Hoạt động đa hướng của Bakuchiol chống lại các cơ chế tế bào gây lão hóa da mặt - Bằng chứng thực nghiệm cho phương pháp điều trị toàn diện Phần 1

trừu tượng

Khách quan: Lão hóa da là một quá trình đa yếu tố liên quan đến sự hình thành các loại oxy phản ứng, viêm liên tiếp làm giảm khả năng sống của tế bào biểu bì và trung bì, đồng thời dẫn đến tổn thương chất nền ngoại bào. Các phương thức điều trị thẩm mỹ da liễu hiệu quả nên giải quyết các dấu hiệu này một cách lý tưởng theo cách tiếp cận toàn diện. Ở đây, chúng tôi đã xác định hồ sơ hoạt động tương ứng của bakuchiol, một meroterpene có nguồn gốc từ thực vật, trong một loạt các nghiên cứu in vitro, ex vivo và in vivo và so sánh nó với retinol, hiện được coi là tiêu chuẩn vàng trong mỹ phẩm chống lão hóa tại chỗ.

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có thể loại bỏ các loại oxy phản ứng, ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra và cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.

Nhấp vào Chất chống oxy hóa Cistanche Tubulosa

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

phương pháp: Khả năng và sức mạnh chống oxy hóa của bakuchiol và retinol được phân tích bằng cách đo mức khử 2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) thông qua phân rã hấp thụ của nó và quang phổ cộng hưởng spin electron tương ứng. Ảnh hưởng đến prostaglandin E2 (PGE2), yếu tố ức chế di chuyển đại thực bào (MIF), yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi 7 (FGF7), collagen loại I và VII (COL1A1, COL7A1), nồng độ fibronectin (FN) cũng như quá trình chuyển hóa tetrazolium tan trong nước 1 (WST-1) đã được xác định trong nguyên bào sợi ở da người. Tái tạo biểu bì được đánh giá bằng cách sử dụng mô hình chữa lành vết thương trong ống nghiệm. Nồng độ protein FN đã được phân tích ex vivo sau khi xử lý bằng công thức có chứa bakuchiol, retinol hoặc phương tiện sử dụng chất lỏng vỉ hút. Cải thiện tình trạng da được xác định in vivo trong một nghiên cứu so sánh hai mặt sau khi sử dụng bakuchiol hoặc phương tiện.

Kết quả: Trái ngược với retinol, bakuchiol thể hiện hiệu quả chống oxy hóa cao. Mức PGE2 và MIF đã giảm đáng kể bởi cả bakuchiol và retinol. Bakuchiol chứ không phải retinol làm tăng đáng kể nồng độ protein FGF7. Mức độ chuyển hóa WST-1 được tăng cường đáng kể bởi bakuchiol và retinol. Ứng dụng Bakuchiol và retinol dẫn đến sự gia tăng đáng kể nồng độ protein COL1A1, COL7A1 và FN. Các vết thương được bổ sung bakuchiol nhưng không chứa retinol cho thấy sự gia tăng đáng kể trong quá trình tái tạo biểu bì. Về mặt lâm sàng, các khu vực được điều trị bằng công thức chứa bakuchiol cho thấy giá trị protein FN tăng đáng kể về mặt thống kê sau 4-tuần áp dụng so với các khu vực không được điều trị và các khu vực được điều trị bằng phương tiện.

Phần kết luận: Những dữ liệu này cung cấp bằng chứng về hiệu quả đa chiều của bakuchiol chống lại các dấu hiệu lão hóa da của tế bào. Hồ sơ hoạt động của nó chia sẻ một số tính năng phổ biến với retinol nhưng cho thấy một số tác động tích cực chưa được biết đến cho đến nay trong các nghiên cứu của chúng tôi, cụ thể là kích thích thành phần ma trận ngoại bào quan trọng FN, đồng thời tăng tốc tái tạo biểu bì và chữa lành vết thương.

TỪ KHÓA

chống lão hóa, bakuchiol, yêu cầu chứng minh in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, cấu trúc/sinh lý da

GIỚI THIỆU

Da lão hóa được đặc trưng bởi các nếp nhăn, sắc tố không đồng đều, da sần sùi và lỏng lẻo. Những dấu hiệu lâm sàng này là kết quả của sự thay đổi cấu trúc và trao đổi chất gây ra bởi quá trình lão hóa bên trong và bên ngoài. Lão hóa nội tại được cho là do các yếu tố bao gồm rút ngắn telomere, viêm mãn tính, đột biến đơn DNA ty thể và các gốc tự do [1]. Da lão hóa hơn nữa bao gồm việc giảm các hệ thống chống oxy hóa của nó [2]. Ngoài ra, tốc độ tăng sinh tế bào giảm do quá trình lão hóa sinh học dẫn đến mất cấu trúc và chức năng của da. Lão hóa bên ngoài chủ yếu được kích hoạt bởi bức xạ tia cực tím và ảnh hưởng của môi trường. Những xúc phạm này dẫn đến tổn thương da, củng cố sự suy giảm theo thời gian và đẩy nhanh quá trình lão hóa da. Da người càng mất khả năng đối phó với tình trạng viêm nhiễm trong suốt quá trình lão hóa, dẫn đến tình trạng tiền viêm mãn tính.

Ứng dụng tại chỗ của retinoids như axit retinoic, retinal hoặc retinol được coi là tiêu chuẩn vàng lâm sàng để điều trị chống lão hóa hiệu quả [3, 4]. Cơ chế phân tử của retinoids đã được mô tả rộng rãi [5–10]. Retinoids tại chỗ làm giảm hiệu quả các dấu hiệu lão hóa có thể nhìn thấy như nếp nhăn, chảy xệ hoặc thô ráp [4, 11] và giảm sự mất sắc tố của da bị tổn thương do ánh sáng bao gồm livedo reticularis và lentigines tím [12]. Tuy nhiên, điều trị tại chỗ bằng retinoids có thể dẫn đến khô và kích ứng da phụ thuộc vào nồng độ [13]. Vì ứng dụng của retinol gây ra các phản ứng bất lợi nhỏ so với các retinoid khác như axit retinoic [6, 14], nên nó là một hoạt chất được sử dụng rộng rãi trong điều trị lão hóa da mặt bằng mỹ phẩm.

Trái ngược với retinol đã được áp dụng trong các sản phẩm chăm sóc da từ năm 1984 [15], bakuchiol chỉ mới được chú ý gần đây như một hợp chất chống lão hóa tại chỗ. Bakuchiol là một meroterpene (Hình 1) có nguồn gốc từ hạt Psoralea corylifolia. Nó đã được sử dụng trong y học cổ truyền Ấn Độ và Trung Quốc trong nhiều thế kỷ [16, 17] và được dung nạp tốt [18]. Bakuchiol được đề xuất để thể hiện các chức năng giống như retinol, như trong một mô hình thay thế da, cả hai chất đều thể hiện các kiểu biểu hiện gen tương tự trong ống nghiệm [19] và cải thiện tổn thương da do ánh nắng trong cơ thể [20]. Do đó, nó cũng được gọi là một chất tương tự retinoid chức năng có nguồn gốc từ thực vật [21]. Các nghiên cứu sâu hơn đã chứng minh chất chống oxy hóa [19, 22–24], chống viêm [19, 25–27], kháng khuẩn [28] cũng như tác dụng chống tăng sinh và chống khối u [29, 30] của bakuchiol.

Để cải thiện và trì hoãn hiệu quả quá trình lão hóa da do nhiều yếu tố, các cơ chế tế bào khác nhau cần được giải quyết theo cách tiếp cận tích hợp. Bakuchiol đồng thời điều chỉnh các mục tiêu khác nhau khiến nó trở thành một hợp chất đầy hứa hẹn về mặt này. Vì stress oxy hóa và viêm có liên quan chặt chẽ đến lão hóa da, nên việc ngăn chặn chúng bằng bakuchiol có thể thúc đẩy tình trạng da tổng thể. Tuy nhiên, chất lượng của các bằng chứng khoa học hiện tại gần đây đã được đánh giá nghiêm túc [31]. Trong bối cảnh này, chúng tôi đã xác định (i) khả năng chống oxy hóa và (ii) chống viêm của bakuchiol và retinol, đồng thời kiểm tra khả năng cải thiện chuyển hóa tế bào và tổng hợp yếu tố tăng trưởng 7 được tóm tắt là (iii) hoạt động của tế bào. Chúng tôi đã phân tích thêm liệu bakuchiol và retinol có ảnh hưởng đến sự biểu hiện của một số (iv) thành phần ECM nhất định và cải thiện (v) tái tạo và tái biểu mô biểu bì hay không. Cuối cùng, một nghiên cứu in vivo đã được tiến hành để xác minh khả năng chống lão hóa lâm sàng của bakuchiol trên da người.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

vật liệu thử nghiệm

Bakuchiol được lấy từ Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Hoa Kỳ). Retinol được mua từ Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Hoa Kỳ). Đối với các thí nghiệm nuôi cấy tế bào, cả hai chất thử nghiệm đều được pha loãng mới trong DMSO (Merck, Darmstadt, Đức). Đối với dung dịch gốc DMSO, nồng độ được áp dụng của các chất thử nghiệm gấp 1000-cao hơn nồng độ cao nhất được áp dụng trong nuôi cấy tế bào tạo ra 0.1 phần trăm DMSO trong môi trường hoặc dung dịch đệm. Các pha loãng tiếp theo được thực hiện bằng cách sử dụng phương tiện hoặc bộ đệm với 0.1 phần trăm DMSO. Do đó, tất cả các thí nghiệm nuôi cấy tế bào được thực hiện với sự có mặt của 0.1 phần trăm DMSO. Đối với các nghiên cứu in vivo, retinol bôi ngoài da được bào chế trong cùng một phương tiện với bakuchiol.

nghiên cứu trong ống nghiệm

Xác định khả năng chống oxy hóa

Bakuchiol, retinol (cả hai đều được áp dụng ở nồng độ cuối cùng là 100μM) hoặc trolox tiêu chuẩn cao (Merck, nồng độ cuối cùng là 25μM) đã được pha loãng trong DMSO. Tóm lại, 30μL các hợp chất này (10-có nồng độ cao hơn nồng độ xét nghiệm cuối cùng) đã được thêm vào 96-tấm đáy phẳng giếng. Sau đó, 270μL DPPH 39ug/mL (Merck, được pha loãng trong hỗn hợp nước/ethanol 1:1) nhanh chóng được bổ sung vào từng giếng để thu được nồng độ cuối cùng là 10% DMSO. Để đối chứng, dung dịch DPPH được ủ với chất thử thiếu DMSO. Hơn nữa, các biện pháp kiểm soát mẫu trắng được thực hiện bằng cách ủ bakuchiol hoặc retinol với nước/etanol (1:1) hoặc chỉ hỗn hợp nước/etanol (1:1) chứa 10% DMSO khi không có DPPH. Sau 10, 30 và 60 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 524nm được đo bằng đầu đọc vi bản đa chế độ Spark (Tecan, Männedorf, Thụy Sĩ). Tín hiệu của các điều khiển trống đã bị trừ.

Xác định khả năng chống oxy hóa

HDF được cấy vào các đĩa giếng {{0}}với 150 000 tế bào/giếng trong môi trường 2 mL chứa 10% huyết thanh bê và được ủ trong 24 giờ. Sau đó, môi trường cũ bị loại bỏ và các tế bào được xử lý bằng môi trường chứa 2% huyết thanh bê và bakuchiol hoặc retinol ở nồng độ cuối cùng là 10 μM. HDF đối chứng được bổ sung 0,1% DMSO thiếu bakuchiol hoặc retinol. Kiểm soát trống được thực hiện bằng cách ủ môi trường không có tế bào. Sau 24 giờ, môi trường đã điều hòa được chuyển sang cột kéo sợi của bộ cô đặc protein Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Đức) và được cô đặc khoảng 10-lần. Thể tích của tất cả các chất nổi trên bề mặt trung bình được cân bằng bằng cách bổ sung lại dòng chảy qua. Mức protein FGF7 của môi trường điều hòa đậm đặc được phân tích bằng cách sử dụng bộ ELISA có bán trên thị trường theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Bio-Techne GmbH). Các phép đo được thực hiện bằng đầu đọc vi bản đa chế độ Spark (Tecan). Các tín hiệu thu được từ các điều khiển trống đã bị trừ đi và mức protein FGF7 được chuẩn hóa thành tổng số tế bào được xác định bằng cách sử dụng bộ đếm tế bào (Scepter, Merck).

Xác định chuyển hóa WST-1

HDF được cấy vào các đĩa giếng {{0}}với 3000 tế bào/giếng trong môi trường 100μL chứa 10% huyết thanh bê và được ủ trong 24 giờ. Môi trường cạn kiệt đã bị loại bỏ và các tế bào được xử lý bằng môi trường 100μL chứa retinol hoặc bakuchiol ở nồng độ cuối cùng tương ứng là 1 μM hoặc 10 μM. HDF đối chứng được bổ sung 0,1% DMSO thiếu bakuchiol hoặc retinol. Để kiểm soát thêm, các tế bào được xử lý bằng 10% triton-X (Merck). Kiểm soát trống được thực hiện bằng cách ủ môi trường không có tế bào. Sau 72 giờ, các tế bào được nhuộm bằng thuốc thử tăng sinh tế bào có bán trên thị trường WST-1 theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Merck). Độ hấp thụ được đo ở 450 và 620nm bằng cách sử dụng đầu đọc vi bản vô cực M200 của Tecan (Tecan). Sự khác biệt trong các phép đo này đã được sử dụng để phân tích. Tín hiệu của các điều khiển trống đã bị trừ.

Xác định nồng độ protein COL1A1 và COL7A1

HDF được cấy vào các đĩa giếng {{0}}với 10  000 tế bào/giếng trong môi trường 100μL chứa 10% huyết thanh bê và được ủ trong 24 giờ. Bakuchiol hoặc retinol được pha loãng trong môi trường 100μL không có huyết thanh bê và được bổ sung vào môi trường hiện tại ở nồng độ cuối cùng tương ứng là 1 μM hoặc 10 μM. Đối chứng được bổ sung 100μL môi trường không có huyết thanh mang lại nồng độ 0,1% DMSO tương ứng với phương pháp điều trị bằng retinol và bakuchiol. Là một tiêu chuẩn cao, yếu tố tăng trưởng biến đổi 10 ng/mL- (TGF- ) và natri ascorbat 11ug/mL (cả Merck) đã được áp dụng. Kiểm soát trống được thực hiện bằng cách ủ môi trường không có tế bào. Sau 4 giờ, nồng độ protein COL1A1 và COL7A1 của môi trường điều hòa đã được phân tích bằng bộ dụng cụ ELISA có bán trên thị trường theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, United States). Các phép đo được thực hiện bằng đầu đọc vi bản đa chế độ Spark (Tecan). Tín hiệu của các điều khiển trống đã bị trừ. Mức protein COL1A1 và COL7A1 đã được chuẩn hóa thành tổng lượng protein ly giải tế bào được xác định bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm axit bicinchoninic có bán trên thị trường (Thermo Fisher Khoa học) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Điều kiện tiên quyết để sử dụng kết quả là phản ứng dương tính của tế bào với TGF- và natri ascorbat tiêu chuẩn cao.

Để phân tích nồng độ protein COL7A1 sau thời gian ủ kéo dài, HDF được cấy vào 96-các đĩa giếng có 3000 tế bào/giếng trong môi trường 100μL chứa 10% huyết thanh bê. Tất cả các phương pháp điều trị, kiểm soát và phân tích được thực hiện như mô tả ở trên, ngoại trừ bakuchiol và retinol chỉ được sử dụng ở nồng độ cuối cùng là 10 μM. Các tế bào được thu hoạch khi đạt đến hợp lưu con, đặc biệt là sau 72 hoặc 96 giờ.

Xác định mức protein FN

HDF được cấy vào các đĩa giếng {{0}}với 10 000 tế bào/giếng trong môi trường 100μL chứa 10% huyết thanh bê và được ủ trong 24 giờ. Môi trường cũ được thay thế bằng môi trường chứa 2% huyết thanh bê và bakuchiol hoặc retinol ở nồng độ cuối cùng là 10 μM. Đối chứng được bổ sung 0,1% DMSO thiếu bakuchiol hoặc retinol. Kiểm soát trống được thực hiện bằng cách ủ môi trường không có tế bào. Sau 24 giờ, mức protein FN của môi trường điều hòa được phân tích bằng cách sử dụng bộ ELISA có bán trên thị trường theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Hệ thống R & D, Minneapolis, Minnesota, Hoa Kỳ). Các phép đo được thực hiện bằng đầu đọc vi bản đa chế độ Spark (Tecan). Tín hiệu của các điều khiển trống đã bị trừ. Mức protein FN đã được chuẩn hóa thành tổng lượng protein lysate của tế bào được xác định như đã nói ở trên.

Xác định khả năng tái tạo biểu bì trong mô hình chữa lành vết thương trong ống nghiệm

Các thí nghiệm đã được tiến hành như mô tả trước đây [34]. Để điều trị các mô hình chữa lành vết thương, bakuchiol hoặc retinol đã được pha loãng trong DPBS và thêm vào vùng vết thương với nồng độ cuối cùng là 100μM (5 μL mỗi vết thương). Các vết thương tham chiếu được bổ sung cùng một lượng DPBS chứa 0,1% DMSO mà không có bakuchiol hoặc retinol. Các vết thương khác không được điều trị như một biện pháp kiểm soát thêm. Các mô hình chữa lành vết thương được ủ trong 43 giờ ở độ ẩm 95%, 5% CO2 và 37 độ. Sau đó, các mẫu được đông lạnh nhanh trong isopentane được làm lạnh trước bằng nitơ lỏng và được bảo quản ở -80 độ. Quá trình tái tạo biểu mô được đánh giá trong các phần máy làm lạnh nhuộm màu hematoxylin và eosin bằng cách đo chiều dài của lớp biểu bì được tái tạo bằng kính hiển vi Leica DMLS (10×), máy ảnh Leica MC 170 HD CCD và phần mềm Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Đức). Định lượng đã được thực hiện một cách mù quáng.

Nghiên cứu in vivo I và II

Đối với cả hai nghiên cứu in vivo, các khuyến nghị của phiên bản hiện tại của Tuyên bố Helsinki và hướng dẫn của Hội nghị quốc tế về hài hòa hóa thực hành lâm sàng tốt được coi là có thể áp dụng cho nghiên cứu mỹ phẩm. Giao thức nghiên cứu tôi đã được phê duyệt bởi Ủy ban đạo đức độc lập Freiburg (mã feki 08/2610). Trong cả hai nghiên cứu, tất cả các tình nguyện viên đều cung cấp sự đồng ý bằng văn bản, có hiểu biết. Đối tượng có làn da khỏe mạnh, thuộc loại da Fitzpatrick từ I đến III và việc bắt đầu hoặc thay đổi thuốc nội tiết tố là một tiêu chí loại trừ.

Trong khoảng thời gian chuẩn bị trước 10-ngày và trong suốt toàn bộ thời gian nghiên cứu, các đối tượng được yêu cầu hạn chế tiếp xúc với tia cực tím ở các khu vực thử nghiệm. Các hoạt động thúc đẩy mồ hôi bị cấm 24 giờ trước khi đánh giá theo lịch trình.

Một nhà điều tra đã chứng minh việc áp dụng đúng các công thức bằng cách sử dụng một lượng tương ứng với chế độ chăm sóc da thông thường của các đối tượng.

Nghiên cứu I: Xác định nồng độ protein FN ngoài cơ thể sống

Trong số 52 đối tượng nữ tham gia nghiên cứu điều khiển phương tiện này, 33 đối tượng đã hoàn thành nghiên cứu và dữ liệu của 31 đối tượng (30–64 tuổi, tuổi trung bình: 50,9 tuổi) được đưa vào phân tích dữ liệu. Việc bỏ học xảy ra do đại dịch SARS-CoV-2 và lý do cá nhân (13 đối tượng) cũng như do phản ứng không tương thích (năm đối tượng, do điều trị bằng retinol). Các phản ứng không tương thích qua trung gian retinol cũng như các vấn đề về lấy mẫu gây ra số lượng đối tượng được thử nghiệm khác nhau cho từng tình trạng (xem kết quả để biết chi tiết).

Bảy ngày trước khi đánh giá theo lịch trình, việc sử dụng các sản phẩm chăm sóc da, chất tẩy rửa và xà phòng trên cánh tay đều bị cấm. Vào ngày nghiên cứu đầu tiên, bốn khu vực kiểm tra đã được thiết lập trên cẳng tay bên trong. Trên hai khu vực thử nghiệm, hai công thức verum đã được áp dụng để chứa {{0}}}.5% bakuchiol hoặc 0,15% retinol tương ứng. Theo một ý kiến ​​được công bố bởi Ủy ban Khoa học về An toàn Người tiêu dùng năm 2016, nồng độ retinol áp dụng được coi là một phương pháp điều trị thẩm mỹ [35]. Trong hai khu vực thử nghiệm khác, phương tiện tương ứng đã được sử dụng hoặc khu vực đó không được xử lý. Vị trí của các địa điểm điều trị đã được hoán vị. Sau 4 tuần áp dụng các công thức thử nghiệm hai lần mỗi ngày, các tình nguyện viên quay trở lại viện thử nghiệm. Trong mỗi khu vực thử nghiệm, ba vỉ hút (đường kính 7 mm) đã được tạo ra như mô tả trước đây [36, 37]. Tóm lại, các cốc vỉ hút tùy chỉnh được đặt vào các khu vực thử nghiệm và áp dụng chân không 550–850 mbar. Sau khoảng 90–150 phút, khi các vết phồng rộp hình thành, chân không được giải phóng và chất lỏng được hút ra khỏi vết phồng rộp bằng 24-kim đo. Chất lỏng được đông lạnh ngay lập tức ở -80 độ trên đá khô cho đến khi phân tích. Nồng độ protein FN đã được định lượng trong các mẫu chất lỏng vỉ hút bằng cách sử dụng bộ ELISA (Hệ thống R & D) có bán trên thị trường. Các phép đo được thực hiện bằng đầu đọc vi bản đa chế độ Spark (Tecan). Mức FN đã được chuẩn hóa thành tổng mức protein của các mẫu chất lỏng vỉ hút được xác định như đã nói ở trên.

Nghiên cứu II: Xác định in vivo về cải thiện tình trạng da

Tổng cộng, 43 nữ tình nguyện viên đã tham gia vào nghiên cứu so sánh hai khuôn mặt được điều khiển bằng phương tiện này. Theo đánh giá y tế, các đối tượng có loại da hỗn hợp (da khô, da thường, da dầu và da hỗn hợp). 34 đối tượng (39–66 tuổi, tuổi trung bình: 56,2 tuổi) đã hoàn thành nghiên cứu và được đưa vào phân tích. Việc bỏ học là do các vấn đề kỹ thuật và không tuân thủ (tám đối tượng), cũng như các phản ứng không tương thích (một đối tượng, do xử lý phương tiện và bakuchiol gây ra).

Hai tuần trước khi bắt đầu nghiên cứu và trong toàn bộ thời gian nghiên cứu, các tình nguyện viên được yêu cầu không sử dụng các sản phẩm làm rám nắng hoặc các phương pháp điều trị thẩm mỹ da mặt chuyên sâu (ví dụ: loại bỏ các lớp da trên bề mặt). Trong 10-giai đoạn điều hòa trước trong ngày và trong suốt nghiên cứu, các đối tượng được yêu cầu không trang điểm vĩnh viễn, điều trị lông mi và lông mày, mặt nạ mắt và miếng dán. Ba ngày trước lần đánh giá đầu tiên, các đối tượng được yêu cầu không sử dụng các sản phẩm chăm sóc da mặt. Vào buổi tối trước ngày chấm điểm theo lịch trình, các đối tượng được yêu cầu ngừng bôi mỹ phẩm trang trí.

Trong 7 ngày đầu tiên của 10-giai đoạn điều hòa trước trong ngày, các đối tượng nhận được một lọ kem có chứa kem phương tiện nghiên cứu (thiếu bất kỳ thông tin nào về thành phần) và bôi kem hai lần mỗi ngày lên toàn bộ khuôn mặt của họ. Lúc ban đầu, các tình nguyện viên thực hiện tự chấm điểm. Cụ thể, họ đánh giá trực quan diện mạo tổng thể của da mặt bằng cách quan sát độ tươi tắn và rạng rỡ cũng như bất kỳ dấu hiệu lão hóa da nào. Do đó, một thang đo tương tự trực quan từ 1 (rất mệt mỏi, già) đến 10 (rất tươi, không có dấu hiệu của da lão hóa) đã được áp dụng. Sau đó, các đối tượng nhận được hai lọ kem mù có chứa verum (phương tiện chứa 0,5 phần trăm bakuchiol) hoặc phương tiện tương ứng mà không có bất kỳ thông số kỹ thuật nào về nội dung. Trong thời gian nghiên cứu kéo dài 12 tuần, một bên mặt được điều trị hai lần mỗi ngày bằng verum trong khi mặt còn lại được điều trị hai lần mỗi ngày bằng phương tiện. Việc phân bổ các phương pháp điều trị cho các địa điểm thử nghiệm đã được hoán vị. Sau 12 tuần sử dụng thường xuyên, các tình nguyện viên lại thực hiện tự chấm điểm như đã nói ở trên.

Phân tích thống kê

Các phân tích thống kê được thực hiện bằng Microsoft Excel cho Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, United States), SAS Software Package for Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Germany) và GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego , California, Hoa Kỳ).

Phân phối dữ liệu bình thường được đánh giá bằng thử nghiệm của Shapiro–Wilk. Nếu phân phối bình thường đã được xác nhận, thì phân tích phương sai đo lặp lại (RM-ANOVA) với so sánh theo cặp bài hoc đã được thực hiện. Nếu giả thuyết về tính quy tắc bị bác bỏ, thì thứ hạng dữ liệu gốc do Blom biến đổi được đánh giá bằng cách sử dụng RM-ANOVA với so sánh theo cặp sau đại học hoặc dữ liệu gốc được đánh giá bằng cách sử dụng kiểm tra thứ hạng dấu hiệu Wilcoxon. Tất cả các bài kiểm tra thống kê đều có tính hai mặt ở mức ý nghĩa alpha=0.05.

KẾT QUẢ

nghiên cứu trong ống nghiệm

Xác định tác dụng chống oxy hóa

Để phân tích (i) tác dụng chống oxy hóa của bakuchiol và retinol, chúng tôi đã thực hiện hai thử nghiệm khác nhau sử dụng DPPH làm phân tử dò.

khả năng chống oxy hóa

Khả năng chống oxy hóa được xác định bằng cách đo mức giảm DPPH thông qua sự phân rã hấp thụ của nó. Trolox tiêu chuẩn cao cho thấy khả năng chống oxy hóa tăng đáng kể so với đối chứng (p=0.0000 cho tất cả các mốc thời gian được chỉ định) xác minh phép đo phù hợp (Hình 2a). Về đối chứng, độ hấp thụ trong các mẫu được xử lý bằng bakuchiol cũng giảm đáng kể tại mọi thời điểm được nghiên cứu (10 phút: p=0.0003, 30 và 60 phút: p=0.0000 ) thể hiện khả năng chống oxy hóa tăng lên. Ngược lại, Retinol cho thấy khả năng chống oxy hóa không đáng kể so với đối chứng.

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】