MicroRNA có nguồn gốc từ Exosome từ sữa -2478 ngăn chặn sự hình thành hắc tố thông qua con đường Akt-GSK3

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae và Sang Hoon Kim

Trừu tượng:Các exposome tham gia vào quá trình giao tiếp giữa các tế bào bằng cách chuyển các phân tử từ các tế bào nhận donorto. Exosomes được tìm thấy trong các chất lỏng khác nhau của cơ thể, bao gồm máu, nước tiểu, dịch não tủy và sữa. Các exosomes sữa chứa nhiều phân tử microRNA nội sinh. MicroRNA là những RNA nhỏ không mã hóa và có vai trò quan trọng trong các quá trình sinh học. Các chức năng sinh học cụ thể của các exomes sữa vẫn chưa được hiểu rõ. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã điều tra tác động củamilkexomesvề sản xuất melanin trong tế bào hắc tố và tế bào hắc tố. Chúng tôi thấy rằngexosomes sữa giảmnội dung melanin, hoạt động của tyrosinase và sự biểu hiện của các gen liên quan đến quá trình tạo hắc tố trong tế bào hắc tố và tế bào hắc tố. MiR đặc hiệu của bò -2478 trong exosomes ức chế sản xuất melanin. Chúng tôi phát hiện ra rằng Rap1a là gen đích trực tiếp của miR -2478 trong tế bào hắc tố và tế bào hắc tố. Sự biểu hiện quá mức của MiR -2478 làm giảm biểu hiện Rap1a, dẫn đến việc sản xuất melanin được điều chỉnh giảm và sự biểu hiện của các gen liên quan đến sự hình thành hắc tố. Giảm ức chế biểu hiện Rap1atạo hắc tốthông qua đường dẫn tín hiệu Akt-GSK3. Những kết quả này hỗ trợ vai trò của miR -2478 có nguồn gốc từ milkexomes như một bộ điều chỉnh củatạo hắc tốthông qua việc nhắm mục tiêu trực tiếp Rap1a. Những kết quả này cho thấy exosomes sữa có thể là thành phần thẩm mỹ hữu ích để cải thiệnlàm trắng.

Từ khóa: tạo hắc tố;exosome sữa; miR -2478; Rap1a

herba cistancheslà một thành phần ức chế melanin

1. Giới thiệu

Cosmeceutical là từ ghép kết hợp giữa mỹ phẩm và dược phẩm và dùng để chỉ mỹ phẩm có các thành phần chức năng có tác dụng chữa bệnh [1]. Trước đây, làn da được cải thiện thông qua các thủ thuật da liễu, nhưng gần đây, sự quan tâm đến mỹ phẩm đã được nâng cao do người tiêu dùng mong muốn có được những hiệu quả này thông qua mỹ phẩm. 2]. Mỹ phẩm chức năng bao gồm các sản phẩm giúp làm trắng da bằng cách ngăn chặn sự lắng đọng của các hắc tố trên da.

Melanin, một yếu tố quan trọng quyết định màu sắc của da và tóc, bảo vệ da khỏi tia cực tím [3]. Tuy nhiên, sự hình thành quá nhiều hắc tố gây ra làn da không đều màu, ví dụ như đốm và tàn nhang [4]. Yếu tố phiên mã microrophthalmia (MITF) là một yếu tố điều chỉnh chính của sự phát triển tế bào hắc tố. Tyrosinase (TYR) là enzyme tổng hợp ofmelanin quan trọng nhất. Quá trình tổng hợp melanin được gây ra bởi sự kích hoạt TYR thông qua MITF, là một enzym quan trọng tham gia vào giai đoạn đầu của quá trình tổng hợp melanin và sử dụng dạng L của tyrosine hoặc DOPA làm chất nền để hình thành melanin [5].

MicroRNAs (miR) là các RNA ngắn không mã hóa tham gia vào nhiều quá trình sinh học bằng cách kiểm soát sự biểu hiện gen sau phiên mã [6]. Các nghiên cứu cũng đã khám phá ra sự kiểm soát quá trình sinh tổng hợp melanin bằng microRNA. Ví dụ, đã có báo cáo rằngmiR -143-5 p nhắm vào gen Tak1 và làm giảm biểu hiện MITF, do đó ức chế quá trình tổng hợp melaninsynthesis [7]. MiR -125 b, bộ điều chỉnh tiêu cực củatạo hắc tố, đã được chứng minh là điều chỉnh gen sắc tố SH3BP4 [8], và miR -675 trong các exosomes tiết ra từ tế bào sừng ức chếtạo hắc tốbằng cách nhắm mục tiêu MITF [9].

Exosomes là những túi có màng bao bọc kích thước từ 30–200 nm và chứa DNA, RNA và peptide [10]. Các thành phần bên trong của exosomes có thể truyền thông tin một cách an toàn đến các tế bào lân cận hoặc ở xa mà không bị phân hủy bởi các enzym trong chất lỏng sinh học, do đó đảm bảo môi trường vi mô xung quanh các tế bào khác nhau [11].Exosomes sữalà các túi nội bào có nguồn gốc từ sữa, ổn định trong quá trình tiêu hóa của con người [12]. Các exosomes chiết xuất từ ​​sữa bò không chỉ chứa một số protein như casein và lactoglobulin mà còn chứa các microRNA, hoạt động như một hàng hóa [13–15]. Sữa bò chứa các microRNA liên quan đến miễn dịch như miR -15 b, miR -27 b, miR -34 a và miR -10. Những microRNA này đặc biệt dồi dào trong sữa non [16].

Một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng các thành phần của sữa ức chếtạo hắc tốtrong tế bào hắc tố; ví dụ, các protein như -lactoglobulin và κ-casein trong sữa điều chỉnh sự hình thành hắc tố [17,18]. Phần nổi phía trên của sữa lên men Lactobacillus helveticus NS 8- đã được phát hiện có khả năng ức chế tác hại của tia UV và tăng sắc tố da [19]. Tuy nhiên, vẫn chưa có báo cáo nào về việc liệu các microRNA trong sữa bò có liên quan đến da hay khônglàm trắng, mặc dù 79 microRNA tồn tại trongexosomes sữa[13]. Do đó, trong nghiên cứu này, chúng tôi đã khảo sát các exosomes từ sữa có chứa microRNA sẽ ức chế sự tổng hợp melanin ở các tế bào hắc tố và tế bào hắc tố của chuột và người.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Nuôi cấy tế bào

Tế bào u ác tính B16F10 của chuột được nuôi cấy trong môi trường Eagle biến tính của Dulbecco (DMEM, Hyclone, Logan, UT, USA). Tế bào MNT -1 u ác tính ở người được phát triển trong Môi trường Thiết yếu Tối thiểu (MEM, Hyclone). Tất cả các môi trường đều được bổ sung 10% huyết thanh bào thai (FBS, Hyclone, Hoa Kỳ) và 1% dung dịch penicilin-streptomycin. Tế bào hắc tố biểu bì của người bình thường (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Đức) ở số 5 hoặc 6 được duy trì trong môi trường tăng trưởng tế bào hắc tố (PromoCell). Những tế bào này được ủ ở 37 ◦C trong điều kiện không khí ẩm có chứa 5% CO2.

2.2. Thanh lọc Exosomes

Sữa thương phẩm (1 mL) được ly tâm ở 2 000 × g trong 1 0 phút, sau đó phần nổi phía trên được ly tâm ở 1 0, 000 × g trong 10 phút. Phần nổi phía trên sữa được đưa qua bộ lọc a0,45 µm và sau đó là bộ lọc 0,2 µm. Dung dịch thu được (300 µL) được trộn với nước muối đệm photphat (PBS) và 300 µL dung dịch kết tủa exosome Exoquick (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, USA) và ủ trong 30 phút. Hỗn hợp được ly tâm ở 10.000 × g trong 30 phút để thu được viên exosome, là viên nén tiếp theo được tái tạo trong PBS. Sự phân bố kích thước của các exomes được xác định trên Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Pháp). Các exosomes được lưu trữ ở -80 ◦C để sử dụng thêm.

2.3. Kính hiển vi điện tử lạnh

Một lượng huyền phù exosomes tươi 3 µL được hấp phụ vào một lưới phủ carbon đục lỗ, phóng điện phát sáng (phẳng 2 / 2-3 C C; Protochips, Morrisville, NC, USA), sau đó sẽ bị thấm trong 3 s ở 4 ◦C và làm đông lạnh bằng Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, USA). Các lưới này được bảo quản trong nitơ lỏng, sau đó được chuyển đến giá giữ mẫu cryo Gatan 626 (Gatan, Pleasanton, CA, USA). Các mẫu được chụp ảnh ở độ phóng đại danh nghĩa là 29, 000 × trong kính hiển vi điện tử lạnh (FEI Tecnai F20 TEM, FEI, Hillsboro, OR, USA), được trang bị súng phát xạ trường tiêu chuẩn (s-FEG) và một camera K2Summit (Gatan) ở hiệu điện thế gia tốc 200 kV.

2.4. Thử nghiệm khả năng tồn tại của tế bào (Thử nghiệm WST)

Tế bào hắc tố (B16F10, MNT -1) và tế bào hắc tố của người (NHEM) được tạo giống với kích thước 4 × 103cells / giếng trong 96- đĩa giếng và được xử lý bằngexosomes sữa(20 và 50 µg / mL) hoặc microRNA bắt chước (RNA sợi kép oligonucleotide) cho mỗi thí nghiệm. Tại các thời điểm chỉ định, khả năng sống của tế bào được đo bằng bộ xét nghiệm khả năng sống của tế bào nâng cao EZ-CyTox (Dịch vụ Phòng thí nghiệm Daeil, Seoul, Hàn Quốc) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 450 nm trên máy quang phổ Vmax vi tấm (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).

2.5. Đo lường hàm lượng Melanin

Tế bào hắc tố và tế bào hắc tố được điều trị bằngexosomes sữa(20 và 50 µg / mL) trong 48 giờ. Sau khi rửa hai lần bằng PBS lạnh đá, các tế bào được ly tâm ở 2500 × g trong 10 phút. Các viên tế bào được ủ lại ở 90 ◦C trong 30 phút trong NaOH 1 N có chứa 10 phần trăm dimethyl sulfoxit. Tổng hàm lượng melanin được đo trên máy đo quang phổ Vmax (Thiết bị phân tử) ở bước sóng 405 nm.

2.6. Thử nghiệm hoạt động của Tyrosinase

Tế bào hắc tố và tế bào hắc tố được ủ vớiexosomes sữatrong 48 giờ. Tế bào được rửa hai lần bằng PBS và được ly giải bằng PBS có chứa 1 phần trăm Triton X -100 và 0. 1 mMphenylmethanesulfonyl florua. Sau khi ly tâm, phần nổi phía trên được thu thập và chuyển vào một đĩa giếng 96-. Sau khi thêm 0. 1 ML -3, 4- dihydroxyphenylalanin, các mẫu được ủ ở 37 ◦C trong 1 giờ. Hoạt tính tyrosinase được đo trên cơ sở độ hấp thụ ở bước sóng 475 nm bằng máy quang phổ microlate (Thiết bị phân tử).

herba cistanches

2.7. Mô da người

Tương đương biểu bì có chứa tế bào hắc tố (MelanoDerm, MEL -300 B) được lấy từ MatTek (Ashland, MA, Hoa Kỳ) và được duy trì trong môi trường EPI -100- NMM -113-.Exosomes sữađã được áp dụng cho các mô MelanoDerm vào Ngày 1, 3, 7, 9 và 12. PBS được sử dụng làm đối chứng tiêu cực. Mô được chụp vào các ngày 3, 7, 9, 12 và 14. Sắc tố được đo bằng cách so sánh những thay đổi trong giá trị L (Adobe PhotoshopCC 2015). Hàm lượng melanin trong mô da người được đo vào ngày 14 bằng xét nghiệm Solvablemelanin. Tóm lại, các mô MelanoDerm được hòa tan bằng cách sử dụng Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) và ủ qua đêm ở 60 ◦C. Các mẫu được quay xoáy và sau đó được ly tâm ở 16.500 × g trong 5 phút. Phần nổi phía trên được chuyển vào giếng của tấm 96- giếng và đọc ở bước sóng 490 nm bằng máy quang phổ.

3. Kết quả

3.1. Đặc điểm của các Exosomes được phân lập từ sữa

Để khảo sát các đặc điểm của các exomes chiết xuất từ ​​sữa bò, trước tiên chúng tôi đo kích thước của exomes bằng sự tán xạ ánh sáng động. Kết quả là, dịch ngoại ly từ sữa được tìm thấy có đường kính 80–190 nm (Hình 1A). Vìmilkexosometinh chế, hỗn hợp Exoquick-sữa nổi trên được ly tâm để thu được viên exosome sữa. Sự biểu hiện của CD9, TSG101 và HSP70 dưới dạng các dấu hiệu ngoại vi đã được phát hiện ở dạng viên, nhưng các protein này không có trong dịch nổi (Hình 1A). 1B). Các exposome được phát hiện có hình tròn, đường kính lên đến 200 nm. Tiếp theo, chúng tôi điều tra xem liệu các exosomes chiết xuất từ ​​sữa có được các tế bào tiếp nhận hay không. Tế bào chuột B16F10 được ủ vớiexosomes sữađược dán nhãn bằng thuốc nhuộm huỳnh quang ưa béo PKH26. Kết quả là, chúng tôi quan sát thấy các exosomes được dán nhãn có mặt bên trong các tế bào (Hình S1).

3.2. Hoạt động Tyrosinase và sản xuất Melanin được ức chế bởi các Exosomes sữa trong Tế bào B16F10

Tiếp theo, chúng tôi kiểm tra ảnh hưởng của các exosomes được chiết xuất đối với khả năng tồn tại của tế bào. Như mô tả trong Hình 2A, chúng tôi tiết lộ rằng không có sự khác biệt đáng kể về khả năng sống của tế bào, bất kể nồng độ exosome.

Để điều tra tế bào da có thể có-làm trắngảnh hưởng củaexosomes sữa, các tế bào đã được xử lý bằng các exosomes sữa. Chúng tôi nhận thấy rằng hoạt động tyrosinase trong các tế bào tiếp xúc với milkexomes ở nồng độ 20 hoặc 50 µg / mL giảm lần lượt 43% và 59% (Hình 2B). Bởi vì việc giảm hoạt động của enzym tyrosinase có thể ức chế sinh tổng hợp melanin, hàm lượng melanin được đo sau khi xử lý với exosomes sữa. Chúng tôi ghi nhận sự ức chế tổng hợp melanin trong các tế bào tiếp xúc vớiexosomes sữa(20 hoặc 50 µg / mL) tương ứng là 45 phần trăm và 55 phần trăm (Hình 2C). Hơn nữa, sự biểu hiện của mRNA MITF giảm khi nồng độ của các exsome từ sữa tăng lên. Mức độ mRNA của MITF giảm 59% ở các tế bào được xử lý với 20 µg / mL exosomes và 84% ở những tế bào được xử lý với exosomes 50 µg / mL, tương ứng (Hình 2D). Biểu hiện mRNA tyrosinase (TYR) giảm 49% và 76% trong các tế bào tiếp xúc với nồng độ exosomes này (Hình 2D). Mức protein MITF và tyrosinase cũng giảm khi cô đặc sữaexosomestăng lên (Hình 2E). Những kết quả này cho thấy rằng các exosomes trong sữa ức chế sự hình thành hắc tố trong các ô B16F10 của chuột.

3.3. MiR dành riêng cho bò -2478 từ Milk Exosomes ức chế sự hình thành hắc tố

Để xác định xem miR -2478 có nguồn gốc từexosomes sữaảnh hưởng trực tiếp đến sự hình thành hắc tố, chất ức chế miR -2478 được truyền vào các tế bào tiếp xúc với milkexomes (50 µg / mL). Với sự hiện diện của các exosomes sữa, các tế bào B16F10 được truyền chất ức chế themiR -2478 cho thấy hoạt tính tyrosinase cao hơn đáng kể so với đối chứng trong đó (Hình 4A). Hàm lượng melanin cũng cao hơn trong tế bào được xử lý bằng chất ức chế miR -2478 so với tế bào đối chứng (Hình 4B). Biểu hiện mRNA của MITF là –2. 5- ở các tế bào được điều trị bằng chất ức chế miR 2478 cao hơn lần so với ở các tế bào kiểm soát và biểu hiện mRNA của TYR là - 2- gấp khi miR -2478 bị ức chế (Hình 4C ). Mức độ protein MITF và TYR cũng được phục hồi trong các tế bào tiếp xúc vớiexosomes sữasau khi các tế bào này được truyền chất ức chế miR -2478 (Hình 4D). Những kết quả này cho thấy rằng miR -2478 có nguồn gốc từ các exosomes sữa đã trực tiếp ức chế sự hình thành hắc tố trong các tế bào u ác tính của chuột.

3.4. Sữa Exosomes ức chế sự hình thành hắc tố thông qua con đường Akt-GSK3

Tiếp theo, chúng tôi đã xem xét cáchexosomes sữađiều tiếttạo hắc tốđể xác định con đường bị ảnh hưởng có liên quan trong tế bào u ác tính. Mặc dù không biết liệu Rap1a có kiểm soát trực tiếp quá trình hình thành hắc tố hay không, nhưng đã có báo cáo rằng Rap1a ức chế tế bào ung thư phosphoryl hóa Akt [20]. Trên cơ sở thông tin này, chúng tôi đã điều tra xem liệu Rap1a có mô-đun hóa con đường Akt để quảng bá hay không.

Trong liên quan đến Akttạo hắc tốcon đường, Akt được kích hoạt gây ra sự phosphoryl hóa Gsk3 tại Ser9 và do đó làm bất hoạt nó; Sự thay đổi này ức chế hoạt động phiên mã của MITF và điều hòa tyrosinase [21,22]. Trong các tế bào này, sự hoạt hóa của quá trình phosphoryl hóa Akt tăng lên và lượng pGSK3 cũng tăng lên (Hình 7A). GSK3 bị bất hoạt bằng cách kích hoạt Akt phụ thuộc vào nồng độ trong các tế bào được xử lý với 20 hoặc 50 µg / mLexosomes sữa(Hình 7B). Mức độ của các protein Akt và GSK3 trong các tế bào được xử lý bằng bắt chước miR -2478 phù hợp với các kết quả trên (Hình 7C). Tiếp theo, chúng tôi đã kiểm tra xem liệu miR -2478 từ các exosomes sữa có ảnh hưởng đến con đường Akt-GSK3 hay không. Với sự có mặt của các exsome từ sữa, sự phosphoryl hóa của các protein Akt và GSK3 thấp hơn trong các tế bào được xử lý bằng chất ức chế themiR -2478 (Hình 7D). Ngoài ra, điều trị bằng chất ức chế AKT GSK690693 đã làm tăng sự biểu hiện của các gen liên quan đếntạo hắc tốtrong các tế bào exosome được xử lý trong sữa. (Hình 7E). Những phát hiện này có nghĩa là miR -2478 trongexosomes sữadownregatesRap1a và ngăn chặn sự hình thành hắc tố thông qua con đường Akt-GSK3.

cistanche herbatác dụng làm trắng da chống oxy hóa

3.8. Các Exosomes sữa Ức chế Hình thành Melanogenesis trong Tế bào Melanoma của Con người, Tế bào Melanocytes và Mô Da Da

Cho rằngexosomes sữaức chếtạo hắc tốtrong tế bào chuột, tiếp theo, chúng tôi xác định liệu các exsome từ sữa có hiệu quả như nhau trong tế bào người hay không. Đầu tiên, khả năng tồn tại của tế bào hắc tố MNT -1 ở người và tế bào hắc tố của người NHEM được kiểm tra sau khi ủ với 20 hoặc 50 ug / mL exosomes sữa. Như được trình bày trong Hình 8A, không có sự khác biệt về khả năng tồn tại. Hoạt động của tyrosinase bị ức chế lần lượt là 43% và 85% trong các tế bào MNT -1 tiếp xúc với 20 ug / mL hoặc 50 ug / mL exosomes sữa (Hình 8B). NHEM cũng giảm tương ứng 34% và 66% thông qua xử lý với 20 ug / mL hoặc 50 ug / mL exosomes sữa (Hình 8B). Hơn nữa, hàm lượng melanin được đo trong các tế bào MNT -1 và NHEM tiếp xúc với các exomes sữa. Kết quả là, tổng hợp melanin trong các tế bào MNT -1 tiếp xúc với 20 ug / mL hoặc 50 ug / mLexosomes sữađã bị ức chế lần lượt là 37% và 58%, và trong các tế bào NHEM, việc xử lý exosome trong sữa đã cản trở sự tổng hợp melanin tương ứng là 36% và 62% (Hình 8C). Ngoài ra, tác dụng làm sáng da củaexosomes sữađã được xác nhận thêm bằng cách sử dụng các mô da người. Sau khi xử lý với exosomes sữa trong mô người, tương đốilàm trắng Các hiệu ứng được quan sát thấy vào các ngày 3, 9, 12 và 14. Kết quả là chúng tôi nhận thấy rằng màu da ở các mô tiếp xúc với exosome sữa có vẻ sáng hơn màu da ở các mô đối chứng (Hình 8D). Mức độ sắc tố được tính bằng giá trị L, là giá trị đại diện cho độ sáng. Sắc tố tiến triển chậm hơn ở các mô da được xử lý exosome bằng sữa so với các mô da đối chứng (Hình 8D). Nhóm thử nghiệm được điều trị bằngexosomes sữacho thấy kích thước hạt melanin nhỏ hơn và lượng sắc tố melanin thấp hơn so với nhóm đối chứng (Hình 8E). Kết quả đo hàm lượng melanin sau 14 ngày các exomes sữa ức chế sự tổng hợp melanin trong các mô của con người (Hình 8F). Do đó, chúng tôi kết luận rằng milkexomes ức chếtạo hắc tốtrong tế bào và mô của con người.

4. Thảo luận

Các nghiên cứu về điều hòa exomestạo hắc tốđã báo cáo rằng exosomes có nguồn gốc từ tế bào sừng có tác dụng làm trắng. Tế bào hắc tố và các tế bào sừng xung quanh có chức năng kết nối với nhau để tạo thành các đơn vị hắc tố trong biểu bì da [23,24]. Các yếu tố hòa tan có nguồn gốc từ tế bào sừng điều chỉnh sự hình thành hắc tố của các tế bào hắc tố lân cận. Tiết ra từ tế bào sừng bình thường thúc đẩy quá trình hình thành hắc tố bằng cách điều chỉnh biểu hiệntạo hắc tố-các protein liên quan [23–25]. Ngoài ra, trong mộtlàm trắngnghiên cứu sử dụng exosomes chiết xuất từ ​​tế bào, gần đây đã có báo cáo rằng exosomes được chiết xuất từ ​​tế bào gốc / mô đệm có nguồn gốc từ mô humanadipose cho thấy hiệu quả làm sáng da ở các tế bào hắc tố chuột [26]. Cũng có một báo cáo rằng exosomes chiết xuất từ ​​thực vật có tác dụng làm trắng da. Các túi ngoại bào chiết xuất từ ​​lá và mô phân sinh của cây D. morbifera có tác dụng chống tạo hắc tố trên tế bào hắc tố chuột và da người khỏe mạnh [27]. Trong nghiên cứu của chúng tôi, tác dụng làm trắng của các exosomes chiết xuất từ ​​sữa đã được khảo sát.

So với exosomes chiết xuất từ ​​huyết tương hoặc dịch nuôi cấy, exosomes chiết xuất từ ​​sữa có ưu điểm là không chỉ có một lượng lớn exosomes chiết xuất được trên một đơn vị thể tích mà còn có giá thành rẻ [26,27]. Tại vìexosomes sữacó thành phần hóa học tương tự như thành phần của màng tế bào, chúng thể hiện tính sinh miễn dịch và độc tính tế bào thấp hơn và có tính tương hợp sinh học cao [28,29]. Gần đây, khi cho chuột mô hình viêm đại tràng gây ra bởi DSS (muối dextran sulfat natri) sữa, sự biểu hiện của các cytokine tiền viêm IL -6 và TNF giảm so với nhóm đối chứng, do đó làm giảm viêm và cải thiện viêm ruột hoại tử [30, 31]. Ngoài ra, việc tiêu thụ các exosomes sữa trong mô hình chuột bị bệnh loãng xương đã cải thiện tình trạng viêm khớp bằng cách tăng mật độ xương và giảm các cytokine gây viêm [32,33]. Cho đến nay, ảnh hưởng của các exosomes sữa được tập trung vào các hiện tượng miễn dịch làm giảm các cytokine tiền viêm và phát triển xương, chẳng hạn như giảm viêm ruột và cải thiện chứng loãng xương. Trong nghiên cứu này, bên cạnh phương pháp lấyexosomes sữa, itwas khẳng định khi thoa lên da có tác dụng dưỡng dalàm trắng. Điều này cho thấy rằng nó có thể được ứng dụng để điều trị các bệnh khác nhau bằng cách tăng cường hoạt động sinh lý bằng cách sử dụng exosomes sữa trong tương lai.

Mặc dù nghiên cứu này cho rằngexosomes sữaức chếtạo hắc tố, người ta đã biết rằng whey protein như casein, -lactoglobulin và -lactalbumin có tác dụng làm trắng da. -lactoglobulin làm giảm hoạt động của tyrosinase trong tế bào hắc tố của người [18], và k-casein ức chế sự hình thành hắc tố trong tế bào hắc tố B16 của chuột [17]. Điều thú vị là nhiều thành phần trong số này cũng có trong các exsome của sữa. Theo kết quả phân tích protein của các exomes sữa, casein, -lactoglobulin và -lactalbumin được phân bố trong các đại thể [15,34,35]. Các exosomes sữa chứa các microRNA cũng như protein. Là kết quả của một microarray miRNA sử dụng các exosomes sữa của Izumi và các đồng nghiệp, miR -2478, miR -1777 b, miR -1777 a, let -7 b và miR {{16 }} được phân phối nhiều trong các exomes sữa [13]. Trong nghiên cứu này, ngoại trừ miR -2478, trong số các microRNA này, miR -1777 b, miR -1777 a, let -7 b và miR -1224 được hiển thị không có sự khác biệt về hoạt động tyrosinase so với nhóm đối chứng (Hình S2). miR -2478 nhiều nhất trongexosomes sữavà giảm khả năng hoạt động của tyrosinasea. Tuy nhiên, sự biểu hiện của các gen MITF và TYR liên quan đến làm trắng giảm nhiều hơn ở các tế bào được điều trị bằngexosomes sữaso với trong các ô được xử lý chỉ bắt chước miR -2478. Những kết quả này chỉ ra rằng một số thành phần, bao gồm microRNA trong milkexomes, có liên quan đếnlàm trắnghoạt động.

Hầu hết các microRNA trong các exsome của sữa thực hiện các chức năng sinh học bằng cách ức chế sự biểu hiện của các gen mục tiêu trong tế bào nhận. Trong nghiên cứu này, miR -2478 cũng ức chế tổng hợpmelanin bằng cách nhắm mục tiêu Rap1a làm gen mục tiêu. Mặc dù chúng không phải là microRNA có nguồn gốc từ sữa, các microRNA kiểm soát sự biểu hiện của các gen liên quan đến làm trắng đã được báo cáo. Khi bắt chước miR -27 a -3 p của con người được áp dụng cho tế bào biểu bì chuột, nó ức chế biểu hiện Wnt3a và do đó ức chế tổng hợp melanin [36] và miR ngoài tử cung -218 ức chế hoạt động TYR bằng cách giảm biểu hiện MITF trong tế bào hắc tố melanoma ở murine [37]. miR -203 quảng cáotạo hắc tốthông qua con đường CREB1 / MITF / Rab27b bằng cách nhắm mục tiêu Kif5b trong khối u ác tính [38]. Có 79 microRNA trong exosomes sữa

microRNA trongexosomes sữacó nguồn gốc từ bò [13]. Do đó, cần nghiên cứu sâu hơn về hoạt động sinh lý của các ngoại tiết sữa.

5. Kết Luận

Phát hiện của chúng tôi cho thấy rằngexosomes sữalà ứng cử viên cho các tác nhân chống melanogenic làm giảm sắc tố bằng cách ức chế sự biểu hiện của các gen liên quan đến melanin (Hình 10). Ở các tế bào hắc tố và tế bào hắc tố, các exosomes sữa cho thấy sự ức chế TYR và giảm hàm lượng melanin so với đối chứng âm tính. Ngoài ra, những hiệu ứng này được dàn xếp bởi miR -2478 từexosomes sữa. Do đó, các exosomes sữa có thể hữu ích cho sự phát triển của chức nănglàm trắngmỹ phẩm có độc tính tế bào thấp.

cistanchetác dụng làm trắng da chống oxy hóa