Biểu hiện gen liên quan đến miễn dịch ở thận và lá lách của chuột con bị nhiễm virus Astrovirus ở ngỗng

Tiếp xúctina.xiang@wecistanche.comđể biết thêm thông tin.

TRỪU TƯỢNGGoose nephritic astrovirus (GNAstV) lần đầu tiên được phân lập vào năm 2018, gây thiệt hại lớn về kinh tế cho ngành chăn nuôi ngỗng. Tuy nhiên, ít người biết về máy chủphản ứng miễn dịchnhiễm GNAstV. Trong nghiên cứu này, bốn mươi {{0}} dê cái ngày tuổi được chia ngẫu nhiên thành 2 nhóm: nhóm chứng nhiễm trùng và nhóm chứng tiêu cực. Mỗi người trong nhóm nhiễm trùng được thử thách với 0,5 mL GNAstV-JSHA tiêm bắp, trong khi người bị bệnh ở nhóm đối chứng âm tính được tiêm cùng một lượng PBS. Thay đổi mô bệnh học và vị trí vi rút trongláchvàquả thậnđã được kiểm tra, và sự biểu hiện của các gen liên quan đến miễn dịch được xác định bằng qPCR ở thời điểm 7 và 14 ngày sau khi nhiễm bệnh. Kết quả của chúng tôi cho thấy sự thoái hóa và hoại tử do nhiễm GNAstV của tế bào lympho và tế bào biểu mô thận, và những tế bào này dương tính với virus. Ngoài ra, nhiễm GNAstV gây ra sự kích hoạt các thụ thể nhận dạng mẫu (RIG-I, MDA -5 và TLR3) và các phân tử tiếp hợp chính

(MyD88, MAVS và IRF7) trong lá lách và thận, đồng thời điều chỉnh sự biểu hiện gen của interferon- trong lá lách và các protein kháng virus (MX1, OASL và IFITM3) trong lá lách và thận. Hơn nữa, mức độ biểu hiện cao của interleukin (IL) -1 và IL -8 trong lá lách và iNOS trong lá lách và thận đã được tìm thấy. Những kết quả này chỉ ra rằng nhiễm GNAstV đã kích hoạt phản ứng miễn dịch bẩm sinh của vật chủ. Hơn nữa, nhiễm GNAstV làm tăng mức độ biểu hiện của CD8t, MHCI và MHCII, cho thấy rằng một phản ứng miễn dịch thích ứng đã được kích hoạt. Bên cạnh đó, TGF- được biểu hiện nhiều ở lá lách và thận, có thể là một chiến lược miễn dịch của GNAstV để gây nhiễm trùng. Điều thú vị là, cả nồng độ mRNA IL -1 và IL -6 đều giảm trong thận, điều này có thể giúp giảm các tổn thương ở thận. Đây là nghiên cứu đầu tiên báo cáo những thay đổi trong biểu hiện gen liên quan đến miễn dịch để đáp ứng với nhiễm GNAstV và kết quả của chúng tôi cung cấp những hiểu biết sâu sắc về cơ chế bệnh sinh của virus.

Từ khóa: vi rút Astrovirus thận ngỗng, phản ứng miễn dịch, lá lách, thận, gosling

Nhấn vào đây để tìm hiểu lợi ích của thân cây cistanche và có kinh nghiệm về cây cistanche

GIỚI THIỆU

Kể từ năm 2017, một số đàn ngỗng đã trải qua đợt bùng phát bệnh gút nghiêm trọng ở những con ngỗng cái từ 4- đến 16- ngày tuổi ở miền Đông Trung Quốc, dẫn đến thiệt hại lớn về kinh tế trong ngành chăn nuôi ngỗng. Những con goslings bị nhiễm bệnh có biểu hiện giảm trọng lượng cơ thể, thận sưng và nhợt nhạt, có urat màu trắng ở niệu quản và sự phân bố urat trên bề mặt các cơ quan nội tạng và khoang khớp. Vào năm 2018, một loại virus astrovirus ở ngỗng mới đã được phân lập từ những con gosling bị nhiễm bệnh và các thí nghiệm sinh sản trên động vật đã chứng minh rằng nó là tác nhân chính gây ra bệnh gout gosling. Loại virus này khác biệt về mặt di truyền với các loại virus astrovirus và virus chiêm tinh đã biết. Nó hình thành một nhánh riêng biệt phù hợp với trình tự axit amin của protein ORF2 có chiều dài đầy đủ (protein capsid), đây là vùng biến đổi nhất của bộ gen. Do đó, cần phải chú ý nhiều hơn đến thiệt hại do vi rút gây ra cho cá con. Trong nghiên cứu này, loại virus chiêm tinh mới ở ngỗng được gọi là virus chiêm tinh thận ngỗng (GNAstV).

Vì GNAstV là một loại virus mới xuất hiện nên hầu hết các nghiên cứu đều tập trung vào việc phân lập, phân tích di truyền và thiết lập các phương pháp chẩn đoán của nó (Yuan và cộng sự, 2018; Wan và cộng sự, 2019; Yin và cộng sự, 2020). Tuy nhiên, người ta còn biết rất ít về phản ứng miễn dịch của vật chủ đối với nhiễm GNAstV. Goose nephritic astrovirus chủ yếu gây ra tổn thương cho thận, gan và lá lách ở dê non, và một lượng virus cao hơn đã được phát hiện ở thận và lá lách so với ở các cơ quan khác (Jin và cộng sự, 2018; Xu và cộng sự, 2019). Các tổn thương ở lách và tải lượng vi rút cao cho thấy vi rút có thể gây tổn hại đến phản ứng miễn dịch. Hệ thống miễn dịch bẩm sinh đóng một vai trò quan trọng trong quá trình lây nhiễm vi rút bằng cách đóng vai trò là tuyến bảo vệ đầu tiên chống lại sự xâm nhập của vi rút (Chow J và cộng sự, 2015). Các thụ thể nhận dạng mẫu (PRR) nhận ra các axit nucleic của vi rút và tạo ra phản ứng bẩm sinh, bao gồm sản xuất các cytokine, chẳng hạn như I -1, TNF-x và IFN và các protein kháng vi rút như OASL, IFITM3 và MX1. Thụ thể giống Toll liên kết màng 3 (TLR3) và thụ thể giống RIG-I trong tế bào chủ yếu chứa RIG -1 và MDA -5 là PRR quan trọng nhất nhận biết RNA của virus. Phản ứng miễn dịch bẩm sinh tạo ra tín hiệu để tạo ra phản ứng miễn dịch thích ứng, điều này kiểm soát sự lây nhiễm virus trong giai đoạn nhiễm trùng tiếp theo. Miễn dịch thích ứng bao gồm đáp ứng I qua trung gian kháng thể / tế bào B và đáp ứng qua trung gian tế bào, đòi hỏi sự tham gia của các phân tử CD3 cộng, CD4 cộng, CD8 cộng và MHC lớp I và II. Hiện tại, các cơ chế mà GNAstV ảnh hưởng đến các phản ứng miễn dịch bẩm sinh và thích ứng của vật chủ vẫn chưa rõ ràng. Trung Quốc là nơi có số lượng ngỗng cao nhất trên toàn thế giới; do đó, việc điều tra phản ứng miễn dịch của ngỗng đối với sự lây nhiễm GNAstV là rất quan trọng để làm sáng tỏ cơ chế gây bệnh và khả năng miễn dịch của GNAstV và kiểm soát sự lây lan của nó. Trong nghiên cứu này, 2- dê cái ngày tuổi đã bị nhiễm GNAstV. Sau đó, các thay đổi mô bệnh học và vị trí của virus, cũng như biểu hiện gen liên quan đến miễn dịch trong lá lách và thận, sau đó đã được kiểm tra.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Chuẩn mực đạo đức

Tất cả các thí nghiệm trên động vật đều được tiến hành theo Hướng dẫn dành cho động vật thí nghiệm của Bộ Khoa học và Công nghệ (Bắc Kinh, Trung Quốc) và đã được sự chấp thuận của Ủy ban chăm sóc và sử dụng động vật của Đại học Nông nghiệp Nam Kinh.

Vi-rút

Phân lập GNAstV-JSHA (GenBank gia nhập số MK125058) được phân lập từ những con bị bệnh gút (tỉnh Giang Tô, Trung Quốc) và được giữ trong phòng thí nghiệm của chúng tôi. Hiệu giá của GAstV-JSHA là 1 × 104. 25 50 phần trăm liều lây nhiễm nuôi cấy mô (TCID50) / mL được xác định bằng cách chuẩn độ trên tế bào biểu mô thận ngỗng theo phương pháp của Reed & Muench.

Thí nghiệm động vật

Các mẫu lá lách và thận được thu thập từ thí nghiệm động vật trước đây của chúng tôi đã được mô tả trong Xu'sstudy (Xuet al., 2 0 19). Tóm lại, 2- cá con bốn mươi ngày tuổi không bị nhiễm GNAstV được tách ngẫu nhiên thành 2 nhóm: nhóm chứng nhiễm trùng và nhóm chứng âm tính. Mỗi người trong nhóm nhiễm trùng được thử thách với 0,5 mL GNAstV-JSHA bằng cách tiêm bắp, trong khi người bệnh ở nhóm đối chứng âm tính được cấy với cùng một lượng PBS.

Tất cả các cá con được theo dõi hàng ngày để tìm các dấu hiệu lâm sàng. Ở 7 ngày sau khi nhiễm bệnh (dpi), 10 cá thể từ mỗi nhóm đã được cho chết và kiểm tra các thay đổi tổng thể, sau đó thận và lá lách được thu thập. Một phần của những vấn đề này đã được khắc phục trong 10% formaldehyde để kiểm tra mô bệnh học, phần còn lại được bảo quản ở độ -80 cho các thí nghiệm tiếp theo. Ở 14 dpi, những con cá con sống sót đã bị chết và các mô được thu thập và lưu trữ như đã đề cập ở trên.

Kiểm tra mô bệnh học

Các mẫu cố định được khử nước bằng một loạt rượu, làm rõ trong xylen, và nhúng trong parafin. Sau đó, các mẫu được cắt nối tiếp thành các đoạn 4 μm và nhuộm bằng hematoxylin và eosin bằng các phương pháp thông thường. Các phần bị nhuộm được kiểm tra bằng kính hiển vi ánh sáng.

Phát hiện vị trí vi-rút bằng cách lai tại chỗ

Phương pháp lai tại chỗ (FISH) được thực hiện theo hướng dẫn của bộ ISH thương mại (Boster, Trung Quốc), với một số sửa đổi. Trước khi thực hiện ISH, độ nhạy và độ đặc hiệu của mẫu đã được kiểm tra và tối ưu hóa thông qua một loạt các xử lý trước. Tóm lại, các phần mô đã khử muối được xử lý trước bằng HCl (0. 2 M, 15 phút) và proteinase K （4 0 ug / mL, 20 phút, 37 độ）. Protease K bị ức chế bằng cách cố định trong 4% paraformaldehyde trong 5 phút. Sau đó, các bước lai và sau lai được thực hiện. Các mẫu dò đã được thêm vào bộ đệm lai với nồng độ 0. 5-2 ug / mL; đệm chứa các đầu dò được biến tính ở 98 độ trong 10 phút và được làm lạnh ngay trên đá. Khoảng 20 μL hỗn hợp lai được pipet vào các phần mô, được phủ bằng các tấm bìa được xử lý bằng diethylpyrocarbonate, và ủ trong 16 đến 20 giờ ở 42 độ. Các mẫu dò đã lai với RNA của virus được phát hiện bằng cách sử dụng kháng thể kháng DIG được liên hợp với 3, 3- N-diaminobenzidine tetrahydrochloride. Các phiến kính được làm mờ bằng màu xanh lá cây metyl và được niêm phong bằng kẹo cao su trung tính. Để cải thiện độ nhạy, proteinase K được sử dụng để tăng cường tính thấm của mô nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho việc xâm nhập của các đầu dò vào mô.

Phân tích gen miễn dịch bằng PCR định lượng thời gian thực

RNA tổng số được chiết xuất bằng cách sử dụng Trizol (Invitrogen, CA), và phiên mã ngược của RNA được tiến hành bằng cách sử dụng bộ HiScript Q RT SuperMix (Vazyme, Trung Quốc). Máy đo vòng quay nhiệt (AB73 0 0; Life Technologies) đã được sử dụng cho PCR định lượng. Phần mềm Primer 5.0 được sử dụng để chỉ định các gen liên quan đến miễn dịch, như được trình bày trong Bảng 1. Biểu hiện axit Ribonucleic được bình thường hóa bằng cách định lượng GAPDH như một gen giữ nhà. Mức độ bảng điểm tương đối được phân tích bằng phương pháp sử dụng 2- AACT

Phân tích thống kê

Sự khác biệt giữa nhóm đối chứng và nhóm thực nghiệm được phân tích bằng Student t-test. Kết quả được biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

KẾT QUẢ

Thay đổi lâm sàng

Không có tử vong hoặc các dấu hiệu lâm sàng rõ ràng được quan sát thấy trong đối chứng không được tiêm chủng. Tuy nhiên, 5 trong số 20 dê cái bị nhiễm bệnh đã chết trong quá trình thử nghiệm, và sự giảm trọng lượng cơ thể được quan sát thấy ở những cá cái bị nhiễm GNAstV. Khi khám nghiệm tử thi, các cơ quan trong nhóm đối chứng âm tính có vẻ bình thường, nhưng sự phân bố urat trên bề mặt các cơ quan (gan, tim và thận), túi mật và khoang khớp được phát hiện ở cá chết. Hơn nữa, thận sưng và nhợt nhạt với urat trắng trong niệu quản đã được quan sát thấy ở tất cả các bệnh nhân bị nhiễm trùng. Những thay đổi bệnh lý đã được chỉ ra trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi (Xu et al..2019). Những kết quả này chỉ ra rằng chúng tôi đã thiết lập thành công một mô hình động vật về sự lây nhiễm GNAstV ở dê cái.

Thay đổi mô bệnh học ở thận và lá lách

Khi kiểm tra mô bệnh học, thận và lách của các bệnh nhân đối chứng âm tính có vẻ bình thường về mặt mô học (Hình 1A và 1B). Tuy nhiên, sự thoái hóa và hoại tử của các tế bào biểu mô thận vàviêmsự xâm nhập tế bào được quan sát thấy trong thận của cá con bị nhiễm bệnh (Hình 1C). Hơn nữa, hoại tử của láchtế bào bạch huyếtvà thâm nhiễm tế bào viêm cũng được tìm thấy trong các lá lách (Hình 1D).

Vị trí vi rút trong thận và lá lách

Vị trí của virus chiêm tinh ở thận ngỗng trong thận và lá lách được kiểm tra bằng cách sử dụng ISH. Như trong Hình 2, một số hạt màu nâu được phát hiện trong tế bào chất của các tế bào biểu mô ống thận, nhưng không có hạt màu nâu nào được quan sát thấy trong các cầu thận của thận. Một số ít hạt màu nâu được phát hiện trong các tế bào lympho của lách và các tế bào đại thực bào của lá lách. Những kết quả này chỉ ra rằng GNAstV có thể lây nhiễm các tế bào biểu mô ống thận và tế bào lympho ở lách.

Sự biểu hiện của PRR và các phân tử tiếp hợp trong lá lách và thận của trẻ bị nhiễm GNAstV Sự biểu hiện của PRR (RIG -1, MDA -5 và TLR3) và các phân tử tiếp hợp chính (MAVS, MyD88, vàIRF7) trong lách và thận được xác định bằng qPCR như trong Hình 3. Mức mRNA của 3 PRR trong lách tăng đáng kể ở nhóm bị nhiễm ở 7 và 14 dpi so với nhóm đối chứng âm tính (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0. 05). Theo đó, sự biểu hiện của các phân tử tiếp hợp trong nhóm bị nhiễm ở 7 và 14 dpi cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Biểu hiện cytokine trong lá lách và thận của chuột con bị nhiễm GNAstV

Biểu thức của cytokine, IL -1, I -6, IL -8, Ⅱ -10, TGF-B và iNOS được xác định bởi qPCR như trong Hình 4. Trong lá lách, mức mRNA của IL -1 B và TGF-B trong nhóm nhiễm trùng ở mức 7 và 14dpi rõ ràng là cao hơn so với những người trong nhóm kiểm soát tiêu cực (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0. 05). Trong thận, nồng độ mRNA của I -1 ở 7 và 14 dpi và I -6 ở 7 dpi ở nhóm nhiễm trùng thấp hơn ở nhóm đối chứng âm tính (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Sự biểu hiện của protein kháng vi-rút trong lá lách và thận của chuột con bị nhiễm GNAstV

Mức mRNA của IFN-d. trong lá lách và sự biểu hiện của các protein kháng virus (OASL, IFITM3. và MIX1) trong thận và lá lách được xác định như trong Hình 5. Trong lá lách, mức mRNA củaIFN -2. OASL, IFITM3 và MX1 ở 7 và 14 dpi ở nhóm bị nhiễm cao hơn đáng kể so với ở nhóm đối chứng âm tính (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

Sự biểu hiện của các phân tửCD4t, CD8 plus và MHC Class và I trong lá lách của GNAstV-nhiễm trùng Goslings

Sự biểu hiện của các gen liên quan đến sự trình bày kháng nguyên (phân tử CD4 ', CD8', MHC lớp I và II) trong lá lách được xác định bằng qPCR như trong Hình 6. Mức độ biểu hiện của MHC I ở 7 và 14dpi ở nhóm bị nhiễm cao hơn đáng kể so với ở nhóm đối chứng âm tính (P <0. 05).="" mức="" độ="" biểu="" hiện="" của="" mhc="" ii="" ở="" 14="" dpi="" ở="" nhóm="" bị="" nhiễm="" rõ="" ràng="" cao="" hơn="" ở="" nhóm="" đối="" chứng="" âm="" tính=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0. 05). Mức CD8 cộng với mRNA ở 7 và 14 dpi ở nhóm bị nhiễm cao hơn đáng kể so với ở nhóm đối chứng âm tính (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

THẢO LUẬN

Goose nephritic astrovirus là một loại virus mới được phân lập có thể gây ra bệnh gút nội tạng và làm chết dê cái, dẫn đến thiệt hại lớn cho gà ngỗng. Do đó, cần phải điều tra phản ứng miễn dịch của vật chủ đối với vi rút để hiểu cơ chế bệnh sinh của nó và phát triển vắc xin và liệu pháp điều trị. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thiết lập thành công mô hình động vật ở cá con bằng cách tiêm bắp GNAst V-JSHA. Vị trí của virus trong các tế bào lympho và đại thực bào ở lách và sự hoại tử của các tế bào lympho ở lách cho thấy rằng GNAstV có thể lây nhiễm vào lá lách và gây ra tổn thương cho hệ thống miễn dịch của vật chủ. Tuy nhiên, cho đến nay vẫn chưa có báo cáo nào về đáp ứng miễn dịch của dê cái bị nhiễm GNAstV. Ngoài ra, một hiệu giá virus cao đã được quan sát thấy trong các tế bào biểu mô thận. và điều này có thể góp phần gây tổn thương thận và rối loạn đào thải axit uric.

Hệ thống miễn dịch bẩm sinh là tuyến phòng thủ đầu tiên chống lại mầm bệnh xâm nhập. Trong nghiên cứu của chúng tôi, nhiễm GNAstV gây ra sự gia tăng TLR3. Biểu hiện mRNA RIG -1 và MIDA -5 trong lá lách và thận, cho thấy rằng hệ thống miễn dịch bẩm sinh đã được kích hoạt, có thể góp phần vào việc ức chế sự xâm nhập của vi rút. ) đã khẳng định thêm những kết quả này. IFN được tạo ra sau khi kích hoạt PRR, đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế vi rút thông qua cảm ứng một số gen được kích thích IFN mà sản phẩm của chúng có hoạt tính kháng vi rút trực tiếp. Trong nghiên cứu của chúng tôi, sự biểu hiện của IFN-z trong lá lách và sự biểu hiện của các protein kháng virus (OASL, MX1 và IFITM3) trong lá lách và thận đã tăng lên sau khi nhiễm GNAstrV. Tăng sản xuất protein kháng vi rút có thể hữu ích cho việc ức chế sự xâm nhập của vi rút. Theo điều này, kết quả của chúng tôi cho thấy rằng TLR3.RIG -1. MDA -5 và IRF7 đã được kích hoạt trong quá trình lây nhiễm GNAstV. Một nghiên cứu trước đây cũng đã chứng minh rằng loại hệ thống này hạn chế sự sao chép của vi rút astrovirus ở người trong ống nghiệm và in vivo, đồng thời cung cấp khả năng bảo vệ chống lại tính thấm hàng rào do vi rút gây ra (Marvin et al..2015). Tuy nhiên, những phát hiện về TLR3 và OASL khác với những phát hiện về PRR và protein kháng vi-rút khác trong lá lách, vì sự biểu hiện của cả TLR3 và OASL đều giảm ở 14 dpi so với 7 dpi. Điều này có thể liên quan đến quy định phản hồi tiêu cực hoặc giảm tải vi rút. Do đó, lL -1 B ở 14 dpi có thể là kết quả của cơ chế điều chỉnh cơ thể chống lại việc sản xuất quá mức cytokine tiền viêm. Điều thú vị là mức mRNA của I -1 trong thận đã giảm ở nhóm bị nhiễm bệnh. Mức độ thấp hơn của cytokine tiền viêm này có thể giúp giảm bớt tổn thương thận. Các nghiên cứu trước đây báo cáo rằng nhiễm trùng Astrovirus ở người và gà tây loại 2 (TASt V -2) không liên quan đến viêm và gây ra một số tổn thương ở nhung mao ruột (Koci và cộng sự. 2003; Sebire và cộng sự.2004), cho thấy rằng đây có thể là một đặc điểm của nhiễm trùng astvirus trong tế bào biểu mô. I -6 cũng là một cytokine gây viêm gây ra tác dụng kháng vi-rút thông qua phản ứng miễn dịch hiệu quả nhưng cũng tham gia vào các quá trình dẫn đến tổn thương mạch máu,viêmcủa thành mạch, và huyết khối. Trong nghiên cứu của chúng tôi, không có thay đổi đáng kể nào về IL -6 được tìm thấy trong lá lách sau khi nhiễm GNAstV; điều này có thể liên quan đến sự khác biệt lớn giữa các cá nhân. Tuy nhiên, biểu hiện I -6 đã giảm ở thận, tương tự như quan sát đối với -1 B; điều này cũng có thể giúp giảm bớt tổn thương thận. Tôi -8 là người trung gian chịu trách nhiệm tuyển chọn bạch cầu trung tính tham gia vào quá trình thâm nhiễm viêm cục bộ. Trong nghiên cứu này, tôi -8 đã được điều tiết ở lá lách và thận, và do đó nó có thể đã góp phần gây ra chứng viêm. IL -10 là một cytokine chống viêm có thể ức chế sản xuất cytokine tiền viêm. Trong nghiên cứu này, GNAstV gây ra sự giảm rõ ràng mức IL -10 trong lá lách; đây có thể là dấu hiệu của tình trạng viêm nặng ở lá lách và một trong những nguyên nhân gây tổn thương lá lách. Nhiễm các vi-rút khác, chẳng hạn như vi-rút viêm não Nhật Bản và vi-rút Zika, cũng đã được chứng minh là làm giảm biểu hiện I -10 (Swarup và cộng sự.2007; Abreu 2019), nhưng cơ chế chính xác Nhiễm trùng GNAstr cơ bản cần được nghiên cứu thêm. TGF- là một cytokine ức chế miễn dịch. Do đó, sự gia tăng nồng độ TGF-B trong lá lách và thận cho thấy rằng nhiễm trùng GNAstV có thể gây ra ức chế miễn dịch. Hơn nữa, có báo cáo rằng nhiễm T AStV -2 làm tăng nồng độ TGF- trong huyết thanh ở gà tây (Koci et al.2003). Tăng sản xuất TGF đã được chứng minh là ngăn chặn phản ứng miễn dịch và tăng cường sự nhân lên của virus (Letterio và Roberts, 1998). Do đó, tăng sản xuất TGF có thể góp phần vào việc sao chép GNAstV bằng cách ức chế phản ứng miễn dịch của vật chủ. INOS là một thành phần quan trọng của phản ứng miễn dịch bẩm sinh và đóng một vai trò quan trọng trong việc kiểm soát nhiễm virus. Trong nghiên cứu của chúng tôi, các phát hiện chỉ ra rằng nhiễm GNAstV

rõ ràng là biểu thức INOS được điều chỉnh. Sản xuất iNOS cao có thể cho phép vật chủ chống lại sự lây nhiễm vi rút. Kết quả của chúng tôi phù hợp với kết quả của các nghiên cứu trước đây, cho thấy rằng nhiễm trùng TAStV -2 gây ra sự sản sinh iNOS, làm hạn chế sự nhân lên của virus chiêm tinh (Qureshi và cộng sự, 200l; Koci và cộng sự, 2004; Meyerhoff và cộng sự, 2012 ).

Hệ thống miễn dịch thích ứng đóng một vai trò quan trọng trong việc kiểm soát nhiễm virus. Trong nghiên cứu của chúng tôi, việc nhiễm GNAstV làm tăng mức mRNA của MHC Ia, MHC Iix và CD8 plus, và điều này cho thấy rằng các phản ứng miễn dịch dịch thể và tế bào đã được kích hoạt. Trước đây, người ta đã báo cáo rằng nhiễm virus astrovirus ở người tạo ra kháng thể có thể vô hiệu hóa virus (Kurtzand Lee, 1978). Tuy nhiên, không có thay đổi đáng kể nào được tìm thấy trong biểu hiện CD4 cộng với mRNA trong nghiên cứu. Xem xét rằng tế bào T CD4 "cần thiết cho sự trưởng thành của tế bào B và tính đặc hiệu của kháng thể, có thể GNAst V không thể tạo ra phản ứng miễn dịch dịch thể mạnh mẽ. Điều này có thể giải thích tại sao không quan sát thấy sự gia tăng rõ ràng MHC Ⅱaexpression ở 7 dpi. Ngoài ra , mức mRNA của CD8 và MHCIa ở 14 dpi giảm so với 7 dpi. Điều này có thể liên quan đến việc giảm tải lượng vi rút, như đã đề cập ở trên. Trong nghiên cứu này, kháng thể GNAst V không được phát hiện vì không có sẵn bộ công cụ thương mại. , vai trò của các kháng thể trong nhiễm GNAstVinfect cần được nghiên cứu thêm.

Kết luận, dữ liệu của chúng tôi tiết lộ các mô hình phản ứng miễn dịch trong lá lách và thận của những con gosling bị nhiễm GNAst V. Khi nhiễm GNAst V, các gen liên quan đến khả năng miễn dịch bẩm sinh và thích nghi đã được kích hoạt. Tuy nhiên, việc sản xuất các cytokine và các protein kháng virus đã không bảo vệ được những con goslings chống lại căn bệnh này. Đây là nghiên cứu đầu tiên báo cáo những thay đổi trong biểu hiện gen liên quan đến miễn dịch để đáp ứng với Sự nhiễm GNAst, điều này có thể giúp làm sáng tỏ thêm các cơ chế phân tử của các tương tác GNAstV của vật chủ.