Iridoid và Acyclic Monoterpene Glycosides, Kankanosides L, M, N, O và P từ Cistanche Tubulosa

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) là một loài thực vật ký sinh lâu năm mọc trên rễ của các loài Salvadora hoặc Calotropis, phân bố ở Bắc Phi, Ả Rập và các nước châu Á.1) Thân của cây này (Kanka-nikujuyou trong tiếng Nhật) có truyền thống được sử dụng để điều trị liệt dương, vô sinh, đau thắt lưng và suy nhược cơ thể cũng như là một tác nhân thúc đẩy lưu thông máu. hai mươi bốn phenylethanoid aminoglycoside bao gồm kankanosides H1, H2, I, J1, J2, K1, và K2, và hai oligosugar acyl hóa từ thân cây tươi của Cistanchetubulosa.phenylethanoid glycoside,echinacoside, acteoside,và isoacteoside, được phát hiện để ức chế sự gia tăng nồng độ aspartate aminotransferase (sAST) và alanin aminotransferase (sALT) trong gan bị thương của chuột do D-galactosamine (D-GalN) / ​​lipopolysaccharide gây ra ở liều 25-100 mg / kg mỗi os ( po). Yêu cầu về cấu trúc của glycoside phenylethanoid đối với hoạt động bảo vệ gan cũng đã được làm sáng tỏ. và N (3), bảy glycoside monoterpene mạch hở bao gồm kankanoside O (4) và P (5), ba phenylpropanoids và bốn lignans. Bài báo này đề cập đến sự phân lập và làm sáng tỏ cấu trúc của năm hợp chất mới (1—5).

Cành tươi của C. tubulosa (trồng ở Urumuqi, tỉnh Xin jiang, Trung Quốc) được chiết xuất bằng metanol trong điều kiện reflflux để thu được chiết xuất metanolic (8,36% từ thân cây tươi). Từ dịch chiết metanol, các phần được rửa giải bằng H2O- và MeOH (tương ứng là 5,63 phần trăm và 2,73 phần trăm) thu được bằng sắc ký cột Diaion HP -20 (H2O → MeOH) như đã mô tả trước đây.5) Phần được rửa giải MeOH là phụ tiếp giáp với sắc ký cột SiO2 và ODS và cuối cùng là HPLC để cung cấp kankanosit L (1, 0. 0 0 26 phần trăm), M (2, 0. {{ 27}} 0 0 1 phần trăm), N (3, 0. 0 0 {{6 0}} 7 phần trăm) , O (4, 0. 0 {{9 0}} 2 {{1 0 5}} phần trăm) và P (5, {{118} }. 0 0 0 2 phần trăm), 6- deoxycatalpol3,7) (6, 0. 197 phần trăm), bartsioside3,7) (7, 0. 0 583 phần trăm), gluroside3,7) (8, 0. 0443 phần trăm), kankanoiside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 phần trăm), axit mussaenosidic3,7) (10, 0,0056 phần trăm), 8- axit epiloganic3,8) (11, 0,0023 phần trăm), 8- axit epideoxyloganic3,7) (12, 0,0004 phần trăm), axit geniposidic3,7) (13, 0,0040 phần trăm), kankanoside E3) (14, 0,0026 phần trăm), (2E, 6Z) -8- b D-glucopyranosyloxy -2, 6- di metyl -2, 6- axit octadienoic3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 phần trăm), (2E, 6E) {{95 }}, 7- dimethyl -8- hydroxyoctadien -1- yl-ObD-glu copyranoside10) (16, 0,0082 phần trăm), 8- hydroxygeraniol 8- Ob-D-glucopyranoside11 ) (17, 0,0044 phần trăm), betulalbuside A12) (18, 0,0004 phần trăm), coniferin13) (19, 0,0002 phần trăm), syringin13) (20, 0,0015 phần trăm), aldehyde sinapic 4- ObD-glucopyranoside14) (21, 0,0001 phần trăm), () -pinoresinol ObD-glucopyranoside4,8,15) (22, 0,0010 phần trăm), eucommin A16) (23, 0,0002 phần trăm), isoeucommin A17) (24, 0,0010 phần trăm) và () -syringaresinol ObD- glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 phần trăm).

Cistanche tubulosacải thiện chức năng tình dục

Cấu trúc của Kankanosides L (1), M (2) và N (3)

Kankanoside L (1) thu được dưới dạng bột màu trắng có chuyển động quay âm ([a] D 26 45,7 trong MeOH). Phổ IR của nó cho thấy một dải hấp thụ mạnh ở 3433 và 1 {{2 0}} 80 cm 1 gợi ý về một gốc glycoside. Bắn phá nguyên tử nhanh (FAB) -MS của 1 lần chạy ở chế độ ion dương và âm cho thấy các đỉnh ion bán phân tử lần lượt ở m / z 371 [M Na] và 347 [MH], và công thức phân tử được xác định là C15H24O9 bằng phép đo FAB-MS độ phân giải cao. Thủy phân axit 1 bằng axit clohydric 1,0 M (HCl) đã giải phóng D-glucozơ, được xác định bằng phân tích HPLC sử dụng detector quay quang học.3—6) Phổ 1 H- và 13C-NMR của 1 (CD3OD, Bảng 1, 2), được ấn định bởi các thí nghiệm NMR khác nhau, 19) cho thấy các tín hiệu có thể ký hiệu được đối với bốn metylenes [d 1,43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 (1H, br dd, J Khoảng 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J=ca. 8, 14 Hz, 6b-H), 3,50 ( 1H, ddd, J 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (mỗi thứ 1H, cả hai d, J 13,1 Hz, 10- H2)], hai metan [d 2,15 (1H, dd, J 7,2, 8,9 Hz, 9- H) và 2,23 (1H, m, 5- H)] và nhóm axetan [d 4,81 (1H, d, J 8,9 Hz, 1- H)] cùng với gốc b-glucopyranosyl [d 4,70 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Như thể hiện trong Hình 1, thí nghiệm quang phổ tương quan 1 H – 1H (1 H – 1 H COSY) trên 1 chỉ ra sự hiện diện của các cấu trúc từng phần được viết bằng các vạch đậm. Trong thí nghiệm tương quan đa liên kết hạt nhân (HMBC) trên 1, các mối tương quan tầm xa đã được quan sát thấy giữa các proton và cacbon sau (1- H và 3- C, 8- C; {{ 124}} H và 1- C; 7- H và 8- C, 10- C; 9- H và 8- C; {{131 }} H2 và 7- C, 8- C; 1 -H và 1- C) như trong Hình 1. Tiếp theo, cấu trúc lập thể tương đối của 1 được đặc trưng bởi hạt nhân nhạy pha Thí nghiệm quang phổ tăng cường Overhauser (NOESY nhạy pha), cho thấy mối tương quan NOE giữa các cặp proton sau (1- H và 3a H; 3a-H và 4a-H; 3b-H và 4b-H; 4b-H và 5- H, 9- H; 5- H và 6b-H, 9- H; 6a-H và 7- H; 7- H và 10- H2), như được thể hiện trong Hình 1. Phổ 1 H- và 13C-NMR của 1 được chồng lên các phổ của thành phần iridoid chính 6- deoxycatalpol (6), ngoại trừ các tín hiệu do đến gốc d-lactol bão hòa. Cuối cùng, quá trình hydro hóa 6 cho 1, do đó cấu trúc lập thể của kankanoside L được làm sáng tỏ là 3, 4- dihydro -6- deoxycatalpol (1).

Kankanoside M (2) thu được dưới dạng bột màu trắng có chuyển động quay âm ([a] D 26 18,7 trong MeOH). Phổ IR của 2 cho thấy các dải hấp thụ ở 3433, 1736, 1655 và 1 0 76 cm 1 tương ứng với các chất hydroxyl, d-lactone, olefin và ether. Phổ FAB-MS của ion dương 2 cho thấy đỉnh ion bán phân tử ở m / z 353 [M Na], và công thức phân tử được xác định là C15H22O8 bằng phép đo FAB-MS ion dương có độ phân giải cao. Thủy phân axit 2 bằng HCl 1,0 M giải phóng được glucozơ. Phổ 1 H- và 13C NMR của 2 (CD3OD, Bảng 1, 2) cho thấy các tín hiệu có thể gán cho bốn metylenes [d 1,66, 2,11 (mỗi loại 1H, cả m, 4- H2), 2,15, 2,75 (mỗi loại 1H , cả m, 6- H2), 4,29 (1H, ddd, J 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (mỗi thứ 1H, cả d, J 13,1 Hz, 10- H2), 4,35 (1H, ddd, J 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], hai methines [d 2,97 (1H, m, 5- H), 3,82 (1H, br s, {{ 84}} H)], một olefin [d 5,94 (1H, m, 7- H)] và một nhóm lacton bão hòa (d C 174,9) cùng với một gốc bD-glucopyranosyl [d 4,32 (1H, d , J 7,9 Hz, 1 -H)]. Như được thể hiện trong Hình 1, thí nghiệm 1 H – 1H COSY trên 2 chỉ ra sự hiện diện của các cấu trúc từng phần được viết bằng các dòng in đậm và trong thí nghiệm HMBC, các mối tương quan trong phạm vi dài đã được quan sát thấy giữa các cặp proton và carbon sau đây ({{105 }} H và 1- C; 7- H và 9- C; 9- H và 1- C, 8- C; {{112} } H2 và 7- C, 8- C, 9- C; 1 -H và 10- C). Cấu trúc lập thể tương đối của 2 được đặc trưng bởi một thí nghiệm NOESY nhạy pha, cho thấy mối tương quan NOE giữa các cặp proton sau (3a-H và 4a-H; 3b-H và 4b-H; 4b-H và 5- H; 5- H và 6b-H, 9- H) như trong Hình 1. Do đó, cấu trúc lập thể của 2 đã được làm sáng tỏ như được minh họa.

Kankanoside N (3) được phân lập dưới dạng bột trắng với chuyển động quang âm ([a] D 25 24,6 trong MeOH). Trong ion dương FAB-MS của 3, một đỉnh ion bán phân tử được quan sát ở m / z 371 [M Na]. Công thức phân tử C16H28O8 được xác định bằng phép đo FAB-MS độ phân giải cao. Thủy phân 3 bằng axit với 1. 0 M HCl giải phóng được D-glucozơ. Dữ liệu 1 H- và 13C-NMR (CD3OD, Bảng 1, 2) cho thấy các tín hiệu có thể gán cho metyl [d 1. 0 7 (3H, d, J 7,2 Hz, 10- H3)] , bốn metylenes {d 1,37, 1,87 (mỗi loại 1H, cả m, 7- H2), 1,65, 1,81 (mỗi loại 1H, cả m, 6- H2), [3,65 (1H, dd, J 9,1 , 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Hz), 11- H2] và [3,70 (1H, dd, J 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), {{ 71}} H2]}, bốn metan [d 1,69 (1H, m, 4- H), 1,75 (1H, m, 9- H), 2,06 (1H, m, 8- H), 2,16 (1H, m, 5- H)] và một nhóm hemiacetal [d 4,67 (1H, d, J 7,4 Hz, 1- H)] cùng với một gốc bD-glucopyranosyl [ d 4,26 (1H, d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. Cấu trúc iridoid của 3 được làm rõ bằng các thí nghiệm 1 H – 1 H COSY và HMBC và cấu trúc lập thể tương đối được đặc trưng bởi một thí nghiệm NOESY nhạy pha như trong Hình 1. Do đó, cấu trúc cấu trúc của 3 được làm sáng tỏ như được minh họa.

Cistanche tubulosa

Cấu trúc của Kankanosides O (4) và P (5)

Kankanosit O (4) và P (5), C16H26O8, cũng thu được dưới dạng bột màu trắng với chuyển động quang âm (4: [a] D 23 26,1; 5: [a] D 21 32,7 cả trong MeOH). Phổ IR của 4 và 5 cho thấy các dải hấp thụ ở 3433, 1696, 1647 và 1 0 76 cm 1 cho 4 và ở 3434, 17 0 1, 1647 và 1 {{96} } 76 cm 1 cho 5, tương ứng với các hàm glycosidic, carboxyl và olefin. Phổ UV của chúng cho thấy cực đại hấp thụ chung ở bước sóng 217 nm cho thấy sự hiện diện của gốc axit cacboxylic không no b trong cả hai chất này. Sự thủy phân bằng axit của 4 và 5 được giải phóng D-glucose, trong khi bằng cách thủy phân bằng enzym với b glucosidase, 4 và 5 cho (2E, 6E) -8- hydroxy -2, 6- dimethyl {{39 }}, {{4 0}} axit octadecenoic2 0) (4a) và (2E, 6E) -8- hydroxy -3, 7- đimetyl {{ 48}}, 6- axit octadecenoic21) (5a), tương ứng. Dữ liệu 1 H- và 13C-NMR của 4 (CD3OD, Bảng 2, 3) cho thấy các tín hiệu có thể gán cho hai metyls [d 1,71 (3H, br s, 10- H3), 1,81 (3H, d, J 1,0 Hz , 9- H3)], ba metylenes {d 2,19 (2H, br t, J khoảng 7 Hz, 5- H2), 2,36 (2H, m, 4- H2), [ 4,24 (1H, dd, J 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J 6,2, 12,0 Hz), 8- H2]} và hai olefin ba thế [d 5,41 (1H, ddd, J 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J 7,2, 1,0 Hz, 3- H)] cùng với một phần glucopyranosyl bD [d 4,34 (d, J 7,8 Hz, 1 -H)]. Bằng cách so sánh các tín hiệu carbon trong phổ 13C-NMR của 4 với của 4a, một sự dịch chuyển glycosyl hóa đã được quan sát thấy ở vị trí 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Vị trí của liên kết glucoside cũng được xác nhận bởi các thí nghiệm HMBC như được thể hiện trong Hình 2. Do đó, cấu trúc lập thể của 4 được làm rõ là (2E, 6E) -8- bD-glucopyranosyloxy -2, {{ 143}} đimetyl -2, 6- axit octadecenoic. Mặt khác, dữ liệu 1 H- và 13C-NMR của 5 (CD3OD, Bảng 2, 3) chỉ ra sự hiện diện của một (2E, 6E) -8- hydroxy -3, {{158} } dimetyl -2, 6- gốc axit octadecenoic [d 1,70 (3H, br s, 10- H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 ( 2H, m, 4- H2), 2,27 (2H, m, 5- H2), 4,05, 4,20 (mỗi thứ 1H, cả br d, J ca. 12 Hz, 8- H2) , 5,47 (1H, tq, J 7,1, 0,9 Hz, 6- H), 5,67 (1H, br s, 1- H)] cùng với một phần bD-glucopyranosyl [d 4,23 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. Khả năng kết nối của gốc bD-glucopyranosyl ở 5 đã được làm sáng tỏ trên cơ sở các thí nghiệm HMBC như được thể hiện trong Hình 2. Hơn nữa, một sự dịch chuyển glycosyl hóa điển hình đã được quan sát thấy đối với các tín hiệu ở vị trí 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). Trên cơ sở các bằng chứng nêu trên, cấu trúc lập thể của 5 được xác định là (2E, 6E) -8- bD-glucopyranosyloxy -3, 7- dimethyl -2, { {230}} axit octa dienoic.

Ảnh hưởng của các yếu tố cấu thành đối với yếu tố hoại tử khối u Độc tính tế bào do yếu tố a (TNF-a) gây ra trong tế bào L929

TNF-a được biết đến là trung gian điều hòa nhiều loại chấn thương cơ quan thông qua việc gây ra quá trình chết theo phương thức tế bào. Trong trường hợp của gan, các tác dụng sinh học của TNF-a có liên quan đến tổn thương gan do chất độc gan gây ra, thiếu máu cục bộ / tái tưới máu, viêm gan do vi rút và rượu.22—24) Do đó, TNF-a được coi là một chất quan trọng mục tiêu để khám phá các tác nhân chống viêm và bảo vệ gan. Trên cơ sở khái niệm nêu trên, chúng tôi đã nghiên cứu các thành phần bảo vệ khỏi các sản phẩm tự nhiên gây chết tế bào do TNF-a gây ra trong tế bào L929, một dòng tế bào nhạy cảm với TNF-a.25) Trước đây, chúng tôi đã báo cáo rằng một số thành phần từ Piper Chaba, 26—29) Boesenbergia rotunda, 3 0, 31) Punica granatum, 32) Helichrysum Arenarium, 33—35) và Sapindus rarak, 36—38) được phát hiện có biểu hiện trong các hiệu ứng hibitory của TNF-a - gây độc tế bào trong tế bào L929. Vì các thành phần phenylethanoid của C. tubulosa (ví dụ: echinacoside, acteoside, và isoacteoside, v.v.) 5) cũng bị ức chế độc tính tế bào này, chúng tôi đã kiểm tra thêm các thành phần iridoid, phenylpropanoid và lignan như được trình bày trong Bảng 4. Kết quả là kankanoside A (9, ức chế: 16,3 2. 0 phần trăm ở 100 mM), axit mussaenosidic (10, 44,7 8,7 phần trăm), 8- axit epiloganic (11, 10,7 0,4 phần trăm), 8- hydroxygeraniol 8- ObD-glucopyranoside (17, 21,3 2,4 phần trăm) và () -pinoresinol ObD-glucopyranoside (22, 22,3 1,6 phần trăm), được tìm thấy để cho thấy hoạt động đáng kể. Mặc dù hoạt động của chúng yếu hơn so với hoạt tính của echinacoside (IC50 31,1 mM), acteoside (17,8 mM) và isoaceteoside (22,7 mM), nhưng nguyên tắc của phenylethanoid vẫn còn nguyên vẹn.5)

Thực nghiệm

Các dụng cụ sau đây được sử dụng để lấy dữ liệu quang phổ và vật lý: phép quay cụ thể, máy đo phân cực kỹ thuật số Horiba SEPA -300 (l 5 cm); Quang phổ UV, quang phổ kế Shimadzu UV -1600; Quang phổ hồng ngoại, quang phổ kế Shimadzu FTIR -8100; Phổ 1 H- và 13C-NMR, phổ kế JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) và JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) với tetramethylsilane làm chất chuẩn nội; Máy đo khối phổ FAB-MS và độ phân giải cao FAB-MS, JEOL JMS-SX 102A; Đầu dò HPLC, Shimadzu RID -10 Một chỉ số khúc xạ, Shimadzu SPD -10 A UV – VIS và Shodex OR -2. Cột HPLC, Cosmosil 5C 18- MS-II, và cột pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) và (250 20 mm id) lần lượt được sử dụng cho mục đích phân tích và chuẩn bị.

Các điều kiện thí nghiệm sau được sử dụng cho sắc ký: sắc ký cột silica gel pha thường (CC), silica gel 6 0 N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63—21 0 lưới, hình cầu, Trung tính); silica gel pha đảo ngược CC, Diaion HP -20 (Nippon Rensui) và Chromatorex ODS DM1 0 20T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100—200 mesh); TLC pha bình thường, tấm TLC tráng sẵn bằng silica gel 60F254 (Merck, 0,25 mm); TLC pha đảo ngược, tấm TLC tráng trước bằng silica gel RP -18 F254S (Merck, 0,25 mm); HPTLC pha đảo, các tấm TLC được tráng trước bằng silica gel RP -18 WF254S (Merck, 0,25 mm), việc phát hiện đạt được bằng cách phun 1 phần trăm Ce (SO4) 2– 10 phần trăm dung dịch H2SO4, sau đó đun nóng .

Nguyên liệu thực vật

Mục này đã được mô tả trong một báo cáo trước đó.

Chiết xuất và cô lập

Thân cây tươi của C. tubulosa (2,98 kg) được cắt mịn và chiết xuất ba lần bằng metanol trong điều kiện hồi lưu trong 3 giờ. Làm bay hơi dung môi dưới áp suất giảm tạo ra dịch chiết metanol (249,1 g, 8,36 phần trăm). Dịch chiết metanol đã chịu tác dụng của Diaion HP -20 CC (5. 0 kg, H2O → MeOH) để tạo ra các phân đoạn được rửa giải bằng H2O và MeOH (167,84 g, 5,63 phần trăm và 81,21 g, 2,73 phần trăm, tương ứng). Phân đoạn được rửa giải bằng MeOH (61. 00 g) được cho vào silica gel pha thường CC [1,8 kg, CHCl3– MeOH – H2O (15: 3: 0. 4 → 1 {{ 36}}: 3: 0. 5 → 6: 4: 1, v / v / v) → MeOH] để cho bảy phân số [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0. 89 g), 4 (1 0. 69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) và 7 (4,6 {{1 0 4}} g)], như đã được mô tả trước đây.5) Phần 1 (1,12 g) được tách bằng silica gel pha đảo CC [55 g, MeOH – H2O (4 0: 6 0, v / v) → MeOH] để đưa ra phân số năm mươi [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267. 0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{8 0}} (31 {{{{ 156}}. 9 mg) và 1-5 (91,4 mg)]. Phần 1-1 (132,8 mg) được tinh chế thêm bằng HPLC [Cosmosil 5C {{9 {{16 0}}} MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (1 {{166} }: 9 0, v / v)] để cung cấp kankanoside M (2, 2,8 mg, 0. {{2 0 3}} {{22 {{24 {{248 }}}}}} 0 1 phần trăm), bartsioside (7, 5,2 mg, 0. 00 0 2 phần trăm), aldehyde sinapic {{1 {{295 }} 6}} O- bD-glucopyranoside (21, 1,4 mg, {{3 {{3 {{3 {{31 0}} 9}} 5}} {{32 0} }}}. 0 0 0 1 phần trăm). Phần 1-2 (267. {{35 0}} mg) được tinh chế thêm bằng HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (7: 93, v / v)] để cung cấp cho (2E, 6E) -3, 7- dimethyl -8- hydroxyoctadien {{13 {{36 0}}}} yl-O-bD -glucopyranoside (16, 15,8 mg, {{37 0}}. {{4 0 6}} 0 0 7 phần trăm), 8- hydroxygeraniol 8- ObD glucopyranoside (17, 5,2 mg, 0,0002 phần trăm), () -pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22,0 mg, 0,0010 phần trăm), eucommin A (23, 5,0 mg, 0,0002 phần trăm), isoeu commin A (24, 21,3 mg, 0,0010 phần trăm), và () -syringaresinol ObD-glucopy ranoside (25, 98,0 mg, 0,0044 phần trăm). Phần 2 (9,56 g) được tách bằng silica gel pha đảo CC [400 g, MeOH – H2O (10: 90, v / v) → MeOH → axeton] để thu được năm phần năm [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g) và 2-5 (31,9 mg) ], như đã được mô tả trước đây. 5) Phần 2-2 (500,0 mg) chịu HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (5: 95, v / v )] để cung cấp kankanoside L (1, 6,6 mg, 0,0026 phần trăm) và 6- deoxycatalpol (6, 455,5 mg, 0,182 phần trăm). Phần 2-3 (1,00 g) được ghép phụ với HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (7: 93, v / v)] để tạo ra bảy phần [Fr . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [7 (380,6 mg) , 0,0581 phần trăm)], 2-3-6 [gluroside (8, 285,1 mg, 0,0435 phần trăm)] và 2-3-7 (84,9 mg)]. Phần 2-3-4 (106,6 mg) được tinh chế thêm bằng HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (5: 95, v / v)] để tạo ra 6 (68,4 mg, 0,0134 phần trăm) cùng với salidroside5) (13,7 mg, 0,0027 phần trăm). Phần 2-4 (1,16 g) chịu HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (15: 85, v / v) và Cosmosil pNAP, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (10: 90 hoặc 15: 85, v / v)] để cung cấp kankanosit N (3, 15,6 mg, 0,0007 phần trăm), O (4, 44,1 mg, 0,0020 phần trăm) và P (5, 4,2 mg, 0,0002 phần trăm), 6 (24,0 mg, 0,0011 phần trăm), 8 (17,7 mg, 0,0008 phần trăm), kankanoiside A (9, 22,3 mg, 0,0010 phần trăm), 8- axit epideoxyloganic (12, 8,1 mg, 0,0004 phần trăm), kankanoside E (14, 58,1 mg, 0,0026 phần trăm), (2E, 6Z) -8- bD-glucopy ranosyloxy -2, 6- dimethyl -2, 6- octadienoic axit (15, 31,0 mg, 0,0014 phần trăm), 16 (168,6 mg, 0,0075 phần trăm), 17 (94,3 mg, 0,0042 phần trăm), betulalbuside A (18, 8,1 mg, 0,0004 phần trăm), coniferin (19, 3,8 mg, 0,0002 phần trăm ), và syringin (20, 33,9 mg, 0,0015 phần trăm). Phần 4 (10,69 g) được tách bằng silica gel pha đảo CC [500 g, MeOH – H2O (30: 70, v / v) → MeOH → axeton] để tạo ra bốn phần [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) và 4-4 (792,8 mg)], như đã được mô tả trước đây. 5) phần 4-1 (500,0 mg) được tinh chế bằng HPLC [Cosmosil 5C 18- MS-II, CH3CN – 1 phần trăm AcOH trong nước (10: 90, v / v)] để tạo ra axit mussaenosidic (10, 39,1 mg, 0,0031 phần trăm) và axit geniposidic (13, 51,2 mg, 0,0040 phần trăm). Phần 5 (8,84 g) được tách bằng silica gel pha đảo CC [400 g, MeOH – H2O (20: 80 → 30: 70, v / v) → MeOH → axeton] để tạo ra bảy phần [Fr. 5-1 ​​(870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) và 5-7 (130,1 mg)], như đã được mô tả trước đây.5) Phần 5-1 (870,2 mg) được tinh chế thêm bằng HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN –1 phần trăm AcOH trong nước (5: 95, v / v)] để tạo ra 10 (55,3 mg, 0,0025 phần trăm) và 8- axit epiloganic (11, 51,5 mg, 0,0023 phần trăm).

Kankanoside L (1): Chất bột màu trắng, [a] D 26 45,7 (c 0. 48, MeOH). Độ phân giải cao-ion dương FAB-MS: Bộ điều khiển cho C15H24O9Na [M Na] 371.1318; Tìm thấy 371.1309. IR (KBr, cm 1): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: cho trong Bảng 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: cho trong Bảng 2. Dương tính- ion FAB-MS m / z: 371 [M Na]. Ion âm FAB-MS m / z: 347 [MH].

Kankanoside M (2): Chất bột màu trắng, [a] D 26 18,7 (c 0. 11, MeOH). Độ phân giải cao-ion dương FAB-MS: Bộ điều khiển cho C15H22O8Na [M Na] 353.1212; Tìm thấy 353.1208. IR (KBr, cm 1): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: cho trong Bảng 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: cho trong Bảng 2. FAB-MS ion dương m / z: 353 [M Na].

Kankanoside N (3): Chất bột màu trắng, [a] D 25 24,6 (c 1. 00, MeOH). Độ phân giải cao-ion dương FAB-MS: Bộ điều khiển cho C16H28O8Na [M Na] 371.1682; Tìm thấy 371.1686. IR (KBr, cm 1): 3415, 2874, 1076, 1028. 1 H- NMR (600 MHz, CD3OD) d: cho trong Bảng 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: cho trong Bảng 2. FAB-MS ion dương m / z: 371 [M Na].

Kankanoside O (4): Chất bột màu trắng, [a] D 23 26,1 (c 2,30, MeOH). Độ phân giải cao-ion dương FAB-MS: Bộ điều khiển cho C16H26O8Na [M Na] 369.1525; Đã tìm thấy 369.1528. UV [l cực đại (log e), MeOH, nm]: 217 (4,04). IR (KBr, cm 1): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: cho trong Bảng 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: cho trong Bảng 2. Điện cực dương FAB-MS m / z: 369 [M Na].

Kankanoside P (5): Chất bột màu trắng, [a] D 21 32,7 (c 0. 18, MeOH). Độ phân giải cao-ion dương FAB-MS: Bộ điều khiển cho C16H26O8Na [M Na] 369.1525; Đã tìm thấy 369.1520. UV [l cực đại (log e), MeOH, nm]: 217 (4,08). IR (KBr, cm 1): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: cho trong Bảng 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: cho trong Bảng 2. Điện cực dương FAB-MS m / z: 369 [M Na].

Thủy phân bằng axit của Kankanosit L — P (1—5): Dung dịch 1—5 (mỗi 1. 0 mg) trong 1. 0 M HCl (1. 0 ml) là được làm nóng ở 8 0 độ trong 3 giờ. Sau khi được làm lạnh, hỗn hợp phản ứng được trung hòa bằng Amberlite IRA -400 (dạng OH), và nhựa được loại bỏ bằng cách lọc. Sau khi loại bỏ dung môi dưới áp suất giảm, cặn được tách bằng cột hộp mực Sep-Pak C18 (H2O → MeOH). Phần được rửa giải bằng H2O được phân tích HPLC trong các điều kiện sau: Cột HPLC, Kaseisorb LC NH 2-60-5, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Nhật Bản); phát hiện, quay quang học [Shodex OR -2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan); pha động, CH3CN – H2O (85: 15, v / v); tỷ lệ đồng loại 0,8 ml / phút]. Việc xác định D-glucose có trong các phân đoạn 1—5 được rửa giải trong H2O được thực hiện bằng cách so sánh thời gian lưu và độ quay quang của chúng với thời gian lưu của chúng và độ quay quang học của mẫu xác thực [tR 17,9 phút (dương tính)].

Hydro hóa của {{0}} Deoxycatalpol (6) Một huyền phù của 6 (12. 0 mg) và 1 0 phần trăm cacbon paladi (5. 0 mg) trong MeOH (2,0 ml) được khuấy ở nhiệt độ phòng trong môi trường H2 trong 2 giờ. Chất xúc tác được lọc bỏ, và dịch lọc được ngưng tụ dưới áp suất giảm để thu được 1 (12,0 mg, lượng.).

Thủy phân bằng enzyme của Kankanosides O (4) và P (5) bằng b-Glucosidase Để tạo ra dung dịch 4 (8. 0 mg) trong H2O (1,5 ml) đã được thêm b-glucosidase (4,7 mg, từ quả hạnh, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), và dung dịch được khuấy ở 37 độ trong 24 giờ. Phản ứng được dập tắt bằng cách thêm EtOH (5. 0 ml), hỗn hợp được ngưng tụ dưới áp suất giảm. Cặn được chiết bằng EtOAc và làm bay hơi dung môi tạo ra (2E, 6E) -8- hydroxy -2, {{2 0}} dimethyl -2, {{22} } axit octadecenoic20) (4a, 3,9 mg, 92 phần trăm). Thông qua quy trình tương tự, (2E, 6E) -8- hydroxy -3, 7- dimethyl -2, 6- axit octadecenoic21) (5a, 0,9 mg, 94 phần trăm ) thu được từ kankanoside P (5, 1,8 mg).

Phương pháp thử nghiệm sinh học Hiệu ứng ức chế đối với độc tế bào do TNF-a gây ra trong tế bào L929 đã được thử nghiệm bằng phương pháp được mô tả trong một bài báo trước.

Giá trị thống kê được biểu thị dưới dạng phương tiện SEM Phân tích phương sai một chiều (ANOVA) theo sau thử nghiệm của Dunnett được sử dụng để phân tích thống kê. Giá trị xác suất (p) nhỏ hơn 0. 05 được coi là đáng kể.

thảo mộc cistanche