Cái nhìn sâu sắc về cơ học về khả năng bảo vệ thần kinh và cải thiện trí nhớ do Diosmin gây ra ở mô hình chuột axit Quinolinic nội não thất: Sự phục hồi của chức năng ty thể và chất chống oxy hóa Phần 3

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Động vật thí nghiệm. Nghiên cứu .is đã được IAEC cho phép theo giao thức số. ASCB/IAEC/14/20/145. Chuột AlbinoWistar (cả giới tính, 200 g đến 250 g, từ 8 đến 9 tháng tuổi) được giữ trong các thùng hình khối bằng polypropylen có kích thước điển hình trong điều kiện nhiệt độ nhân tạo (23 ± 2 độ), chuỗi tối/sáng 12:12 giờ và độ ẩm (40 ± 10%) trong chuồng nuôi của cơ quan. Các loài gặm nhấm .e được cho ăn thực phẩm bổ dưỡng tiêu chuẩn (Nhà sản xuất Ashirwad, Punjab) và nước tinh khiết theo ý muốn.

Mối quan hệ giữa nam và nữ và trí nhớ luôn thu hút nhiều sự chú ý. Người ta biết rằng nội tiết tố nam đóng vai trò quan trọng trong việc phát triển thể chất, duy trì sức khỏe và thúc đẩy sự phát triển giới tính và chức năng tình dục. Ngoài ra, các nghiên cứu gần đây còn chỉ ra rằng nội tiết tố nam có liên quan mật thiết đến trí nhớ.

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng đàn ông thực hiện tốt hơn phụ nữ trong một số nhiệm vụ ghi nhớ nhất định. Ví dụ, đàn ông thường hoạt động tốt hơn phụ nữ về trí nhớ không gian, và lý do là do tác động của nội tiết tố nam lên vùng hải mã. Hồi hải mã là vùng não xử lý trí nhớ không gian. Nội tiết tố nam có thể phát huy chức năng của vùng hải mã, từ đó cải thiện khả năng ghi nhớ không gian của nam giới.

Tuy nhiên, nội tiết tố nữ cũng có tác động tích cực đến trí nhớ. Các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng nội tiết tố nữ có thể thúc đẩy sự biểu hiện của các gen liên quan đến trí nhớ trong não và làm tăng số lượng cũng như chức năng của các tế bào thần kinh ở vùng hải mã, từ đó cải thiện trí nhớ của phụ nữ. Ngoài ra, nội tiết tố nữ có thể làm giảm căng thẳng, ức chế sự chết của tế bào thần kinh, bảo vệ tế bào thần kinh não và cải thiện hơn nữa trí nhớ của phụ nữ.

Điều này cho thấy cả nội tiết tố nam và nội tiết tố nữ đều có tác dụng tích cực trong việc cải thiện trí nhớ. Đàn ông và phụ nữ có biểu hiện trí nhớ khác nhau, mỗi người đều có ưu điểm và nhược điểm, nhưng điều đó không có nghĩa là đàn ông có trí nhớ tốt hơn phụ nữ hay phụ nữ có trí nhớ tốt hơn nam giới. Vì vậy, chúng ta không nên lấy giới tính làm thước đo trí nhớ. Mọi người nên phát huy hết lợi thế của mình và không ngừng cải thiện trí nhớ.

Cuối cùng, dù là nam hay nữ, chúng ta nên chú ý đến sức khỏe thể chất, tinh thần của mình và lựa chọn phương pháp phù hợp để cải thiện trí nhớ. Ví dụ, không ngừng học hỏi những điều mới, phát triển thói quen sinh hoạt đều đặn và duy trì sự ổn định về cảm xúc có thể có tác động tích cực đến việc cải thiện trí nhớ. Chúng ta hãy cùng nhau không ngừng khám phá và rèn luyện các phương pháp cải thiện trí nhớ và tạo dựng một tương lai tốt đẹp hơn cho chính mình. Có thể thấy rằng chúng ta cần phải cải thiện trí nhớ của mình. Cistanche có thể cải thiện trí nhớ đáng kể vì Cistanche là một loại thuốc cổ truyền Trung Quốc có nhiều tác dụng độc đáo, một trong số đó là cải thiện trí nhớ. Hiệu quả của Cistanche đến từ các thành phần hoạt chất khác nhau mà nó chứa, bao gồm axit tannic, polysacarit, glycoside flavonoid, v.v. Những thành phần này có thể tăng cường sức khỏe não bộ theo nhiều cách.

Bấm biết 10 cách cải thiện trí nhớ

Tất cả các thủ tục trên động vật đều được thực hiện độc quyền theo hướng dẫn của CCPSEA, GOI, New Delhi. .e Những người chăm sóc và xử lý động vật không được biết về các phác đồ điều trị khác nhau được tạo điều kiện cho các nhóm động vật. Các thử nghiệm điều tra trên động vật đã được thực hiện, sau ít nhất một hai tuần làm quen.

Tất cả các cuộc điều tra sử dụng động vật đều được thực hiện trong khoảng từ 0900- đến 1600-giờ mỗi ngày.2.2. Thuốc và Hóa chất. Diosmin (DSM: 520-27-4), axit quinolinic (QA: 89-00-9) và chất phân tích chuẩn được mua từ Merck (Ấn Độ).

Natri dihydrogen photphat (NaH2PO4), natri hydroxit (NaOH), kali photphat dibasic (K2HPO4), nitrobluetetrazolium (NBT),phenazine methosulphate (5-methylphenazinium methylsulphate), axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA), albumin bò (BSA), {{ 5}[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]axit ethanesulfonic (HEPES), 1,2-bis[{{11}[bis(carboxymethyl) amino]ethoxy]ethane (EGTA), riboflavin, natri xyanua (NaCN), natriumazid (NaN3), tetrasodium pyrophosphate,hydro peroxide (H2O2), dinatri NADH (DPNH),tetrasodium NADPH (Coenzym II khử muối tetranatri), axit photphoric, Thuốc thử Folin và Ciocalteu's phenol (FCR) và axit sulphosalicylic (5-SSA) (Phòng thí nghiệm HiMedia, Maharashtra, Ấn Độ); diglycine, axit axetic băng(CH3COOH), thuốc thử Ellman (3-Carboxy-4-nitrophenyldisulfide, DTNB), azabenzen (C5H5N) và natri laurylsulphate (SLS) (LobaChemie, Mumbai, Ấn Độ); 4,6-Dihydroxy-2-mercaptopyrimidine (2-TBA), dinatri cacbonat(Na2CO3) và (2-mercaptoethyl)trimethylammonium iodide axetat (hóa chất TCI, Ấn Độ); kẽm sunfat (ZnSO4), muối Rochelle (kali natri L(+)-tartrate), 2-(1-Naphthylamino)ethylamine dihydrochloride, axit nitơ (NaNO2) và p-aminobenzensulfonamide (Phòng thí nghiệm SiscoResearch, Ấn Độ ); Rượu butyl (Fisher Scientific, Ấn Độ) được sử dụng.2.3. Tiêm nội não của axit Quinolinic.

Động vật được gây mê bằng cách tiêm cocktail ketamine (90 mg/kg) và xylazine (10 mg/kg) trong màng bụng bằng nước vô trùng để tiêm. Thi thể được đặt trong tư thế nằm sấp trên đệm sưởi ấm và được đặt trên giá đỡ của dụng cụ phẫu thuật định vị lập thể, đầu được đặt ở vị trí đó. Da đầu được rạch ở điểm giữa và hộp sọ được bộc lộ bằng cách kéo da ra xa nhau.

Bất kỳ một trong hai tâm thất bên nào được chọn tùy ý và trong hộp sọ, xương đỉnh bị khoét (tọa độ lập thể -0,8 mm trước sau so với bregma, ±1,5 mm trong bên từ đường khớp dọc giữa và ±3,6 mm so với mặt lưng bụng từ bề mặt xương đỉnh ) để tạo ra một lỗ khoan [21].

Vào ngày đầu tiên, dung dịch axit quinolinic (QA) mới được tạo thành (240nmol) trong dung dịch muối đệm PBS (Na+-K+ [PO4]2-, pH 7,4) và được tiêm dần dần bằng vi tiêm Hamilton với tốc độ dòng là 1 µl/phút vào não thất trái hoặc não phải của chuột trong thời gian 5 đến 6 phút với thể tích tiêm 5 µl ICV-xe [22].

Sau khi tiêm toàn bộ thuốc, microneedle không bị bong ra trong 4 đến 5 phút để tạo điều kiện cho thuốc khuếch tán vào dịch não tủy và ngăn chặn sự trào ngược của thuốc. .e thể tích tương đương (10 µl) của phương tiện PBS đã được sử dụng ICV trong các shamrat được vận hành giống hệt nhau, tuy nhiên, QA không được tiêm.

Sau khi tiêm thuốc, các lỗ được phục hồi bằng cách sử dụng chất gắn (kẽm photphat, PYRAX®) và việc khâu da đã hoàn tất. Để ngăn ngừa ô nhiễm (vi khuẩn phát triển), Neosporin® đã được áp dụng pro re nata.

Để tránh nhiễm trùng huyết sau phẫu thuật, Orizolin (Zydus Cadila), được dùng với liều 30 mg/kg (ip). Mỗi con chuột được cung cấp môi trường ấm áp (37 ± 0,5 độ) để tránh tình trạng hạ thân nhiệt sau phẫu thuật. Mỗi con chuột được cho ăn thức ăn bán rắn (bên trong lồng) và nước miễn phí sau phẫu thuật trong bảy ngày và được nhốt riêng biệt trong một chiếc lồng riêng biệt (30 × 23 × 14 cm3).

2.4. Giao thức thử nghiệm. DSM được tiêm với liều 50và 100 mg/kg mỗi trọng lượng cơ thể (bw) ở chuột qua đường trong màng bụng (ip) sử dụng phương tiện dimethylsulfoxide 0,5% trong nước muối thông thường (liều lượng 5 ml/kg) [17].

Các động vật được phân bổ ngẫu nhiên thành 5 cụm theo chế độ mù đơn (n � 5): (i) giả (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv)QA + DSM100 và (v) QA + DNP. Chuột được tiêm QA (QA-ICV) nội não hoặc phẫu thuật giả vào ngày đầu tiên.

DSM được quản lý trong 21 ngày liên tiếp mỗi ngày 120 phút sau QA-ICV kể từ ngày đầu tiên trở đi. Donepezil (DNP) được sử dụng làm thuốc tiêu chuẩn trong nghiên cứu này và được tiêm (liều 3 mg/kg, ip) ở chuột được tiêm QAICV trong 21 ngày liên tiếp.

Động vật trong nhóm kiểm soát thesham và QA được sử dụng phương tiện (0.5% dimethylsulfoxide vô trùng trong nước muối thông thường với liều lượng thể tích 5 ml/kg) từ ngày 1 đến ngày 21. .e toàn bộ nghiên cứu được thực hiện theo sơ đồ được mô tả trong Hình 1.2.5. Hoạt động vận động.

Trong tất cả các cụm chuột, hoạt động vận động trung bình được ghi lại bằng thiết bị đo quang độ trong 5 phút. Một con vật riêng biệt được đặt vào máy quang kế trong 3 phút để làm quen với khí hậu. Sau đó, chuột được cho 5 phút và kết quả được ghi là số đếm trong 5 phút [11].2.6. Thử nghiệm Rotarod.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 giây khi thanh quay với tốc độ chín vòng một phút (vòng/phút).

Sau các thử nghiệm thu nhận, một con chuột riêng biệt được đặt trên trục hình trụ và tốc độ quay được tăng lên trong khoảng thời gian gián đoạn liên tục là 10 giây từ 6 vòng/phút (tốc độ sơ bộ) lên 30 vòng/phút (tốc độ kết thúc), kéo dài hơn 50 giây. .e độ trễ giảm trung bình (tính bằng giây) từ trục hình trụ quay được nêu trong kết quả.2.7.

Phân tích dấu chân. Nguyên tắc đằng sau việc thực hiện phân tích dấu chân ở chuột là đánh giá những bất thường về dáng đi.

Đối với dấu chân, chân chuột được ngâm trong bốn loại thuốc nhuộm thực phẩm không độc hại có màu sắc đa dạng và được phép chạy trên lối đi nghiêng (70 cm × 10 cm × 8 cm). Nền đường băng được bao bọc bằng một tấm xenlulo màu trắng. Những con chuột được thúc đẩy đến đoạn đường lên dốc mờ mịt ở cuối đường băng để có được dấu chân rõ ràng. Thuốc nhuộm .e được loại bỏ nhẹ nhàng khỏi mỗi con vật bằng nước ấm sau các thử nghiệm. .e dấu chân đã được quét và "chiều dài sải chân" được đo bằng thước tiêu chuẩn. Chiều dài sải chân được định lượng bằng cách tính khoảng cách giữa các vị trí liên tiếp của chân chuột giống hệt nhau [11].

2.8. Nhiệm vụ nhận dạng đối tượng mới (NORT). Giao thức chuẩn được tuân theo do Kumar và Bansal đưa ra [23].

ORT là một nguyên mẫu ngoại cảm không có lợi và không thù địch được sử dụng để đánh giá trí nhớ hồi tưởng kiểu hoạt động được khai thác thông qua hành vi thăm dò bốc đồng của loài gặm nhấm. Cuộc điều tra được thực hiện trong một thùng hình khối bằng gỗ dán hở trên mái nhà (80 cm × 42 cm × 62 cm), được đặt ở khu vực yên tĩnh, được chiếu sáng bằng đèn LED 60W để quản lý độ sáng nhất quán trong thùng.

Các đồ vật bằng gỗ hình trụ (trắng)-, kim tự tháp (đỏ)- và hình lập phương (đen) (cao 12 cm) (theo bộ ba giống hệt nhau) đều chắc chắn và có trọng lượng đủ để khiến chúng bất động trước loài gặm nhấm. NORT được thực hiện vào ngày thứ 16 với 3 giai đoạn (S): giai đoạn thích nghi (S1), giai đoạn thu nhận (S2) và giai đoạn kiểm tra (lưu giữ) nhận dạng đối tượng mới (S3).

Trong thời gian S1, ba ngày liên tiếp trước khi các thử nghiệm được thực hiện để phát hiện ra phần đáy tàu trống (5 phút) bởi chuột. Sau khi hoàn thành S1, từng con vật đã làm quen với bất kỳ bộ vật phẩm rắn nào trong giai đoạn học tập (S2).

Các vật giống song sinh được đặt ở 2 góc đối diện được lựa chọn tùy ý của tàu (khoảng cách từ 9 cm đến 11 cm tính từ thành bên). Riêng biệt, một loài gặm nhấm được đặt ở giữa bình, đối diện với hai vật thể rắn và được phép khám phá hai vật phẩm giống nhau trong 5 phút. Hướng mõm đến gần vật thể ở khoảng cách Nhỏ hơn hoặc bằng 2–3 cm hoặc tiếp xúc vật lý với vật thể bằng mõm được coi là hành vi điều tra.

Sau S2, loài gặm nhấm được nhốt trong chuồng trong nhà có thời gian nghỉ giữa các vòng (ITR) là 60 phút.

Bất kỳ vật phẩm rắn đơn lẻ nào được cung cấp trong S2 đều được hoán đổi bằng một vật phẩm rắn khác và loài gặm nhấm lại được đưa ra các vật phẩm đôi, tức là một bản sao của vật phẩm quen thuộc và vật phẩm khác..e toàn bộ sự kết hợp và vị trí của các vật phẩm được bù đắp cho giảm bớt thành kiến ​​có thể bị xúi giục bởi thiên hướng đối với một số bối cảnh hoặc mục nhất định. Bình chứa và các vật dụng rắn được lau chùi tỉ mỉ (cồn etylic 15% và vải khô) sau mỗi lần kiểm tra để hạn chế dấu hiệu mùi hôi. .e Khoảng thời gian dành cho việc khám phá từng mục trong S2 và S3 được ghi lại bằng đồng hồ bấm giờ. .e khoảng thời gian đã dành để điều tra hai mục phù hợp trong S2 (I1 � Ii1 + Ii2) và khoảng thời gian đã dành để điều tra hai mục khác nhau, tức là quen thuộc và khác nhau, trong S3 (I2 � Ii3 + Ib) đã được ghi lại. .e sự khác biệt trong khoảng thời gian dành cho việc điều tra mục khác nhau và khoảng thời gian điều tra mục quen thuộc (Ib–Ii3 � DI) tiết lộ việc lưu giữ ký ức.

DI (chỉ số phân biệt)/S3 khoảng thời gian điều tra cả mục quen thuộc và mục mới (DI đã sửa đổi) cải thiện sự phân chia theo phương sai trong cuộc điều tra đầy đủ và biểu thị xu hướng dành cho các mục khác nhau trái ngược với những mục đã quen thuộc {DI � (Ib–Ii3 )/(Ii3 + Ib)}. Trí nhớ hồi tưởng được đánh giá bằng cách định lượng kỹ năng của loài gặm nhấm trong việc chọn ra những thứ quen thuộc/mới lạ trong S3 và được xác định là DI (được sửa đổi cho giai đoạn điều tra tổng thể trong S3) [24].

2.9. Mê cung nước Morris (MWM). .e giao thức chuẩn đã được tuân theo, do Kumar và Bansal đưa ra [25]. MWM đánh giá trí nhớ không gian bằng các thử nghiệm bơi lội, trong đó loài gặm nhấm tìm đường thoát ra bục được giấu kín.

Một bể hình tròn màu đen (đường kính 2 m, cao 0,6 m) có nước (25 ± 1 độ ) được đổ đầy đến độ sâu 0,3 m. Bể thủy sinh được tách theo chiều kim đồng hồ thành 4 vùng tương tự (R1, R2, R3 và R4) bằng hai sợi nylon, được cố định vuông góc ở chu vi phía trên của bể.

Một bệ (10,5 cm × 10,5 cm) được đặt dưới nước (1 cm dưới nước) trong vùng hồ chứa R4. Vị trí của bệ vẫn tồn tại nguyên vẹn trong suốt thời gian mua lại.

Mỗi con chuột được đưa ra bốn vòng thu nhận nối tiếp (5 phút ITR) mỗi ngày. .e loài gặm nhấm được thả nhẹ nhàng vào bể thủy sinh đối diện với thành bể, với vị trí thay đổi theo từng thử nghiệm đơn lẻ từ R1-R4, R2-R1, R3-R2 và R{{ 7}}R3 tương ứng vào ngày 1 đến ngày 4 và được phép có 120 giây để phát hiện bục dưới nước. .e loài gặm nhấm tiếp tục nằm trên bục trong 20 giây.

Việc không phát hiện được nền tảng trong vòng 120 giây cho thấy việc đặt chuột thủ công trên nền tảng và sau đó chúng được phép đặt chuột trên nền tảng trong 20 giây. Thời gian trễ thoát hiểm (ELT) là khoảng thời gian phát hiện ra các bệ nước ẩn trong hồ thủy sinh.

Việc học về không gian được đánh dấu bằng ngày đầu tiên so với ngày thứ tư ELT. Trong thử nghiệm thăm dò (ngày thứ 5), các loài gặm nhấm đã nghiên cứu hồ chứa trong 120 giây nhưng bị tước vị trí đứng đầu. .e thời gian trung bình sử dụng trong toàn bộ hồ chứa (4 vùng) đã được ghi lại. .e thời lượng trung bình đã sử dụng trong R4 (TSTQ: thời gian dành cho góc phần tư mục tiêu) để thăm dò bục ẩn được coi là một chỉ số của bộ nhớ tham chiếu. .thiết lập so sánh của bể so với các vật phẩm trong phòng thí nghiệm đóng vai trò là dấu hiệu trực quan và vị trí của người điều tra vẫn không bị xáo trộn [26].

2.10. Ước tính các thông số sinh hóa. Sau khi hoàn thành các bài kiểm tra hành vi, não chuột hoàn chỉnh được thu thập và đặt trên các viên đá nghiền thành bột, sau đó tắm bằng nước muối khử trùng đông lạnh (isotonic308 mOsmol/l NaCl) để loại bỏ tàn dư và máu.

Quá trình đồng nhất hóa toàn bộ não được thực hiện ngay lập tức trong dung dịch đệm phân tách đông lạnh (pH 7,4) với thành phần 215 mM D-mannitol, 20 mM {{5}[4-(2-hydroxyethyl )piperazin-1-yl]axit ethanesulfonic, 1 mM 1,2-bis[{{12}[bis(carboxymethyl)amino]ethoxy]ethane, 75 mM saccharose và 0,1% BSA. .e homogenate được ly tâm ở 4 độ bằng lực 13000 × g trong 5 phút. .e viên bị loại bỏ, và phần nổi phía trên được tách thành hai phần và được ly tâm lại (4 độ) ở lực 13000 × g trong 5 phút. .e viên ty thể thô được tách ra và ly tâm lại trong dung dịch đệm tách với 1,2-bis[{{24}[bis(carboxymethyl)amino]ethoxy]ethane ở tốc độ 12.500 × g trong 11 phút (4 độ ). .e cặn bán rắn thu được bao gồm ty thể không bị nhiễm bẩn được tái huyền phù trong dung dịch đệm tách (pH 7,4) chứa 75 mM saccharose,20 mM {{33}fer4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1- yl]axit ethanesulfonic và 215 mM D-mannitol [27].

Sau đó, phân tích ty thể của chất đồng nhất toàn bộ não được sử dụng để xác định các dấu hiệu sinh hóa bằng phương pháp tiêu chuẩn.2.11. Ước tính phức hợp ty thể.

2.11.1. NADH: Hoạt động của Ubiquinone Oxidoreductase. Tốc độ hoạt động của phức hợp I (NADH dehydrogenase) được định lượng (nmol NADH oxy hóa/phút/mg protein) theo kỹ thuật của King và Howard [28]. Việc tạo ra NAD+ oxy hóa từ NADH đi kèm với quá trình khử cytochrome c. Hỗn hợp xét nghiệm .e bao gồm cytochrome c (10,5 mM), 6 mM -nicotinamide adeninedinucleotide (DPNH) được hòa tan bằng dung dịch đệm diglycine 2 mM và dung dịch đệm diglycine (0,2 M, độ pH 8,5).

Một phần ty thể có thể hòa tan được đưa vào hỗn hợp xét nghiệm để kích hoạt phản ứng. .e sự thay đổi mật độ quang (OD) ở λmax � 550 nm được theo dõi trong 120 giây.

2.11.2. Succinate: Hoạt động của Ubiquinone Oxidoreductase..e tốc độ hoạt động của succinate dehydrogenase (phức hợp II) đã được định lượng (nmol succinate oxy hóa/phút/mg protein) bằng cách làm theo kỹ thuật của King [29].

Quá trình oxy hóa axit succinic được kích hoạt bởi một máy thu điện tử giả, kalicyanoferrate (K3Fe(CN)6). .e hỗn hợp xét nghiệm bao gồm axit succinic (0,63 M), 1% BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M) vàNa+-K+ Dung dịch đệm [PO4]2- (0,23 M, pH 7,6). Một phần ty thể có thể hòa tan được đưa vào hỗn hợp xét nghiệm để kích hoạt phản ứng. .e biến thiên OD ở λmax � 420 nm được theo dõi trong 120 giây.2.12. Xác định các dấu ấn sinh học gây stress oxy hóa 2.12.1. Các chất phản ứng axit iobarbituric (TBARS).

Để đánh giá TBARS (nmol trên mg protein) [30], tổ hợp phân tích (số lượng cuối cùng ∼4 ml) bao gồm0.10 ml não đồng nhất, 1,51 ml 4,{{ 7}}dihydroxy-2-mercaptopyrimidine (0,8%), 200 µl SLS (8,18%), 1,49 ml axit glacialacetic (21%, pH 3,51) và 0,71 ml nước khử ion được đun nóng trong bể nước ở 96 độ trong 60 phút.

Tỷ lệ 15:1 của rượu butyl/azabenzen (5,1 ml) đã được bổ sung vào hỗn hợp phân tích được ly tâm ở tốc độ 4,000 × gpower (10 phút) và phần nổi phía trên được tách ra.

Với máy quang phổ UV1700 hai chùm tia (Shimadzu, Nhật Bản), malondialdehyde-4,6-dihydroxy-2-mercaptopyrimidine OD được đánh giá ở bước sóng (λmax � 532 nm) và ε � 1,56 × 105/M/cm (hệ số tuyệt chủng mol) được áp dụng để tính 4 chất cộng 4,6-dihydroxy-2-mercaptopyrimidine.

2.12.2. Giảm mức độ Glutathione (Lc-Glutamyl-L-Cysteinyl-glycine). Quy trình [31] của Ellman đã được triển khai để đánh giá hàm lượng L-glutathione (GSH). .e thử nghiệm pha chế bao gồm chất đồng nhất (1,1 ml) và 1 ml axit sulfobenzoic 4% 2-hydroxy-5-(5-SSA) được ly tâm (4 độ ) trong 11 phút ở công suất 2.500 × g .

Sau đó, 2,8 ml dung dịch đệm Na+-K+[PO4]2- (51,2 mM, pH 7,77) và {{10}}.21 ml 3-carboxy{{13 }}nitrophenyl disulfide (0,12 mM, pH 7,89) được trộn với chất nổi phía trên đã được tách ở trên (0,12 ml).

Tripeptide (µmolGSH trên mỗi mg protein) được định lượng bằng máy quang phổ UV1700 chùm tia kép (λmax � 412 nm). áp dụngε � 1,36 ×104/M/cm.2.12.3.

Hoạt động của Glutathione Peroxidase. Hoạt tính của glutathione peroxidase (GPx) (EC 1.11.1.9) được đánh giá bằng cách thực hiện kỹ thuật của Mohandas et al. [32]. Hỗn hợp .eanalyze bao gồm 100 µl 10% homogenate, 100 µl natri azide (1,11 mM), 100 µl EDTA (1,13 mM), 40 µl glutathione-disulfide reductase (GSR, 1 IU/ml) (EC1.8.1.7), 10 µl H2O2 (0,28 mM), 40 µl Lc-glutamyl-L-cysteinyl-glycine (1,2 mM), 100 µl coenzym II muối tetrasodium khử (0,22 mM ) và dung dịch đệm 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-(pH 7,4) trong toàn bộ số lượng 2000 µl. .e sự mất đi tetrasodium khử coenzym II ở λmax � 340 nm được ghi nhận ở nhiệt độ 25 độ. Tốc độ GPx được tính bằng nmol NADPH oxy hóa/phút/mg protein sử dụng ε � là 6,22 ×103/M/cm.

For more information:1950477648nn@gmail.com