Xican Li 1,2, *, † ID, Yulu Xie 1,2, †, Ke Li 3,4, Aizhi Wu 1,2, *, Hong Xie 1,2, Qian Guo 1,5,

Penghui Xue 1, Yerkingul Maleshibek 1, Wei Zhao 6, Jiasong Guo 7 và Dongfeng Chen 3,4

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com

1 School of Chinese Herbal Medicine, Đại học Trung y Quảng Châu, Quảng Châu 510006, Trung Quốc; xieyulu1900@163.com (YX); xiehongxh1@163.com (HX); 15622178307@163.com (QG); 15228738137@163.com (PX); pandiphd@163.com (YM)

2 Phòng thí nghiệm Nghiên cứu & Phát triển Sáng tạo của TCM, Đại học Trung y Quảng Châu,

Quảng Châu 510006, Trung Quốc

3 Trường Khoa học Y tế Cơ bản, Đại học Trung y Quảng Châu, Quảng Châu 510006, Trung Quốc; ys1090992678@163.com (KL); chen888@gzucm.edu.cn (DC)

4 Trung tâm Nghiên cứu Y học Tích hợp Cơ bản, Đại học Trung y Quảng Châu,

Quảng Châu 510006, Trung Quốc

5 Trường Khoa học Y tế Cơ bản, Đại học Dược Quảng Đông, Quảng Châu 510007, Trung Quốc

6 Trường Y Trung Sơn, Đại học Tôn Trung Sơn, Số 74 Đường Trung Sơn. 2, Quảng Châu 510080, Trung Quốc; zhaowei23@mail.sysu.edu.cn

7 Khoa Mô học và Phôi học, Đại học Nam Y, Quảng Châu 510515, Trung Quốc;

† Các tác giả này đã đóng góp như nhau cho công việc này.

Nhận: 24/01/2018; Được chấp nhận: ngày 20 tháng 2 năm 2018; Xuất bản: 23 tháng 2, 2018

Tóm tắt: Nghiên cứu đã cố gắng khám phá vai trò của dư lượng đường và cơ chế của phenolicphenylpropanoidchất chống oxy hóa. Acteoside, cùng với apioside forsythoside B và rhamnoside

poliumoside, được nghiên cứu tương đối bằng cách sử dụng các thử nghiệm chống oxy hóa khác nhau. Trong ba thử nghiệm dựa trên sự chuyển điện tử (ET) (FRAP, CUPRAC, PTIO · -lưu ý ở pH 4,5), mức độ chống oxy hóa tương đối được xác định làacteoside >forsythoside B> poliumoside. Thứ tự như vậy cũng được quan sát trong

H cộng với PTIO liên quan đến chất vận chuyển ·-xét nghiệm nhặt rác ở pH 7,4, và trong ba xét nghiệm nhặt rác gốc có liên quan đến nhiều con đường, tức là ABTS cộng với · -lấy rác, DPPH ·-nhặt rác, và · O2.-nhặt rác. Trong quang phổ UV-vis, mỗi cực đại hiển thị sự chuyển dịch màu đỏ ở 335 364 nm và hai cực đại yếu (480 và 719 nm), khi trộn với Fe2 cộng; tuy nhiên,acteosideđã cho khả năng hấp thụ yếu nhất.

Trong phép phân tích sắc ký lỏng siêu hiệu suất kết hợp với phép đo khối phổ tứ cực thời gian bay song song ion hóa tia điện cực (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS), không tìm thấy đỉnh hình thành gốc (RAF). Thử nghiệm MTT tiết lộ rằng poliumoside thể hiện khả năng sống sót cao nhất của các tế bào gốc trung mô tủy xương bị stress oxy hóa. Tóm lại là,acteoside, forsythoside B, và poliumoside có thể tham gia vào nhiều con đường để phát huy tác dụng chống oxy hóa, bao gồm ET, H cộng với chất truyền dẫn, hoặc Fe2 cộng với -chelating, nhưng không phải RAF. Việc chuyển giao ET và H cộng có thể bị cản trở bởi các nguyên tắc rhamnosyl và apiosyl; tuy nhiên, tiềm năng tạo thành cộng Fe2 có thể được tăng cường bởi hai gốc đường (đặc biệt là gốc rhamnosyl). Tác dụng chung của các chất rhamnosyl và apiosyl là cải thiện tác dụng chống oxy hóa hoặc bảo vệ tế bào.

Từ khóa:acteoside; apiosyl; forsythoside B;phenylpropanoidglycoside; poliumoside; rhamnosyl

cistanche có tác dụng chống oxy hóa

1. Giới thiệu

Gần đây, acteoside (verbascoside, Hình 1), một phenolphenylpropanoidglycosidexảy ra ở cây sống và các loài thực vật khác [1], được phát hiện để cải thiện hiệu suất của quá trình chuyển nhân tế bào soma ở chó (SCNT) trong quá trình nhân bản chó [2]. Ngoài ra, acteoside có thể bảo vệ các tế bào SH-SY5Y của khối u nguyên bào thần kinh ở người chống lại các tổn thương do -amyloid gây ra [3] và các nguyên bào da người chống lại các tổn thương do tia X gây ra [4]. Apioside forsythoside B (Hình 1) của nó cũng được phân bố trong thực vật [5], và đã được quan sát thấy có tác dụng bảo vệ thần kinh mạnh mẽ với một khoảng thời gian điều trị thuận lợi [6]. Những tác động có lợi này đối với tế bào và mô được cho là có liên quan đến việc bảo vệ một số phân tử sinh học, chẳng hạn như lipid và DNA. Trên thực tế, acteoside và cistanoside F tương tự của nó đã được chứng minh là có khả năng ức chế quá trình peroxy hóa lipid ty thể ở chuột [7]. Quá trình peroxy hóa lipid được biết đến là kết quả của stress oxy hóa tế bào và cuối cùng là từ các loại oxy phản ứng (ROS).

Hình 1. Các cấu trúc (bên trái) và các mô hình quả bóng và cây gậy dựa trên cấu trúc ưu tiên (bên phải) của ba tự nhiênphenylpropanoidglycoside(acteoside, forsythoside B và poliumoside).

Từ khía cạnh bảo vệ DNA, acteoside và các dẫn xuất của nó có thể nhanh chóng sửa chữa các gốc DNA, chẳng hạn như 2'-deoxyadenosine -5 '- monophosphate (dAMP) và 2'-deoxyguanosine -5' - monophosphate (dGMP) [ số 8]. Các gốc deoxynucleotide thứ cấp này có thể làm tổn thương tế bào một cách oxy hóa hơn nữa dẫn đến đột biến và sinh ung thư [9]. Nghiên cứu lý sinh chỉ ra rằng acteoside và các dẫn xuất của nó có thể gắn vào các rãnh nhỏ của DNA và nhanh chóng sửa chữa các tổn thương DNA bị oxy hóa như vậy [10]. Mô hình quả bóng dựa trên cấu trúc ưu tiên đề xuất (Hình 1, bên phải) rằng các phân tử này là prolate và có thể dễ dàng tiếp cận vòng lặp của DNA, và do đó, chúng có thể nhanh chóng sửa chữa các tổn thương của các gốc DNA [8].

Tuy nhiên, từ quan điểm của hóa sinh, việc sửa chữa về cơ bản được thực hiện thông qua con đường thu gom ROS (tức là chất chống oxy hóa). Như đã đề cập trước đây, việc tạo ra các cation gốc deoxynucleotide cuối cùng là từ sự tấn công của ROS, bao gồm các gốc tự do (ví dụ, gốc OH [11]) và các phân tử oxy hóa (ví dụ, H2O2 [12]). ROS-nhặt rác được cho là có thể làm giảm đáng kể tình trạng oxy hóa tế bào [13,14] và cải thiện chất lượng của tế bào gốc [12,15]. Vì vậy, cần phải nghiên cứu khả năng chống oxy hóa của chúng và thảo luận thêm về các cơ chế có thể có.

Trong nghiên cứu này, ba phenolphenylpropanoidglycoside(acteoside, forsythoside B và poliumoside) được nghiên cứu tương đối bằng cách sử dụng các thử nghiệm chống oxy hóa khác nhau, bao gồm 2- phenyl -4, 4,5, 5- tetramethylimidazoline -1- oxyl {{6 }} xét nghiệm nhặt gốc oxit (PTIO ·), xét nghiệm khả năng chống oxy hóa khử ion sắt (FRAP), xét nghiệm khả năng chống oxy hóa khử cốc (CUPRAC), 2,2 → -azino-bis (3- ethylbenzene-thiazoline {{13 }} gốc axit sulfonic (ABTS cộng với ·) thử nghiệm nhặt rác,

1, xét nghiệm 1- diphenyl -2- picryl-hydrazine (DPPH ·), và · xét nghiệm nhặt rác O2. cũng như phân tích phổ UV cộng với Fe2. Sau đó, các sản phẩm phản ứng của họ với DPPH · được xác định bằng cách sử dụng sắc ký lỏng siêu hiệu suất kết hợp với phân tích khối phổ tứ cực thời gian bay song song ion hóa tia điện cực (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS). Cuối cùng, tác dụng bảo vệ tế bào của chúng đối với tế bào gốc trung mô có nguồn gốc từ tủy xương (bmMSCs) được ước tính bằng cách sử dụng

Thử nghiệm 3- (4, 5- dimethylthiazol -2- yl) -2, 5- diphenyl (MTT). Như đã thấy trong Hình 1, sự khác biệt giữa ba phenolphenylpropanoidglycoside(tức là, acteoside, forsythoside B và poliumoside) là loại glycoside: forsythoside B là một apioside của acteoside, trong khi poliumoside là rhamnoside của acteoside. Do đó, nghiên cứu so sánh này cũng giúp hiểu được vai trò của apiosyl và rhamnosyl trongchất chống oxy hóacác hiệu ứng.

cistanche làm trắng da để chống lại quá trình oxy hóa

2. Kết quả

2.1. Thử nghiệm khử kim loại (FRAP & CUPRAC)

Trong nghiên cứu, chúng tôi thực hiện hai xét nghiệm khử kim loại, đó là xét nghiệm FRAP và xét nghiệm CUPRAC. Như minh họa trong Suppl. 1, acteoside và các dẫn xuất của nó làm tăng tỷ lệ FRAP tương đối (hoặc Cu2 cộng với sức mạnh giảm năng lượng) ở 0 - 10 g / L theo cách phụ thuộc vào liều lượng. Thứ tự mức độ khử kim loại tương đối của chúng giảm gần như theo thứ tự acteoside> forsythoside B> poliumoside (Bảng 1).

Bảng 1. Các giá trị IC50 của acteoside, forsythoside B và poliumoside trong cácchất chống oxy hóacác thử nghiệm.

2.2. PTIO · Thử nghiệm nhặt rác

PTIO ·-xét nghiệm nhặt rác gần đây đã được phát triển bởi phòng thí nghiệm của chúng tôi [16]. Nó có thể được sử dụng để đánh giá mức độ chống oxy hóa và khám phá các con đường chống oxy hóa. Như được hiển thị trong Suppl. 1, acteoside và các dẫn xuất của nó có thể quét thành công PTIO · ở pH 4,5 và pH 7,4. Tuy nhiên, theo các giá trị IC50 trong Bảng 1, mức độ thu hồi PTIO · tương đối của chúng ở cùng một giá trị pH là khác nhau. Ngoài ra, mỗi acteoside và các dẫn xuất của nó thể hiện các mức độ thu nhận PTIO khác nhau giữa pH 4,5 và pH 7,4. Nhìn chung, mức độ thu hồi PTIO ở 7,4 cao hơn ở độ pH 4,5.

2.3. ABTS cộng với · -S nhặt rác và DPPH · Thử nghiệm nhặt rác

ABTS cộng với · -tìm kiếm và DPPH · -sử dụng hiện nay được sử dụng rộng rãi cho các nghiên cứu chống oxy hóa của các hợp chất hoặc chiết xuất tinh khiết. Như đã thấy trong Suppl. 1, acteoside và nồng độ các chất dẫn xuất của nó - tăng tỷ lệ phần trăm ABTS cộng với · -tìm kiếm hoặc DPPH · -sử dụng phụ thuộc vào nó.

Tuy nhiên, xét về các giá trị IC50 trong Bảng 1, mức ABTS cộng với · -sử dụng tương đối của chúng được tìm thấy theo thứ tự của acteoside> forsythoside B> poliumoside> Trolox. Một thứ tự tương tự cũng có thể được quan sát thấy trong xét nghiệm DPPH · nhặt rác.

2.4. UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS Phân tích DPPH · Sản phẩm phản ứng

Sản phẩm phản ứng của DPPH · với mỗi chất trong số baphenylpropanoidglycosideđã được khám phá bằng cách sử dụng phân tích UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS. Trong phân tích (Phần bổ sung 2), không có glycoside nào trong số ba phenylpropanoid tạo ra đỉnh sản phẩm RAF. Bằng cách so sánh, axit caffeic đã được tìm thấy để tạo ra một sản phẩm dimer (m / z 359–360, Phần bổ sung 2).

2.5. Phân tích quang phổ UV-Vis của Fe2 cộng với các sản phẩm giá trị

Vì phổ UV-vis-quang có thể đặc trưng cho các phức kim loại, do đó, nghiên cứu đã sử dụng phổ UV-vis-để phân tích phản ứng tạo cộng-tạo Fe2 có thể xảy ra với baphenylpropanoid glycoside. Như thể hiện trong Hình 2, mỗi trong số chúng có thể tạo ra sự thay đổi sắc độ (335 nm ● 364 nm) trong quang phổ UV. Trong khi đó, mỗi điểm trong số chúng có thể cung cấp hai cực đại quang phổ trực quan yếu trong quang phổ nhìn thấy (480 nm và 719 nm) và dẫn đến xuất hiện màu xanh lục nhạt. Tuy nhiên, cường độ đỉnh theo thứ tự giảm dần của poliumoside> forsythoside B> acteoside.

2.6. Thử nghiệm tự động oxy hóa Pyrogallol để tìm kiếm Superoxide Anion (· O2.)

Thử nghiệm tự động oxy hóa pyrogallol đã được cải tiến bởi phòng thí nghiệm của chúng tôi vào năm 2012 [17]. Nó được sử dụng để ước tính tiềm năng nhặt rác · O2. trong nghiên cứu hiện tại. Như đã thấy trong Suppl. 1, tất cả các chất acteoside và các dẫn xuất của nó có thể làm tăng tỷ lệ phần trăm thu nhặt · O2. phụ thuộc vào liều lượng. Tuy nhiên, hoạt tính sinh học tương đối giảm theo thứ tự poliumoside> forsythoside B> acteoside, theo các giá trị IC50 trong Bảng 1.

2.7. Hiệu ứng bảo vệ tế bào đối với bmMSCs được nén oxy hóa (Thử nghiệm MTT)

Để đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào của acteoside và các dẫn xuất của nó, chúng tôi đã thực hiện một thử nghiệm MTT. Trong thử nghiệm, bmMSCs bị phá hủy bởi thuốc thử oxy hóa H2O2, bmMSCs bị hư hỏng sau đó được xử lý bằng acteoside và các dẫn xuất của nó. Các giá trị A490nm được sử dụng để đánh giá các tác động bảo vệ tế bào tương đối. Như đã thấy trong Bảng 2, mỗi acteoside và liều dẫn xuất của nó làm tăng các giá trị A490nm một cách phụ thuộc. Tuy nhiên, ở cùng nồng độ, poliumoside cho giá trị A490nm cao nhất.

3. Thảo luận

Hoạt động chống oxy hóa của các hợp chất phenolic tự nhiên được biết là tham gia vào quá trình chuyển điện tử (ET) [18,19]. Do đó, một số xét nghiệm khử kim loại dựa trên ET đã được sử dụng rộng rãi để đánh giá mức độ chống oxy hóa của phenol, chẳng hạn như xét nghiệm FRAP và CUPRAC. Các hướng dẫn xét nghiệm FRAP phải phù hợp với độ pH nhỏ hơn 3,6. Một môi trường axit như vậy đã ngăn chặn thành công sự ion hóa H cộng từ phenol; do đó, xét nghiệm FRAP được coi là một quá trình ET đơn thuần [20,21]. Hiệu quả của acteoside và các dẫn xuất của nó trong thử nghiệm FRAP ngụ ý rằng, khi acteoside và các dẫn xuất của nó hoạt động nhưchất chống oxy hóa, họ có thể sử dụng con đường ET để phát huy tác dụng chống oxy hóa.

Bên cạnh đó, chúng tôi cũng thực hiện xét nghiệm CUPRAC trong dung dịch đệm pH 7,4. Như đã thấy trong Suppl. 1, acteoside và liều lượng các dẫn xuất của nó làm tăng tỷ lệ phần trăm năng lượng Cu2 cộng với-giảm năng lượng Cu2 một cách phụ thuộc, cho thấy rằng chúng có thể vẫn còn tiềm năng ET ở pH sinh lý. Tuy nhiên, tiềm năng ET của chúng giảm theo thứ tự sau: acteoside> forsythoside B> poliumoside (Bảng 1). Động lực này cho thấy rõ ràng rằng gốc apiosyl trong forsythoside B và gốc rhamnosyl trong poliumoside đã làm giảm tiềm năng ET.

cistanchelà một chất ức chế tyrosinase

Để kiểm tra khả năng ET xảy ra trong quá trình thu dọn gốc của chúng, một PTIO gốc tự do tập trung vào oxy · đã được giới thiệu trong nghiên cứu. Bằng chứng đo điện thế theo chu kỳ cho thấy rằng PTIO · -lắng dưới pH 5. 0 là một phản ứng oxy hóa khử đơn electron [22]. Quan sát cho thấy rằng acteoside và các dẫn xuất của nó có thể nhanh chóng loại bỏ gốc PTIO ở pH 4,5, cho thấy khả năng ET trong quá trình loại bỏ gốc của chúng. Rõ ràng, liên kết này hỗ trợ thêm cho các kết quả nói trên từ các thử nghiệm FRAP và CUPRAC, và các kết quả trước đó rằng một điện tử hiến tặng (e) là một đặc điểm của phenolicchất chống oxy hóa[23]. Tuy nhiên, ở pH sinh lý 7.4, bài luận PTIO-thu nhận không chỉ đơn thuần là một con đường ET mà còn bao gồm một con đường chuyển proton- (H cộng). Trong quá trình này, PTIO đã được đề xuất chấp nhận H cộng từ phenol để tạo ra đỉnh sản phẩm ([PTIO-H] cộng) [16]. Bởi vì H cộng-truyền luôn đi kèm với ET trong cơ chế đồng bộ hoặc từng bước [24], sản phẩm thực tế (hoặc fi nal) là một phân tử [PTIO-H] [22]. PTIO · -tìm ở pH 7,4 (Suppl. 1) ngụ ý rằng acteoside và các dẫn xuất của nó cũng có tiềm năng truyền dẫn H cộng. Các giá trị IC50 (Bảng 1) chỉ ra rằng

tương đối H cộng với điện thế truyền dẫn theo thứ tự giảm dần của acteoside> forsythoside B> poliumoside. Rõ ràng, các nguyên tố apiosyl và rhamnosyl cũng làm suy yếu tiềm năng truyền H cộng trong quá trình chống oxy hóa.

Như đã thảo luận trước đây, trong quá trình chống oxy hóa của phenol, ET thường đi kèm với chuyển proton (H cộng) để tạo thành một số cơ chế chống oxy hóa [24], chẳng hạn như chuyển nguyên tử hydro (HAT) [23,25–27], điện tử tuần tự. -proton chuyển (SEPT) [26,27], truyền một điện tử mất proton tuần tự (SPLET) [26], và chuyển điện tử kết hợp proton (PCET) [24–26,28].

Ví dụ, ABTS cộng ·-thu hồi, một phản ứng bị chi phối bởi sự truyền đơn điện tử (SET) [29], cũng đã được chứng minh là bị ảnh hưởng bởi mức H cộng gần đây [30]. Do đó, ABTS cộng với · -sạch sẽ là một xét nghiệm chống oxy hóa dựa trên đa con đường [21,31]. Thực tế là acteoside và các dẫn xuất của nó có thể quét các gốc ABTS cộng với · chỉ ra rằng hoạt động chống oxy hóa của chúng cũng có thể được thực hiện thông qua nhiều con đường. Giả thuyết này càng được củng cố bởi bằng chứng từ thử nghiệm thu dọn DPPH ·, một phản ứng bao gồm nhiều con đường HAT, ET, SEPT và PCET [26,32]. Tuy nhiên, phân tích định lượng dựa trên giá trị IC50 (Bảng 1) cho thấy rằng trong khía cạnh ABTS dựa trên đa đường cộng với ·-nhặt rác và DPPH · -lìm, acteoside vượt trội hơn so với apioside forsythoside B và rhamnoside poliumoside. Do đó, có thể suy ra rằng các nguyên tố apiosyl và rhamnosyl cuối cùng cản trở các điện thế đa con đường (đặc biệt là ET và H cộng-chất truyền dẫn) trong quá trình thu gom gốc tự do. Theo ghi nhận của các tác giả và những người khác [14,26], trong quá trình chống oxy hóa, phản ứng RAF cũng có thể xảy ra. Tuy nhiên, để xác minh khả năng RAF, baphenylpropanoidglycosidecùng với axit caffeic đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng phân tích UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS. Axit caffeic được tìm thấy để tạo ra một sản phẩm mờ hơn, trong khi baphenylpropanoidglycosidesản xuất không có đỉnh của sản phẩm RAF.

Điều này cho thấy rõ ràng rằng baphenylpropanoidglycosidekhông thể trải qua con đường RAF để phát huy tác dụng chống oxy hóa của chúng. Vì ba phenylpropanoid glycoside có thể được coi là este của axit caffeic (Hình 1), sự khác biệt như vậy giữa axit caffeic và este của axit caffeic cũng chỉ ra rằng gốc rất lớn có thể cản trở việc tạo RAF.

Kết hợp lại với nhau, từ khía cạnh thu gom gốc tự do, acteoside và các dẫn xuất của nó có thể trải qua nhiều con đường để phát huy tác dụng chống oxy hóa của chúng. Các con đường chống oxy hóa này ít nhất có liên quan đến ET và H cộng với -transfer (nhưng không phải RAF). Mối quan hệ của chúng tôi được hỗ trợ một phần bởi nghiên cứu lý thuyết rằng acteoside có thể thực hiện hoạt động chống oxy hóa thông qua con đường SPLET. Trong quá trình này, trước tiên acteoside có thể deprotonate (H cộng với chất truyền dẫn) để tạo ra anion. Sự deproto hóa được cho là xảy ra trong các chất catechol có tính axit yếu. Sau đó, anion tặng electron để tạo ra dạng gốc phenoxy [33]. Tuy nhiên, các gốc phenoxy với sự liên hợp pu lại ổn định ở một mức độ nào đó. Tất nhiên, về mặt này, cần phải có nhiều công việc thử nghiệm hơn nữa trong tương lai.

Điều đáng nói là stress oxy hóa tế bào cũng có thể bắt nguồn từ các kim loại chuyển tiếp (đặc biệt là Fe2 plus). Tuy nhiên, ion Fe2 cộng có thể biến đổi phân tử H2O2 thành gốc · OH có hại nhất thông qua phản ứng Fenton (Fe2 cộng với H2O2 ● Fe3 cộng với · OH cộng OH.). Do đó, sự suy giảm nồng độ Fe2 plus có thể ức chế hiệu quả các gốc OH để giải phóng stress oxy hóa tế bào. Trên thực tế, quá trình tạo sắt bằng phenol tự nhiênchất chống oxy hóanay đã được phát triển thành một liệu pháp hữu hiệu đối với một số bệnh do stress oxy hóa [34,35].

Trong nghiên cứu này, acteoside và các dẫn xuất của nó được đề xuất là chất lọc cộng Fe2 hiệu quả bởi những thay đổi trong quang phổ và màu dung dịch (Hình 2). Tuy nhiên, acteoside kém hơn hai glucoside trong việc chelat hóa Fe2 cộng và forsythoside B với gốc apiosyl kém hơn so với poliumoside với gốc rhamnosyl. Dựa trên sự so sánh các quy định ưu tiên của chúng (Hình 1, bên phải), người ta đề xuất rằng gốc apiosyl (hoặc rhamnosyl) có thể hỗ trợ phối tử chính (phenylpropanoidtập đoàn) trong quá trình cộng hóa Fe2. Hiệu ứng tổng hợp như vậy chắc chắn tăng cường khả năng tạo kết hợp Fe2 cộng và mở rộng các đỉnh UV-vis. Tuy nhiên, rhamnosyl có hiệu quả hơn apiosyl ở khả năng tạo thành cộng Fe2 của nó. Sự khác biệt có thể là do thực tế là rhamnosyl xảy ra ở dạng hexocyclic (tức là, / - L-rhamnopyranosyl), trong khi apiosyl ở dạng pentacyclic (tức là, -D-apiofuransyl). Dạng hexocyclic được biết là lớn hơn và ổn định hơn. Do đó, rhamnosyl hexocyclic có hiệu quả hơn so với apiosyl pentacyclic ở khả năng tạo thành cộng Fe2 của nó.

Để kiểm tra xem acteoside và các dẫn xuất của nó có thể loại bỏ ROS hay không, chúng tôi đã tiến hành một thử nghiệm tự oxy hóa pyrogallol. Như đã thấy trong Suppl. 1, tất cả đều có thể thu thập một cách hợp lý · O2. gốc, một ROS điển hình xảy ra trong tế bào. Tuy nhiên, hoạt tính sinh học tương đối giảm theo thứ tự poliumoside> forsythoside B> acteoside. Thứ tự này cũng song song với thứ tự của các tác động bảo vệ tế bào (Bảng 2). Kết quả này chỉ ra rằng tác dụng chung của gốc rhamnosyl hoặc gốc apiosyl là tăng cường tác dụng thu hồi ROS hoặc bảo vệ tế bào.

cistanchecóhàm sốcủalàm trắnglàn da

4. Vật liệu và Phương pháp

4.1. Hóa chất và Động vật

Acteoside (số CAS: 61276-17-3, 97 phần trăm), forsythoside B (số CAS: 81525-13-5, 97 phần trăm) được lấy từ BioBioPha (Côn Minh, Trung Quốc, Phần bổ sung 3). Poliumoside (số CAS: 94079-81-9, 97 phần trăm) đã được nhóm của chúng tôi phân lập từ loại thảo mộc truyền thống của Trung Quốc Callicarpa pei HT Chang (Suppl. 3). DPPH ·, (o) -6- hydroxyl -2, 5,7, 8- tetramethlychromane -2- axit cacboxylic (Trolox), 2, 9- đimetyl {{ 16}}, 10- phenanthroline (neocuproine), 2,4, 6- tripyridyltriazine (TPTZ) và pyrogallol đã được mua từ Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (Thượng Hải, Trung Quốc). (NH4) 2ABTS [2,2 → -azinobis (3- ethylbenzene-thiazoline -6- muối diammonium axit sulfonic)] được sản xuất từ ​​Amresco Chemical Co. (Solon, OH, Hoa Kỳ). PTIO · cấp tiến được mua từ Công ty TNHH Phát triển TCI (Thượng Hải, Trung Quốc). Axit caffeic được mua từ Viện Kiểm soát Dược phẩm và Sinh học Quốc gia (Bắc Kinh, Trung Quốc). Môi trường modi fi ed Eagle's (DMEM), huyết thanh bò thai (FBS) và trypsin của Dulbecco được mua từ Gibco (Grand Island, NY, USA). Bộ xét nghiệm Annexin V / propidium iodide (PI) được mua từ Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Tất cả các thuốc thử khác là các lớp phân tích.

Chuột Sprague-Dawley (SD) 4 tuần tuổi được lấy từ Trung tâm Động vật của Đại học Trung y Quảng Châu. Quy trình của thử nghiệm này được thực hiện dưới sự giám sát của Ủy ban Đạo đức Động vật của Tổ chức tại Đại học Trung Quốc Quảng Châu (Số phê duyệt 20170306A).

4.2. Thử nghiệm khử kim loại (FRAP & CUPRAC)

Các xét nghiệm khử kim loại bao gồm xét nghiệm sức mạnh khử cộng của Fe3 và xét nghiệm sức mạnh khử cộng của Cu2. Xét nghiệm Fe3 plus -reducing được thiết lập bởi Benzie và Strain và được đặt tên chính thức là FRAP [2 0]. Quy trình thử nghiệm của xét nghiệm này đã được mô tả trong một báo cáo trước đây [9]. Tóm lại, thuốc thử FRAP được điều chế mới bằng cách trộn 1 0 mM TPTZ, 20 mM FeCl3, và dung dịch đệm axetat 0,25 M theo tỷ lệ 1: 1: 10 ở pH 3,6. Mẫu thử nghiệm (x=4 - 20 L, 0,05 mg / mL) được thêm vào (20. X) L etanol 95%, sau đó là 80 L thuốc thử FRAP. Sau khi ủ 30- phút ở nhiệt độ môi trường, độ hấp thụ được đo ở bước sóng 595 nm bằng đầu đọc vi tấm (Multiskan FC, Thermo Scienti fi c, Thượng Hải, Trung Quốc). Công suất giảm tương đối của mẫu được tính theo công thức sau:

trong đó Amax là độ hấp thụ tối đa của hỗn hợp phản ứng với mẫu và Amin là độ hấp thụ tối thiểu trong phép thử. A là độ hấp thụ của mẫu.

Cu2 cộng với khả năng giảm năng lượng cũng có thể đặc trưng cho mức độ chống oxy hóa và do đó được gọi là CUPRAC. Thử nghiệm này được thực hiện theo một phương pháp đã được công bố trước đây [36]. Brie fl y, 12 L dung dịch nước CuSO4 (1 0 mmol / L), 12 L dung dịch etanol neocuproine (7,5 mmol / L) và (75. X) L dung dịch đệm CH3COONH4 (0. 1 mol / L, pH 7,5) được thêm vào các giếng với các thể tích mẫu khác nhau (0,05 mg / mL, 4–20 L). Độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm sau 30 phút được đo bằng đầu đọc vi tấm đã nói ở trên. Công suất CUPRAC tương đối được tính bằng công thức cho FRAP. Amax là độ hấp thụ cực đại của hỗn hợp phản ứng với sample, và Amin là độ hấp thụ tối thiểu trong phép thử. A là độ hấp thụ của mẫu.

cistanchecó tác dụng làm trắng da

Xin vui lòng nhấp vào đây để Phần 2