Các hoạt động chống lão hóa trong ống nghiệm của chiết xuất Ethanol từ quả chôm chôm hồng (Nephelium Lappaceum Linn.) Đối với các ứng dụng trên da Phần 1

trừu tượng

Lão hóa da được đặc trưng bởi các đặc điểm như nếp nhăn, mất tính đàn hồi, chảy xệ, thô ráp, nám và tàn nhang. Một số loại nghiên cứu đã tập trung vào việc ngăn ngừa và điều trị lão hóa da bằng nhiều thành phần tự nhiên. Nghiên cứu này nhằm đánh giá hoạt tính chống lão hóa da của dịch chiết etanol của Chôm chôm hồng (PR) (Nephelium lappaceum Linn.) từ lá (L), cành (B), hạt (S), và vỏ từ quả chín (R) và quả non (Y). Hiệu suất chiết xuất của tất cả Chôm chôm hồng (PR) được chiết xuất bằng Maceration (M) và chiết xuất Soxhlet (Sox) sử dụng 95% etanol làm dung môi, nằm trong khoảng từ 10,62 phần trăm đến 30 0,63 phần trăm . Flavonoid được tìm thấy như là chất hóa học thực vật chính trong hầu hết các chiết xuất PR. Dịch chiết PR-YM và PR-Y-Sox cho tổng hàm lượng phenolic cao nhất bằng xét nghiệm Folin-Ciocalteu là 67,60 ± 4,38 mgGAE/g và tổng hàm lượng flavonoid bằng xét nghiệm so màu nhôm clorua biến tính là 678,72 ± tương ứng là 23,59 mgQE/g. Chiết xuất PR-LM cho thấy ba hoạt động chống oxy hóa cao nhất; loại bỏ gốc tự do (SC50 của 0.320 ± 0.{{40}}70 mg/mL) , ức chế peroxy hóa lipid (LC50 của 0.274 ± 0,029 mg/mL) và hoạt tính thải sắt kim loại (MC50 là 0,203 ± 0,021 mg/mL). Tất cả các chiết xuất PR ở mức 0,01 và 0,1 mg/mL cho thấy không gây độc tế bào trên các tế bào B16F10 và nguyên bào sợi da người, tương ứng. Tương tự như vậy, chiết xuất PR-R-Sox thể hiện khả năng chống tạo hắc tố cao nhất trên các tế bào B16F10 (52,7 ± 0,9 phần trăm ), và hoạt tính ức chế tyrosinase của nấm (IC50 là 0,04 ± 0,02 mg/mL), tương đương đáng kể với axit kojic (p <0,05). Chiết xuất PR-Y-Sox cho thấy quá trình sinh tổng hợp collagen bằng phương pháp Sirius Red và kích thích các gen chống lão hóa (Sirt1 và Foxo1) trên nguyên bào sợi da người bằng phương pháp RT-PCR, tương tự như axit ʟ-ascorbic tiêu chuẩn và resveratrol tương ứng. Nghiên cứu này gợi ý rằng chiết xuất PR-R-Sox và PR-Y-Sox có thể được phát triển hơn nữa như là chất chống lão hóa tự nhiên để làm trắng và chống nhăn trong ngành công nghiệp mỹ phẩm, mỹ phẩm và dược phẩm. 2023 (Các) Tác giả. Được xuất bản bởi Elsevier BV thay mặt cho Đại học King Saud.

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có khả năng loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra, đồng thời cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.

Nhấp vào Tôi có thể mua Cistanche ở đâu

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Giới thiệu

Trên toàn cầu, dân số già trên thế giới đang tăng nhanh hơn tất cả các nhóm tuổi khác. Tổ chức Y tế Thế giới ước tính rằng dân số thế giới trên 60 tuổi sẽ là 2,1 tỷ người vào năm 2050 và sẽ phải đối mặt với các tình trạng phổ biến bao gồm viêm xương khớp, tiểu đường, mất thính lực, bệnh Alzheimer, bệnh phổi tắc nghẽn mãn tính (COPD), trầm cảm và mất trí nhớ. , ung thư cũng như các bệnh về thần kinh và tim mạch (Darawsha et al., 2021, WHO, 2021). Da là một trong những cơ quan dễ thấy nhất trong quá trình lão hóa. Lão hóa da có liên quan đến giao tiếp xã hội vì ngoại hình đẹp tạo ấn tượng tốt và cải thiện sự tự tin. Lão hóa da bị ảnh hưởng bởi các yếu tố môi trường hoặc bên ngoài như ô nhiễm không khí, xenobamel, bức xạ tia cực tím và hút thuốc, cũng như các yếu tố bên trong như di truyền, chuyển hóa tế bào, hormone và quá trình trao đổi chất (Darawsha và cộng sự, 2021). Nhiều loại nghiên cứu gần đây đã tập trung vào việc duy trì làn da khỏe mạnh bằng cách trì hoãn, ngăn ngừa và điều trị lão hóa để cải thiện vẻ ngoài của da bằng cách tái tạo và kích thích các quá trình sinh lý tự nhiên để bảo vệ da khỏi lão hóa.

Các loại oxy phản ứng (ROS) từ ứng suất oxy hóa tế bào có thể gây ra hiện tượng chết theo chương trình của tế bào bằng cách kích hoạt các quá trình viêm và các con đường truyền tín hiệu của chúng, làm tăng mức độ metallicoproteinase (MMP), sự thoái hóa của lipid không bão hòa và thay đổi cấu trúc của sợi cơ. các protein bao gồm collagen và elastin do lão hóa da (Miastkowska và Sikora, 2018, Darawsha và cộng sự, 2021). Theo quá trình hình thành hắc tố, hắc tố là một sắc tố polyphenolic được tạo ra trong các melanosome của tế bào hắc tố nằm trong mắt, lông và da của động vật và có thể bảo vệ da bị tổn thương do bức xạ cực tím (Ali và Naaz, 2018). Tyrosinase là enzyme chứa đồng, có thể biến đổi L-tyrosine thành L-dopa và L-dopa thành odopaquinone-H cộng với các phản ứng hydroxyl hóa và oxy hóa, sau đó chuyển qua các chất trung gian cuối cùng thành melanin (Solano, 2018). ROS cũng đóng một vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh stress oxy hóa tế bào trong các tế bào hắc tố là các tế bào đuôi gai định vị ở lớp đáy của biểu bì trên da. Các chất trung gian gây viêm trong da như interleukin (IL), prostaglandin E2, yếu tố hoại tử khối u và interferon-gamma chủ yếu được tiết ra bởi các tế bào Th, tế bào lympho, tế bào đuôi gai và bạch cầu đơn nhân, điều chỉnh hoạt động kích thích tyrosinase và điều chỉnh tăng TYRP{{11 }} và TYRP-2, đồng thời thúc đẩy sự tăng sinh tế bào hắc tố liên quan đến quá trình sản xuất hắc tố (Fu và cộng sự, 2020). Tuy nhiên, việc sản xuất quá mức và tích tụ nhiều sắc tố melanin gây lão hóa da như nám, tàn nhang, đốm đen, lentigo và rối loạn tăng sắc tố gây mất thẩm mỹ (Ali và Naaz, 2018).

Sirtuins là histone deacetylase loại III phụ thuộc nicotinamide adenine dinucleotide (NAD cộng) điều chỉnh sự lão hóa tế bào và quá trình chết theo chương trình, cũng như sự phát triển của tế bào bằng cách kiểm soát p53, các yếu tố phiên mã đầu não (FOXO) và gamma thụ thể được kích hoạt bởi chất tăng sinh peroxisome (PPAR-c) liên quan đến các quy định về trao đổi chất, biệt hóa tế bào, sống sót và lão hóa. (Sơn và cộng sự, 2021). SIRT1, SIRT6 và hiếm khi là SIRT7 trong họ sirtuin đã được quy định cho các vấn đề về da liễu, bao gồm viêm da, nhiễm trùng da, ung thư, bệnh tự miễn dịch, bệnh da liễu di truyền, đặc biệt là lão hóa da (Son và cộng sự, 2021). Đồng thời, FOXO1 là một yếu tố phiên mã nằm trong tế bào chất. SIRT1 khử acetyl FOXO1 và kích hoạt quá trình phiên mã FoxO1 theo nhiều con đường chẳng hạn như MAPK (protein kinase được kích hoạt bằng mitogen), protein kinase (AKT) và con đường hộp nhà-1 (Pdx1) tuyến tụy và tá tràng (Sin và cộng sự, 2015) . Sự gia tăng biểu hiện Sirt1 và Foxo1 mRNA điều chỉnh quá trình chuyển hóa glucose, sửa chữa DNA, bảo vệ thần kinh, biệt hóa, bảo vệ mạch máu và tiết insulin; và giảm lão hóa và các bệnh liên quan đến tuổi tác như stress oxy hóa, lão hóa tế bào, thoái hóa thần kinh, viêm, kháng insulin, bệnh tim mạch, mỡ và gan nhiễm mỡ cũng như lão hóa da (Son và cộng sự, 2021).

Đạo luật Dược phẩm (Thuốc) và Mỹ phẩm năm 1940 định nghĩa thuốc là “tất cả các loại thuốc dùng cho người hoặc động vật dùng bên trong hoặc bên ngoài, và tất cả các chất nhằm mục đích sử dụng hoặc trong chẩn đoán, điều trị, giảm nhẹ hoặc phòng ngừa bất kỳ bệnh tật hoặc rối loạn nào ở người hoặc động vật." Mỹ phẩm là bất kỳ vật phẩm nào được dùng để cọ xát, đổ, rắc hoặc phun lên, đưa vào hoặc thoa lên bất kỳ bộ phận nào của cơ thể con người để làm sạch, làm đẹp, tăng cường sức hấp dẫn hoặc thay đổi diện mạo. mỹ phẩm, và bao gồm bất kỳ sản phẩm nào được dự định sử dụng như một thành phần của mỹ phẩm. mỹ phẩm, dược mỹ phẩm và dược phẩm có chứa các hợp chất hoạt tính giúp trung hòa các gốc tự do như vitamin E, vitamin C, glutathione và coenzyme Q10; và làm chậm quá trình lão hóa da do nếp nhăn và nám da như axit nucleic, chất thủy phân protein, chiết xuất tảo, dầu thực vật, hormone thực vật , cytokine và neuropeptide (Kim và cộng sự, 2015, Miastkowska và Sikora, 2018), cũng như polyphenol và flavonoid từ các chiết xuất thực vật tự nhiên khác nhau như chiết xuất của Vigna subterranean, Stichopus japonicus, Citrus aurantifolia, Ananus comosus và Manihot esculenta (Chutoprapat và cộng sự, 2020; Ding và cộng sự, 2020 Boonpisuttinant và cộng sự, 2022, Jampa và cộng sự, 2022).

Chôm chôm hồng hay Ngo See Chom Pu (Nephelium lappaceum L.) là một loại cây thuộc họ Bồ hòn, là cây bản địa của huyện Klung, tỉnh Chanthaburi, miền đông Thái Lan. Chôm chôm ruột hồng (PR) trái ngọt, ăn rất ngon. Chúng có vỏ mỏng với phần vỏ màu vàng hồng và gai màu hồng nhạt với đầu màu xanh nhạt, khác với các loài khác như Ngo Rongrien và Ngo Nasarn có vỏ và gai màu đỏ nhạt. Các chất hóa học thực vật chính được tìm thấy trong cây chôm chôm là axit ellagic, corilagin, geraniin, quercetin và rutin (Phuong et al., 2019, Phuong et al., 2020). Trước đây đã có báo cáo rằng vỏ chôm chôm từ các loài khác đã được phát hiện có hàm lượng hợp chất phenolic cao và có nhiều hoạt tính sinh học như loại bỏ gốc tự do DPPH, chống viêm, kháng vi-rút, chống ung thư và kháng khuẩn (Chingsuwanrote et al ., 2016; Hernández-Hernández và cộng sự, 2019; Rohman, 2017; Sukmandari và cộng sự, 2017; Thitilertdecha và Rakariyatham, 2011). Tuy nhiên, các chất chiết xuất từ ​​chôm chôm hồng chưa có báo cáo khoa học nào về hoạt tính sinh học, đặc biệt là hoạt tính chống lão hóa vì mục đích làm đẹp và sức khỏe làn da. Do đó, nghiên cứu hiện tại nhằm mục đích đánh giá tiềm năng của chiết xuất PR trong các ứng dụng da trong mỹ phẩm, mỹ phẩm và dược phẩm. Các nghiên cứu về các hoạt động sinh học chống lão hóa trong ống nghiệm bao gồm ức chế tyrosinase và quá trình tạo tế bào già, sinh tổng hợp collagen và kích thích biểu hiện Sirt1 và Foxo1 mRNA, và ba hoạt động chống oxy hóa cũng như độc tính tế bào trên nguyên bào sợi ở người, cho thấy hiệu quả và tính an toàn của chiết xuất PR có thể được phát triển thêm cho các sản phẩm chăm sóc da tự nhiên.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Chuẩn bị và khai thác

Năm bộ phận của chôm chôm hồng (PR) bao gồm lá (L), cành (B), hạt (S), và vỏ quả chín (R) và quả non (Y) được thu hái từ Quận Klung, Chantaburi, Thái Lan từ tháng 6 đến tháng Tháng 8 năm 2017. Các mẫu chứng từ đã được xác định bởi một nhà thực vật học tại Forest Herbarium of Thailand và được đăng ký tại herbarium (Mã số: RSPG-RMUTT-0102) của Innovative Natural Products từ Đơn vị Nghiên cứu Trí tuệ Thái Lan, Khoa Y học Tích hợp, RMUTT , Pathum Thani, Thái Lan. Tất cả các bộ phận của chôm chôm hồng được cắt, rửa sạch bằng nước máy, sấy khô ở nhiệt độ 60 độ trong lò sấy không khí nóng và nghiền thành bột bằng máy xay. Tất cả các bộ phận của chôm chôm hồng được chiết xuất bằng phương pháp chiết xuất Maceration và Soxhlet sử dụng 95% ethanol làm dung môi, đây là loại dung môi được sử dụng phổ biến nhất để chiết xuất cây thuốc vì nó an toàn và tiết kiệm. Tóm lại, 10 g của mỗi loại bột PR được chiết xuất bằng (1): Maceration (M) trong 100 mL etanol 95 phần trăm (v/v) (Bangkok Alcohol Industrial, Thái Lan) với tốc độ lắc 200 vòng/phút ở nhiệt độ phòng (25 ± 2 độ ) trong 48 giờ; và (2): chiết xuất Soxhlet (Sox) với 100 mL etanol 95 phần trăm (v/v) ở 80 ± 5 độ C trong 24 giờ. Sau đó, dịch chiết lần đầu tiên được lọc qua bông gòn rồi được đưa qua giấy lọc nối với bơm chân không. Các dịch lọc được thu thập, gộp lại và làm khô bằng thiết bị cô quay. Dịch chiết thô PR được giữ trong chai thủy tinh và bảo quản ở 4 độ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Sản lượng khai thác được thực hiện dựa trên cơ sở trọng lượng khô. Ethanol 95 phần trăm được sử dụng làm dung môi để hòa tan chiết xuất PR trước các thí nghiệm.

2.2. Hóa chất thực vật, tổng phenolics và flflavonoid, và hàm lượng quercetin

Các chất hóa học thực vật như anthraquinone, alkaloid, carotenoid, glycoside, flavonoid, tannin và xanthones của chiết xuất PR đã được nghiên cứu như mô tả trước đây (Boonpisuttinant et al., 2022). Các kết quả định tính được biểu thị bằng ( cộng ) đối với sự hiện diện và (-) đối với sự vắng mặt của hóa chất thực vật. Tổng hàm lượng phenolic (TPC) đã được phân tích bằng xét nghiệm Folin-Ciocalteu như đã mô tả trước đây (Boonpisuttinant và cộng sự, 2022). Tóm lại, 50 lL dịch chiết PR, 75 lL thuốc thử Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) và 75 lL Na2CO3 7,5 phần trăm (w/v) (Loba Chemie, Ấn Độ) đã được thêm vào {{13} }đĩa vi mạch kỹ, trộn nhẹ nhàng, sau đó ủ ở nhiệt độ phòng trong nơi tối trong 90 phút. Sau đó, độ hấp thụ ở bước sóng 725nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Hàm lượng phenolic được tính toán từ đường chuẩn của axit galic (Sigma-Aldrich, USA). Các kết quả được thực hiện dưới dạng mg đương lượng axit gallic (GAE)/g dịch chiết.

Tổng hàm lượng flavonoid (TFC) bằng phương pháp nhôm clorua cải tiến đã được phân tích theo Shraim et al. (2021). Tóm lại, 50 lL dịch chiết PR, 25 lL AlCl3 10% (BDH Prolabo Chemicals, Bỉ) và 100 lL NaNO2 5% (Loba Chemie, Ấn Độ) đã được thêm vào 96-giếng vi đĩa. Sau 5 phút ủ, các đĩa được bổ sung 25 lít NaOH 1 M (BDH Prolabo Chemicals, Belgium). Phản ứng được cho phép bằng cách ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút. Sau đó, độ hấp thụ ở bước sóng 450nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Hàm lượng flavonoid được tính toán từ đường cong chuẩn của quercetin (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ). Kết quả được thực hiện dưới dạng mg đương lượng Quercetin (QE)/g dịch chiết.

Hàm lượng quercetin trong dịch chiết PR được nghiên cứu bằng phương pháp HPLC (Shaikh và Jain, 2018). Tóm lại, một lượng quercetin chuẩn được cân chính xác được hòa tan trong metanol trong bình định mức 100 mL, để thu được dung dịch gốc 1,000 lg/mL. Các dung dịch chuẩn sau đó được 2-pha loãng lần lượt thành 3,125 mg/mL. Để chuẩn bị mẫu, 2,5 g dịch chiết được hòa tan trong 25 mL metanol có 25 mL bình định mức để thu được 1,000 mg/mL. Tất cả các phân tích được thực hiện trên hệ thống HPLC vô cực Agilent 1260 (Waters, Milford, MA, USA) được trang bị đầu dò mảng photodiode. Cột phân tích được sử dụng là cột mở rộng Agilent Zorbax C18 (5l × 100 mm × 4,6 mm) với pha động gồm metanol: axit orthophosphoric 0,1 phần trăm (75:25) với tốc độ dòng 0,6 mL/phút. Nhiệt độ cột được duy trì ở 25 độ và bước sóng phát hiện được đặt ở 370 nm. Tất cả các dung dịch và dung môi được lọc qua bộ lọc 0,22 lm và khử khí. Thể tích tiêm mẫu là 10 lL và thời gian chạy là 8 phút.

2.3. hoạt động chống oxy hóa

2.3.1. Hoạt động nhặt gốc tự do

Hoạt động thu dọn gốc tự do của chiết xuất PR đã được thử nghiệm bằng phương pháp 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) của Boonpisuttinant et al. (2019). Một lượng 100 lL chiết xuất PR hoặc axit ʟ-ascorbic (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) làm đối chứng dương tính và 100 lL dung dịch DPPH 0,1 mg/mL (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) trong etanol nguyên chất được bổ sung vào một 96 giếng vi đĩa. Sau khi ủ ở nhiệt độ phòng trong một nơi tối trong 30 phút, độ hấp thụ được đo ở bước sóng 515nm bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ phần trăm của hoạt động nhặt gốc tự do DPPH được tính theo công thức sau:

phần trăm hoạt động nhặt gốc tự do DPPH {{0}}[A0 -A1/A0]×100 (1)

Trong đó A0 là độ hấp thụ của đối chứng và A1 là độ hấp thụ của mẫu. Nồng độ cung cấp khả năng nhặt sạch 50 phần trăm (SC50) sau đó được tính toán từ đồ thị được vẽ giữa phần trăm khả năng nhặt sạch gốc tự do và nồng độ mẫu.

2.3.2. Ức chế peroxid hóa lipid

Khả năng ức chế peroxy hóa lipid của chiết xuất PR đã được thử nghiệm bằng phương pháp Ferric-thiocyanate Boonpisuttinant et al. (2019). Một lượng 50 lL chiết xuất PR hoặc a-tocopherol (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) làm đối chứng dương tính và 50 lL axit linoleic trong 50 phần trăm (v/v) DMSO (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) đã được thêm vào một Tấm vi mạch 96 giếng. Phản ứng được bắt đầu bằng cách thêm 50 lL NH4- SCN 5 mM và 50 lL FeCl2 2 mM. Sau khi ủ ở 37 độ trong một nơi tối trong 60 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 490nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Phần trăm ức chế peroxid hóa lipid được tính theo công thức sau:

Trong đó A0 là độ hấp thụ của đối chứng và A1 là độ hấp thụ của mẫu. Nồng độ cung cấp 50 phần trăm ức chế peroxy hóa lipid (LC50) được tính toán từ đồ thị được vẽ giữa phần trăm ức chế peroxy hóa lipid và nồng độ mẫu.

2.3.3. thải sắt kim loại

Quá trình thải sắt kim loại của chiết xuất PR đã được thử nghiệm bằng phương pháp thải sắt ion (FIC) của Boonpisuttinant et al. (2019). Một lượng 50 lL chiết xuất PR hoặc EDTA (Loba Chemie, Ấn Độ) làm đối chứng dương tính, 1 mg/mL FeCl2 và 50 lL 1 mg/ml ferrozine trong 1% HCl (TCI, Hoa Kỳ) đã được bổ sung vào một tấm vi mạch 96 giếng. Sau khi ủ ở nhiệt độ phòng trong một nơi tối trong 60 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 570nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ chelat hóa kim loại được tính theo công thức sau:

Trong đó A0 là độ hấp thụ của đối chứng và A1 là độ hấp thụ của mẫu. Nồng độ cung cấp 50 phần trăm quá trình thải sắt kim loại (MC50) được tính toán từ đồ thị được vẽ giữa phần trăm quá trình thải sắt kim loại và nồng độ mẫu.

2.4. Ức chế tyrosinase của nấm

Hoạt tính ức chế men tyrosinase của nấm chiết xuất PR đã được thử nghiệm bằng phương pháp dopachrom cải tiến (Boonpisuttinant et al., 2022). Một lượng 50 lL chiết xuất PR hoặc axit kojic (Phòng thí nghiệm nghiên cứu Sisco (SRL), Ấn Độ) làm đối chứng dương tính, 50 lL 0,1 mg/mL L-tyrosine (Sigma- Aldrich, Hoa Kỳ), 50 lL dung dịch đệm phốt phát 0,1 mM và 50 lL chất tyrosinase nấm 0,1 mg/mL (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) đã được bổ sung vào 96-giếng vi đĩa. Trước và sau khi ủ ở 37 độ C trong một nơi tối trong 60 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ phần trăm ức chế tyrosinase của nấm được tính theo công thức sau:

phần trăm ức chế tyrosinase của nấm=[(A - B)-(C - D)]/=(A - B)×100 (4)

Trong đó A là độ hấp thụ của mẫu trắng sau khi ủ, B là độ hấp thụ của mẫu trắng trước khi ủ, C là độ hấp thụ của mẫu sau khi ủ và D là độ hấp thụ của mẫu trước khi ủ. Nồng độ cung cấp 50 phần trăm ức chế tyrosinase (IC50 mg/mL) được tính toán từ đồ thị được vẽ giữa phần trăm ức chế tyrosinase và nồng độ mẫu

2.5. Các hoạt động chống lão hóa trong ống nghiệm trên nuôi cấy tế bào

2.5.1. Nuôi cấy tế bào

Các khối u ác tính ở chuột (B16F10) và nguyên bào sợi da người đã được sử dụng để nghiên cứu khả năng chống tạo hắc tố, sinh tổng hợp collagen và chống lão hóa của biểu hiện Sirt1 và Foxo1 mRNA, tương ứng. Hai ô này được lấy từ Bộ sưu tập Văn hóa Kiểu Mỹ (ATCC), Virginia, Hoa Kỳ. Các tế bào được nuôi cấy trong Môi trường Đại bàng Sửa đổi (DMEM) của Dulbecco (Công nghệ sinh học Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Hoa Kỳ) được bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò (FBS) (Tập đoàn Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Hoa Kỳ ), 100 IU/ml penicillin và 100 mg/mL streptomycin (Gibco BRL, Gaithersburg, USA) trong điều kiện tiêu chuẩn ở 37 C trong tủ ấm 5% CO2 trước khi thí nghiệm.

2.5.2. Thử nghiệm độc tính tế bào trên nguyên bào sợi da người

Các nồng độ khác nhau của chiết xuất PR đã được nghiên cứu về khả năng gây độc tế bào trên khối u ác tính ở chuột (B16F10) và nguyên bào sợi da người bằng phương pháp 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl )-2,5-xét nghiệm diphenyl tetrazolium bromide (MTT) như Boonpisuttinant et al đã mô tả trước đây. (2022). Các nguyên bào sợi da người ở mật độ 1×104 tế bào trên mỗi giếng được mạ trong các đĩa giếng 96-, điều chỉnh thể tích thành 180 lL bằng DMEM và ủ ở 37 độ trong môi trường 5% CO2 trong 24 giờ. Các chiết xuất ở nồng độ khác nhau sau đó đã được thêm vào. Các tế bào được ủ ở 37 độ C trong môi trường 5% CO2 trong 24 giờ. Sau đó, các tế bào được rửa bằng PBS 10 mM ở pH 6,8 trong 3 lần và thêm 1 mL dung dịch MTT 0,5 mg/mL (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ). Sau khi ủ ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ, dung dịch MTT được loại bỏ và 100 lít dimethyl sulfoxide (DMSO) được thêm vào mỗi giếng. Các đĩa được lắc nhẹ với tốc độ 200 vòng/phút trong 15 phút. Độ hấp thụ ở bước sóng 570nm của các dung dịch được đo bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ phần trăm khả năng sống của tế bào được tính theo công thức sau:

Trong đó Acontrol là độ hấp thụ của mẫu đối chứng và A sample là độ hấp thụ của mẫu.

2.5.3. Chống tạo hắc tố trên tế bào B16F10

Khả năng chống tạo hắc tố trên các tế bào B16F10 của chiết xuất PR đã được kiểm tra bằng phương pháp được mô tả trước đó bởi Boonpisuttinant et al. (2022). Các tế bào B16F10 với mật độ 2,5×105 tế bào mỗi giếng được cấy vào 6-các đĩa giếng và được ủ ở 37 độ trong môi trường 5% CO2 qua đêm. Các chất chiết xuất ở nồng độ 0,01 mg/mL sau đó được thêm vào. Axit Kojic đã được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực. Các tế bào được ủ ở 37 độ trong môi trường 5% CO2 trong 72 giờ. Sau đó, phần nổi phía trên được thu thập trong các ống vi lọc sạch, trong khi các tế bào được rửa bằng dung dịch muối đệm phốt phát 10 mM (PBS) ở pH 6,8 trong 3 lần, hòa tan trong 200 lít NaOH 10% và ủ ở 60 độ trong 1 giờ . Độ hấp thụ ở bước sóng 450nm của chất nổi trên bề mặt và dung dịch tế bào được đo bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ phần trăm hàm lượng melanin được tính theo công thức sau:

2.5.4. Sinh tổng hợp collagen trên nguyên bào sợi da người

Sinh tổng hợp collagen của chiết xuất PR đã được kiểm tra như phương pháp được mô tả trước đây bởi Boonpisuttinant et al. (2022). Nguyên bào sợi da người với mật độ 5×105 tế bào trên mỗi giếng được gieo vào 6-các đĩa giếng và ủ ở nhiệt độ 37 độ trong môi trường 5% CO2 qua đêm. Sau đó, dịch chiết ở nồng độ 0.1 mg/mL được thêm vào. Axit ʟ-ascorbic được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực. Các tế bào được ủ ở 37 độ trong môi trường 5% CO2 trong 24 giờ. Sau đó, các tế bào được rửa bằng PBS 10 mM ở pH 6,8 trong 3 lần, thêm 1 mL dung dịch đỏ Sirius 0,1 phần trăm (w/v) (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) trong axit picric bão hòa (Phòng thí nghiệm nghiên cứu của Sisco (SRL) ), Ấn Độ), và sau đó được ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Thuốc nhuộm được loại bỏ và các tấm được rửa bằng 1 mL HCl 10 mM (Merck Millipore, Đức) 5 lần. Sau đó, các tế bào được hòa tan bằng cách thêm 1 mL NaOH 0,1 M. Độ hấp thụ ở bước sóng 450nm của chất nổi trên bề mặt và dung dịch tế bào được đo bằng đầu đọc vi bản. Tỷ lệ phần trăm của lượng collagen được tính theo công thức sau:

Trong đó, Csample là hàm lượng collagen của các mẫu và Ccontrol là hàm lượng collagen của đối chứng.

2.5.5. Kích thích gen chống lão hóa trên nguyên bào sợi da người

Sự kích thích các gen chống lão hóa (Foxo1 và Sirt1) của chiết xuất PR được xác định bằng RT-PCR như được mô tả trước đây bởi Polouliakh et al. (2020). Các nguyên bào sợi da người ở mật độ 5×105 tế bào mỗi giếng được cấy vào 6-các đĩa giếng được ủ ở 37 độ C trong môi trường 5% CO2 qua đêm. Dịch chiết ở nồng độ 0,01 mg/mL sau đó được thêm vào. Sau khi ủ trong 24 giờ, RNA tổng số được chiết xuất bằng NucleoSpin RNA Plus (Macherey Nagel, Dueren, Đức) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Lượng RNA tổng số được định lượng bằng máy đo huỳnh quang Qubit 2.0 (Invitrogen, Massachusetts, Hoa Kỳ.). Các đoạn mồi cụ thể cho RT-PCR bao gồm Foxo1, Sirt1 và b-actin đã được mua từ Macrogen Oceania, Australia. Trình tự của các đoạn mồi cụ thể đã được tuân theo; Foxo1: 5′ -GAC GCC GTG CTA CTC GTT-3′(Chuyển tiếp) và 5′-CGG TTC ATA CCC GAG GTG-3′(Xoay ngược); Sirt1: 5′ -TAG CCT TGT CAG ATA AGG AAG GA-3′(Tiến lên), 5′ -ACA GCT TCA CAG TCA ACT TTG T-3′ (Lùi); và b-actin: 5′ TCA TGC AGT GTG ACG TTG ACA TCC GT-3′ (Chuyển tiếp), 5′ -CCT AGA AGC ATT TGC GGT GCA CGA TG -3′(Xoay ngược). Các hỗn hợp PCR chứa 1x Hệ thống RT-PCR một bước SuperScriptTM III với PlatinumTM Taq DNA Polymerase Supermix (Invitrogen, Massachusetts, USA.), 250 nM mồi cụ thể và 2 lg RNA. Tất cả các phản ứng RT-PCR được thực hiện trên TProfessional Basic Gradient 070–601 (Biometra GmbH, Göttingen, Đức) trong các điều kiện khuếch đại: 60 độ C 30 phút để sao chép ngược; sau đó 40 chu kỳ ở 94 độ trong 15 giây biến tính, 55 độ C trong 30 giây ủ và 68 độ trong 30 giây kéo dài; và cuối cùng ở 68 độ C trong 5 phút. Sau quá trình RT-PCR, các sản phẩm PCR sau đó được phân tách trên gel agarose 1,5% được trộn với Bộ đệm tải DNA Novel Juice 6x (GeneDireXTM, Trung Quốc), được xem bằng đèn chiếu sáng và sau đó được chụp ảnh bằng Số một 4.6.8 (cơ bản) (Phòng thí nghiệm Bio-Rad, Inc., California). Sau đó, mật độ dải được định lượng bằng Image J (Phiên bản 1.47, Viện Y tế Quốc gia, Bethesda, MD, Hoa Kỳ) và được chuẩn hóa thành gen giữ nhà, b-actin.

2.6. Phân tích thống kê

Tất cả các thử nghiệm được biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (SD) của các thử nghiệm độc lập (n {{0}}). Sự khác biệt thống kê được phân tích bởi ANOVA với thử nghiệm Tukey (p <0,05). Mối quan hệ giữa các hoạt tính sinh học đã được kiểm tra bằng hệ số tương quan của Pearson.

3. Kết quả

3.1. Năng suất chiết xuất, đặc tính vật lý và hàm lượng hóa chất thực vật của dịch chiết PR

Sản lượng chiết xuất, đặc tính vật lý và hàm lượng hóa chất thực vật của chiết xuất PR được thể hiện trong Bảng 1. Sản lượng chiết xuất của chiết xuất PR dao động từ 10,62% đến 30,63%. Các thành phần hóa học chính của chiết xuất PR là flavonoid. Đặc biệt, chiết xuất chôm chôm hồng từ hạt (PR-SM và PR-S-Sox) không chứa flavonoid mà chỉ cho thấy glycoside là chất phytochemical của chúng. Chỉ có điều, chiết xuất PR từ vỏ chín và vỏ non bằng Maceration (M) cho thấy sự hiện diện của xanthones, là một polyphenol không bền với nhiệt. Ngoài ra, năng suất chiết xuất của chiết xuất PR bằng chiết xuất Soxhlet (Sox) dường như cao hơn so với Maceration (M).

3.2. Tổng hàm lượng phenolic (TPC), flavonoid (TFC) và quercetin trong dịch chiết PR

Dịch chiết PR từ vỏ quả non bằng phương pháp Maceration (PRY-M) cho tổng hàm lượng phenolic cao nhất theo xét nghiệm FolinCiocalteu là 67,60 ± 4,38 mgGAE/g, trong khi dịch chiết PR từ vỏ quả non bằng phương pháp Maceration. Chiết xuất Soxhlet (PR-Y-Sox) cho tổng hàm lượng flavonoid cao nhất bằng xét nghiệm so màu nhôm clorua cải biến là 678,72 ± 23,59 mgQE/g (Hình 1) (p < 0,05). Tuy nhiên, các chiết xuất PR-BM, PR-SM và PR-S-Sox không cho thấy hàm lượng phenolic. Nó đã được tiết lộ rằng tất cả các chiết xuất PR đã chứng minh hàm lượng quercetin được xác định bằng phân tích HPLC. Ngoài ra, dịch chiết PR từ vỏ quả chín bằng Maceration (PR-RM) cho hàm lượng quercetin cao nhất là 190,10 ± 0,28 lg/mL. (Hình 2).

3.3. Các hoạt động ức chế tyrosinase nấm và chống oxy hóa của chiết xuất PR

Bảng 2 thể hiện 3 hoạt tính chống oxy hóa, bao gồm hoạt tính thu hồi gốc tự do bằng phương pháp DPPH, hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid bằng phương pháp Ferric-thiocyanate; thải sắt kim loại theo phương pháp FIC; và sự ức chế tyrosinase của nấm chiết xuất PR. Hầu hết các chiết xuất PR ngoại trừ các chiết xuất PR-LM, PR-BM và PR-S-Sox cho thấy hoạt động loại bỏ gốc tự do vượt trội với phạm vi 0} {{1{12}}} 0} của SC5.{ {18}}23 – {{20}}.045 mg/mL, tương đương với axit ʟ-ascorbic tiêu chuẩn (SC50 của 0. 036 ± 0.{{40}}03 mg/mL) ở p < 0.05. Ngoài ra, dịch chiết PR-LM cho thấy khả năng ức chế peroxy hóa lipid cao nhất với LC50 là 0.274 ± 0.029 mg/mL và hoạt tính thải sắt với MC50 là 0,203 ± 0,021 mg/mL, tương đương với a-tocopherol tiêu chuẩn (LC50 là 0,122 ± 0,015 mg/mL) và EDTA (MC50 là 0,518 ± 0,034 mg/mL), tương ứng (p < 0,05). Tất cả các chiết xuất PR đều thể hiện hoạt tính ức chế tyrosinase của nấm, trong khi chiết xuất PR-R-Sox cho thấy hoạt tính cao nhất với IC50 là 0,04 ± 0,02 mg/ml, tương đương với axit kojic tiêu chuẩn (IC50 là 0,02 ± 0,01 mg). /ml) (p < 0,05).

3.4. Độc tính tế bào của chiết xuất PR

Fig. 3 showed the cytotoxicity on the B16F10 cells (A) human skin fibroblasts by the MTT assay of the PR extracts. All of the PR  extracts at the concentrations of 0.01 and 0.1 mg/mL had no cytotoxicity on the B16F10 cells and human skin fibroblasts, respectively since they gave>80% khả năng sống tương đối so với nhóm không được điều trị. Mặc dù vậy, nồng độ cao hơn của tất cả các chiết xuất PR được coi là gây độc tế bào trên các tế bào đó. Nồng độ cao hơn 1 mg/ml không được thử nghiệm vì nó không thể hòa tan hoàn toàn trong dung môi.

3.5. Chống tạo hắc tố của chiết xuất PR

In this study, there is a screening method from many samples,  therefore we highlight only the highest concentration that had no cytotoxicity on both cells and might have the highest anti-melanogenesis activity. This concentration is the highest concentration that showed no cytotoxicity on the B16F10 cells after being treated with the PR extracts and kojic acid (>80 phần trăm khả năng tồn tại của tế bào) (dữ liệu không được hiển thị). Hình 4 thể hiện khả năng chống tạo hắc tố trên các tế bào u ác tính ở chuột (B16F10) của dịch chiết PR ở nồng độ 0,01 mg/ml. Tất cả các chất chiết xuất từ ​​​​PR đều thể hiện khả năng chống tạo hắc tố trên các tế bào B16F10. Chiết xuất PR từ lá, cành, hạt, quả chín và quả non bằng phương pháp chiết xuất Soxhlet (PR-L-Sox, PR-B-Sox, PR-S-Sox, PR-R-Sox và PR-Y-Sox ) cho thấy khả năng chống lại sự hình thành hắc tố cao nhất là 50,6–54,1 phần trăm , vượt trội đáng kể so với axit kojic tiêu chuẩn (37,9 ± 3,9 phần trăm ) khoảng 1,5 lần, trong khi hoạt tính của chiết xuất RB-M và PR-YM tương đương với axit kojic tiêu chuẩn (p <0,05).

3.6. Kích thích sinh tổng hợp collagen của chiết xuất PR

Tất cả các chiết xuất PR ở nồng độ {{0}}.1 mg/ml đều cho thấy sự kích thích sinh tổng hợp collagen trên nguyên bào sợi da người được xác định bằng phương pháp Sirius Red. Nồng độ 0.1 mg/ml của dịch chiết PR và axit ʟ-ascorbic là nồng độ cao nhất cho thấy không gây độc tế bào trên nguyên bào sợi da người. Chiết xuất PR từ lá và cành bằng chiết xuất Soxhlet (chiết xuất PR-LM và PR-BM) đã chứng minh khả năng sinh tổng hợp collagen cao nhất (16,46 ± 0.{{20}}7 phần trăm và 14,66 ± 0,09 phần trăm , tương ứng), thấp hơn axit ʟ-ascorbic tiêu chuẩn (34,07 ± 0,03 phần trăm ) khoảng 2 lần (p < 0,05) (Hình 5).

3.7. Kích thích gen chống lão hóa

Hình 6 cho thấy sự kích thích của các gen chống lão hóa bao gồm gen Sirt1 và Foxo1 trên nguyên bào sợi da người của chiết xuất PR ở 0.01 mg/ml được xác định bằng kỹ thuật RT-PCR. Nồng độ {{20}}.01 mg/ml của chiết xuất PR và resveratrol là nồng độ cao nhất không gây độc tế bào trên nguyên bào sợi da người. Thật thú vị, các chiết xuất PR-L-Sox, PR-S-Sox, PRR-M, PR-R-Sox, PR-YM và PR-Y-Sox ở mức 0,01 mg/ml thể hiện khả năng chống lão hóa cao nhất của Foxo1 biểu hiện mRNA (495 bp), vượt trội đáng kể so với resveratrol tiêu chuẩn khoảng 2 lần (p <0,05). Mặt khác, chiết xuất PR-S-Sox và PR-Y-Sox thể hiện sự kích thích cao nhất đối với biểu hiện mRNA chống lão hóa Sirt1 (160 bp), thấp hơn so với resveratrol (p <0,05). Mặc dù hầu hết tất cả các chiết xuất PR đều thể hiện khả năng kích thích biểu hiện gen chống lão hóa, nhưng các chiết xuất PR-R-Sox và PR-BM không kích thích biểu hiện Sirt1 và Foxo1 tương ứng.

4. Thảo luận

Một số thực vật tự nhiên thường được sàng lọc về hóa chất thực vật, hợp chất hoạt tính sinh học và đặc tính sinh học của chúng để tìm ra các thành phần tự nhiên hứa hẹn mới cho y học, thực phẩm bổ sung và ứng dụng mỹ phẩm. Chôm chôm hồng là một trong những loại trái cây địa phương ở huyện Klung, tỉnh Chanthaburi, Thái Lan. Có một vài báo cáo khoa học về các hoạt động sinh học và dược phẩm của nó, đặc biệt là hoạt động chống lão hóa. Trong nghiên cứu này, năm bộ phận của chôm chôm hồng, bao gồm lá, cành, hạt và vỏ từ quả chín và quả non, được chiết xuất bằng Maceration và chiết xuất Soxhlet sử dụng 95% ethanol làm dung môi. Một số hóa chất thực vật mới được phát hiện, bao gồm quercetin, là chất chuyển hóa thứ cấp của thực vật, đã được nghiên cứu về tác dụng chống lão hóa ở tế bào, động vật và con người (Phuong và cộng sự, 2020). Từ những phát hiện của nghiên cứu này, flavonoid là chất phytochemical chính của chiết xuất PR. Trước đây đã có báo cáo rằng chất chiết xuất từ ​​các loài chôm chôm khác chứa các chất hóa học thực vật bao gồm flavonoid, tanin và caroten, tương quan với đặc tính chống oxy hóa của chúng (Rohman, 2017). Sự vắng mặt của xanthones trong chiết xuất Soxhlet có thể là do nhiệt độ cao (Yuvanatemiya và cộng sự 2022, Sankeshwari và cộng sự, 2018). Quercetin là một trong những hợp chất phenolic và flavonoid phong phú nhất được tìm thấy trong nhiều loại trái cây và rau quả, cũng như trong chôm chôm (Phuong và cộng sự, 2020). Trong nghiên cứu này, nhiệt độ cao hơn (80 độ C) của quy trình Soxhlet có thể chiết xuất một chất không bền với nhiệt bao gồm quercetin nhiều hơn so với quy trình lạnh. Lượng quercetin được xác định bằng phân tích HPLC có thể được sử dụng làm chất đánh dấu để kiểm soát chất lượng của dịch chiết PR trên quy mô sản xuất. Hệ số tương quan Pearson (R2 ) giữa TFC và TPC của chiết xuất PR là 0,825 phân loại mối quan hệ rất chặt chẽ (R2=± 0,80 đến ± 1.00) (p < 0,01) có nghĩa là nếu TFC tăng lên, TPC cũng sẽ tăng lên đáng kể. Ngoài ra, hệ số R2 giữa TPC và hàm lượng quercetin trong chiết xuất PR là 0,650 phân loại mối quan hệ chặt chẽ (R2=± 0,60 đến ± 0,79) (p < 0,05). Sự khác biệt về năng suất chiết xuất, hóa chất thực vật, cũng như TPC, TFC và quercetin của chiết xuất PR có thể bị ảnh hưởng bởi dung môi, quy trình chiết xuất và nhiệt độ (Chutoprapat et al., 2020). Một số nghiên cứu đã phát hiện ra rằng các hợp chất flavonoid và phenolic, cũng như quercetin, có nhiều hoạt tính sinh học và dược phẩm, bao gồm hoạt tính chống vi khuẩn, chống oxy hóa, chống viêm và chống lão hóa (Panche et al., 2016, Shahidi và Yeo, 2018, Musika và cộng sự, 2021, Wang và cộng sự, 2022).

Như đã nêu trước đây, các loại oxy gốc, hay ROS, có thể gây ra tổn thương liên quan đến tuổi tác ở cấp độ tế bào và mô, đẩy nhanh quá trình lão hóa theo thời gian và môi trường, đặc trưng bởi các nếp nhăn và sắc tố không điển hình (Papaccio et al., 2022). Các chất chống oxy hóa tự nhiên có thể loại bỏ các gốc tự do, dẫn đến giảm tác dụng chống viêm, ngăn ngừa ung thư, tiểu đường và rối loạn não, giảm huyết áp và xơ vữa động mạch, đồng thời làm chậm quá trình lão hóa da (Miracle Uwa, 2{{20} }17). Loại bỏ các gốc tự do, ức chế peroxid hóa lipid và thải sắt đã được nghiên cứu rộng rãi như là các hệ thống để điều tra hoạt động chống oxy hóa của các sản phẩm tự nhiên. Để loại bỏ gốc tự do DPPH, các electron lẻ trong phân tử DPPH bị khử bằng cách nhận một nguyên tử hydro từ chất chống oxy hóa để trở thành phân tử hydrazine (Ionita, 2021). Phương pháp peroxy hóa lipid dựa trên quá trình oxy hóa các ion đồng (II) thành đồng (III) được truyền qua nhũ tương axit linoleic (Bakir et al., 2017), trong khi phương pháp thải sắt kim loại dựa trên quá trình oxy hóa đồng (II) để tạo thành phức hợp sắt-ferrozine (Wong và cộng sự, 2014). Sự hiện diện của hàm lượng flavonoid và phenolic trong chiết xuất PR từ nghiên cứu này có thể đã góp phần vào ba hoạt động chống oxy hóa. Người ta đã phát hiện ra rằng các hợp chất phenolic (ví dụ: corilagin, axit ellagic, geraniin và quercetin) từ chiết xuất chôm chôm thể hiện hoạt tính chống oxy hóa bằng cách loại bỏ gốc tự do DPPH và ức chế peroxy hóa lipid (Hernández-Hernández et al., 2019, Phuong et al., 2019, Monrroy và cộng sự, 2020, Araujo và cộng sự, 2021). Điều này tương tự như các báo cáo trước đây rằng chiết xuất vỏ từ các loài chôm chôm khác thể hiện TPC và TFC cao, cũng như cho thấy các hoạt động chống oxy hóa mạnh hơn như ABTS, DPPH, O2-xác định khả năng khử sắt, khử sắt (FRAP ), các tác nhân chelate và peroxid hóa lipid (Lourith và cộng sự, 2017, Rohman, 2017, Monrroy và cộng sự, 2020). Thật thú vị, hệ số R2 giữa thải sắt kim loại và ức chế peroxid hóa lipid của chiết xuất PR cho thấy mối tương quan thuận rất mạnh là 0,953, phân loại mối quan hệ chặt chẽ ở mức p < 0,01 đáng kể.

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】