Tổn thương thận gây ra bởi quá trình mang thai tiền sản phục hồi sau sinh ở mô hình chuột chuyển gen

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Sarah M. Kedziora 1,2,3,4,5, Kristin Kräker 1,2,3,4,5, Lajos Markó1,2,3,4,5, Julia Binder 6, Meryam Sugulle 7,8, Martin Gauster 9 , Dominik N. Müller 1,2,3,4,5, Ralf Dechend 1,2,3,4,5,10, Nadine Haase 1,2,3,4,5, † và

Florian Herse 1,2,3,4, *

1 Trung tâm Nghiên cứu Thực nghiệm và Lâm sàng (ECRC), Sự hợp tác chung của Charité — UniversitätsmedizinBerlin và Trung tâm Y học Phân tử Max Delbruck, 13125 Berlin, Đức; sarah.kedziora@mdc-berlin.de (SMK); kristin.kraeker@charite.de (KK); lajos.marko@charite.de (LM); dominik.mueller@mdc-berlin.de (DNM); ralf.dechend@charite.de (RD); nadine.haase@mdc-berlin.de (NH)

2 Trung tâm Y học Phân tử Max Delbruck (MDC) thuộc Hiệp hội Helmholtz, 13125 Berlin, Đức

3 Charité-Universitätsmedizin Berlin, Thành viên công ty của Freie Universität Berlin và Humboldt-Universitätzu Berlin, 10117 Berlin, Đức

4 Viện Y tế Berlin tại Charité – Universitätsmedizin Berlin, 10117 Berlin, Đức

5 DZHK (Trung tâm Nghiên cứu Tim mạch Đức), Địa chỉ Đối tác Berlin, 13353 Berlin, Đức

6 Khoa Sản và Phụ khoa, Đại học Y Vienna, 1090 Vienna, Áo

7 Viện Y học Lâm sàng, Khoa Y, Đại học Oslo, 0318 Oslo, Na Uy

8 Khoa Sản và Phụ khoa, Bệnh viện Đại học Oslo, 0450 Oslo, Na Uy

9 Phòng Sinh học Tế bào, Mô học và Phôi học, Trung tâm Nghiên cứu Gottfried Schatz, Đại học Y Graz, 8036 Graz, Áo;

10 Helios Klinikum, 13125 Berlin, Đức

† Các tác giả này đã đóng góp như nhau cho bản thảo.

Trừu tượng:

Preeclampsia (PE) is characterized by the onset of hypertension (≥140/90 mmHg) and the presence of proteinuria (>300 mg / L / 24 giờ nước tiểu) hoặc rối loạn chức năng cơ quan khác của mẹ. Trong quá trình PE của con người, các chấn thương ở thận đã được quan sát thấy. Một số nghiên cứu cho rằng phụ nữ được chẩn đoán PE có nguy cơ mắc các bệnh thận sau này cao hơn. Tuy nhiên, trong các nghiên cứu trên người, PE như một nguyên nhân duy nhất của sự phát triển này không thể được nghiên cứu. Ở đây, chúng tôi nhằm mục đích nghiên cứu ảnh hưởng củaPE đối với tổn thương thận sau sinh trong mô hình chuột PE chuyển gen đã được thiết lập. Chuột cái chứa gen người-angiotensinogen phát triển kiểu hình tiền sản sau khi giao phối với chuột đực mang gen renin của người nhưng không tăng huyết áp trước và sau khi mang thai. Trong thời kỳ mang thai, chuột phát triển những thay đổi nhẹ ở ống thận và cầu thận được đánh giá bằng phân tích mô học, tăng biểu hiện gen của các dấu hiệu tổn thương thận nhưquả thậnvết thươngmarker 1 và yếu tố tăng trưởng mô liên kết, và albumin niệu so với chuột cái hoang dã (WT). Tuy nhiên, bốn tuần sau sinh, hầu hết các bệnh lý thận liên quan đến PE đều không có, bao gồm cả albumin niệu và biểu hiện dấu ấn sinh học tăng cao. Chỉ có thể phát hiện được sự phình to nhẹ của búi cầu thận. Nhìn chung, các chức năng cầu thận và ống thận bị ảnh hưởng trong thời kỳ mang thai ở chuột PE chuyển gen. Tuy nhiên, hầu như tất cả các bệnh lý này được quan sát thấy trong thời kỳ PE phục hồi sau sinh.

Từ khóa: tiền sản giật;quả thậnvết thương; hậu sản; mô hình chuột chuyển gen

Cistanche ngăn ngừa chấn thương thận

Chengdu Wecistanche có thể cung cấp các sản phẩm cistanche

1. Giới thiệu

Preeclampsia (PE) affects about 5–8% of all pregnancies worldwide, with a high maternal mortality rate due to complications such as eclampsia, HELLP-syndrome, or edema [1–3]. According to the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy, PE is characterized by the development of gestational hypertension (resting systolic blood pressure (BP) ≥ 140 and/or diastolic ≥ 90 mmHg) at or after 20 weeks of gestation in previously normotensive women [1]. Since proteinuria is present in only 75% of all cases [4], the American College of Obstetrics and Gynecology adapted guidelines for PE established in 2019 stated that "either proteinuria (>Nên có 300 mg / L mỗi 24- giờ nước tiểu) hoặc rối loạn chức năng cơ quan khác của người mẹ "[1,5]. Bệnh lý cơ bản của PE vẫn chưa được hiểu đầy đủ nhưng nguồn gốc nhau thai làm rối loạn chức năng miễn dịch và thay đổi mạch máu đóng vai trò vai trò quan trọng với hậu quả là nguy cơ chuyển hóa và tim mạch lâu dài đáng kể cho bà mẹ và trẻ em [6-9]. Nhiều nghiên cứu khác nhau báo cáo rằng PE không chỉ liên quan đến cấp tínhquả thậnnhưng có thể dẫn đến bệnh thận nghiêm trọng và suy thận sau sinh cũng như sau này trong cuộc sống [10–12]. Tổn thương thận trong quá trình PE ở người được Spargo et al lần đầu tiên mô tả. như nội mô cầu thận, nghĩa là các cầu thận mở rộng với sự phá hủy của lòng mao mạch [13], được cho là do sự phì đại của các tế bào nội mô hoặc trung bì [14]. Sự hiện diện của xơ cứng cầu thận, tắc các mao mạch do dày lên của thành mao mạch cầu thận, thâm nhiễm các đại thực bào và giảm mật độ của lớp màng nội mô đã được mô tả ở những phụ nữ bị tiền sản giật [15–18]. Những thay đổi cấu trúc này cũng như sự co mạch và giảm thể tích huyết tương góp phần làm giảm khả năng lọc của thận [15,19]. Tổn thương cấu trúc thận xuất hiện trong thai kỳ tiền sản giật dường như có thể hồi phục được [19], trong khi tác động chức năng xuất hiện sau khi sinh và mối liên quan của PE và nguy cơ phát triển bệnh thận giai đoạn cuối (ESRD) sau này đã được báo cáo [ 20,21]. Có bằng chứng cho thấy tăng huyết áp mãn tính không được phát hiện trước khi xảy ra thai kỳ tiền sản góp phần làm tăng nguy cơ mắc bệnh thận sau sinh ở người [12,20,21].

Tổn thương thận trong thời kỳ mang thai PE đã được đặc trưng ở nhiều mô hình động vật. Các cơ chế liên quan đến thay đổi cầu thận bao gồm sự mất cân bằng tạo mạch [9,22–24]. Trong mô hình chuột giảm áp lực tưới máu tử cung (RUPP) cho PE, tình trạng suy thận có thể được phục hồi bằng cách điều trị bằng yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF) [25,26]. Hơn nữa, một cơ chế quan trọng trong tổn thương thận tiền sản có vẻ là tăng stress oxy hóa và viêm, dẫn đến tăng sản xuất oxy phản ứng (ROS) và hoạt hóa bổ thể [27–30]. Mặc dù những cơ chế này gây ra những thay đổi nghiêm trọng ở thận trong thời kỳ mang thai, nhưng vẫn còn thiếu kiến ​​thức về việc liệu suy thận có xuất hiện sau khi sinh ở mô hình động vật PE hay không. Chỉ có một số nghiên cứu trên động vật tập trung vào tổn thương thận sau sinh. Trong mô hình RUPP, huyết áp động mạch trung bình và albumin niệu được phục hồi tám tuần sau khi sinh. Không có tổn thương cầu thận hoặc ống thận nhưng mức lọc cầu thận bị giảm [31].

Mục tiêu của nghiên cứu này là đánh giá tác động sau sinh của PE đối vớithậntrong mô hình chuột chuyển gen renin-angiotensinogen ở người. Trong mô hình này, những con chuột cái được chuyển gen cho angiotensinogen ở người có huyết áp bình thường trước và sau khi mang thai. Chúng phát triển chứng tăng huyết áp trong ba tháng cuối của thai kỳ chỉ khi giao phối với chuột đực có gen renin của con người, như đã mô tả trước đây [32,33]. Các con đập đã phát triển một kiểu hình tiền sản trong thời kỳ mang thai [34], bao gồm cả việc tái tạo tim sau khi sinh [35]. Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng tổn thương thận dài hạn, được mô tả cho PE ở người và mô hình động vật gặm nhấm, là do huyết áp cao (khủng hoảng tăng huyết áp) trong thời kỳ thai nghén và phục hồi sau sinh.

Lợi ích của chiết xuất Cistanche: điều trị các bệnh về thận

2. Kết quả

2.1. Kiểu hình preeclamptic trong mô hình chuột chuyển gen

Chuột cái chuyển gen mang thai biểu hiện các triệu chứng của PE (Hình 1A), trong khi chuột WT không phát triển các triệu chứng này. HA trong thai kỳ tiền sản giật tăng từ ngày 12 đến ngày 14, sau đó ổn định và giảm xuống trị số huyết áp trong vòng hai ngày sau khi mang thai. Huyết áp vẫn không tăng cho đến khi kết thúc nghiên cứu và 4 tuần sau khi sinh (Hình 1B). Chuột WT được đo vào các ngày duy nhất (d 0, 9, 15, 19, 28, 35, 42, 49) để cho phép so sánh. Huyết áp động mạch trung bình là 1 0 5,3 ± 4,6 mmHg ở chuột WT trong thời kỳ mang thai và ở mức 148,4 ± 2 0. 7 mmHg ở chuột có thai bị tiền sản giật tương ứng. Nó tăng đáng kể trong thai kỳ tiền sản giật (kiểu hoang dã, WTd19 so với PEd19; p <0,0001) và="" sau="" sinh="" bình="" thường="" (ped19="" so="" với="" ped49,="" p=""><0,0001; hình="" 1c).="" chuột="" pe="" cho="" thấy="" albumin="" niệu="" cao="" hơn="" đáng="" kể="" so="" với="" creatinin="" niệu="" trong="" thời="" kỳ="" mang="" thai="" so="" với="" wt="" (wtd21="" so="" với="" ped21,="" p="0." 0024),="" và="" bài="" tiết="" albumin="" được="" phục="" hồi="" sau="" khi="" sinh="" ở="" chuột="" pe="" (ped21="" so="" với="" ped49,="" p="" {35="" }}.="" 0004;="" hình="" 1d).="" mặc="" dù="" albumin="" niệu="" cao="" hơn="" ở="" chuột="" wt="" sau="" sinh="" so="" với="" chuột="" pe="" nhưng="" không="" có="" sự="" khác="" biệt="" đáng="" kể="" (wtd49="" so="" với="" ped49,="" p="0." 4917).="" có="" ảnh="" hưởng="" tổng="" thể="" của="" pe="" lên="" mức="" albumin="" tại="" các="" thời="" điểm="" khác="" nhau="" (2w-anova:="" f="" (1;="" 29)="16." 15;="" p="0.">

Như đã chỉ ra trong một trong những nghiên cứu trước đây của chúng tôi, những con chuột tiền sản cho thấy nhau thai và trọng lượng cơ thể thai nhi giảm so với những con chuột đối chứng [35], theo đó trọng lượng cơ thể mẹ giảm vào cuối thai kỳ. Nghĩaquả thậntrọng lượng giữa chuột chuyển gen và chuột WT tương tự nhau trong thời gian (WTd {{0}}. 8 g ± 0. {{1 0}} 6; PEd 21=0. 7 g ± 0. 07) và sau khi mang thai (WTd 50=0. 9 g ± 0,05; PEd 50=1. 0 g ± 0,06) (Hình S1A).Quả thậncân nặng chuẩn hóa theo trọng lượng cơ thể mẹ cho thấy giá trị cao hơn đáng kể ở nhóm PE so với WT (WTd21 so với PEd21 p=0. 002; WTd50 so với PEd50 p=0. 001; Hình S1B) chủ yếu do trọng lượng cơ thể mẹ của nhóm PE thấp hơn, chủ yếu là do số lượng và trọng lượng của chuột con và bánh nhau trong nhóm PE giảm [35].

2.2. Biểu hiện thay đổi của các gen đánh dấu chấn thương thận

Các gen đặc hiệu cho tổn thương ống thận, hình thành mạch, xơ hóa, viêm mô, hoặc stress oxy hóa được lựa chọn dựa trên giả thuyết và được phân tích trong và sau khi mang thai PE và WT. Hầu hết các thay đổi đáng kể trong biểu hiện gen thận được phát hiện trong thai kỳ tiền sản giật (Hình 2A). Biểu hiện của các dấu hiệu tổn thương ống thận cụ thể,quả thậnphân tử tổn thương 1 (Kim -1, Hình 2B), và lipocalin liên kết với gelatinase của bạch cầu trung tính 2 (Ngal, Hình 2C) đã tăng lên đáng kể 2. 5- lần tăng lên trong thời kỳ mang thai chuột bị ĐMP. Nephrin (Nphs -1), là một phần của màng ngăn podocyte, được biểu hiện tương tự ở chuột PE và WT trong thời kỳ mang thai, cho thấy không có tổn thương ở màng khe. Hầu hết các gen liên quan đến sự hình thành mạch và co mạch đều được biểu hiện tương tự trong thời kỳ thai nghén tiền sản ởquả thận. Không phải endothelin -1 (Et -1), yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF-a), cũng như các thụ thể của chúng (Flt -1, Flk -1, muối -1 ) cho thấy biểu hiện gen bị thay đổi đáng kể trong thời kỳ mang thai. Để xác định các thay đổi sợi trongquả thậnmô, gen đánh dấu chẳng hạn như collagen loại 1 và 4 (Col -1, Col 4 -1), yếu tố tăng trưởng mô liên kết (GF) và yếu tố tăng trưởng chuyển đổi-beta 1 (Tgf -1) đã được đo lường. Col -1 và Ctgf đã bị thay đổi đáng kể trong thai kỳ tiền sản giật (Hình 2A, D). Các gen đánh dấu cụ thể CD68 (cụm 68 phân tử biệt hóa) và Mcp -1 (protein hóa trị đơn bào 1) được sử dụng để mô tả các quá trình viêm. Biểu hiện CD68 tăng lên đáng kể trong thai kỳ tiền sản giật so với WT. Các chất đánh dấu cho tình trạng stress oxy hóa ở thận bao gồm các thành phần của NADPH oxidase 2 (Ncf -1, Ncf -4, Cyb-a, Cyb-b) và NADPH oxidase 4 dành riêng cho thận (Nox -4 ). Biểu thức Ncf -4 hơi nhưng tăng đáng kể trong PE (Hình 2E).

Khi tập trung vào biểu hiện gen sau khi mang thai tiền sản, chỉ có một số khác biệt đáng kể (Hình 2A). Dấu hiệu viêm CD68 đã tăng lên đáng kể sau khi mang thai tiền sản giật so với sau sinh WT. Các gen liên quan đến tổn thương nephron, hình thành mạch và co mạch, và xơ hóa cũng được biểu hiện tương tự ở chuột PE và WT sau khi mang thai. Dấu hiệu ứng suất oxy hóa Ncf -4 tiếp tục cho thấy biểu hiện cao hơn một chút ở chuột PE so với WT sau sinh (Hình 2E). Ngoài ra, biểu hiện Nox -4 đã tăng lên đáng kể ở chuột PE sau sinh (Hình 2F). Giá trị biểu hiện gen và p được trình bày trong Bảng S2.

lợi ích của bột chiết xuất cistanche: chống viêm

2.3. Suy thận cấu trúc nhẹ

Sự to lên của các cầu thận và tăng sự dày lên của thành mao mạch, dấu hiệu nhận biết của nội mô cầu thận, cùng với albumin niệu ở người và chuột thí nghiệm thai nghén [13,17,27]. Đầu tiên, chúng tôi đánh giá tổn thương cầu thận trong thời kỳ mang thai chuột cống và xác định các đặc điểm của cầu thận như kích thước và mật độ. Kích thước cầu thận không thay đổi trong thai kỳ PE trong phân tích mô học (Hình 3A). Thông qua mô tả đặc điểm của vùng mao mạch cầu thận, có thể phát hiện dày thành mao mạch và xơ cứng cầu thận. Chuột PE có phần trăm diện tích dương tính axit-Schiff (PAS) định kỳ cao hơn (WTd21 so với PEd21, p=0. 0293; Hình 3B). Hệ thống ống thận rất quan trọng đối với hoạt động sinh lýquả thận. Đánh giá tổn thương ống thận ở chuột bị ĐMP được thực hiện bằng cách phân tích điểm tổn thương ống thận, tình trạng viêm và xơ hóa quanh mạch. Hệ thống ống không bị thay đổi đáng kể trong thời kỳ mang thai PE, tuy nhiên có xu hướng tổn thương ống thận nhẹ trong những lần mang thai này. Quan sát thấy sự giãn nở của ống thận và sự mỏng đi của viền bàn chải (Hình 3C). Tình trạng viêm được định lượng bằng số lượng đại thực bào trong tủy thận. So sánh cho thấy không có sự khác biệt đáng kể trong thời kỳ mang thai, mặc dù chuột PE cho thấy số lượng tế bào CD 68- dương tính cao hơn nhưng không đáng kể, nằm trong khoảng từ 10 đến 50 trên mỗi trường xem (Hình 3D). Diện tích xơ tương đối được tính toán để định lượng xơ hóa quanh mạch, mặc dù các mạch ở chuột PE và WT xuất hiện tương tự trong thời kỳ mang thai (Hình 3E).

Ngoài ra, một mô tả đặc điểm của tổn thương cầu thận và ống thận đã được thực hiện trongthậnsau khi mang thai của chuột PE và WT. Diện tích búi cầu thận tăng lên ở cả hai nhóm sau sinh; tuy nhiên, so với WT, các cầu thận to ra đáng kể (WTd50 so với PEd50, p=0. 0406; Hình 3A). Diện tích búi cầu thận không bị thay đổi sau khi sinh ở chuột PE so với chuột WT (Hình 3B). Xu hướng tổn thương ống thận hiện diện trongthậntừ chuột PE sau khi mang thai, mặc dù không khác biệt đáng kể (Hình 3C). Tương tự như những quan sát trong thời kỳ mang thai,thậncủa chuột PE sau sinh hiển thị nhiều tế bào CD68 cộng hơn trên mỗi trường xem, nhưng sự so sánh không có ý nghĩa (Hình 3D). Không có sự khác biệt đáng kể sau khi sinh về xơ hóa quanh mạch giữa chuột PE và WT (Hình 3E)

2.4. Chức năng thận bị thay đổi một chút trong thai kỳ PE

Các thông số nước tiểu được đo để xác định đặc điểmquả thậnlọc và bài tiết. Khi bị tổn thương thận, sự tái hấp thu có thể bị ảnh hưởng. Trong một so sánh thông minh theo nhóm, creatinin niệu giảm đáng kể trong và sau khi mang thai tiền sản giật so với WT và ở nhóm PE vào ngày 19 so với d49 (mỗi so sánh với p <0. 0001;="" hình="">

Tương tự, natri ở PE d19 thấp hơn đáng kể so với PE d49 (p=0. 0263; Hình 4C). Trong số các chất điện giải được đo, chỉ có nồng độ kali và clorua bị ảnh hưởng đáng kể trong thời kỳ thai nghén tiền sản (K cộng với p=0. 0063; Cl− p=0. 0034; Hình 4D, E). Ngoài ra, kali thấp hơn đáng kể ở WT d19 so với WT d49 (K cộng với p=0. 0042; Hình 4D). Đáng chú ý, chuột PE có bài tiết nước tiểu cao hơn so với WT mang thai hoặc sau khi sinh.

3. Thảo luận

Chúng tôi đã điều tra tác động của PE đối vớiquả thậntrong mô hình chuột chuyển gen và phân tích xem các thay đổi ở thận có biểu hiện sau sinh hay không. Trong quá trình PE, biểu hiện gen ở thận bị thay đổi. Có những thay đổi cầu thận nhẹ với mật độ cầu thận tăng và những thay đổi ở ống thận. Tăng bài tiết albumin có thể được phát hiện. Biểu hiện bị thay đổi có trong các gen đánh dấu liên quan đến tổn thương nephron (Kim -1, Ngal), xơ hóa (Col -1, Ctgf), viêm (CD68) và stress oxy hóa (Ncf -4) . Biểu hiện của dấu hiệu sinh học chấn thương ống thận Kim -1 [36] tăng cao trong PE và trở lại bình thường sau khi mang thai, cho thấyquả thậnthiệt hại chỉ trong PE. Chỉ phát hiện thấy biểu hiện Ngal tăng nhẹ 2. {1}} lần, theo đó những người khác báo cáo mức tăng nhanh 1000- khi bị thương ống thận [37]. Chúng tôi đã quan sát thấy những thay đổi nhẹ trong biểu hiện của các gen đánh dấu stress oxy hóa (Ncf -4, Nox -4) trong thận trong suốt quá trình PE. Những quan sát này cùng với các nghiên cứu chỉ ra ROS tăng cao và chức năng ti thể bị suy giảm trong thai kỳ ởquả thậncủa các mô hình PE khác [28,30]. Người ta đã chỉ ra rằng các tự kháng thể tự chủ (AT 1- AA), xuất hiện trong huyết tương của phụ nữ bị tiền sản giật, có liên quan đến việc sản xuất ROS trong các mô khác nhau bao gồmquả thận[28,38]. Trong mô hình chuột của chúng tôi về PE, hầu hết các thay đổi ở thận đều phục hồi sau khi sinh. Chỉ các gen đánh dấu stress oxy hóa (Ncf -4, Nox -4), mở rộng cầu thận nhẹ và giảm bài tiết creatinin vẫn tồn tại sau PE. Trọng lượng cơ thể mẹ giảm trong giai đoạn PE do trọng lượng nhau thai và thai thấp hơn nhưng không khác sau khi sinh như trước [34,35]. Do đó, chúng tôi giả định rằng sự thay đổi trong bài tiết creatinin không phải do sự khác biệt về khối lượng cơ mà do suy giảm chức năng thận.

Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng chỉ riêng thai kỳ tiền sản mạc không đủ để dẫn đến tổn thương thận và ảnh hưởng đến tổn thương tim mạch khác, như đã quan sát thấy ở người. Hầu hết các nghiên cứu trên các mô hình động vật PE khác cho thấy những thay đổi về thận trong thời kỳ mang thai, chẳng hạn như mở rộng cầu thận, xơ hóa, xơ cứng cầu thận và protein niệu [39–42]. Tuy nhiên, chỉ có một số tập trung vào tác động sau khi mang thai của PE đối vớiquả thận. Trong mô hình RUPP, HA và albumin niệu tái phát tám tuần sau khi sinh và không có tổn thương cầu thận hoặc ống thận nào được phát hiện [31]. Ở chuột nhạy cảm với muối Dahl, các tổn thương ở cầu thận và ống thận xuất hiện ở chuột cái 8 tuần sau khi sinh, được phát hiện khi lượng protein nephrin và KIM -1 trong nước tiểu tăng lên [43]. Cùng với những phát hiện của chúng tôi, những kết quả này hỗ trợ bằng chứng rằng huyết áp cao kéo dài có thể là nguyên nhân gây tổn thương thận ở người sau khi mang thai tiền sản giật. Ngoài ra, sự phụ thuộc áp suất củaquả thậnthiệt hại đã được nhấn mạnh bởi Mori et al. Họ đã sử dụng mô hình tăng huyết áp do angiotensin II gây ra, trong đó thận được bảo vệ khỏi hầu hết các tổn thương thận (xơ hóa, tổn thương ống) khi áp lực động mạch thận cao được điều chỉnh bằng kiểm soát servo mãn tính [44]. Những phát hiện này hỗ trợ chúng tôi hiểu rằng tổn thương thận liên quan đến thai nghén trong PE phụ thuộc vào khả năng hồi phục của tăng huyết áp liên quan đến thai nghén trong PE.

Giả thuyết ban đầu của chúng tôi được thúc đẩy bởi các quan sát ở phụ nữ có tiền sử PE, những người cho thấy nguy cơ phát triển ESRD hoặc CKD cao hơn sau này trong cuộc đời [12,45]. Đa số phụ nữ không cóquả thậnkiểm tra chức năng trước PE [45]. Kết quả của chúng tôi cho thấy bằng chứng rằng chỉ PE có thể không đủ để gây ra bệnh thận. Dai et al. nêu rõ rằng những phụ nữ bị tăng huyết áp đã có trước đó do PE chồng chất có nguy cơ phát triển ESRD cao nhất so với những phụ nữ bị tăng huyết áp từ trước hoặc PE [20]. Kattah và cộng sự. cho thấy rằng những phụ nữ có tiền sử PE có nguy cơ phát triển ESRD cao hơn bốn lần và 20% trong số họ cho thấy giảmquả thậnchức năng trước khi mang thai [21]. Những nghiên cứu này nhấn mạnh vai trò tiềm ẩn của tăng huyết áp chưa được phát hiện trước đó dẫn đến PE chồng chất góp phần vào bệnh thận. Hơn nữa, chúng tôi cho rằng sự phát triển của bệnh thận sau thai kỳ tiền sản giật là do nhiều bệnh lý ảnh hưởng đến chức năng thận. Theo một giả thuyết có nhiều tác động, hai hoặc nhiều sự kiện sẽ góp phần vào sự phát triển của bệnh thận và PE có thể chỉ là một yếu tố góp phần.

Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy những hạn chế liên quan đến quy trình thử nghiệm vì chúng tôi bao gồm hai thời điểm, vào cuối thai kỳ và sau khi sinh. Các cơ quan được thu hoạch và phân tích tương ứng từ cả hai thời điểm, nhưng đo HA theo chiều dọc chỉ có thể được thực hiện đối với những người đã hy sinh sau khi sinh. Cả hai nhóm đều trình bày các giá trị HA có thể so sánh được trong thời kỳ mang thai. Ngoài ra, HA theo chiều dọc chỉ được đo đôi khi trong WT để đáp ứng nguyên tắc 3R trong các thí nghiệm trên động vật. Các nghiên cứu trước đây của nhóm chúng tôi cho thấy chuột WT không bị tăng huyết áp khi mang thai [34].

Kết luận, mô hình chuột biến đổi gen cho PE cho thấy suy thận nhẹ trong thời kỳ mang thai, hầu như chỉ giải quyết được sau khi sinh. Tổn thương thận nhẹ với sự gia tăng của các dấu ấn sinh học do stress oxy hóa và sự thay đổi độ lọc cầu thận xuất hiện trong thời kỳ mang thai chuột cống. Những kết quả này chỉ ra thiệt hại nhẹ củaquả thậnsau thai kỳ tiền sản giật và do đó không thể loại trừ hoàn toàn PE như một yếu tố nguy cơ của bệnh thận sau sinh. Chúng tôi nghi ngờ rằng các sự kiện bổ sung ảnh hưởng đến chức năng thận sẽ là cần thiết đối với tổn thương thận và suy thận sau đó.

cistanche tubolosa testosterone: Cistanche có thể điều trị bệnh thận và cải thiện chức năng tình dục

4. Vật liệu và Phương pháp

4.1. Nghiên cứu động vật

Chuột SD cái chuyển gen cho gen angiotensinogen ở người (Tg (hAgt) L1623) được giao phối với chuột SD đực chuyển gen cho gen renin của người (Tg (hRen) L10J) như đã mô tả trước đây [32,35]. Chuột cái được kiểm soát hàng ngày để cắm âm đạo, được cho là vào ngày đầu tiên của thai kỳ (d1). Những con chuột cái chuyển gen mang thai do lai giữa các động vật chuyển gen đã phát triển một kiểu hình preeclamptic điển hình (PE) với tăng huyết áp và albumin niệu và được sử dụng cho quy trình thí nghiệm [32]. Những con cái và con đực kiểu hoang dã SD (WT) được lai với nhau và phục vụ như một đối chứng. Tất cả chuột được nuôi trong điều kiện tiêu chuẩn với nhiệt độ được kiểm soát là 22 ± 2 ◦C, độ ẩm 55 ± 15 phần trăm và chu kỳ sáng-tối 12 giờ 12 phút. Các con vật có thức ăn (Sniff V 1324-300) và nước uống trong suốt thí nghiệm. Chuột bị hy sinh ở hai thời điểm khác nhau, cuối thai kỳ (ngày 21, n=9 WT; 8PE) và bốn tuần sau khi mang thai (ngày 50, n=9 WT; 11PE) bằng cách chặt đầu dưới lớp isoflurane sâu gây mê, thời điểm sau tương ứng với khoảng. hai năm ở người [46]. Các cơ quan và máu được thu thập và lưu trữ ở -80 ◦C cho đến khi được sử dụng tiếp. Nang thận, đệm mỡ và tuyến thượng thận đã được tách ra khỏiquả thận, được cắt đôi theo chiều ngang để phân tích thêm. Nghiên cứu đã được sự chấp thuận của chính quyền địa phương (Văn phòng Y tế và Xã hội, Berlin).

4.2. Đo huyết áp

Thiết bị đo từ xa DSI (HD-T11) được cấy vào cơ thể gây mê qua đường hô hấp với isoflurane (isoflurane-air composite 2–2,5%) 14 ngày trước khi giao phối như đã mô tả trước đây [34]. Do đó, huyết áp (HA) có thể được đo trước, trong và sau khi mang thai trong khoảng thời gian 5- phút một cách thường xuyên. Các con vật được nuôi đơn lẻ trong quá trình ghi BP.

4.3. Đo nước tiểu

Nước tiểu 24- giờ được thu thập khi mang thai vào ngày 19 và sau khi mang thai vào ngày 49 như đã mô tả trước đây [47]. Các mẫu nước tiểu được phân tích bằng máy phân tích hóa học lâm sàng AU480 (Beckman Coulter) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Để đo nồng độ albumin, một ELISA cạnh tranh, trực tiếp (CellTrend, Luckenwalde, Đức) đã được thực hiện. Lượng clorua, kali và natri được phát hiện bằng cách sử dụng các điện cực chọn lọc ion. Creatinine được chuyển đổi bằng enzym và định lượng bằng phương pháp so màu (Số OSR61204, Beckman Coulter, Krefeld, Đức). Tất cả các thông số nước tiểu được bình thường hóa về mức độ bài niệu hoặc nồng độ creatinin.

4.4. Phân tích biểu hiện gen

Phân tích biểu hiện gen đã được thực hiện như đã mô tả trước đây [48]. Ngắn gọn, bị đóng băngquả thậnmô được đồng nhất với Thuốc thử ly giải Qiazol (Qiagen) và hạt gốm Precellys (Công nghệ sinh học Peqlab, Erlangen, Đức). RNA tổng số được phân lập bằng cách sử dụng RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Đức) theo quy trình của nhà sản xuất. Bộ phiên mã ngược cDNA dung lượng cao (Hệ thống sinh học ứng dụng, Waltham, Hoa Kỳ) mRNA thành DNA bổ sung (cDNA). Để định lượng biểu hiện gen tương đối, phản ứng chuỗi polymerase định lượng phiên mã ngược (RT-qPCR) đã được thực hiện bằng cách sử dụng Hệ thống PCR thời gian thực QuantStudio 3 (Hệ thống sinh học ứng dụng) với TaqManFast Universal PCR Master Mix hoặc Fast SYBR Green Master Mix ( cả Thermo FisherScientifific, Waltham, MA, USA). Mồi và đầu dò được thiết kế bằng Primer Express3. 0 và được tổng hợp bởi BioTez, Đức (trình tự mồi: Bảng S1). Mồi được pha loãng đến nồng độ cuối cùng là 10 mM, đầu dò đến 5 mM. Biểu hiện mRNA đích được phân tích định lượng bằng phương pháp đường cong chuẩn. Tất cả các giá trị biểu hiện được chuẩn hóa cho gen quản lý 18S. Các gen được chọn theo cách dựa trên giả thuyết trước khi phân tích.

4.5. Hóa mô miễn dịch

Quả thậncác lát được cố định trong 4% formalin (24 giờ), khử nước và nhúng vào parafin. Cácthậnđược cắt ngang thành các lát dày 2- và 4- µm bằng một microtome quay điện tử (Thermo Fisher).Quả thậncác lát cắt được nhuộm và quét đồng thời bằng cách sử dụng Máy quét Trang chiếu Toàn cảnh MIDI với vật kính plan-chromate 2 0 × / 0. 8 × (Zeiss) để đảm bảo khả năng so sánh như đã mô tả trước đây [35]. Quá trình nhuộm Himalayan – eosin (HE) được thực hiện theo quy trình của nhà sản xuất (T 865, Carl Roth, Karlsruhe, Đức). Chu vi của vùng búi mao mạch cầu thận trong phạm vi ba trường vỏ não nhìn trên mỗi thận (n=5) được đo để xác định nội mô cầu thận. Phân tích bán định lượng tổn thương ống thận được thực hiện bằng cách sử dụng thang điểm tổn thương đã mô tả trước đây [49]. Mười lăm hình ảnh tủy (độ phóng đại 200 ×) đã được ghi theo cách làm mù liên quan đến tỷ lệ phần trăm giãn nở ống thận, thoái hóa, hoại tử, hình thành bó bột và mất đường viền bàn chải. Phương pháp nhuộm định kỳ axit-Schiff (PAS) được sử dụng để phát hiện các thành phần giàu carbohydrate (glycogen) trong cầu thận. Các phiến kính được ủ trong axit định kỳ 0,5% (Sigma Aldrich, 5 phút, Steinheim, Đức), rửa sạch và thuốc thử của Schiff (Merck, Darmstadt, Đức) được bôi (tối 10- phút). Các trang trình bày được đối chiếu với Himalayan (Carl Roth, 5 phút). Diện tích dương tính với PAS của 8–10 khu vực cầu thận trên mỗi thận (n=5) được đo bằng cách sử dụng trình cắm ngưỡng màu của ImageJ [50]. Phương pháp nhuộm Masson– Goldner trichrome (MGT) được sử dụng để đo độ xơ hóa quanh mạch. Các phiến kính (2 µm) được nhuộm theo quy trình của nhà sản xuất (3459, Carl Roth). Chu vi của mô liên kết, mạch và lòng mạch của ba động mạch có khung tốt trên mỗi quả thận được đo. Diện tích sợi xơ được tính toán liên quan đến tổng diện tích tàu. Các đại thực bào trong mô thận được nhuộm bằng kháng thể chống chuột CD68 (clone ED1; số MCD341R, Bio-Rad, con. 1: 100) [51,52]. Kháng thể chống chuột lừa liên hợp Cy 3- thứ cấp (số 715-165-151, Jackson ImmunoResearch) đã được sử dụng (con. 1: 300) và các hạt nhân được nhuộm bằng môi trường gắn Vectashield với DAPI (40, 6- diamide -2- phenyl-Lindal; Số H -1200; Phòng thí nghiệm Vector, Burlingame, Hoa Kỳ). Các tế bào dương tính của CD 68- được đếm theo cách thủ công trong mười trường xem (độ phóng đại 200 ×) trên mỗi quả thận (n=5) khi một hạt nhân được định vị thành tín hiệu Cy3. Phân tích mô học được thực hiện một cách mù quáng bằng cách sử dụng phần mềm xem trường hợp (3D Hitech Ltd., Budapest, Hungary) và Image J (Viện Y tế Quốc gia, Bethesda, MD, Hoa Kỳ).

4.6. Số liệu thống kê

Phân tích thống kê được thực hiện bằng phần mềm GraphPad Prism 6 và 7. Các giá trị được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (SD). Kết quả được hiển thị dưới dạng n=8 - 11per nhóm điều trị và thời điểm. Các giá trị ngoại lai được xác định bằng phương pháp ROUT sử dụng tỷ lệ phát hiện sai tối đa là 1 phần trăm, các giá trị được kiểm tra cho phân phối Gaussian và so sánh các nhóm được thực hiện bằng ANOVA hai chiều thông thường (phân tích phương sai) với kiểm tra so sánh nhiều lần của Sidak. Giá trị f được biểu thị với các bậc tự do tương ứng. Giá trị p được biểu thị là * Nhỏ hơn hoặc bằng 0. {{1 0}} 5, ** Nhỏ hơn hoặc bằng 0. 01, *** Nhỏ hơn hoặc bằng 0,001, **** Nhỏ hơn hoặc bằng 0,0001.

Cistanche sa mạc: cải thiện chức năng thận