư viện EST và các phân tích bản thể gen cho thấy các gen liên quan đến các phản ứng căng thẳng khác nhau, sinh tổng hợp các chất chuyển hóa thứ cấp và điều hòa phiên mã. Trong số đó, chúng tôi đã xác định được hai gen liên quan đến PeGs(phenylethanoidglycoside)con đường sinh tổng hợp (coenzyme 4-coumarate A ligase và cinnamate 4-hydroxylase), và hai yếu tố phiên mã loại WRKY. Các biểu hiện của các gen được chọn sau khi điều trị H2O2 đã được rt-qPCR phân tích. Phiên mã PeG tăng sớm(phenylethanoidglycoside)các gen con đường sinh tổng hợp sau khi điều trị cho thấy H2O2 đã gây ra PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp thông qua up-regulation của các gen quan trọng của nó.
Từ khóa bổ sung: cinnamate-4-hydroxylase, coumarate coenzyme A ligase, ức chế lai trừ.Cistanche ·Salsa.phenylethanoidglycoside.

Giới thiệu

Cistanche ·Salsalà một loại ký sinh trùng thực vật lâu năm trên rễ của Haloxylos ammodendrun, và nó phát triển ở khu vực sa mạc phía tây Trung Quốc. Trong nhiều thế kỷ,Cistanche ·loài đã được sử dụng làm thuốc thảo dược truyền thống (Wang et al. 2012). Thành phần hoạt tính sinh học làphenylethanoidglycoside(PeGs) có tác dụng đáng chú ý trong việc giải phóng mặt bằng các loại oxy phản ứng (ROS), bảo vệ bức xạ, tăng cường miễn dịch và chống lão hóa (Nan et al. 2013). Chốt(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp trongCistanche ·được bắt đầu từ nmol (Hình 1 Suppl.) và axit caffeic tổng hợp được tiếp tục glycosyl hóa để tạo thành các PeGs khác nhau(phenylethanoidglycoside)(Wang và cộng sự 2012). Ba PeGs chính(phenylethanoidglycoside), echinacoside, acteoside và 2'-acetylacteoside, được coi là những thành phần hoạt động mạnh nhất trongCistanche ·(Kobayashi và cộng sự 1984). Để nâng cao nội dung của họ trongCistanche ·nuôi cấy tế bào, các chất gợi ý khác nhau đã được thử nghiệm bao gồm chitosan, putrescine, Ag + và căng thẳng thẩm thấu (Ouyang et al. 2005a, b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu and Cheng 2008). Tuy nhiên, các gen liên quan đến PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp trongCistanche ·, chủ yếu là các gen của con đường chuyển hóa phenylalanine, hiếm khi được xác định. Chỉ có một mã hóa gen phenylalanine ammonia-lyase (PAL) gần đây đã được xác định trong Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Các gen khác mã hóa, ví dụ, cinnamate-4-hydroxylase (C4H), có thể xúc tác cho sự chuyển đổi cinnamate thành axit cumaric và coenzyme 4-coumarate A ligase (4CL), một gen thiết yếu cho sinh tổng hợp lignin và flavanoids, chưa được tìm thấy trongCistanche ·.
Chúng tôi đã sử dụng nuôi cấy tế bào củaCistanche ·Salsađể nghiên cứu PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp và biểu hiện gen liên quan. Chúng tôi cũng đã điều tra ảnh hưởng của một Elicitor H2O2 hiệu quả đối với PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp. Hơn nữa, để tìm ra các gen đáp ứng sớm liên quan đến PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp, chúng tôi đã tiến hành lai trừ ức chế (SSH) để xây dựng một thư viện cDNA gồm các gen đáp ứng H2O2.

Hình 1. Biểu hiện gen tương đối được xác định bởi RT-qPCR sau khi điều trị H2O2. CsWRKY1 - Yếu tố phiên mã WRKY (Contig07), CsC4H1 - cinnamate 4-hydroxylase (Contig09), Cs4CL1 - 4-coumarate: ligase (Contig03), CsHSP1 - protein sốc nhiệt 70 kDa (Contig 01) và CsSOD1 - superoxide dismutase (Contig16). Các tế bào được xử lý bằng 80 μg dm-3 H2O2 trong môi trường lỏng trong 2 giờ và các biểu hiện được so sánh với đối chứng được xử lý bằng nước. Có nghĩa là +- SD của ba lần lặp lại sinh học; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Vật liệu và phương pháp

Dòng tế bào CS2001 được thiết lập từ cánh hoa củaCistanche ·Salsa(C.A. Mey.) Beck thu thập tại tỉnh Neimenggu và nuôi cấy phụ. Phương pháp nuôi cấy tương tự như một giao thức được xuất bản trước đây (Liu et al. 2007). Nói chung, một Murashige và Skoog rắn (1962; MS) môi trường được sử dụng cho văn hóa nhóm và môi trường lỏng cho PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp (đó là môi trường MS biến đổi được bổ sung 30 g glucose dm-3 và axit 2,0 mg dm-3 indole-3-acetic). Đối với điều trị H2O2, 5,0 ± 0,2 g tế bào trong giai đoạn tăng trưởng nhanh, thường là 20 đến 30 d sau khi chúng được nuôi cấy nhóm trong môi trường rắn, được cấy vào môi trường lỏng 50 cm3 trong bình Erlenmeyer 250 cm3 và được nuôi cấy trong bóng tối có hoặc không có nồng độ H2O2 khác nhau. Các PeGs(phenylethanoidglycoside)nội dung sau cảm ứng 10 d của H2O2 đã được phân tích theo một phương pháp được công bố trước đó (Liu et al. 2007) dựa trên sắc ký lỏng hiệu suất cao pha ngược với sự khử gradient methanol.

Các tế bào 2 giờ sau khi xử lý H2O2 được thu thập từ môi trường bằng giấy lọc sử dụng phễu Büchner, và sau đó chúng được đông lạnh trong nitơ lỏng và nghiền thành bột. Cứ 2 g bột tế bào được ly giải bằng hỗn hợp 1 cm3 2-mercaptoethanol, 1 cm3 200 g dm-3 sarcosyl và 8 cm3 dung dịch đệm GTC (5 M guanidinium isothiocyanate, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM thiourea và 10 mM dithiothreitol). Các tế bào sau đó được ủ trên băng trong 15 phút, sau đó 1/3 thể tích 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, được thêm vào, và các tế bào được ủ trên băng trong 15 phút và sau đó ly tâm ở 15 000 g trong 15 phút. Chất siêu âm đã được thêm vào một thể tích isopropanol bằng nhau để kết tủa tổng RNA. Tổng RNA được tinh chế thêm bằng bộ mini RNeasy (Qiagen, Hilden, Hoa Kỳ) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. RNA thông tin được phân lập từ tổng RNA bằng cách sử dụng bộ midi mRNA Oligotex (Qiagen).

phenylethanoidglycosidetrongCistanche ·Salsa

Một thư viện SSH được tạo ra từ các mẫu tế bào kiểm soát và 30% H2O2 gợi ra 2 giờ sau khi gợi ra bằng cách sử dụng bộ trừ cDNA chọn PCR (Clontech, Mountain View, Hoa Kỳ). Để xây dựng thư viện, các sản phẩm được tinh chế riêng biệt bằng bộ lọc gel (Qiagen) và nhân bản thành vectơ pGEM bằng bộ nhân bản TA (Tiangen, Bắc Kinh, Trung Quốc). Plasmid từ các bản sao độc lập đã được phân lập và giải trình tự bằng sơn lót T7. Tất cả các chuỗi thẻ chuỗi được thể hiện (EST) từ thư viện (với các chuỗi vectơ bị loại bỏ) đã được sử dụng để lắp ráp contig với CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). Các EST được nhóm lại thành các contigs và singletons; chúng được sử dụng để tìm kiếm tương đồng bằng cách sử dụng chương trình BLASTx tại NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Các trình tự sau đó được chú thích, phân tích và phân loại theo các thuật ngữ bản thể gen (GO) bằng cách sử dụng Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Phản ứng chuỗi polymerase định lượng thời gian thực (RT-qPCR) được thực hiện theo Bustin et al. (2009). Các mẫu cDNA được tổng hợp bằng bộ thuốc thử PrimeScript RT (Takara, Đại Liên, Trung Quốc) từ 0,5 μg tổng RNA. RT-qPCR được thực hiện bằng bộ dụng cụ SYBR Premix Ex Taq II và ROX plus (Takara) trên hệ thống PCR thời gian thực ABI 7300 (Applied Biosystems, Foster City, Hoa Kỳ) với ba bản sao kỹ thuật. Mồi được thiết kế bằng phần mềm Primer3 trực tuyến theo hướng dẫn do Takara cung cấp; mồi được sử dụng trong nghiên cứu này được liệt kê trong Bảng 1 Suppl. Các biểu hiện gen đã được bình thường hóa thành RNA 18S, biểu hiện của nó ổn định trong tất cả các mẫu.

Kết quả được phân tích bằng cách sử dụng R phiên bản 3.1.1, tầm quan trọng của sự khác biệt đã được xác minh bằng bài kiểm tra t-test của Học sinh.

Kết quả

Hydrogen peroxide gây ra quá trình sinh tổng hợp của cả ba PeG chính(phenylethanoidglycoside)trongCistanche ·Salsaô treo (Bảng 1) nhưng không có ảnh hưởng rõ ràng đến sự phát triển của tế bào (Hình. S2). Hàm lượng echinacoside đã tăng sau khi xử lý 10 μg dm-3 H2O2 (P< 0.05),="" a="" higher="" increase="" was="" recorded="" after="" the="" 20="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment="" (p="">< 0.01),="" and="" the="" highest="" increase="" was="" after="" the="" 40,="" 80,="" and="" 160="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatments.="" similar="" results="" are="" shown="" for="" acteoside,="" but="" its="" content="" peaked="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment.="" the="" biosynthesis="" of="" 2'-acetylacteoside="" was="" less="" sensitive="" to="" h2o2="" treatment;="" a="" significant="" increase="" of="" its="" content="" (p="">< 0.05)="" was="" at="" h2o2="" concentrations="" over="" 40="" μg="" dm-3.="" after="" the="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2="" treatment,="" the="" amount="" of="" all="" the="" three="" main="" pegs="">(phenylethanoidglycoside)tăng đáng kể (P< 0.01)="" over="" the="" control.="" therefore,="" this="" concentration="" was="" used="" in="" further="">
Để tạo ra một thư viện được làm giàu cho các gen đáp ứng sớm được điều chỉnh bởi H2O2, chúng tôi đã sử dụng cDNA từCistanche ·SalsaCác tế bào huyền phù được xử lý bằng 80 μg dm-3 H2O2 trong 2 giờ. Trình tự một lần vượt qua 129 bản sao tái tổ hợp trong thư viện SSH đã mang lại 105 EST sạch sau khi loại trừ chuỗi vectơ. Các EST trong suốt này đã được CAP3 sử dụng để lắp ráp, và 18 contigs và 67 singletons đã được tạo ra (Bảng 2). Do đó, 85 gen đã được phân lập trong thư viện này. Độ dài trung bình của 105 EST sạch là 527 bp, đủ cho việc phân loại chức năng dựa trên sự tương đồng về trình tự.

phenylethanoidglycosidetrongCistanche ·Salsa

Tất cả 85 gen thu được trong thư viện đã được BLASTx truy xuất dựa trên cơ sở dữ liệu protein không dư thừa GenBank để có sự tương đồng về trình tự (Giá trị E ≤ 0,001). Hai mươi mốt gen cho thấy không có lần truy cập nào trong cơ sở dữ liệu, chúng có thể cụ thể choCistanche ·Salsa. Kết quả với BLASThits đã được nhập vào phần mềm Blast2GO để tiếp tục phân tích làm giàu lộ trình GO và KEGG. Trong số 64 gen có lượt truy cập BLAST, 50 gen đã được chú thích theo mô tả về các gen tương đồng từ các loài khác. Các gen được chú thích được đặt tên theo mô tả của các lần truy cập BLAST. Phân tích GO (Hình 3 Suppl.) cho thấy trong số 50 gen này, có 14 gen liên quan đến phản ứng với các kích thích và hơn 30 gen liên quan đến quá trình trao đổi chất (Bảng 1 và 2). Trong số các gen này, hai tương đồng gen con đường sinh tổng hợp PeG đã được phân lập như mong đợi: coenzyme 4-coumarate A ligase (có tên Cs4CL1: Contig03) và cinnamate 4-hydroxylase (có tên CsC4H1: Contig14). Hơn nữa, RT-qPCR đã được thực hiện để xác nhận các biểu hiện cảm ứng của gen từ thư viện sau khi điều trị H2O2.

Để xác nhận rằng các gen thiết yếu được xác định từ thư viện SSH đáp ứng với phương pháp điều trị H2O2, các biểu hiện của hai PeGs(phenylethanoidglycoside)các gen liên quan đến con đường sinh tổng hợp (Cs4CL1, CsC4H1), hai gen cảm ứng ROS (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) và một gen giống như yếu tố phiên mã gia đình WRKY (CsWRKY1: Contig 07) được đo bằng RT-qPCR sau khi điều trị bằng H2O2 (Hình 1). Các biểu thức CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 và CsWRKY1 đã được điều chỉnh hơn 15 lần, 3 lần, 45 lần và 4 lần, tương ứng 2 giờ sau khi điều trị H2O2. Biểu hiện của CsHSP1 chỉ bị thay đổi 1,8 lần sau khi điều trị H2O2.
Quá trình thời gian của các biểu thức của CsWRKY1, CsC4H1 và Cs4CL1 sau khi xử lý H2O2 đã được RT-qPCR (Hình 2) phân tích thêm. Các biểu thức CsC4H1 và Cs4CL1 đã được tăng lên rất nhiều (lần lượt hơn 80 lần và 50 lần) sau khi xử lý 16 giờ và sau đó được điều chỉnh xuống sau 32 giờ. Biểu hiện của CsWRKY1 đã được điều chỉnh tăng hơn 20 lần ở 4 giờ và sau đó giảm từ 8 giờ sau đó (Hình 2).

Hình 2. Biểu hiện tương đối của CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) và Cs4CL1 (C) tại các thời điểm khác nhau sau khi điều trị với 80 μg dm-3 H2O2. Các biểu thức đã được chuẩn hóa để kiểm soát; (được xử lý bằng nước). Có nghĩa là +- SD của ba lần lặp lại sinh học; * - P< 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Sự thảo luận

Hydrogen peroxide là một elicitor thực vật nổi tiếng cho thấy các hiệu ứng khác nhau đối với thực vật. Giống như ROS, nó có thể tạo ra hệ thống nhặt rác ROS bao gồm superoxide dismutase, catalase, peroxidase, v.v., và nó đóng vai trò là tín hiệu hạ lưu của muối, thẩm thấu và mất nước

căng thẳng (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Có ý kiến cho rằng việc tạo H2O2 ở thực vật đi kèm với quá trình sinh tổng hợp chất chuyển hóa thứ cấp gây ra trongCistanche ·Salsanuôi cấy tế bào. Đúng như dự đoán, kết quả của chúng tôi tiết lộ rằng PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp trongSalsa Cistanchenuôi cấy tế bào được gây ra sau khi điều trị H2O2 (Bảng 1). Nội dung của ba PeGs chính(phenylethanoidglycoside)tăng sau khi điều trị H2O2 cho thấy vai trò quan trọng của nó trong sinh tổng hợp PeGs. Các gen được làm giàu trong thư viện SSH cho thấy thêm tác dụng của nó đối với PeGs(phenylethanoidglycoside)cảm ứng sinh tổng hợp trongSalsa Cistanche.

Nhiều gen đáp ứng H2O2 đã biết, chẳng hạn như ascorbate peroxidase (CISTH069, Karyotou và Donaldson 2005), h-quinone oxidoreductase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), và các gen đáp ứng kháng bệnh (Contig10, Nanda, et al. 2010), đã được làm giàu trong thư viện SSH (Bảng 3, Bảng 2 Suppl.). Một số gen đáp ứng ROS điển hình này với biểu hiện cảm ứng sau khi điều trị H2O2 đã được xác nhận thêm bởi RT-qPCR (Hình 1 và 2) chỉ ra rằng một thư viện SSH đủ điều kiện đã được xây dựng ở đây. Hai gen con đường sinh tổng hợp PeG, CsC4H1 và Cs4CL1, cũng được tìm thấy trong thư viện này và hai biểu hiện gen này được gây ra bởi phương pháp điều trị H2O2 theo cách phụ thuộc vào thời gian (Hình 2). Nó cho thấy rằng điều trị H2O2 gây ra PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp ở cấp độ di truyền thông qua sự điều hòa các gen con đường PAL. Tuy nhiên, PAL và các gen sinh tổng hợp PeGs hạ lưu khác (Wang et al. 2012) không được xác định trong thư viện SSH; nó có thể là do thư viện đã không được sắp xếp đầy đủ. Cần làm rõ mối quan hệ giữa các biểu hiện cảm ứng CsC4H1 và Cs4CL1 và sinh tổng hợp PeGs tăng sau khi điều trị H2O2 bằng cách phân tích thêm.

Ngoài các gen con đường PAL gây ra bởi phương pháp điều trị H2O2, hai yếu tố phiên mã gia đình WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) đã được tìm thấy trong thư viện SSH (Bảng 3 và Bảng 2 Suppl.), và biểu hiện cảm ứng CsWRKY1 đã được RT-qPCR xác nhận. Biểu hiện của nó đáp ứng với điều trị H2O2 sớm hơn biểu hiện của hai gen con đường PAL, Cs4CL1 và CsC4H1 (Hình 2). Từ các nghiên cứu trước đây, sự đồng biểu hiện của một số yếu tố phiên mã WRKY và gen con đường PAL đã được quan sát thấy trong lúa (Gupta et al. 2012). Hơn nữa, biểu hiện gen PAL được điều chỉnh trong một đột biến biểu hiện quá mức OsWRKY03 (Liu và cộng sự 2005). Hai yếu tố phiên mã gia đình WRKY được đề cập ở trên cũng có thể liên quan đến PeGs(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp trongCistanche ·Salsa. Điều thú vị là các EST liên quan đến mất nước (CISTH067, CISTH064) đã được tìm thấy trong thư viện SSH, điều này có thể gợi ý rằng phương pháp điều trị H2O2 có liên quan đến biểu hiện gen đáp ứng mất nước trongCistanche ·Salsanhư được quan sát thấy ở các loài thực vật khác (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Một gen liên quan đến tín hiệu gibberellin (GA), giống thụ thể gibberellin gid1b (CISTH092), đã được xác định trong thư viện SSH ngụ ý sự kết nối của tín hiệu GA và điều trị H2O2 trongCistanche ·Salsa, cũng đã được báo cáo trong lúa mạch (Bahin et al. 2011). Tuy nhiên, cần nhiều nghiên cứu hơn để xác nhận xem những gen này có liên quan đến PeGs hay không(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp. Ngoài các gen được đề cập ở trên, thư viện SSH được xây dựng ở đây cũng trình bày các gen có hoặc không có lượt truy cập BLAST. Nó cải thiện sự hiểu biết của chúng tôi về hiệu ứng H2O2 đối với C. salsa và trước tiên cung cấp thông tin về các gen của nó liên quan đến sinh tổng hợp PeGs.

Tóm lại, chúng tôi đã đánh giá ảnh hưởng của H2O2 đối với PeGs(phenylethanoidglycoside)cảm ứng trongCistanche ·Salsanuôi cấy tế bào. Thư viện SSH được xây dựng sau khi xử lý H2O2 và sự biểu hiện của các gen được chọn đã được RT-qPCR xác nhận. Hai gen liên quan đến con đường sinh tổng hợp PeG và các gen đáp ứng H2O2 khác đã được xác định. Những phát hiện này sẽ mở rộng sự hiểu biết của chúng tôi về PeGs do H2O2 gây ra(phenylethanoidglycoside)sinh tổng hợp trongCistanche ·Salsađến cấp độ phân tử, cung cấp thông tin cho việc thao túng gen củaCistanche ·Salsanuôi cấy tế bào để cải thiện PeGs(phenylethanoidglycoside)Sản xuất.

Từ: 'Xác định các EST đáp ứng hydro peroxide liên quan đến sinh tổng hợp glycoside phenylethanoid trong nuôi cấy tế bào salsa Cistanche' bằng cáchJ. CHEN và cộng sự.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN và cộng sự DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Tham khảo

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Nhiễu xuyên âm giữa các loài oxy phản ứng và con đường tín hiệu nội tiết tố điều chỉnh độ ngủ đông của hạt trong lúa mạch. - Môi trường tế bào thực vật. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Các loài oxy phản ứng được tạo ra bởi một sản phẩm gây sốc nhiệt (Hsp) góp phần vào việc sản xuất Hsp70 và khả năng miễn dịch bảo vệ qua trung gian Hsp70 trong Artemia franciscana chống lại vibrios gây bệnh. - Dev. Comp. Miễn dịch. 46: 470-479, 2014.
Bello, R.I., Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, F.J., Villalba, J.M.: Biểu hiện của NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 trong tế bào HeLa  vai trò của hydro peroxide và giai đoạn tăng trưởng. - J. biol. Hóa học. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Tiêu chuẩn hóa qPCR và RT-qPCR. - Genet. Eng. Công nghệ sinh học. Tin tức 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, C.Z.:Cistanche ·nuôi cấy huyền phù tế bào deserticola:phenylethanoidglycosidesinh tổng hợp và hoạt động chống oxy hóa. - Quá trình Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, C.Z. Cải tiến củaphenylethanoidglycosidesinh tổng hợp trongCistanche ·nuôi cấy huyền phù tế bào deserticola bằng elicitor chitosan. - J. Công nghệ sinh họcnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Axit abscisic làm trung gian sản xuất hydro peroxide trong đậu phộng gây ra bởi ứng suất nước. - Biol. Thực vật. 57: 555-558, 2013.
Gupta, S.K., Ra,i A.K., Kanwar, S.S., Chand, D., Singh, N.K., Sharma, T.R.: Gen kháng vụ nổ chức năng duy nhất Pi54 kích hoạt một cơ chế phòng thủ phức tạp trong gạo. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, Y.S., Lee, J.H., Yun, D.J., Chung, W.S., Yi, G.H., Kim, T.H., Kim, D.H.: Đặc tính phân tử của gen amoniac-lyase phenylalanine từCistanche ·sa mạc. - Mol. Biol. Đại diện 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Phản ứng của thực vật đối với căng thẳng nước: vai trò của các loài oxy phản ứng. - Hành vi tín hiệu thực vật 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, R.P.: Ascorbate peroxidase, một chất nhặt rác hydro peroxide trong màng glyoxysomal. - Arc h. Hóa sinh. Sinh lý học. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Các nghiên cứu về các thành phần củacistanchelà herba. 4. Cô lập và cấu trúc của 2 glycoside phenylpropanoid mới, cistanoside-C và cistanoside-D. - Chem. Pharm. Bò tót. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, C.Z., Cheng, X.Y.: Tăng cường củaphenylethanoidglycosidesinh tổng hợp trong nuôi cấy tế bào củaCistanche ·deserticola bởi căng thẳng thẩm thấu. - Đại diện tế bào thực vật 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, Z.G., Zeng, Z.L.: Cải thiện tích lũy củaphenylethanoidglycosidebằng cách cho ăn tiền chất để đình chỉ văn hóa củaCistanche ·Salsa. - Hóa sinh. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, X.Q., Bai, X.Q., Qian, Q., Wang, X.J., Chen, M.S., Chu, C.C.: OsWRKY03, một chất kích hoạt phiên mã gạo có chức năng trong đường dẫn tín hiệu phòng thủ ngược dòng của OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Một môi trường được sửa đổi để tăng trưởng nhanh chóng và xét nghiệm sinh học với nuôi cấy mô thuốc lá. - Physiol. Thực vật. 15: 473-497, 1962.
Nan, Z.D., Zeng, K.W., Shi, S.P., Zhao, M.B., Jiang, Y., Tu, P.F.:Nmolglycosidevới các hoạt động chống viêm từ thân cây củaCistanche ·deserticola văn hóa ở sa mạc Tarim. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, A.K., Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Các loài oxy phản ứng trong quá trình tương tác sớm giữa thực vật và vi sinh vật. - J. Tích hợp. Nhà máy Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Tăng cường sản xuấtphenylethanoid glycosidebằng cách tiền chất cho ăn vào nuôi cấy tế bào củaCistanche ·sa mạc. - Quá trình Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, X.D., Zhao, B., Wang, Y.C.: Cải thiện sản xuất củaphenylethanoidglycosidebằng cáchCistanche ·các tế bào sa mạc được nuôi cấy trong một lò phản ứng sinh học không vận vòng trong với riser sifter. - Enzyme Microbiol. Công nghệ 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, A.R., Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Đặc tính giải phẫu và mô hóa học của haustorium trong ống nghiệm từ rễ của Castilleja tenuiflora. - Biol. Thực vật. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OP, Parvin, S., Balusamy, S.R., Khorolragchaa, A., Yang, DC: Sự thích nghi của hydro peroxide giúp tăng cường khả năng chịu muối bằng cách kích hoạt các protein liên quan đến quốc phòng trong Panax ginseng C.A. Meyer. - Mol. Biol. Đại diện 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, H.M., Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, A.R., Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, J.H.M., Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 điều chỉnh tín hiệu phụ thuộc vào các loài oxy phản ứng trong phản ứng ban đầu đối với căng thẳng muối
trong gạo. - Tế bào thực vật 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanche ·deserticola Y.C. Ma, "Nhân sâm sa mạc": một đánh giá. - Amer. J. cằm. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, J.H., Lee, KS, Kim, J.S. Mô hình lắng đọng hydro peroxide trong vỏ lá của gạo dưới áp lực muối. - Biol. Thực vật. 50: 469-472, 2006.
Zhou, X.F., Jin, Y.H., Yoo, C.Y., Lin, X.L., Kim, W.Y., Yun, D.J., Bressan, R.A., Hasegawa, P.M., Jin, J.B.: CYCLIN H1 điều chỉnh các phản ứng căng thẳng hạn hán và mở khí khổng do ánh sáng xanh gây ra bằng cách ức chế sự tích tụ các loài oxy phản ứng trong Arabidopsis. - Physiol thực vật. 162: 1030-1041, 2013.