Tác dụng bảo vệ thần kinh của bốn Phenylethanoid Glycoside trên H2O 2- Gây ra quá trình chết trên tế bào PC12 Qua con đường Nrf2 / ARE
Mar 04, 2022
Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao và Baiyi Lu 1, *
1. Giới thiệu
Stress oxy hóa, là sự mất cân bằng cân bằng nội môi chống oxy hóa, gây ra quá trình peroxy hóa lipid, tổn thương protein và DNA, lão hóa tế bào và chết tế bào. Quá trình này có thể góp phần vào một số rối loạn thoái hóa thần kinh, chẳng hạn như bệnh Alzheimer (AD), bệnh Parkinson (PD), và thiếu máu cục bộ / tái tưới máu [1]. Hydrogen peroxide (H2O2), là một trong những loại oxy phản ứng chính (ROS), được biết là gây ra quá trình peroxy hóa lipid và phá hủy DNA [2]. Hơn nữa, H2O2 là một nguồn nội sinh của các gốc tự do hydroxyl góp phần vào mức độ cơ bản của stress oxy hóa tế bào [3,4]. Do đó, các chiến lược điều trị để ngăn chặn quá trình chết rụng do stress oxy hóa có thể có tiềm năng trong điều trị các bệnh thoái hóa thần kinh.
Yếu tố hạt nhân erythroid 2- liên quan đến yếu tố 2 (Nrf2), là một yếu tố phiên mã có liên quan chặt chẽ với stress oxy hóa. Việc kích hoạt Nrf2 gây ra sự phiên mã của nhiều gen chống oxy hóa và giải độc, bao gồm heme oxygenase -1 (HO -1), NAD (P) H quinone oxidoreductase 1, chống viêm [13], và điều hòa miễn dịch [14 ] hoạt tính sinh học. Osmanthusfragrans là một thành phần phổ biến trong một số loại thực phẩm châu Á và đã được tiêu thụ từ lâu. Trước đây, chúng tôi đã chỉ ra rằng chiết xuất từ hoa O.fragrans giúp tăng cường khả năng học tập và trí nhớ trong không gian, ức chế tổn thương oxy hóa và thể hiện các hoạt động bảo vệ thần kinh trong quá trình lão hóa do d-galactose gây ra trên mô hình chuột ICR [15]. Salidroside, acteoside và isoacteoside là những phản ứng PhGs chính cho các hoạt động chống oxy hóa của chiết xuất hoa O.fragrans [16].
Các nghiên cứu về tác dụng bảo vệ thần kinh của PhGs đã thu được kết quả đáng mong đợi. Salidroside làm giảm đáng kể quá trình apoptosis của tế bào PC12 được tiếp xúc trong MPP plus [17,18]. Acteoside cũng làm dịu quá trình tự chết và stress oxy hóa do MPP gây ra trong tế bào PC12 [19] và tổn thương tế bào SH-SY5Y gây ra bởi A p 25-35- [20]. Echinacoside đã được nghiên cứu về quá trình chết rụng do yếu tố hoại tử khối u-a (TNFa) gây ra ở tế bào SH-SY5Y [21], độc tính dopaminergic do MPTP gây ra ở chuột [22], nuôi cấy chính tế bào vỏ chuột bị tổn thương glutamate [23], và { {19}} Tổn thương do OHDA gây ra trong tế bào PC12 [24]. Kết quả chỉ ra rằng PhG có tác dụng bảo vệ tế bào và là tác nhân tiềm năng để điều trị các bệnh thoái hóa thần kinh. Các nghiên cứu đã chỉ ra các đặc tính chống oxy hóa của PhG dưới nhiều hoạt tính sinh học khác đối với các hợp chất này [25]. Tuy nhiên, có rất ít nghiên cứu đã nghiên cứu cơ chế phân tử của PhGs chống lại độc tính oxy hóa.
Trong nghiên cứu của mình, chúng tôi đã chọn ra 4 PhG tiêu biểu như sau: salidroside (phenylethanoid monosaccharides), acteoside (phenylethanoid disaccharides), isoacteoside (phenylethanoid disaccharides), và echinacoside (phenylethanoid trisaccharides). Chúng tôi đã sử dụng một mô hình chết tế bào thần kinh bằng cách sử dụng các tế bào PC12 đã biệt hóa [26] để điều tra tác dụng bảo vệ và cơ chế phân tử của PhG trên mô hình tế bào PC12 cảm ứng H2O 2-. Chúng tôi đã chứng minh rằng PhGs đã kích hoạt con đường Nrf2 / ARE bằng cách liên kết với protein 1 liên kết với ECH giống Kelch (Keap1). Quá trình này điều chỉnh các enzym chống oxy hóa và tăng sức đề kháng của các tế bào PC12 đối với stress oxy hóa.
Điều trị rối loạn thoái hóa thần kinh:PhG từ cistanche
2. Kết quả
2.1. PhGs ức chế H2O {3}} Gây độc tế bào trong tế bào PC12
Tác dụng gây độc tế bào của H2O2 và PhGs (0. 1,1,5, và 1 0 卩 g / mL) trên tế bào PC12 đã được thử nghiệm. Kết quả cho thấy H2O2 làm mất khả năng sống của tế bào PC12 trong cách cư xử phụ thuộc vào nồng độ và phụ thuộc vào thời gian (Hình 1A). Sự tiếp xúc của các tế bào PC12 với 2 0 0 H2O2 trong 2 giờ dẫn đến khả năng sống sót của tế bào là 57,4 phần trăm. Tiền xử lý tế bào bằng PhGs ở 0. 1,1, 5 và 10 昭 / mL không ảnh hưởng đến khả năng tồn tại của tế bào (Hình 1B) và tế bào PC12 được bảo vệ rõ rệt khỏi H2O 2- gây ra thiệt hại bằng cách cải thiện khả năng tồn tại của ô là 9. 549-22. 141 phần trăm, 12. 092-25. 289 phần trăm, 1. 470-9. 289 phần trăm và 3. 411-11. 441 phần trăm, tương ứng ( Hình 1C). Tuy nhiên, tiền xử lý bằng salidroside (0,1 ^ g / mL), isoacteoside (0,1, 1, 5 và 10 ^ g / mL), echinacoside (0,1,1, và 5 ^ g / mL) cho thấy không có sự khác biệt đáng kể trên tế bào cảm ứng HzOz vết thương. Tiền xử lý tế bào bằng PhG cũng cải thiện đặc điểm hình thái do H2O2 gây ra (Hình 1D).
Hình 1.PhG ức chế H2O {1}} gây độc tế bào trong tế bào PC12. Khả năng sống sót của tế bào được phát hiện bằng xét nghiệm MTT. Tác dụng gây độc tế bào của H2O2 (A) và PhGs (B) ở các nồng độ khác nhau trên tế bào PC12. (C) H2O bị khử độc tính của PhGs 2- làm giảm khả năng sống của tế bào. Tế bào PC12 được ủ với PhG (0. 1, và 1 0 mg / mL) trong 24 giờ, sau đó được ủ với 2 0 0 pM H2O2 trong 2 lần nữa h sau khi các PhG được loại bỏ. (D) Quan sát hình thái. Tế bào sau khi xử lý được quan sát bằng kính hiển vi tương phản pha (x100), CK: nhóm bình thường, nhóm xử lý H2O2: H2O2, HL: nhóm xử lý liều lượng thấp salidroside, HH: nhóm xử lý liều lượng cao salidroside, ML: nhóm xử lý liều lượng thấp acteoside, MH: nhóm xử lý liều lượng cao acteoside, IL: nhóm xử lý liều lượng thấp isoacteoside, IH: nhóm điều trị liều lượng cao isoacteoside, SL: nhóm điều trị liều lượng thấp echinacoside, SH: nhóm điều trị liều lượng cao echinacoside. ** p <0,01 so="" với="" nhóm="" không="" được="" điều="" trị;="" #="" p=""><0,05, so="" với="" nhóm="" được="" xử="" lý="" h2o2;="" ##="" p=""><0,01, so="" với="" nhóm="" xử="" lý="">
2.2. PhG ức chế H2O 2- Gây ra sự tích tụ nội bào của ROS, Lipid Peroxidation (MDA) và Tăng hoạt động Superoxide Dismutase (SOD) trong Tế bào PC12
Việc các tế bào PC12 tiếp xúc với 2 0 0 pM H2O2 trong 2 giờ làm tăng mức ROS, hàm lượng MDA và giảm hoạt động của SOD (Hình 2). Tiền xử lý PhGs làm giảm mức ROS, salidroside, và acteoside, và liều lượng cao của tiền xử lý isoacteoside và echinacoside làm giảm đáng kể mức ROS (p <0,01). tiền="" xử="" lý="" bằng="" salidroside="" cho="" thấy="" không="" ảnh="" hưởng="" đến="" hàm="" lượng="" mda,="" nhưng="" tiền="" xử="" lý="" bằng="" acteoside="" làm="" giảm="" đáng="" kể="" hàm="" lượng="" mda="" (p=""><0,05). isoacteoside="" và="" echinacoside="" tiền="" xử="" lý="" làm="" giảm="" đáng="" kể="" hàm="" lượng="" mda="" đến="" mức="" lớn="">
Hình 2.PhG ngăn chặn sự tích tụ ROS và MDA và tăng hoạt động của SOD trong các tế bào PC12. Tế bào PC12 được ủ với PhG (0. 1, và 10 4 g / mL) trong 24 giờ, sau đó được ủ với 2 0 0|^ M H2O2 cho một tế bào khác 2 giờ sau khi các PhG được loại bỏ. (A) PhG đã chặn tích tụ ROS và MDA. (B) PhGs bị chặn tích tụ MDA. (C) PhGs làm tăng các hoạt động của SOD. CK: nhóm bình thường, Model: nhóm được xử lý bằng H2O2, Salidroside: nhóm được điều trị bằng salidroside, Acteoside: nhóm được điều trị bằng acteoside, Isoacteoside: nhóm được điều trị bằng isoacteoside, Echinacoside: nhóm được điều trị bằng echinacoside. ** p <0. 01="" so="" với="" nhóm="" chưa="" được="" xử="" lý;="" #="" p=""><0,05, so="" với="" nhóm="" được="" xử="" lý="" h2o2,="" ##="" p=""><0,01, so="" với="" nhóm="" được="" xử="" lý="">
2.3.PhGs H2O đảo ngược 2- Gây ra quá trình chết rụng trong tế bào PC12
Xử lý H2O2 (2 0 0|1M) trong 2 giờ làm tăng đáng kể quá trình chết rụng ở các tế bào PC12, với tổng tỷ lệ apoptotic lên đến 16,02 phần trăm (Hình 3). Tuy nhiên, tiền xử lý với PhGs (0,1 và 10 卩 g / mL) trong 24 giờ làm giảm tỷ lệ apoptosis theo cách phụ thuộc vào nồng độ (p <0,01). salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside="" và="" echinacoside="" làm="" giảm="" rõ="" rệt="" phần="" trăm="" quá="" trình="" tự="" chết="" của="" tế="" bào="" xuống="" 4.="" 750-6.="" 627="" phần="" trăm,="" 4.="" 413-5.="" 800="" phần="" trăm,="" 6.="" 593-10.="" 047="" phần="" trăm,="" và="" 1.="" 530-7.="" 510="" phần="" trăm,="" tương="">
Hình 3. PhGs đảo ngược H2O 2- gây ra quá trình apoptosis trong tế bào PC12. Tế bào PC12 được ủ với PhG (0. 1 và 1 0 卩 g / mL) trong 24 giờ, sau đó được ủ với 2 0 0 pM H2O2 trong 2 giờ nữa sau PhGs đã bị loại bỏ. Sau đó, quá trình apoptosis được đo bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy sử dụng đầu dò huỳnh quang PI / FITC. CK: nhóm bình thường, Model: nhóm được xử lý bằng H2O2, Salidroside: nhóm được điều trị bằng salidroside, Acteoside: nhóm được điều trị bằng acteoside, Isoacteoside: nhóm được điều trị bằng isoacteoside, Echinacoside: nhóm được điều trị bằng echinacoside. ** p <0,01 so="" với="" nhóm="" không="" được="" điều="" trị;="" ##="" p=""><0,01, so="" với="" nhóm="" xử="" lý="">
2.4. PhGs đảo ngược H2O 2- Gây ra sự điều hòa giảm biểu hiện protein của HO -1, NQO1, GCLC và GCLM
HO {{0}}, NQO1 và glutamate-cysteine ligase (GCL) là các enzym chống oxy hóa tế bào quan trọng và HO -1, NQO1, và xúc tác hoặc sửa đổi các tiểu đơn vị của GCL (GCLC hoặc GCLM) là Nrf 2- các gen hạ lưu quy định [27]. Sự biểu hiện protein của HO -1, NQO1, GCLC và GCLM đã được quan sát thấy sau khi điều trị. Một sự khác biệt rõ ràng đã được tìm thấy giữa sự biểu hiện protein của HO -1 và NQO1 có hoặc không có H2O2 (Hình 6A-C) (p <0. 0="" 1).="" phgs="" (0.="" 1="" và="" 1="" 0="" p="" ^="" g="" ml)="" đã="" đảo="" ngược="" sự="" điều="" hòa="" giảm="" h2o="" 2-="" gây="" ra="" sự="" điều="" hòa="" biểu="" hiện="" protein="" của="" ho="" -1="" (ngoại="" trừ="" salidroside="" ở="" {{32}="" }="" .1="" pg="" ml),="" nqo1="" (ngoại="" trừ="" acteoside="" ở="" 0.="" 1="" pg="" ml)="" (p=""><{{4 0}}.="" 0="" 1).="" h2o2="" cũng="" điều="" chỉnh="" giảm="" biểu="" hiện="" protein="" gclc="" và="" gclm="" (p=""><0. 0="" 5)="" (hình="" 6a,="" d,="" e).="" phgs="" (0.="" 1="" và="" 1="" 0="" pg="" ml)="" đã="" đảo="" ngược="" h2o="" 2-="" gây="" ra="" sự="" điều="" hòa="" giảm="" biểu="" hiện="" protein="" của="" gclc="" (ngoại="" trừ="" echinacoside="" ở="" 0,1="" pg="" ml)="" (p=""><0,01) và="" gclm="" (trừ="" salidroside="" ở="" 0,1="" pg="" ml)="" (p=""><0,01). sau="" đó,="" các="" chất="" ức="" chế="" hóa="" học="" đối="" với="" ho="" -1="" được="" sử="" dụng="" để="" đánh="" giá="" thêm="" vai="" trò="" của="" các="" enzym="" chống="" oxy="" hóa="" trong="" việc="" điều="" chỉnh="" sự="" bảo="" vệ="" của="" phg="" chống="" lại="" độc="" tế="" bào="" gây="" ra="" bởi="" h2o="" 2-.="" phgs="" (0,1="" và="" 10="" pg="" ml)="" ngăn="" cản="" h2o="" 2-="" gây="" độc="" tế="" bào,="" nhưng="" tác="" dụng="" bảo="" vệ="" đó="" đã="" bị="" đảo="" ngược="" bởi="" chất="" ức="" chế="" ho="" -1="" znpp="" (p=""><0,01) ở="" 20="" pm="" (hình="" 6f,="" p=""><0,01)>
2.5. Keap1 Phân tích biểu thức và lưu trữ phân tử
Trong các điều kiện sinh lý, Keap1 hoạt động như một protein kìm hãm Nrf2 bằng cách liên kết với miền Neh2 của Nrf2 và nhắm mục tiêu Nrf2 tới một ligase ubiquitin dựa trên Cul 3- để ubiquitin hóa khắp nơi và sự phân hủy sau đó bởi proteasome 26S [28]. Khả năng liên kết với Keap1 của PhGs được đánh giá bằng phân tích gắn kết phân tử để nghiên cứu cơ chế tác dụng chống oxy hóa của chúng.
Tác dụng chống oxy hóa: CistanchePhGs
3. Thảo luận
Chúng tôi đã nghiên cứu sự bảo vệ thần kinh của PhGs trên sự gây độc tế bào do H2O2 gây ra trong tế bào PC12. Kết quả cho thấy tiền xử lý PhGs ức chế đáng kể độc tính tế bào do HzOz gây ra, làm giảm mức ROS nội bào, cải thiện mức độ của các enzym chống oxy hóa nội bào và cuối cùng đảo ngược độc tính tế bào gây ra H2O 2- trong tế bào PC12. Hơn nữa, PhGs làm tăng hoạt hóa phiên mã của Nrf2, đảo ngược điều hòa giảm do HzOz gây ra đối với sự biểu hiện protein của HO -1, NQO1, GCLC và GCLM. Ngoài ra, PhGs cho thấy tương tác tiềm năng với vị trí liên kết Nrf2 trong protein Keap1.
Trong tổn thương tế bào PC12 2- do H2O 2- gây ra, sự peroxy hóa lipid, đề cập đến sự phân hủy lipid do oxy hóa, làm tăng tính thấm của màng, dẫn đến tổn thương tế bào [29]. Sự hình thành MDA được sử dụng rộng rãi như là chỉ số của quá trình peroxy hóa lipid [30]. H2O2 tăng cường sản xuất ROS và làm cạn kiệt các enzym bảo vệ chống oxy hóa, chẳng hạn như SOD, catalase và GPx. Quá trình này dẫn đến căng thẳng oxy hóa [31], đóng một vai trò quan trọng trong nguyên nhân và sự tiến triển của phần lớn các rối loạn thoái hóa thần kinh. Phù hợp với các nghiên cứu trước đây, chúng tôi đã quan sát thấy mức độ ROS tăng lên, giảm các enzym chống oxy hóa nội bào và tăng cường quá trình chết rụng của tế bào PC12 sau khi điều trị bằng H2O2. Tiền xử lý PhGs làm giảm đáng kể sự gia tăng ROS nội bào do HzOz gây ra, cải thiện các enzym chống oxy hóa nội bào và cuối cùng đảo ngược độc tính tế bào do HzOz gây ra trong tế bào PC12.
Kuang và cộng sự. [32] báo cáo rằng echinacoside cho thấy tác dụng bảo vệ thần kinh đáng kể đối với độc tính tế bào gây ra H2O 2- trong tế bào PC12 thông qua con đường apoptotic ti thể. Trong nghiên cứu này, chúng tôi nhận thấy rằng echinacoside, salidroside, acteoside và isoacteoside cho thấy tác dụng bảo vệ thần kinh bằng cách tăng cường hoạt động chống oxy hóa của tế bào PC12 vì chúng làm tăng hoạt hóa phiên mã của Nrf2 và điều chỉnh sự biểu hiện protein hạ lưu của HO -1, NQO1, GCLC và GCLM. Nhiều nghiên cứu đã chứng minh rõ ràng rằng việc kích hoạt các gen đích Nrf2, đặc biệt là HO -1, trong tế bào hình sao và tế bào thần kinh bảo vệ mạnh mẽ chống lại chứng viêm, tổn thương oxy hóa và chết tế bào. Hệ thống HO -1 đã được báo cáo là hoạt động rất tích cực trong hệ thống thần kinh trung ương, và sự điều biến của nó dường như đóng một vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh của các rối loạn thoái hóa thần kinh [33]. Các nghiên cứu gần đây cũng làm rõ vai trò của Nrf2 trong sự tiến triển và nguy cơ của PD [9] và Keap1 là mục tiêu hiệu quả để kích hoạt lại Nrf2 trong AD [34]. Các kết quả hỗ trợ bằng chứng mới cho Nrf2 như một mục tiêu điều trị trong các bệnh thoái hóa thần kinh.
Phân tích gắn kết phân tử cho thấy PhG có thể liên kết với Keap1, với các khả năng liên kết sau: echinacoside> isoacteoside> acteoside> salidroside. Phù hợp với những kết quả này, tiền xử lý PhGs dẫn đến sự chuyển vị Nrf2 trong nhân, với biểu hiện Nrf2 sau đây trong nhân: echinacoside> isoacteoside * acteoside> salidroside. Chúng tôi giả định rằng số lượng glycoside ảnh hưởng đến chế độ liên kết có thể có của PhGs và Keap1, và chế độ liên kết tiếp tục gây ra sự giải phóng Nrf2 khỏi Keap1. Quá trình này dẫn đến việc kích hoạt Nrf2 và các gen hạ lưu và cuối cùng bảo vệ tế bào PC12 khỏi stress oxy hóa gây ra H2 O 2 -.
Tác dụng bảo vệ thần kinh của cistanchePhGs
4. Vật liệu và Phương pháp
4.1. Hợp chất hóa học và thuốc thử
Salidroside (CAS No. {{0}}), acteoside (CAS No. 61276-17-3), isoacteoside (CAS No. 61303-13-7) và echinacoside (CAS No. {{3} }) được mua từ Công ty Công nghệ Sinh học YYuanye (Thượng Hải, Trung Quốc). PhG được hòa tan trong PBS để tạo ra dung dịch gốc 10 mg / mL, được bảo quản ở -20 độ. H2O2 được mua từ Aladdin® (Thượng Hải, Trung Quốc). RPMI -1640 huyết thanh bò vừa và thai được mua từ Hyclone (Logan, UT, Hoa Kỳ), và 0,5% trypsin EDTA, penicillin và streptomycin được mua từ Keyi (Hàng Châu, Trung Quốc). Bộ dụng cụ chẩn đoán MDA, SOD, MTT và DCFH-DA được mua từ Viện Công nghệ Sinh học Beyotime (Nam Kinh, Giang Tô, Trung Quốc). Bộ nhuộm kép Annexin V-FITC / PI được mua từ Solarbio Life Sciences (Bắc Kinh, Trung Quốc). Các kháng thể đối với Nrf2, Histone H3, Keap1, HO -1, NQO1, GCLC, GCLM và p-actin, IgG chống chuột, peroxide cải ngựa (HRP) và IgG chống thỏ-HRP-IgG đã được mua từ Abcam (London, Vương quốc Anh). Các chất ức chế HO -1 và ZnPP được mua từ Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, Hoa Kỳ). RNAiso Plus, PrimeScript ™ RT reagent Kit với gDNA Eraser và SYBR® Premix Ex Taq ™ II đã được mua từ Takara (Shiga, Nhật Bản). Thuốc thử Truyền nhiễm Lipofectamine® RNAiMAX được mua từ Thermo Fisher Scientific (Waltham, Vương quốc Anh). Trình tự siRNA Nrf2 như sau: chuyển tiếp, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; và ngược lại, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Trong khi đó, trình tự siRNA kiểm soát như sau: phía trước, UUCUCCGAACGUGUCACGU; và ngược lại, ACGUGACACGUUCGGAGAA.
4.2. Nuôi cấy tế bào
Dòng pheochromocytoma tuyến thượng thận chuột (tế bào PC12) được lấy từ Viện Hóa sinh và Sinh học Tế bào, SIBS, (CAS, Thượng Hải, Trung Quốc). Các tế bào được duy trì trong RPMI -1640 (Hyclone) chứa 1 0 phần trăm huyết thanh bò thai (Hyclone), 100 U / mL penicillin và 0,1 mg / mL streptomycin ở 37 độ với 5 phần trăm CO2. Phương tiện được thay đổi mỗi ngày.
4.3. Khả năng tồn tại của tế bàoAssay
Tế bào PC12 được gieo vào 96- đĩa giếng với kích thước 2 x 104 tế bào / giếng. Sau khi gắn vào, các tế bào được ủ trước có hoặc không có chất ức chế trong 20 phút, ủ có hoặc không có PhG trong 24 giờ, và sau đó được ủ với H2O2 thêm 2 giờ sau khi PhG được loại bỏ. Sau khi ủ, các tế bào được xử lý với 5 mg / mL MTT trong 4 giờ ở 37 độ, và môi trường được loại bỏ cẩn thận. Các tinh thể formazan hình thành bởi các tế bào sống sót được hòa tan trong 150 rL DMSO để tạo ra màu xanh lam [35], và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 570 nm trên máy đọc đĩa. Các đối chứng sử dụng cùng nồng độ môi trường chỉ với DMSO. Khả năng sống sót của tế bào được bình thường hóa dưới dạng phần trăm kiểm soát.
Nồng độ của PhGs (0. 1,1,5 và 10 Rg / mL) được chọn tùy thuộc vào phân tích độc tính tế bào của PhGs và tác dụng bảo vệ tế bào được báo cáo của echinacoside [32]. Theo báo cáo, không có tác dụng gây độc tế bào nào được thể hiện dưới 10 Rg / mL và echinacoside đã được báo cáo cho thấy tác dụng bảo vệ tế bào trong mô hình tế bào bị tổn thương HzOz.
4.4. Thử nghiệm apoptosis
Apoptosis được phát hiện bằng Bộ nhuộm kép Annexin V-FITC / PI (Solarbio). Tế bào PC12 được gieo hạt trong 6- đĩa giếng với kích thước 2 x 1 0 5 ô / giếng. Sau khi gắn, các tế bào được xử lý bằng PhGs (0,1 và 10 Rg / mL) trong 24 giờ và ủ với H2O2 trong 2 giờ nữa sau khi các PhG được loại bỏ. Sau khi ủ, các tế bào được rửa trong PBS lạnh, ly tâm hai lần ở tốc độ 1500 vòng / phút trong 10 phút, và tiếp tục lại trong 500 rL dung dịch đệm liên kết. Annexin V (5 rL) được dán nhãn FITC và propidium iodide.
Các từ viết tắt
GCLC glutamate-cysteine-ligase xúc tác tiểu đơn vị
GCLM glutamate-cysteine-đơn vị phụ trợ chất xúc tác ligase
H2O2 hydro peroxit
HO -1 heme oxygenase 1
Protein liên kết Keap1 Kelch ECH 1
NQO1 NAD (P) H quinon oxidoreductase 1
Yếu tố hạt nhân Nrf2 erythroid 2- yếu tố liên quan 2
PhGs salidroside, acteoside, isoacteoside và echinacoside
Các loại oxy phản ứng ROS
ZnPP kẽm protoporphyrin
Chiết xuất Cistanche Desticola: PHG của Cistanche
Người giới thiệu
1. Mặt trời, AY; Chen, YM Căng thẳng oxy hóa và rối loạn thoái hóa thần kinh. J. Sinh học. Khoa học. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]
2. Maheshwari, A.; Micro, MM; Aggarwal, A.; Sharma, RK; Nandan, D. Các con đường liên quan đến quá trình chết rụng tế bào mầm tinh hoàn do H2O2 gây ra trong ống nghiệm. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]
3. Halliwell, B. Các loài phản ứng oxy và hệ thần kinh trung ương. J. Hóa chất thần kinh. Năm 1992, 59, 1609-1623. [CrossRef] [PubMed]
4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Về vai trò có thể có của quá trình peroxy hóa gốc tự do do sắt gây ra trong thoái hóa dây thần kinh ở bệnh Alzheimer. Ann. NY Acad. Khoa học. Năm 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]
5. Zhang, DD Nghiên cứu cơ học về lộ trình truyền tín hiệu Nrf 2- Keap1. Metab ma túy. Rev. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]
6. Itoh, K .; Tong, KI; Yamamoto, M. Cơ chế phân tử kích hoạt con đường Nrf 2- Keap1 trong quy định phản ứng thích nghi với các electrophin. Radic miễn phí. Biol. Med. 2004, 36, 1208-1213. [CrossRef] [PubMed]
7. Kong, AN; Owuor, E.; Yu, R .; Hebbar, V .; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Cảm ứng các enzym xenobiotic bằng con đường kinase bản đồ và yếu tố phản ứng chống oxy hóa hoặc electrophile (ARE / EpRE). Metab ma túy. Rev. 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]
8. Buendia, tôi; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, tôi; Egea, J .; Con đường Leon, R. Nrf 2- LÀ: Mục tiêu mới nổi chống lại stress oxy hóa và chứng viêm thần kinh trong các bệnh thoái hóa thần kinh. Pharmacol. Họ. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]
9. Skibinski, G .; Hwang, V; Ando, DM; Daub, A.; Lee, AK; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, MM; Tồi tàn, BA; Finkbeiner, S. Nrf2 giảm thiểu LRRK 2- và sự thoái hóa thần kinh do a-synuclein gây ra bằng cách điều chỉnh sự cân bằng protein. Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]
10. Jimenez, C.; Riguera, R. Phenylethanoid glycoside trong thực vật: Cấu trúc và hoạt tính sinh học. Nat. Sản phẩm. Bản tái bản 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]
11. Georgiev, M.; Alipieva, K .; Orhan, tôi; Abrashev, R .; Denev, P.; Angelova, M. Các hoạt động ức chế chất chống oxy hóa và cholinesterase của Verbascum xanthophoeniceum Griseb. và các glycoside phenylethanoid của nó. Chem chép thực phẩm. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]
12. Li, N.; Wang, J .; Ma, J .; Gu, Z; Giang, C.; Yu, L.; Fu, X. Tác dụng bảo vệ thần kinh củaCistanches HerbaLiệu pháp trên bệnh nhân mắc bệnh Alzheimer / s mức độ trung bình. Bổ sung dựa trên Evid. Altern. Med. 2015, 2015,103985. [CrossRef] [PubMed]
13. Liu, YL; Anh ấy, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Zhu, YY; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Các hoạt động kháng khuẩn, chống viêm và độc tính của glycoside phenylethanoid từ Monochasma savatieri Franch. ex Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]
14. Đồng, Q.; Yao, J .; Fang, JN; Ding, K. Đặc điểm cấu trúc và hoạt động miễn dịch của hai polysaccharid chiết xuất được trong nước lạnh từCistanche Desticola YC Ma. Carbohydr. Res. 2007, 342, 1343-1349. [CrossRef] [PubMed]
15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J .; Zhou, F.; Hu, Y .; Giang, Y .; Shen, C.; Zhao, Y. Chiết xuất hoa Osmanthusfragrans và Acteoside Bảo vệ chống lại sự lão hóa do d-Galactose gây ra trong mẫu chuột ICR. J. Med. Thực phẩm 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]
16. Giang, Y.; Mao, S.; Huang, W .; Lu, B.; Cái, Z .; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Hồ sơ glycoside Phenylethanoid và các hoạt động chống oxy hóa của Osmanthusfragrans Lour. Hoa bằng UPLC / PDA / MS và Mô hình tiêu hóa mô phỏng. J. Agric. Chem chép thực phẩm. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]
17. Li, X.; Ye, X.; Li, X.; CN, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside bảo vệ chống lại quá trình chết rụng do MPP cộng với gây ra ở tế bào PC12 bằng cách ức chế con đường NO. Brain Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]
18. Zhang, L. .; Ding, W .; CN, H.; Chu, Q.; Huang, J .; Li, X.; Xie, Y. Chen, J. Salidroside bảo vệ tế bào PC12 khỏi quá trình apoptosis do MPP cộng với việc kích hoạt con đường PI3K / Akt. Chem chép thực phẩm. Toxicol. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]
19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; Ma, J .; Li, CL Tác dụng bảo vệ của verbascoside đối với độc tính thần kinh do ion 1- metyl -4- phenylpyridinium gây ra trong tế bào PC12. Eur. J. Pharmacol. 2002, 451, 119-124. [CrossRef]
20. Vương, H.; Xu, Y .; Yan, J .; Zhao, X.; CN, X.; Zhang, Y. Guo, J .; Zhu, C. Acteoside bảo vệ các tế bào SH-SY5Y gây u nguyên bào thần kinh ở người chống lại tổn thương tế bào do beta-amyloid gây ra. Brain Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]
21. Tối thiểu, D.; Jin, YZ; Yong, J .; Zheng, BL; Yao, HW Echinacoside giải cứu các tế bào thần kinh SHSY5Y khỏi quá trình chết rụng do TNFa gây ra. Cái cằm. Pharmacol. Bò đực. 2005, 505, 11-18.
22. Zhao, Q.; Gao, JP; Li, WW; Cai, DF Tác dụng dưỡng thần kinh và chữa bệnh thần kinh của Echinacoside trên mô hình chuột MPTP bán cấp của bệnh Parkinson. Brain Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]
23. Koo, KA; Sung, SH; Công viên, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Các hoạt động bảo vệ thần kinh trong ống nghiệm của glycoside phenylethanoid từ Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]
24. Liu, YG; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Ye, XS Các dẫn xuất phenylethanoid glycoside tổng hợp làm chất bảo vệ thần kinh tiềm năng. Eur. J. Med. Chèm. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]
25. Phúc, G.; Pang, H.; Wong, YH Các glycoside phenylethanoid xuất hiện tự nhiên: Các đầu mối tiềm năng cho liệu pháp điều trị mới. Curr. Med. Chèm. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]
26. Greene, LA; Tischler, AS Thành lập dòng vô tính noradrenergic của các tế bào u pheochromocytoma tuyến thượng thận chuột đáp ứng với yếu tố tăng trưởng thần kinh. Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]
27. Liang, QN; Sheng, YC; Giang, P.; Ji, LL; Xia, YY; Tối thiểu, Y .; Wang, ZT Sự khác biệt của hệ thống chống oxy hóa glutathione trong gan chuột non và mới cai sữa và sự liên quan của nó trong quá trình nhiễm độc gan do cô lập. Vòm. Toxicol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]
28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K .; Yamamoto, M. Cảm biến ứng suất oxy hóa Keap1 có chức năng như một bộ điều hợp cho Cul 3- dựa trên E3 Ligase để điều chỉnh sự thoái hóa proteasomal của Nrf2. Mol Tế bào. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]
29. Giác mạc, C.; Crupi, R.; Calabrese, V; Graziano, A. .; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z .; Calabrese, EJ; Cuzzocrea, S. Chấn thương sọ não: Căng thẳng oxy hóa và bảo vệ thần kinh. Chất chống oxy hóa. Tín hiệu oxy hóa khử. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]
30. Hou, Z .; Luo, W .; CN, X.; Hảo, S.; Zhang, Y. Xu, F.; Wang, Z .; Liu, B. Nước muối giàu hydro bảo vệ khỏi tổn thương oxy hóa và suy giảm nhận thức sau chấn thương sọ não nhẹ. Brain Res. Bò đực. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]
31. Ansari, MA; Roberts, KN; Scheff, SW Một quá trình theo thời gian của stress oxy hóa gây ra xung huyết và các protein tiếp hợp trong vỏ não trong mô hình TBI của chuột. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]
32. Kuang, R .; CN, Y .; Nhân dân tệ, W .; Lei, L.; Zheng, X. Tác dụng bảo vệ của echinacoside, một trong những glycoside phenylethanoid, trên H2O 2- gây ra độc tế bào trong tế bào PC12. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]
33. Scapagnini, G .; Vasto, S.; Áp-ra-ham, NG; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Điều chế con đường Nrf2 / ARE bằng polyphenol thực phẩm: Một chiến lược bảo vệ thần kinh dinh dưỡng cho các rối loạn nhận thức và thoái hóa thần kinh. Mol Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]
34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O. Ivanov, DK; Gatliff, J .; Gomez, PB; Bertrand, HC; Martinez, P.; Callard, R.; Snoeren, tôi; Cochem, HM Direct Keap 1- Sự gián đoạn Nrf2 như một mục tiêu điều trị tiềm năng cho bệnh Alzheimer / s. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]
35. Hansen, MB; Nielsen, SE; Berg, K. Kiểm tra lại và phát triển thêm một phương pháp nhuộm chính xác và nhanh chóng để đo sự phát triển tế bào / tiêu diệt tế bào. J. Immunol. Phương pháp 1989, 119, 203-210. [CrossRef]
36. Báo chí, C. Sàng lọc Ảo trong Khám phá Ma túy; Crc Press: Boca Raton, FL, Hoa Kỳ, 2005.
37. Muegge, tôi; Martin, YC; Hajduk, PJ; Fesik, SW Đánh giá điểm PMF trong việc gắn các phối tử yếu vào protein liên kết FK506. J. Med. Chèm. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]
38. Kuntz, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Langridge, R.; Ferrin, TE Một cách tiếp cận hình học đối với các tương tác đại phân tử-phối tử. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [CrossRef]
39. MD, E.; Murray, CW; Auton, TR; Paolini, GV; Mee, RP Các chức năng cho điểm theo kinh nghiệm: I. Sự phát triển của một chức năng cho điểm theo kinh nghiệm nhanh để ước tính ái lực liên kết của các phối tử trong phức hợp thụ thể. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11, 425-445.
© 2 0 18 của các tác giả. Đơn vị được cấp phép MDPI, Basel, Thụy Sĩ. Bài viết này là một bài viết truy cập mở được phân phối theo các điều khoản và điều kiện của giấy phép Creative Commons Attribution (CC BY) (http: ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).
