Thận Pericyte Yếu tố gây ra tình trạng thiếu oxy điều hòa quá trình tạo Erythropoiesis nhưng không phải xơ hóa thận
Mar 13, 2022
Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Szu-Yu Pan1,2,3 et al
Các chất ức chế men miền prolyl hydroxylase (PHD) có hiệu quả trong việc điều trịbệnh thận mãn tính(CKD) - thiếu máu liên quan bằng cách ổn định yếu tố gây thiếu oxy (HIF), do đó làm tăng erythropoietin và do đó tạo hồng cầu. Tuy nhiên, mối quan tâm về sự tiến triển của CKD cần được giải quyết trong các thử nghiệm lâm sàng. Mặc dù các nghiên cứu tiền lâm sàng cho thấy tác dụng chống viêm trongquả thậnmô hình bệnh tật, ảnh hưởng của chất ức chế PHD đối vớiquả thậnxơ hóakhông nhất quán có lẽ vì tác động của HIF là loại ô và phụ thuộc vào ngữ cảnh. Thị trưởngquả thậnTế bào sản xuất erythropoietin là các tế bào pericyte sản xuất erythropoietin thông qua phiên mã gen phụ thuộc HIF -2. Mối quan tâm về tác động của HIF trong pericytes đối vớiquả thậnxơ hóaphát sinh từ thực tế rằng pericytes là các tế bào tiền thân chính của nguyên bào sợi trong bệnh thận mạn tính. Vì các tế bào biểu hiện Gli1 đáp ứng các tiêu chí về hình thái và giải phẫu đối với pericytes, chúng tôi đã tạo ra Gli1 cộng với sự ổn định hoặc loại bỏ HIF dành riêng cho tế bào để nghiên cứu tác động của HIF trong pericytes đối vớiquả thậnbệnh lý của chuột có hoặc không có tổn thương xơ do tắc nghẽn niệu quản một bên. So với các đối chứng cùng lứa, những con chuột có sự ổn định HIF đặc hiệu pericyte do protein von Hippel-Lindau hoặc loại bỏ PHD2 cho thấy tăng erythropoietin huyết thanh và đa hồng cầu hơn là sự khác biệt rõ ràng vềquả thậnxơ hóa. So với Gli1thêmpericytes được sắp xếp từ các đối chứng theo lứa tuổi, Gli1thêmpericyte được phân loại từ những con chuột loại trực tiếp PHD2 cho thấy biểu hiện gen erythropoietin tăng lên hơn là những thay đổi rõ ràng trong biểu hiện Col1a1 hoặc Acta2. Hơn nữa, loại bỏ HIF -1 a hoặc HIF -2 a cụ thể pericyte không ảnh hưởng đếnquả thậnxơ hóa. Do đó, nghiên cứu của chúng tôi ủng hộ việc không có tác động tiêu cực của các chất ức chế PHD đối vớiquả thậnxơ hóacủa chuột mặc dù HIF ổn định trong pericytes.
TỪ KHÓA: erythropoietin;xơ hóa; yếu tố gây thiếu oxy; pericyte
Tuyên bố dịch
Các chất ức chế men miền prolyl hydroxylase (PHD) có hiệu quả trong điều trị bệnh thiếu máu ởmãn tínhquả thậndịch bệnh(CKD) thông qua việc ổn định yếu tố gây thiếu oxy (HIF), do đó làm tăng erythropoietin (EPO) và tạo hồng cầu. Tế bào màng thận sản xuất EPO thông qua HIF -2 a trong sinh lý bình thường, nhưng chúng phân biệt với nguyên bào sợi tạo sẹo trong bệnh thận mạn. Không rõ liệu sự biểu hiện HIF ở màng thận có ảnh hưởng đến hay khôngthậnxơ hóa. Bằng các mô hình tiền lâm sàng về thao tác HIF và xơ hóa thận, chúng tôi cho thấy rằng thao tác HIF cụ thể của Gli1 cộng với pericyte ảnh hưởng đến sản xuất EPO và tạo hồng cầu nhưng khôngxơ hóa thận. Nghiên cứu của chúng tôi xác nhận việc không có tác dụng tiêu cực của thuốc ức chế PHD đối với xơ hóa thận.
Phương pháp điều trị chính cho bệnh thiếu máu ở bệnh nhânmãn tínhquả thậndịch bệnh(CKD) là chất kích thích tạo hồng cầu và chất bổ sung sắt. 1,2 Gần đây, chất ức chế men miền prolyl hydroxylase (PHD) nổi lên như một tác nhân điều trị đầy hứa hẹn cho bệnh thiếu máu liên quan đến CKD chủ yếu thông qua việc ổn định yếu tố gây thiếu oxy (HIF) và do đó tăng sản xuất erythropoietin (EPO). Việc áp dụng chất ức chế PHD hoặc chất ổn định HIF ở bệnh nhân CKD sắp xảy ra trong tương lai gần nếu những lo ngại liên quan đến khả năng hình thành mạch, phát triển khối u, chuyển hóa glucose bất thường và sự suy giảm nhanh chóng củaquả thậnchức năng sẽ được giải quyết trong các thử nghiệm lâm sàng.
HIF là bộ máy cảm nhận oxy tế bào quan trọng nhất được biết đến. 6,7 HIF chức năng bao gồm các tiểu đơn vị a và b. HIF-a là một tiểu đơn vị không bền oxy bị phân hủy nhanh chóng ở điều kiện không độc hại khi có mặt các đồng yếu tố. HIF-b không được điều chỉnh bởi lực căng oxy. Sự phân hủy của HIF-a diễn ra trước quá trình hydroxyl hóa proline và polyubiquiti hóa. Quá trình hydroxyl hóa proline được xúc tác bởi PHD với sự có mặt của oxy, sắt và 2- oxoglutarate làm đồng yếu tố. Quá trình polyubiquiti hóa sau đó được xúc tác bởi một ligase E3 ubiquitin bao gồm phức hợp protein von Hippel Lindau (pVHL) -Elongin BC-CUL2. Yêu cầu về sắt, PHD và pVHL đối với sự phân hủy HIF làm cho nó có thể ổn định HIF trong điều kiện không độc với sự ức chế hoặc giảm bất kỳ thành phần quan trọng nào trong số này.
Các pericytes thận được nhúng trong màng đáy vi mạch và tiếp xúc chặt chẽ với các tế bào nội mô để hỗ trợ vi mạch và điều chỉnh lưu lượng máu. }} phiên mã gen phụ thuộc a gây ra do thiếu máu hoặc thiếu oxy.14 Pericytes đã được chứng minh là nguồn chính của nguyên bào sợi tạo sẹo trong CKD, 8,10,11,15,16 một phát hiện được hỗ trợ bởi các báo cáo độc lập khác.17, 18 Mặc dù quá trình chuyển đổi sang nguyên bào sợi dẫn đến sự ức chế phiên mã Epo, sự biểu hiện quá mức của HIF -2 phục hồi một phần quá trình sản xuất EPO trong nguyên bào sợi cơ.14,17
Các nghiên cứu của chúng tôi đã chỉ ra rằngxơ hóa thậncó thể bị suy giảm do gián đoạn quá trình chuyển đổi pericyte-myofibroblast thông qua việc phong tỏa dược lý đối với yếu tố tăng trưởng biến đổi-b, 19 yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu, 20 yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu, con đường 21 hoặc WNT / b-catenin.22
Về mối quan tâm đối với sự suy giảm nhanh chóng củaquả thậnchức năng ở những bệnh nhân đang điều trị bằng thuốc ức chế PHD, người ta biết rất ít về ảnh hưởng của hoạt động HIF trong pericytes hoặc myofibroblasts trênxơ hóa thận.23 Ngược lại, ảnh hưởng của việc biểu hiện quá mức hoặc loại trực tiếp HIF đối vớixơ hóa thậnđã được nghiên cứu rộng rãi, hoặc không chọn lọc 24–27 hoặc chọn lọc trong các tế bào hình ống, 28,29 tế bào nội mô, 30 và tế bào vỏ.
Các nghiên cứu in vitro sử dụng nguyên bào sợi thận cô lập ở người33 và tế bào kẽ tủy thận của chuột34 cho thấy vai trò tiền nguyên bào của HIF -1 a. Tuy nhiên, Souma và cộng sự 17 đã báo cáo rằng việc loại bỏ đồng thời PHD1, PHD2 và PHD3 trong REPCs của những con chuột Tg (Epo-Cre) biểu hiện sự tái tổ hợp Cre dưới sự kiểm soát của promoter Epo không ảnh hưởng đếnxơ hóa thậntrong mô hình tắc nghẽn niệu quản một bên (UUO). Tuy nhiên, biểu hiện Epo ở thận thấp và kích thước nhóm REPC nhỏ ở trạng thái ổn định không thiếu oxy hoặc thiếu máu, 35 cho thấy rằng gen chuyển Epo-Cre chỉ xác định một phần nhỏ trong tổng số REPC. Gần đây, các tế bào biểu hiện Gli 1- thận được chứng minh là pericytes và biệt hóa thành nguyên bào sợi trênquả thận11,36 Sự cắt bỏ tế bào Gli1 cộng với sự cải thiện các tế bào do UUO gây rathậnxơ hóa.11 Ở đây, chúng tôi sử dụng chuột có tái tổ hợp Cre dưới sự kiểm soát của promoter / chất tăng cường Gli1 để nghiên cứu ảnh hưởng của sự ổn định hoặc loại bỏ HIF cụ thể pericyte đối vớirxơ hóa màng nhĩ.
cistanche là tốt choquả thận
PHƯƠNG PHÁP
Chuột
Gli1CreERT2 / cộng, Tg (UBC-CreERT2), VhlF/F,ROSA26fstdTomato / fstdCà chua, Hif1aF/Fvà Hif2aF/F chuột được mua từ Phòng thí nghiệm Jackson (Bar Harbour, ME). Egln1F/F chuột được cung cấp bởi Giáo sư Guo-Hua Fong (Trung tâm Y tế Đại học Connecticut, Farmington, CT). Tất cả các nghiên cứu được thực hiện theo một quy trình đã được phê duyệt bởi Ủy ban chăm sóc và sử dụng động vật của tổ chức, Đại học Y khoa Đại học Quốc gia Đài Loan (IACUC 20160499).
Tắc nghẽn niệu quản một bên
Quy trình đã được trình bày chi tiết trong một nghiên cứu trước đây.14 Tóm lại, ở chuột trưởng thành từ 7 đến 9 tuần tuổi được gây mê bằng ketamine / xylazine (ketamine 1 0 0 mg / kg, xylazine 10 mg / kg), trái niệu quản của chuột bị lộ ra ngoài và được khâu bằng chỉ nylon qua một vết rạch ở sườn trái. Ngày phẫu thuật UUO được xác định là ngày 0 của thí nghiệm.
Phân tích thống kê
Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bìnhthêmSD. Các phân tích thống kê được thực hiện bằng GraphPad Prism (Phần mềm GraphPad, San Diego, CA). Ý nghĩa thống kê được xác định bằng phép thử t Student hoặc phép thử Mann-Whitney U như thể hiện trong phần chú thích.
Phương pháp bổ sung
Các phương pháp đầy đủ bao gồm chuột, UUO, quản lý tamoxifen, phản ứng chuỗi polymerase định lượng, immunoblot, hóa mô miễn dịch, lai RNA tại chỗ, kính hiển vi, đo tế bào dòng và phân lập tế bào Gli1 plus ở thận nằm trong Phương pháp Bổ sung.
KẾT QUẢ
Tăng sản xuất EPO và tạo hồng cầu ở chuột có loại bỏ Gli1 cộng với PHD2 đặc hiệu pericyte
Để chứng minh rằng Gli1 cộng với pericyte tạo ra EPO trước khi chúng tôi bắt đầu nghiên cứu ảnh hưởng của thao tác HIF cụ thể đối với pericyte đối vớixơ hóa thận, chúng tôi đã tạo Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/Fchuột để kích hoạt PHD2 trong Gli1 cộng với pericytes có điều kiện (Hình 1a). So với bạn cùng lứa Egln1F/Fchuột, Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/Fchuột cho thấy mức EPO huyết thanh cao hơn (Hình 1b), trọng lượng lá lách nặng hơn (Hình 1c), nhiều TER hơn -119thêmDòng hồng cầu trong tế bào lách vào ngày thứ 14 sau khi dùng tamoxifen (Hình 1d), nhưng trọng lượng cơ thể thay đổi tương tự sau khi dùng tamoxifen (Hình S1A bổ sung). Hematocrit (Hct) cao hơn ở Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/Fchuột ở ngày thứ 21 (Hình 1e). Chúng tôi đã phân tích mRNA Epo ở thận và công thức máu ngoại vi 14 ngày sau khi dùng tamoxifen. So với bạn cùng lứa Egln1F/Fchuột, Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/Fchuột có biểu hiện Epo ở thận tăng (Hình 1f) và hồng cầu lưới ngoại vi (Hình 1g), trong khi số lượng bạch cầu ngoại vi và số lượng tiểu cầu không khác nhau (Hình S1B và C bổ sung). Để xác định các tế bào thận chịu trách nhiệm cho sự biểu hiện Epo, chúng tôi đã thực hiện lai tại chỗ của Epo trênquả thậncác phần từ Egln1F / F và Gli1CreERT2 /thêm; Egln1F/Fchuột (Hình bổ sung S2A – F). Các tế bào kẽ biểu hiện Epo tăng lên có thể được xác định chủ yếu ở đường nối vỏ tủy, và ở mức độ thấp hơn ở tủy trong và vỏ não ở Gli1CreERT2 /thêm; Egln1F/Fchuột. Những kết quả này cho thấy rằng Gli1 cộng với PHD2 đặc hiệu pericyte gây ra sản xuất EPO ở thận và tạo hồng cầu.
Để xác định xem PHD2 có điều chỉnh sản xuất EPO trong các loại tế bào và các cơ quan khác ngoài pericytes trongquả thận, chúng tôi đã tạo Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/Fchuột để gây ra loại trực tiếp PHD2 toàn cầu (Hình bổ sung S3A). Sau khi sử dụng tamoxifen, loại bỏ gen Egln1 trongquả thận, gan, lá lách, tim và phổi có thể được phát hiện (Hình S4 bổ sung). bên trongquả thận, sự biểu hiện của mRNA Egln1 giảm xuống còn 4 phần trăm, cho thấy hiệu quả loại bỏ PHD2 cao (Hình bổ sung S3B). Như trong Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/Fchuột, Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/Fchuột cho thấy sự gia tăng tiến bộ của Hct so với con cùng lứa là Egln1F/Fchuột (Hình S3C bổ sung). Đáng chú ý là Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/Fchuột cho thấy trọng lượng cơ thể giảm (Hình S3D bổ sung). Nồng độ EPO huyết thanh cao đáng kể, khoảng 130, 000 pg / ml, được tìm thấy trong Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F chuột, cao hơn nhiều so với kết quả đạt được khi cắt phlebotomy (ít hơn 5, 000 pg / ml) ở chuột kiểu hoang dã (Hình bổ sung S3E). Để xác định nguồn gốc của EPO huyết thanh, chúng tôi đã kiểm tra mức độ mRNA của Epo trong các cơ quan khác nhau từ Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F,và chuột đối chứng với lứa tuổi ở ngày thứ 15. Ở chuột đối chứng với lứa tuổi, mRNA của Epo hầu như không được phát hiện ở bất kỳ cơ quan nào. Trong 5 cơ quan chính (quả thận, gan, phổi, tim, lá lách) của Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F chuột, chỉquả thậncho thấy sự gia tăng đáng kể của mRNA Epo, ngụ ýquả thậnnhư một nguồn chính của EPO huyết thanh (Hình bổ sung S3F và G). Lai tại chỗ của mRNA Epo trênquả thậncác phần cho thấy các tế bào thận có biểu hiện Epo là các tế bào kẽ có hình thái pericyte trong Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/Fchuột (Hình S5 bổ sung). Do đó, những dữ liệu này khẳng định rằng Gli1 ở thận cộng với pericytes sản xuất EPO khi loại bỏ PHD2, do đó làm tăng tạo hồng cầu và Hct.
Gli1 cộng với pVHL đặc hiệu pericyte dẫn đến đa hồng cầu nhưng không có tác dụng trên xơ hóa thận
Phù hợp với các báo cáo trước đó, 11,36 tăng Gli1thêmpericytes được hiển thị ở chỗ nối vỏ não và tủy sau chấn thương UUO ở Gli1CreERT2 /thêm; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột phóng viên (Hình S6 bổ sung), cho thấy rằng Gli1 cộng với pericytes tăng sinh và đóng góp đáng kể vào nguyên bào sợi trongxơ hóa thận.Do đó, chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của sự ổn định hoặc loại trực tiếp HIF trong Gli1thêmpericytes trênxơ hóa thận.
Chúng tôi đã sử dụng chuột với Gli1thêmloại pericyte cụ thể của pVHL, không phải PHD2 vì có thể dư thừa trong 3 PHD khác nhau. Để điều tra ảnh hưởng lâu dài của việc ổn định HIF cụ thể pericyte đối vớithậnở chuột không có CKD, Gli1CreERT2 /thêm; VhlF/Fchuột và VhlF/FCác lứa đẻ được sử dụng tamoxifen lúc 6 tuần tuổi và sau đó được quan sát cho đến 30 tuần tuổi (Hình S7A bổ sung). Một cái chết bất ngờ trong Gli1CreERT2 /thêm; VhlF/Fchuột diễn ra ở 25 tuần tuổi (tỷ lệ tử vong 14,3 phần trăm), nhưng không có trường hợp tử vong nào ở VhlF/Fbạn cùng lứa. Điểm yếu và giảm trọng lượng cơ thể tăng lên được tìm thấy trong Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột sớm nhất là 16 tuần tuổi (Hình S7B bổ sung). Vì hốc hác và chết bất ngờ, một số con chuột đã chết trước 30 tuần tuổi. Giải phẫu bệnh cho thấy hồng cầu nặng lan tỏa trong lá lách và tắc nghẽn các tế bào hồng cầu ở gan, phổi vàquả thậnlúc 18 tuần tuổi (Hình S8 bổ sung). Ngoại trừ tắc nghẽn hồng cầu, không cóxơ hóađã được quan sát thấy trong các cơ quan chính bao gồmthận. Mức Hct và EPO huyết thanh tăng lên 87 cộng với -2. 6 phần trăm và 1604 cộng với -141 pg / ml ở 30 tuần tuổi (tức là 24 tuần sau tamoxifen) (Hình bổ sung S9A và B)
Bởi vì không thể nhận raxơ hóa thậnở những con chuột có Gli1 cộng với pVHL đặc hiệu pericyte, chúng tôi gây ra UUO ở chuột và đánh giá mức độ nghiêm trọng của xơ hóa thận 7 hoặc 14 ngày sau đó (Hình 2a). Đã xóa các alen Vhl trong Gli1CreERT2 / þ; VhlF/Fchuột đã được phát hiện trongquả thậnDNA bộ gen bằng phản ứng chuỗi polymerase, chỉ ra loại pVHL trong pericytes (Hình bổ sung S10). Hct được tăng lên trong Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột ngay cả sau khi phẫu thuật UUO (Hình 2b). Đáng chú ý, sự biểu hiện của mRNA EPO đã được tăng lên ở cả hai bên và UUOthậncủa Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột (Hình 2c), cho thấy sự ổn định HIF có thể kích hoạt phiên mã Epo ở cả pericytes và myofibroblasts. Tuy nhiên, không có sự khác biệt trongxơ hóa thậngiữa Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fvà bạn cùng lứa VhlF/F chuột có thể được phát hiện, được đo bằng vùng nhuộm đỏ picrosirius (Hình 2d và 3a và b) và biểu hiện của mRNA Col1a1 (Hình 2e) trongquả thận. Bên cạnh đó, mức mRNA và protein của actin cơ trơn không khác nhau ởthận(Hình 2f và g và Hình bổ sung S11). Để xác nhận rằng nguyên bào sợi vẫn giữ được khả năng biểu hiện Epo sau khi loại trực tiếp pVHL, chúng tôi đã thực hiện lai tại chỗ của Epo và Acta2 trênquả thận(Hình bổ sung S12 và S13). Biểu hiện Acta2 của thận tăng mạnh và có thể so sánh được sau chấn thương UUO ở cả Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fvà VhlF/Fchuột. Có thể quan sát thấy nhiều tế bào biểu hiện Epo ở kẽ hơn trong Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột hơn trong VhlF/F chuột, bất kể sự hiện diện của chấn thương UUO. Ngoài ra, các ô có biểu hiện đồng thời của Acta2 và Epo có thể được xác định trong UUOquả thậntừ Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột nhưng không phải VhlF/Fchuột. Trên thực tế, chúng tôi khó có thể xác định được bất kỳ ô biểu hiện Epo nào trong UUOquả thậntừ VhlF/Fchuột. Những kết quả này cho thấy rằng Gli1 cộng với pVHL hạn chế pericyte thúc đẩy biểu hiện Epo nhưng không phải sự biệt hóa nguyên bào sợi hoặc sản xuất collagen ngay cả sau chấn thương UUO.
Bởi vì chấn thương UUO dẫn đến tổn thương các tế bào ống gần và tuyển dụng các đại thực bào, 37 mức mRNA của Havcr1 (mã hóaquả thậnphân tử tổn thương -1) (Hình 4a) và Adgre1 (mã hóa mô-đun yếu tố tăng trưởng nội mô chứa thụ thể hormone giống mucin giống như 1, còn được gọi là F4 / 80) (Hình 4b) tăng lên trong UUOthận, nhưng không có sự khác biệt nào có thể được phát hiện giữa Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fvà bạn cùng lứa VhlF/F chuột. Mức mRNA của Vegfa, Hmox1, Egln1 và Egln3 (mã hóa yếu tố tăng trưởng tế bào nội mô mạch máu-A, heme oxygenase -1, PHD2 và PHD3, tương ứng) trongthậnkhông bị thay đổi (Hình 4c-f), có thể phản ánh rằng những bản sao này không được tạo ra bởi Gli1 cộng với pericyte chiếm ưu thế hoặc không bị thay đổi sau khi loại trực tiếp VHL hạn chế Gli1 cộng với pericyte. Chúng tôi đã đánh giá tổn thương mô kẽ ống dẫn trứng trong định kỳ nhuộm axit-Schiffquả thậnvà không có sự khác biệt nào được phát hiện giữa Gli 1-CreERT2 / cộng; VhlF/F,và bạn cùng lứa VhlF/Fchuột (Hình 4g và 5a và b). Bởi vì tamoxifen được báo cáo là làm giảmxơ hóa, 38,39 chúng tôi đã kéo dài thời gian rửa trôi giữa lần dùng tamoxifen cuối cùng và phẫu thuật UUO từ 2 tuần lên 4 tuần (Hình bổ sung S14A). Một lần nữa, không có sự khác biệt nào được phát hiện giữa Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/F và bạn cùng lứa VhlF/F chuột (Hình bổ sung S14B – E). Những phát hiện này chỉ ra rằng Gli1 cộng với pVHL đặc hiệu pericyte dẫn đến sản xuất EPO và đa hồng cầu nhưng không ảnh hưởng đếnthậnxơ hóa.
cistanche là tốt choquả thận
Gli1 cộng với PHD2 đặc hiệu pericyte làm tăng sản xuất EPO nhưng không sản xuất collagen hoặc biệt hóa nguyên bào sợi.
Để xác nhận tác động của sự ổn định HIF trong Gli1 cộng với pericyte ở cấp độ tế bào, chúng tôi đã sắp xếp các ô tdTomato plus từthậncủa Gli1CreERT2 / cộng; ROSA26fstdTomato / fstdTomatovà Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột sau chấn thương UUO (Hình bổ sung S15 và S16). Dưới sự kiểm tra bằng kính hiển vi, các tế bào đã được phân loại phát ra huỳnh quang màu đỏ cam khi bị kích thích (Hình bổ sung S17A – C). So với những người từ Gli1CreERT2 / cộng; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột, mức mRNA Egln1 trong tdTomato cộng với các tế bào được sắp xếp theo bên cạnh và UUOthậncủa Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột 7 ngày sau chấn thương UUO lần lượt giảm xuống còn 46 phần trăm và 33 phần trăm (Hình bổ sung S17D và E).
Chúng tôi đã phân tích mức mRNA của Epo, Col1a1, Col3a1 và Acta2 trong tdTomato cộng với Gli1 cộng với pericytes được sắp xếp từ Gli1CreERT2 / cộng; ROSA26fstdTomato / fstdTomatovà Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột. Phù hợp với kết quả thu được từ những con chuột bị loại bỏ pVHL đặc hiệu với pericyte Gli1, loại bỏ PHD2 ở Gli1 cộng với pericyte dẫn đến tăng biểu hiện Epo, nhưng không ảnh hưởng đến sự biểu hiện của Col1a1, Col3a1 và Acta2 ở cấp độ tế bào (Hình 6) , xác nhận tác dụng trung tính của sự ổn định HIF đối với các đặc tính profibrotic của pericytes / myofibroblasts.
Loại trực tiếp HIF đặc hiệu pericyte Gli1þ không ảnh hưởng đến xơ hóa thận
Bởi vì những thí nghiệm này đã xác nhận tác động trung tính của sự ổn định HIF đối với các đặc tính của profibrotic của pericytes / myofibroblasts, chúng tôi đã tạo ra Gli1CreERT2 / plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F chuột để nghiên cứu ảnh hưởng của HIF knockout trong pericytes / myofibroblasts trênxơ hóa thận(Hình 7a). Xóa Hif1a và Hif2a trongquả thậncó thể được phát hiện trongquả thậnDNA bộ gen sau khi sử dụng tamoxifen (Hình bổ sung S18). So với đối chứng theo lứa tuổi, Gli1CreERT2 / cộng; Hif1aF/F; Hif2aF/F chuột có sự thay đổi trọng lượng cơ thể và mức Hct tương tự 7 ngày sau khi UUO (Hình 7b và c). Về mặtxơ hóa thận, không có sự khác biệt nào có thể được phát hiện trong khu vực nhuộm đỏ picrosirius, mức mRNA của Col1a1 và Acta2 trongquả thận(Hình 7d – f). Mức mRNA của Havcr1 và Adgre1 cũng không khác nhau (Hình 7g và h). Chúng tôi đã thay đổi liều lượng và thời gian rửa trôi của tamoxifen (Hình bổ sung S19A và S20A), và kết quả về sự lắng đọng collagen và biểu hiện gen là tương tự (Hình bổ sung S19B – E, S20B – E). Chúng tôi đã lặp lại các thử nghiệm trong Gli1CreERT2 / cộng; Hif1aF/F(Hình 8a – c) và Gli 1- CreERT2 / plus; Hif2aF/F(Hình 8d-f) chuột và không chứng minh được sự khác biệt về UUO gây raxơ hóa thậnkhi so sánh với đối chứng lứa đẻ.
THẢO LUẬN
Các phát hiện chính của nghiên cứu này bao gồm: (i) Gli1 ở thận cộng với sự ổn định HIF đặc hiệu của pericyte dẫn đến sản xuất EPO và tạo hồng cầu nhưng không ảnh hưởng đến bệnh lý thận có hoặc không có tổn thương UUO; và (ii) Gli1 ở thận cộng với HIF đặc hiệu pericyte -1 a và HIF -2, loại trực tiếp không ảnh hưởngxơ hóa thậnmột trong hai.
Trước đây chúng tôi đã báo cáo rằng Foxd1 ở thận cộng với pericytes có nguồn gốc từ tiền thân là REPC và được điều chỉnh bởi HIF -2 a. 14 Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng các tế bào Gli1 plus ở thận cũng là REPC. Mặc dù không có bằng chứng trực tiếp nào giải thích mối quan hệ giữa FOXD1 và GLI1 trong tế bào màng ngoài tim, các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng cả tế bào Foxd1 cộng với tế bào tiền thân ở thận và tế bào Gli1 cộng với tế bào đều là pericytes và có thể biệt hóa thành nguyên bào sợi trên vết thương. dữ liệu cho thấy loại PHD2 hoặc pVHL cụ thể trong Gli1 cộng với pericytes dẫn đến tăng sản xuất EPO ở thận, tạo hồng cầu và đa hồng cầu, phù hợp với báo cáo gần đây của Greenwald và cộng sự.40 Ngoài ra, so với sự giảm rõ rệt của Epo biểu hiện trong thận UUO của các đồng loại hoang dã, biểu hiện Epo ở thận UUO của chuột có loại pVHL cụ thể Gli 1- có thể so sánh với mức được hiển thị trong bên đối chứngquả thận, xác nhận sự ổn định HIF có thể khắc phục cơ chế ức chế Epo trong nguyên bào sợi thận.quả thậnnguyên bào sợi ở chuột bị loại bỏ PHD2. Tương ứng với những phát hiện của chúng tôi, một nghiên cứu rất gần đây41 đã báo cáo rằng các tế bào Gli1 plus ở thận là một quần thể con của thụ thể yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu-b cộng với REPCs và duy trì khả năng sản xuất EPO trong UUOthận.
Các thử nghiệm lâm sàng đã chứng minh hiệu quả của các chất ức chế PHD trong điều trị thiếu máu liên quan đến CKD. 3–5,42–45 Quan trọng là, các phân tích gộp các thử nghiệm pha III của roxadustat đã chứng minh kết quả tim mạch không thua kém hoặc thậm chí tốt hơn.46 Tuy nhiên, không có chính thức cho đến nay báo cáo về tác dụng của thuốc ức chế PHD đối với sự tiến triển của bệnh thận mạn tính. Thực nghiệm, vai trò của tình trạng thiếu oxy và HIF trongxơ hóa thậnđang gây tranh cãi. 47,48 Ở những con chuột bị chấn thương thận cấp tính (AKI) do chấn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ, Kapitsinou và cộng sự đã chứng minh rằng sự ức chế PHD trước khi AKI cải thiệnxơ hóa, trong khi sự ức chế ở giai đoạn đầu hồi phục của AKI thì không. Hơn nữa, Uchida và cộng sự đã chứng minh rằng chất ức chế PHD có thể cải thiệnxơ hóa thậnkết hợp với giảm cytokine tiền viêm và phục hồi mật độ mao mạch trong thận của mô hình CKD chuột gây ra bởi 5/6 cắt thận phụ, mặc dù không có ảnh hưởng đến protein niệu và mức creatinine huyết thanh. Ngược lại, một báo cáo gần đây cho thấy chất ức chế PHD góp phần gây ra bệnh đa hồng cầu và làm giảm viêm thận mô kẽ tubulointer, nhưng nó không có tác dụng đối với xơ hóa thận trong một mô hình viêm thận ống tủy mãn tính do adenine gây ra.25 Tác dụng chống viêm của chất ức chế PHD cũng đã được chứng minh. trong thận của người bệnh tiểu đường tuýp 2 béo phì. Mặc dù những nghiên cứu này không báo cáo tác dụng của các chất ức chế PHD đối với hoạt hóa nguyên bào sợi thận, nhưng việc không có tác dụng tiêu cực đối với xơ hóa thận có thể hỗ trợ tác động có thể bỏ qua của biểu hiện HIF đối với sản xuất collagen ở màng thận. Đánh giá tác động của HIF đối với thận là rất phức tạp.49 Thứ nhất, các loại tế bào khác nhau có thể biểu hiện các đồng dạng HIF khác nhau.50 Thứ hai, ngay cả cùng một đồng dạng HIF cũng có thể quy định các gen mục tiêu khác nhau trong các loại tế bào khác nhau.51 Thứ ba, sự biểu hiện và điều hòa HIF trong tình trạng sinh lý có thể khác với thận bị bệnh.50 Hơn nữa, sự phân hủy nhanh chóng của HIF trong điều kiện không độc hại làm tăng khó khăn trong việc phân tích không chính xác nồng độ protein HIF trong mô.52 Do đó, các kết quả không nhất quán trước đây về tác động lên xơ hóa thận có lẽ là bởi vì tác động của HIF là loại ô và phụ thuộc vào ngữ cảnh. Ví dụ: bằng chứng đã chỉ ra rằng chất ức chế PHD trước khi tái tưới máu do thiếu máu cục bộ do AKI gây ra sẽ cải thiện quá trình xơ hóa sau AKI thông qua cơ chế phụ thuộc HIF {16}} nội mô, 24,30 trong khi HIF -1 là tình trạng viêm phụ thuộc , xơ hóa và loạn sản tế bào thận đã được tìm thấy trong Tg (Hoxb 7- Cre); VhlF/Fnhững con chuột bị loại pVHL trong ống góp và một tập hợp con của ống xa.xơ hóa thận,chúng tôi đã chứng minh rằng sản xuất EPO về cơ bản đã tăng lên đáng kể trong pericyte thận ở những con chuột có sự ổn định Gli1 cộng với sự ổn định HIF cụ thể của pericyte bằng loại pVHL hoặc PHD2 đặc hiệu cho tế bào, và đáng chú ý là biểu hiện Epo được duy trì trong nguyên bào sợi thận UUO. Tuy nhiên, chúng tôi không phát hiện ra rằng sự ổn định HIF cụ thể của pericyte ảnh hưởng đến quá trình chuyển đổi nguyên bào pericyte-myofibroblast, sản xuất collagen trong nguyên bào sợi hoặc do UUO gây ra.quả thậnxơ hóa. Hơn nữa, các biểu hiện của Havcr1 vàAdgre1 không bị ảnh hưởng ở thận UUO, ngụ ý rằng mức độ nghiêm trọng của tổn thương ống thận và viêm thận không bị ảnh hưởng ở chuột có ổn định HIF đặc hiệu pericyte. Bởi vì nguyên bào sợi là loại tế bào tạo sẹo trong quá trìnhxơ hóa thận, kết quả của chúng tôi có thể cung cấp bằng chứng thực nghiệm về việc không có tác dụng tiêu cực của việc ổn định HIF bởi các chất ức chế PHD đối với xơ hóa thận. Phù hợp với nghiên cứu của chúng tôi, Souma và cộng sự 17 cũng báo cáo rằngxơ hóa thậnkhông bị ảnh hưởng bởi việc loại bỏ đồng thời PHD1, PHD2 và PHD3 trong REPC của chuột Tg (Epo-Cre).
cistanche là tốt chothận
Trong nghiên cứu của chúng tôi, Gli1CreERT2 / plus; VhlF/F chuột được đặc trưng bởi cả tăng sản xuất EPO nội sinh và đa hồng cầu. Mức độ EPO trong huyết thanh tăng của bệnh đa hồng cầu có ảnh hưởng đếnxơ hóa thậnđang gây tranh cãi. Có nhiều nghiên cứu sâu rộng về ảnh hưởng của EPO tái tổ hợp ngoại sinh đối với AKI hoặc CKD.53–57 Trong các nghiên cứu trước đó, EPO tái tổ hợp liều cao được báo cáo là gây ra đa hồng cầu, tăng huyết áp và suy giảm chức năng thận. chất tương tự EPO ngoại sinh liều thấp đó, thấp đến mức không gây tạo hồng cầu, dẫn đến tác dụng tái bảo vệ ở phần còn lạiquả thậnvà mô hình chuột db / db.59,60 Ngoài ra, phẫu thuật cắt bỏ tĩnh mạch để bình thường hóa bệnh đa hồng cầu đã được chứng minh là cải thiện tình trạng tăng albumin niệu ở chuột db / db được sử dụng chất tương tự EPO ngoại sinh liều cao.60 Trong một đoàn hệ lâm sàng bệnh nhân mắc bệnh đa hồng cầu, a bệnh đặc trưng với bệnh đa hồng cầu mà không tăng EPO nội sinh, 61 tần số CKD (được định nghĩa là mức lọc cầu thận ước tính<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2 / cộng; VhlF/F những con chuột bị tổn thương UUO, dữ liệu của chúng tôi cho thấy biểu hiện Epo ở thận tăng lên và bệnh đa hồng cầu, nhưng không có sự thay đổi trongxơ hóa thận, viêm và tổn thương ống thận. Do đó, tác dụng tổng thể của việc ổn định HIF đặc hiệu ở vùng quanh thận đối với tổn thương thận, viêm và xơ hóa là trung tính, hỗ trợ sự an toàn của các chất ức chế PHD trong tiến triển CKD. Tế bào màng thận có thể được định nghĩa là một quần thể nguyên bào sợi không đồng nhất tiếp xúc chặt chẽ với các tế bào nội mô trongquả thận.8–13 Do sự phát triển phức tạp, chức năng sinh học không đồng nhất 64,65, 8,11–13,23 và sự khác biệt điều hòa PHD và HIF, 17,41,66 dấu hiệu di truyền tối ưu cho pericytes thận vẫn chưa được xác định. Tế bào Gli1 plus đáp ứng các tiêu chí về hình thái và giải phẫu đối với pericytes. Sau chấn thương UUO, các tế bào Gli1 plus ở thận tăng sinh và biệt hóa thành nguyên bào sợi. Tế bào Gli1 plus ở thận chiếm khoảng 45% tổng số nguyên bào sợi thận và sự cắt bỏ tế bào Gli1 plus ở thận giảmxơ hóa thận.11,36 Chúng tôi đã biết rằng tế bào Gli1 plus ở thận là một quần thể con của thụ thể yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc tiểu cầu – b cộng với tế bào11,36,41 và tác động của Gli1 cộng với thao tác di truyền hạn chế pericyte có thể bị che bởi các nguyên bào sợi khác. Tuy nhiên, các thí nghiệm của chúng tôi trên các tế bào Gli1 cộng với thận được phân loại đã chứng minh rằng sự ổn định HIF có thể làm tăng Epo nhưng không làm tăng biểu hiện collagen hoặc Acta2 ở cấp độ tế bào. Chúng tôi không thể loại trừ khả năng ổn định HIF được điều khiển bởi các điểm đánh dấu pericyte khác có thể có kết quả khác. Những con chuột có tái tổ hợp Cre được thúc đẩy bởi promoter Col1a1, Foxd1, hoặc Pdgfrb không được sử dụng để xác định pericytes trong nghiên cứu này vì sự tái tổ hợp Cre của chúng cũng hoạt động trong tế bào pod cầu thận, 8 tế bào trung bì cầu thận, 67 tế bào cơ trơn mạch máu, 68 và có lẽ một số ống tế bào biểu mô.69 loại pVHL trong tế bào vỏ và tế bào hình ống được báo cáo là gây ra các bệnh lý thận như viêm cầu thận hình lưỡi liềm31 và nang thận.70 Ngoài ra, chúng tôi sử dụng Cre cảm ứng để loại bỏ PHD2 hoặc pVHL sau 5 tuần tuổi vì Foxd1 được biểu hiện trong phôi giai đoạn và loại trực tiếp của pVHL hoặc PHD2 trong Foxd 1- biểu hiện pericytes đã được chứng minh là làm giảm sự hình thành thận.71,72
Trong các ô Gli1 cộng với thận đã được sắp xếp có loại bỏ PHD2 bằng cách sử dụng Gli1CreERT2 / cộng; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột, chúng tôi đã quan sát thấy sự gia tăng đáng kể của biểu hiện mRNA Epo tế bào nhưng không phải là Col1a1 hoặc Acta2. Sự gia tăng gấp 50- lần của mRNA Epo đã xác nhận sự biểu hiện quá mức của HIF trong thận Gli1 cộng với pericytes được sắp xếp với loại bỏ PHD2. Ngoài ra, loại pVHL hoặc PHD2 in vivo ở Gli1 cộng với pericytes dẫn đến tăng biểu hiện Epo ở thận và đa hồng cầu nhưng khôngxơ hóa thận. Chúng tôi tin rằng nếu các phân tử hạ lưu HIF trong pericyte bị ảnh hưởngxơ hóa thận, nó sẽ được quan sát trong nghiên cứu của chúng tôi. Ảnh hưởng của việc khử hoạt tính PHD2 đối với sự ổn định HIF có thể bị che lấp bởi sự dư thừa sinh học của PHD1 và PHD3. Tuy nhiên, chúng tôi đã quan sát thấy những tác động nhất quán đối với sản xuất EPO và collagen trong Gli1 cộng với pericytes với loại bỏ pVHL hoặc PHD2, hỗ trợ thêm cho sự ổn định HIF trong pericytes thúc đẩy quá trình tạo hồng cầu nhưng khôngxơ hóa. Chúng tôi không thể tạo Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/F; ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột qua chữ thập của Gli1CreERT2 / þ; VhlF/Fvà ROSA26fstdTomato / fstdTomatochuột vì cả Vhl và ROSA26 đều nằm trên nhiễm sắc thể số 6.
Chúng tôi đã sử dụng UUO như mộtquả thậnmô hình tổn thương để điều tra ảnh hưởng của thao tác cụ thể pericyte của HIF đối vớixơ hóa thậnbởi vì trong mô hình UUO, hầu hết các tế bào Gli1 cộng với pericytes được biệt hóa thành nguyên bào sợi và cắt bỏ tế bào Gli1 cộng với quá trình xơ hóa thận. những người khác.14,17,41 Tuy nhiên, UUO có những hạn chế riêng với tư cách là một mô hình CKD và những phát hiện của chúng tôi trong nghiên cứu này có thể không được khái quát hóa cho các mô hình CKD khác. Các nghiên cứu trong tương lai được bảo đảm để kiểm tra tác động của thao tác HIF cụ thể pericyte trong các mô hình CKD khác nhau.
Kết luận, chúng tôi đã chứng minh rằng sự ổn định HIF đặc hiệu của Gli1 cộng với pericytes làm tăng EPO, tạo hồng cầu, nhưng không ảnh hưởngxơ hóatrong các mô hình có hoặc không có chấn thương UUO. Ở cấp độ tế bào, sự ổn định HIF cụ thể của Gli1 cộng với pericyte làm tăng biểu hiện Epo, nhưng không phải là biểu hiện của Col1a1, Col3a1 và Acta2. Loại trực tiếp HIF cụ thể pericyte không ảnh hưởngxơ hóa thận, một trong hai. Những kết quả này cung cấp bằng chứng thực nghiệm về việc không có tác dụng tiêu cực của thuốc ức chế PHD đối với xơ hóa thận và tiến triển CKD.
Cistanche để cải thiệnquả thậnhàm số
TIẾT LỘ
Tất cả các tác giả tuyên bố không có lợi ích cạnh tranh.
SỰ NHÌN NHẬN
SYP được hỗ trợ bởi Bộ Khoa học và Công nghệ (cấp 106-2314- B -418-006, 107-2314- B -418-001 và 108-2314- B -418-004) và Bệnh viện Far Eastern Memorial (cấp 2017- C -037 và 2020- C - 037). SLL được hỗ trợ bởi Bộ Khoa học và Công nghệ (cấp 108-2314- B -002-078- MY3 và 109-2314- B -002-260), Viện Nghiên cứu Y tế Quốc gia (cấp EX 108-10633 SI), Bệnh viện Đại học Quốc gia Đài Loan (NTUH; cấp 108- T16 và 109- T16), NTUH và Đại học Y khoa NTU (cấp NSCCMOH -131-43), Bà Hsiu-Chin LeeQuả thậnTổ chức Nghiên cứu và Tổ chức Y tế Đài Loan.
Chúng tôi cảm ơn Giáo sư Guo-Hua Fong (Trung tâm Y tế Đại học Connecticut) về Egln1F/Fchuột; Tiến sĩ Yi-Ting Tsai (Đại học Y khoa NTU) để kiểm tra bệnh lý của Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fvà VhlF/Fchuột; và Khoa Nghiên cứu Y học của NTUH, Cơ sở cốt lõi Hình ảnh và Phân loại Tế bào của Phòng thí nghiệm Lõi Thứ nhất, Cơ sở Lõi Mô hình Chuột Chuyển gen và Phòng thí nghiệm Lõi Chuột Gen của Trường Đại học Y khoa NTU để được hỗ trợ thiết bị và hỗ trợ kỹ thuật.
SỰ ĐÓNG GÓP CỦA TÁC GIẢ
SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC và WCC đã thực hiện các thí nghiệm và phân tích dữ liệu. SYP, YLC, TH, YMC và TSC đã tham gia thiết kế thử nghiệm và phân tích dữ liệu. SLL thiết kế và chỉ đạo dự án. SYP và SLL đã viết bản thảo.
TÀI LIỆU BỔ SUNG
Tệp bổ sung (PDF)
Phương pháp bổ sung.
Hình S1. Trọng lượng cơ thể, số lượng bạch cầu ngoại vi và số lượng tiểu cầu không thay đổi ở những con chuột bị loại bỏ PHD2 đặc hiệu pericyte.
Hình S2. Hình ảnh đại diện của mRNA Epo được phát hiện bằng cách lai RNA tại chỗ trongquả thậncủa Egln1F / F và Gli1CreERT2 / þ; Egln1F/F chuột. Hình S3. Loại trực tiếp PHD2 toàn cầu thúc đẩy sản xuất EPO và
tạo hồng cầu.
Hình S4. Phân tích PCR của DNA bộ gen được chiết xuất từquả thận, gan, lá lách, tim và phổi ở Tg (UBC-CreERT2); Egln1F / F và chuột đối chứng lứa tuổi.
Hình S5. Hình ảnh đại diện của mRNA Epo được phát hiện bằng cách lai RNA tại chỗ trongquả thậncủa chuột Egln1F / F.
Hình S6. Hình ảnh đại diện của Gli1þ pericytes trong CLK và UUOthậnsau chấn thương UUO.
Hình S7. Ảnh hưởng lâu dài của việc ổn định HIF cụ thể pericyte trong
Chuột Gli1CreERT2 / þ; VhlF / F.
Hình S8. Báo cáo bệnh lý của Gli1CreERT2 / plus; Chuột VhlF / F.
Hình S9. Tăng hematocrit và nồng độ EPO huyết thanh trong Gli1CreERT2 / cộng; VhlF/Fchuột.
Hình S10. Phân tích PCR củaquả thậnDNA bộ gen sau khi cảm ứng tamoxifen.
Hình S11. Hình ảnh gel đầy đủ để hấp thụ miễn dịch a-SMA và [1] tubulin.
Hình S12. Biểu hiện Epo của thận và Acta2 trong VhlF/F và Gli1CreERT2 / plus; VhlF/Fchuột 7 ngày sau chấn thương UUO.
Hình S13. Biểu hiện Epo của thận và Acta2 trong VhlF/F và Gli1CreERT2 / plus; VhlF/Fchuột 14 ngày sau khi bị UUO bị thương.
Hình S14.Xơ hóa thậntrong mô hình rửa trôi tamoxifen mở rộng.
Hình S15. Lược đồ thực nghiệm để gắn nhãn các tế bào Gli1þ thận với tdTomato.
Hình S16. Chiến lược phân loại tế bào tdTomatoþ thận.
Hình S17. Xác thực biểu hiện tdTomato và xóa Egln1 trong các tế bào tdTomatoþ ở thận đã được sắp xếp.
Hình S18. Phân tích PCR củaquả thậnDNA bộ gen từ Gli1CreERT2 / plus; Hif1aF/F; Hif2aF/Fvà bạn cùng lứa Hif1aF/F; Hif2aF/Fkiểm soát chuột sau khi dùng tamoxifen.
Hình S19. UUO gây raxơ hóa thậntrong Gli1CreERT2 / cộng; Hif1aF/F; Hif2aF/Fchuột sau khi dùng tamoxifen liều cao và thời gian rửa trôi ngắn.
Hình S20. UUO gây raxơ hóa thậntrong Gli1CreERT2 / cộng; Hif1aF/F; Hif2aF/F chuột sau một nửa liều và thời gian rửa trôi tamoxifen kéo dài.
Bảng S1. Mồi dùng để định kiểu gen.
Bảng S2. Mồi dùng cho PCR định lượng.
Macro bổ sung. Macro để định lượng tự động vi khuẩn nhuộm đỏquả thậnkhu vực của ImageJ.
Các sản phẩm của Cistanche rất tốt chothận
NGƯỜI GIỚI THIỆU
1. Bệnh thận: Cải thiện Kết quả Toàn cầu (KDIGO) Nhóm làm việc về Thiếu máu. Hướng dẫn thực hành lâm sàng KDIGO cho bệnh thiếu máu ởbệnh thận mãn tính.Thận Int Suppl. 2012; 2: 279–335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A, và cộng sự. Hiệp hộiquả thậnchức năng bị thiếu máu: Khảo sát Kiểm tra Sức khỏe và Dinh dưỡng Quốc gia Lần thứ Ba (1988-1994). Arch Intern Med. 2002; 162: 1401–1408.
3. Maxwell PH, Eckardt KU. Các chất ức chế HIF prolyl hydroxylase để điều trị bệnh thiếu máu thận và hơn thế nữa. Nat Rev Nephrol. 2016; 12: 157–168.
4. Chen N, Hao C, Peng X, et al. Roxadustat dùng để thiếu máu ở bệnh nhânquả thậnbệnh không được lọc máu. N Engl J Med. 2019; 381: 1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC, et al. Roxadustat điều trị thiếu máu ở bệnh nhân phải lọc máu lâu dài. N Engl J Med. 2019; 381: 1011–1022.
6. Schodel J, Ratcliffe PJ. Cơ chế báo hiệu tình trạng thiếu oxy: những tác động mới đối với thận. Nat Rev Nephrol. 2019; 15: 641–659.
7. Pan SY, Tưởng WC, Chen YM. Hành trình từ erythropoietin đến giải Nobel 2019: tập trung vào các yếu tố gây thiếu oxy trongquả thận. J Formos Med PGS. Năm 2021; 120: 60–67.
8. Lin SL, Kisseleva T, Brenner DA, et al. Pericytes và nguyên bào sợi quanh mạch là nguồn chính của các tế bào sản xuất collagen trong tắc nghẽnxơ hóacủa thận. Là J Pathol. 2008; 173: 1617–1627.
9. Pan SY, Chang YT, Lin SL. Tế bào vi mạch ở thận khỏe mạnh và thận bị bệnh. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014; 7: 39–48.
10. Humphreys BD, Lin SL, Kobayashi A, et al. Lần theo số phận cho thấy nguồn gốc pericyte và không phải biểu mô của nguyên bào sợi trongxơ thận. Là J Pathol. 2010; 176: 85–97.
11. Kramann R, Schneider RK, DiRocco DP, et al. Các progenitors Gli1þ quanh mạch là những nhân tố chính góp phần vào cơ quan gây ra chấn thươngxơ hóa. Tế bào gốc Tế bào. 2015; 16: 51–66.
12. Schrimpf C, Xin C, Campanholle G, và cộng sự. Pericyte TIMP3 và ADAMTS1 điều chỉnh độ ổn định mạch máu sauquả thậnvết thương. J Am Soc Nephrol. 2012; 23: 868 - 883.
13. Lemos DR, Marsh G, Huang A, et al. Duy trì tính toàn vẹn của mạch máu bởi pericytes là điều cần thiết để bình thườngquả thậnhàm số. Am J Physiol Renal Physiol. 2016; 311: F1230 – F1242.
14. Chang YT, Yang CC, Pan SY, et al. Sự ức chế DNA methyltransferase phục hồi quá trình sản xuất erythropoietin trong thận chó non. J Clin Đầu tư. 2016; 126: 721–731.
15. Chou YH, Pan SY, Shao YH, et al. Methyl hóa trong pericytes sau chấn thương cấp tính thúc đẩy mãn tínhquả thậndịch bệnh. J Clin Đầu tư. Năm 2020; 130: 4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT, et al. Những hiểu biết mới lạ về quá trình chuyển đổi nguyên bào pericytemyofibroblast và các mục tiêu điều trị trongxơ hóa thận. J Formos Med PGS. 2012; 111: 589–598.
17. Souma T, Nezu M, Nakano D, và cộng sự. Sự tổng hợp erythropoietin trong nguyên bào sợi thận được phục hồi bằng cách kích hoạt tín hiệu thiếu oxy. J Am Soc Nephrol. 2016; 27: 428–438.
18. Asada N, Takase M, Nakamura J, et al. Rối loạn chức năng của các nguyên bào sợi có nguồn gốc ngoài thượng thậnxơ hóa thậnvà thiếu máu thận ở chuột. J Clin Đầu tư. 2011; 121: 3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF, et al. Chuyển đổi yếu tố tăng trưởng beta -1 kích thích tín hiệu biểu mô profibrotic để kích hoạt quá trình chuyển đổi nguyên bào pericyte-myofibroblast trong tắc nghẽnxơ hóa thận.Là J Pathol. 2013; 182: 118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF, et al. Tín hiệu thụ thể yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu kích hoạt quá trình chuyển đổi nguyên bào sợi pericyte-myofibroblast trong tắc nghẽn và sau thiếu máu cục bộquả thậnxơ hóa. Thận Int. 2011; 80: 1170–1181.
21. Lin SL, Chang FC, Schrimpf C, và cộng sự. Nhắm mục tiêu trao đổi chéo nội mô-pericyte bằng cách ức chế sự suy giảm tín hiệu của thụ thể VEGFquả thậnsự hiếm gặp vi mạch vàxơ hóa. Là J Pathol. 2011; 178: 911–923.
22. Ren S, Johnson BG, Kida Y, và cộng sự. LRP -6 là cơ quan thụ cảm cốt lõi cho nhiều đường truyền tín hiệu nguyên bào sợi trong tế bào ngoại bì và nguyên bào sợi bị ức chế bởi DKK -1. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 1440–1445.
23. Kawakami T, Mimura I, Shoji K, et al. Thiếu oxy vàxơ hóaTrongbệnh thận mãn tínhe: giao nhau ở pericytes. Thận Int Suppl. 2014; 4: 107–112.
24. Kapitsinou PP, Jaffe J, Michael M, et al. Nhắm mục tiêu trước thiếu máu cục bộ của HIF prolyl hydroxyl hóa ức chếxơ hóakết hợp với dấu sắcquả thậnvết thương. Am J Physiol Renal Physiol. 2012; 302: F1172 – F1179.
25. Schley G, Klanke B, Kalucka J, và cộng sự. Các tế bào thực bào đơn nhân tổ chức tái bảo vệ qua trung gian ức chế men prolyl hydroxylase trong viêm thận mô kẽ tubulointer mãn tính. Thận Int. 2019; 96: 378–396.
26. Uchida L, Tanaka T, Saito H, và cộng sự. Ảnh hưởng của chất ức chế prolyl hydroxylase đối vớiquả thậnvà các biến chứng tim mạch ở mô hình chuột mắc bệnh thận mãn tính. Am J Physiol Renal Physiol. Năm 2020; 318: F388 – F401.
27. Sugahara M, Tanaka S, Tanaka T, et al. Chất ức chế miền prolyl hydroxylase bảo vệ chống lại các rối loạn chuyển hóa và liên quanquả thậnbệnh ở chuột đái tháo đường týp 2 béo phì. J Am Soc Nephrol. 2020; 31: 560–577.
28. Higgins DF, Kimura K, Bernhardt WM, et al. Tình trạng thiếu oxy thúc đẩy quá trình tạo sợi in vivo thông qua HIF -1 kích thích chuyển tiếp biểu mô sang trung mô. J Clin Đầu tư. 2007; 117: 3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J, et al. Sự bất hoạt có điều kiện của gen ức chế khối u von Hippel – Lindau của chuột dẫn đến các tổn thương tăng sản, viêm và xơ lan rộng ở thận. Gen ung thư. 2014; 34: 2631.
30. Kapitsinou PP, Sano H, Michael M, et al. HIF nội mô -2 làm trung gian bảo vệ và phục hồi khỏi chứng thiếu máu cục bộquả thậnvết thương. J Clin Đầu tư. 2014; 124: 2396–2409.
31. Ding M, Cui S, Li C, và cộng sự. Mất Vhlh chất ức chế khối u dẫn đến điều hòa Cxcr4 và viêm cầu thận tiến triển nhanh ở chuột. Nat Med. 2006; 12: 1081–1087.
32. Ding M, Coward RJ, Jeansson M, và cộng sự. Điều chỉnh yếu tố gây thiếu oxy 2- a là cần thiết cho sự toàn vẹn của hàng rào cầu thận. Am J Physiol Renal Physiol. 2013; 304: F120 – F126.
33. Norman JT, Clark IM, Garcia PL. Tình trạng thiếu oxy thúc đẩy quá trình tạo sợi trong nguyên bào sợi thận của con người. Thận Int. 2000; 58: 2351–2366.
34. Wang Z, Tang L, Zhu Q, et al. Yếu tố cảm ứng giảm oxy -1 alpha góp phần vào hoạt động tạo sợi của angiotensin II trong tế bào kẽ tủy thận.Quả thậnInt. 2011; 79: 300–310.
35. Koury MJ, Haase VH. Thiếu máu ởquả thậnbệnh: khai thác các phản ứng thiếu oxy để điều trị. Nat Rev Nephrol. 2015; 11: 394–410.
36. Fabian SL, Penchev RR, St-Jacques B, et al. Kích hoạt con đường Hedgehog-Gli trongxơ hóa thận.Là J Pathol. 2012; 180: 1441–1453.
37. Lin SL, Castano AP, Nowlin BT, et al. Tủy xương Ly6 Tế bào đơn nhân cao được tuyển chọn có chọn lọc để bị thươngthậnvà phân hóa thành các quần thể khác biệt về chức năng. J Immunol. 2009; 183: 6733–6743.
38. Delle H, Rocha JR, Cavaglieri RC, et al. Tác dụng chống xơ hóa của tamoxifen trên một mô hình bệnh thận tiến triển. J Am Soc Nephrol. 2012; 23: 37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema A, et al. Tamoxifen để kích ứng Crerecombination có thể gây nhầm lẫnxơ hóanghiên cứu trên chuột cái. Tín hiệu J Cell Commun. 2017; 11: 205–211.
40. Greenwald AC, Licht T, Kumar S, và cộng sự. VEGF mở rộng tạo hồng cầu thông qua cảm ứng erythropoietin không phụ thuộc vào tình trạng thiếu oxy trong các tế bào mô đệm quanh mạch không hình nón. J Exp Med. 2019; 216: 215–230.
41. Nhà môi giới KAE, Fuchs MAA, Schrankl J, et al. Các quần thể con khác nhau củaquả thậntế bào kẽ sản xuất erythropoietin và các yếu tố hỗ trợ quá trình oxy hóa mô để đáp ứng với tình trạng thiếu oxy trong cơ thể sống.Quả thậnInt. Năm 2020; 98: 918–931.
