PHẦN 1 Phenylethanol Glycoside Liposome ức chế sự kích hoạt HSC do PDGF gây ra thông qua sự điều chỉnh của con đường truyền tín hiệu FAK / PI3K / Akt

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye và Tao Liu 1, *

1 Khoa Độc chất, Trường Y tế Công cộng, Đại học Y Tân Cương, Khu tự trị Duy Ngô Nhĩ Tân Cương, Đường số 393, Urumqi 830011, Trung Quốc

2 Phòng thí nghiệm trọng điểm về y học người Duy Ngô Nhĩ, Viện Materia Medica Tân Cương, Khu tự trị Duy Ngô Nhĩ Tân Cương, Quận Thiên Sơn, Tân Hoa Xã Nam Đường số 140, Urumqi 830004, Trung Quốc

Vui lòng liên lạc để biết thêm thông tin:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche Desticola có nhiều tác dụng, click vào đây để biết thêm

Trừu tượng: Cistanche tubulosalà một loại thuốc thảo dược truyền thống của Trung Quốc được sử dụng rộng rãi để điều chỉnh khả năng miễn dịch vàphenylethanoid glycoside(CPhGs) là một trong những thành phần chính chịu trách nhiệm cho hoạt động này. Tuy nhiên, việc áp dụng CPhGs bị ảnh hưởng tiêu cực bởi khả năng hấp thụ kém và sử dụng đường uống thấp. Phân phối thuốc theo mục tiêu là một hướng phát triển quan trọng của dược phẩm. Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng CPhGs có thể ngăn chặn sự dẫn truyền của các con đường tín hiệu trong TGF-p1 / smad và ức chế sự hoạt hóa của các tế bào hình sao gan (HSCs). Mục đích của nghiên cứu này là đánh giá tác dụng chống xơ hóa gan của các liposome CPhG bằng cách ức chế hoạt hóa HSC, thúc đẩy quá trình apoptosis, ngăn chặn chu kỳ tế bào, ngăn chặn sự dẫn truyền của các đường truyền tín hiệu trong kết dính khu trú kinase (FAK) / phosphatidylinositol -3- kinase (PI3K) / protein kinase B (Akt), và xác định chúng có hoạt tính bảo vệ gan in vitro. Các nghiên cứu về giải phóng in vitro đã chứng minh rằng liposome CPhG có tác dụng giải phóng bền vững so với CPhG của thuốc. Sự tăng sinh HSC bị ức chế sau khi điều trị với liposome CPhG (29,45,14,72, 7,36 ^ g / mL), với giá trị IC50 là 42,54 Rg / mL trong xét nghiệm MTT. Các nồng độ khác nhau của các liposome CPhG có thể ức chế sự tăng sinh HSC, thúc đẩy quá trình apoptosis và ngăn chặn chu kỳ tế bào. Phương pháp MTT cho thấy sự ức chế rõ rệt sự tăng sinh HSC sau khi điều trị CPhG liposome và yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu của chuột tái tổ hợp-BB (rrPDGF-BB). Mức độ collagen -1, chất ức chế metallopeptidase 1 (TIMP -1), actin cơ trơn (a-SMA) và PI3K / Akt được phosphoryl hóa được điều chỉnh giảm và ma trận metalloproteinase -1 (MMP { {23}}) đã được điều chỉnh, bằng cách tiền xử lý với các nồng độ khác nhau của liposome CPhG. Hơn nữa, 29,45 Rg / mL của liposome CPhG có thể làm giảm sự biểu hiện của protein FAK và protein PI3K và Akt đã được phosphoryl hóa ở hạ lưu của FAK bằng cách biểu hiện quá mức của gen FAK. Thí nghiệm này cho thấy rằng liposome CPhG có thể ức chế sự hoạt hóa của HSC bằng cách ức chế FAK và sau đó làm giảm sự biểu hiện của phosphoryl hóa Akt / PI3K, do đó cung cấp những hiểu biết mới về ứng dụng của CPhGs đối với xơ hóa gan.

Từ khóa: phenylethanoid glycosideliposome; tế bào hình sao gan; sự sinh sôi nảy nở; sự chết tế bào; chu kỳ tế bào; FAK / PI3K / Akt,

các yếu tố, chẳng hạn như TGF-p1, rượu, chất độc và nhiễm mỡ, có thể dẫn đến việc kích hoạt HSC. PDGF cũng có thể dẫn đến việc kích hoạt các HSC [4]. Hiện tại, các chiến lược điều trị nhắm vào HSC để ngăn ngừa xơ hóa gan bao gồm ức chế kích hoạt, tăng sinh và chu kỳ tế bào của HSC, cũng như kích thích quá trình tự chết của HSC [5].

Cistanche tubulosa(họ Orobanchaceae), một loài thực vật ký sinh, được trồng rộng rãi ở khu vực phía nam Tân Cương, Trung Quốc.C. tubulosađã được chứng minh là có các hoạt động khác nhau, bao gồm tăng cường khả năng miễn dịch của sinh vật, cải thiện sức bền của sinh vật, bổ thận, điều trị liệt dương và tăng trí thông minh;

1. Giới thiệu

nó cũng có đặc tính chống oxy hóa và chống lão hóa [6]. Loại cây này chứa phenylethanoid glycoside (CPhGs), iridoids và polysaccharides, trong đó CPhGs là một số loài có hoạt tính sinh học chính [7]. Trong một nghiên cứu trước đây, chúng tôi đã phát hiện ra rằng CPhGs có thể ngăn chặn sự dẫn truyền của các con đường tín hiệu trong TGF-p1 / smad, ức chế sự hoạt hóa của HSC và có tác dụng phòng ngừa xơ gan do albumin huyết thanh bò ở chuột [7,8]. Tuy nhiên, CPhGs có khả năng hòa tan trong nước tốt và hòa tan trong lipid kém và bị ảnh hưởng bởi các yếu tố bên ngoài như độ chua và các enzym phân hủy, làm giảm tính ổn định và hiệu quả của CPhGs [9]. Sau khi dùng đường tiêu hóa, CPhGs không ổn định trong đường tiêu hóa của chuột, và quá trình thủy phân các liên kết glycoside có thể dễ dàng xảy ra. Khả dụng sinh học đường uống của chuột chỉ là 0. 83 phần trăm, vì vậy rất khó xác định vai trò điều trị của nó [10]. Vì vậy, chúng ta phải tìm ra một loại thuốc chống xơ hóa an toàn, hiệu quả, duy trì và nhắm mục tiêu cho HSC để cải thiện hiệu quả điều trị của chúng. Hệ thống phân phối thuốc dạng hạt nano cung cấp một chiến lược thay thế để khắc phục những thiếu sót này vì những ưu điểm của chúng, bao gồm khả năng tải thuốc cao và lưu thông máu lâu [11]. Chúng có ái lực mạnh với gan và có thể đưa thuốc trực tiếp vào tế bào thông qua quá trình nội bào và dung hợp. Liposome không biến đổi chủ yếu phân bố trong các mô hoặc cơ quan được phát triển bởi hệ thống lưới nội mô (RES) và có chức năng nhắm mục tiêu thụ động đến gan [12]. Do đó, các liposome CPhG được điều chế bằng cách phân tán màng và bao bọc thứ cấp để cung cấp tác dụng chống xơ hóa. Trong nghiên cứu này, chúng tôi nhằm mục đích điều tra tác động của liposome CPhG đối với sự tăng sinh HSC, quá trình chết rụng và chu kỳ tế bào, cũng như các cơ chế của nó.

2. Kết quả

2.1. Tính chất vật lý củaCPhG Liposome

Các tính chất vật lý của liposome CPhG chuẩn bị như sau: Kích thước hạt là (216,7 ± 3,47) nm, thế Zeta là (-55. 6 ± 1,3) mV. Như trong Hình 1, các hạt có dạng tròn, được phủ một lớp dày đồng nhất trên bề mặt và sự phân bố kích thước hạt là đồng đều. Hiệu suất tải thuốc và đóng gói của liposome CPhG là (3,71 ± 0. 32) phần trăm và (38,46 士 7,85) phần trăm.

2.2. Giải phóng trong ống nghiệm từ các liposome CPhG và CPhGs

Tỷ lệ phóng thích tích lũy ước tính được tính toán và vẽ biểu đồ dưới dạng hàm thời gian cho các liposome CPhG và CPhG (Hình 2). Trong nghiên cứu hiện tại; tốc độ giải phóng của CPhG sau 12 giờ được chuẩn hóa thành 100 phần trăm, trong khi của liposome CPhG là gần 100 phần trăm sau 24 giờ và tốc độ giải phóng của CPhG tăng lên theo thời gian. Dữ liệu được phân tích bằng cách sử dụng các mô hình phù hợp khác nhau cho các cơ chế phát hành có kiểm soát, bao gồm các phương trình bậc 0, bậc nhất và Higuchi. Các phương trình phù hợp và hệ số tương quan cho ba mô hình phát hành được trình bày trong Bảng 1.

Mô hình phù hợp nhất cho CPhGs và liposome CPhG là Higuchi và phương trình bậc nhất. Nghiên cứu giải phóng trong ống nghiệm của các liposome CPhG không cho thấy bất kỳ hiệu ứng bùng nổ nào. Hàm phân phối phù hợp nhất đã được chọn để tính toán các thông số hòa tan T50 (hòa tan 50 phần trăm). Kết quả cho thấy thời gian lưu trung bình của liposome CPhG lâu hơn CPhGs và T50 của liposome CPhG là 9,39 giờ. So với 1,69 giờ đối với CPhGs, các liposome CPhG thể hiện tác dụng giải phóng bền vững rõ ràng (Bảng 2).

Đầu tiên, chúng tôi nghiên cứu tác động gây độc tế bào của liposome CPhG trên HSC bằng xét nghiệm MTT in vitro. HSC đã tiếp xúc với các nồng độ khác nhau của liposome CPhG, từ 0 đến 117,79 卩 g / mL trong 24 giờ. Các liposome CPhG làm giảm khả năng tồn tại của HSC theo cách phụ thuộc vào liều lượng và giá trị IC50 của chúng là 42,535 (ví dụ / mL. Ảnh hưởng của các liposome CPhG (29,45, 14,72 và 7,36 ^ g / mL) trên các tế bào ở 24, 48 và 72 giờ được thể hiện trong Hình 3. Sau khi điều trị bằng liposome CPhG, sự tăng sinh của HSC bị ức chế đáng kể tại các thời điểm khác nhau (Hình 3).

Sự giải phóng lactate dehydrogenase (LDH) của HSC được phát hiện sau 24 giờ điều trị với các nồng độ khác nhau của CPhG liposome. Kết quả được trình bày trong Bảng 3. HSC được điều trị bằng liposome CPhG không có ảnh hưởng đáng kể đến việc giải phóng LDH.

2.4. CPhG Liposome gây ra quá trình tự chết của HSCs và bắt giữ chu kỳ tế bào

HSC được tiếp xúc với liposome CPhG (29,45,14,72,7,36 卩 g / mL) trong 24 giờ, và nhuộm kép annexin-V-FITC / PE được thực hiện để phát hiện apoptosis bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy, như trong Hình 4a. Tổng số tế bào chết theo thống kê tăng lên so với nhóm đối chứng (p <0. 05).="" sau="" 24="" giờ="" điều="" trị="" trên="" hsc="" cho="" mỗi="" nhóm="" liều,="" các="" liposome="" cphg="" (29,45="" ^="" g="" ml)="" có="" thể="" gây="" ra="" quá="" trình="" chết="" muộn="" của="" các="" hsc="" và="" tỷ="" lệ="" tế="" bào="" apoptotic="" muộn="" cao="" hơn="" so="" với="" tế="" bào="" apoptotic="" sớm.="" tỷ="" lệ="" các="" tế="" bào="" apoptotic="" sớm="" cao="" hơn="" nhiều="" so="" với="" các="" tế="" bào="" apoptotic="" muộn="" trong="" các="" nhóm="" được="" xử="" lý="" liposome="" cphg="" (14,72="" và="" 7,36|^="" g="" ml).="" những="" kết="" quả="" này="" chỉ="" ra="" rõ="" ràng="" rằng="" liposome="" cphg="" gây="" ra="" quá="" trình="" apoptosis="" của="" tế="" bào="" gan,="" đặc="" biệt="" là="" trong="" giai="" đoạn="" cuối="" của="" hscs.="" ngoài="" ra,="" quá="" trình="" apoptosis="" toàn="" phần="" tăng="" lên="" theo="" liều="" lượng="" của="" các="" liposome="" cphg.="" những="" kết="" quả="" này="" cho="" thấy="" rằng="" các="" liposome="" cphg="" có="" thể="" ức="" chế="" sự="" hoạt="" hóa="" của="" hscs="" và="" xơ="" hóa="" gan="" bằng="" cách="" gây="" ra="" quá="" trình="" apoptosis="" của="">

Để xác định ảnh hưởng của liposome CPhG đối với chu kỳ tế bào của HSC, HSC được xử lý với liposome CPhG ở các nồng độ 29,45, 14,72 và 7,36 昭 / mL trong 24 giờ, và được phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy (Hình 4b). Kết quả cho thấy rằng tỷ lệ ô trong pha G 0 / G1 đã tăng lên đáng kể (p <{{1 0}}.="" 05),="" trong="" khi="" tỷ="" lệ="" ô="" trong="" pha="" s="" là="" đáng="" kể="" giảm="" (p=""><0,05). hơn="" nữa,="" tỷ="" lệ="" tế="" bào="" ở="" pha="" g2="" m="" đã="" giảm="" đáng="" kể="" khi="" so="" sánh="" với="" nhóm="" đối="" chứng=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. Tìm hiểu kỹ về (các) Cơ chế hoạt động của C PhG Liposomes In Vitro

2.5.1. CPhG Liposome ngăn chặn sự phát triển HSCs bằng cách kích thích rrPDGF-BB

Để nghiên cứu sâu hơn về tác động của liposome CPhG đối với sự tăng sinh được kích thích bởi rrPDGF-BB của HSC, một thử nghiệm MTT đã được thực hiện để đo khả năng tồn tại của HSC được xử lý với nồng độ đặt trước của liposome CPhG trong 24, 48 và 72 giờ ( Hình 5).

Sau 24 giờ điều trị với HSC được kích thích bởi rrPDGF-BB và 29,45,14,721 và 7,36 昭 / mL của liposome CPhG, tỷ lệ sống sót của các tế bào trong mỗi nhóm liều tương ứng là 67,5%, 75,3% và 89,2%. Sau 48 giờ, tỷ lệ sống sót lần lượt là 49,2%, 58,6% và 73,5% trong các ô
của mỗi nhóm liều. Sau 72 giờ điều trị, tỷ lệ sống sót của các tế bào trong mỗi nhóm liều tương ứng là 45,3%, 59,2% và 79,2%. Kết quả cho thấy các liposome CPhG có tác dụng ức chế đáng kể HSC được kích thích bởi rrPDGF-BB, và tác dụng ức chế này trở nên rõ ràng hơn khi tăng liều. Người ta cho rằng tác dụng ức chế của các liposome CPhG trên HSC góp phần vào hoạt động chống tăng sinh CPhGliposomo.

2.5.2. Các liposome CPhG ức chế sự kích hoạt HSC trong ống nghiệm

HSC trong không gian Disse tạo ra các thành phần ECM như collagen -1, (s-SMA và collagen III. Các yếu tố khác điều chỉnh sự phát triển của ECM, chẳng hạn như MMP và TIMP, cũng được sản xuất bởi HSC [5]. Để nghiên cứu thêm về cơ chế gây ra rrPDGF-BB trong HSC, chúng tôi đã đánh giá sự biểu hiện của các protein liên quan đến ECM, bao gồm collagen -1, Cosma, collagen III, MMP -1 và TIMP {{8} }. Hình 6a chứng minh rằng các nhóm liposome CPhG (29,45,14,72, 7. 36 4 g / mL) có thể làm giảm mức độ biểu hiện mRNA của collagen -1, a-SMA và TIMP {{18} } và tăng mức độ biểu hiện mRNA của MMP -1 hơn nhóm rrPDGF-BB.

Hình 6. Ảnh hưởng của liposome CPhG lên sự biểu hiện của collagen -1, a-SMA, TIMP -1 và MMP -1 trong HSC. (a) Biểu hiện mRNA của collagen -1, a-SMA, TIMP -1 và MMP -1 trong HSC (xét nghiệm RT-PCR). (b) Sự biểu hiện protein của collagen {{1 0}} và a-SMA. A, nhóm kiểm soát; B, nhóm được điều trị rrPDGF-BB; C, nhóm được xử lý liposome rrPDGF-BB cộng với CPhG 29,45 g / mL; D, rrPDGF-BB cộng với liposome CPhG 14,72 (_ nhóm được điều trị ig / mL; E, rrPDGF-BB cộng với liposome CPhG 7. 3 6 卩 g / m L nhóm d; Dữ liệu được thể hiện là trung bình 土 SD. ** p <0. 01,="" khác="" biệt="" đáng="" kể="" so="" với="" nhóm="" hsc="" được="" kích="" hoạt="" rrpdgf-bb.="" #="" p=""><0,05, khác="" biệt="" đáng="" kể="" so="" với="" nhóm="" đối="" chứng.="" 6-="" actin="" đã="" được="" sử="" dụng="" như="" một="" kiểm="" soát="" nội="">

Các liposome CPhG cũng làm tăng mức mRNA của MMP -1. Mức độ a-SMA và collagen -1 được biểu hiện cao trong HSC được kích hoạt bằng rrPDGF-BB. Ngược lại, các liposome CPhG làm giảm mức a-SMA và collagen -1 (Hình 6b). Đặc biệt ở nồng độ cao (29,45 ^ g / mL), CPhG liposome làm giảm sự gia tăng collagen -1 và biểu hiện a-SMA thông qua rrPDGF-BB.

2,53 Liposome CPhG ức chế con đường truyền tín hiệu PI3K / Akt

PI3K / Akt là một con đường dẫn truyền tín hiệu quan trọng qua trung gian của các thụ thể tyrosine kinase. Con đường tín hiệu PI3K / Akt hoạt động như một cảm biến để phản ứng với các kích thích ngoại bào và làm trung gian cho các tín hiệu tế bào, do đó đóng một vai trò quan trọng trong quá trình chết và tăng sinh tế bào bằng cách ảnh hưởng đến hoạt động của các phân tử tác động cuối [13]. Để xác minh xem con đường PI3K / Akt có tham gia vào tác dụng chống tăng sinh của các liposome CPhG trên HSC hay không, sự biểu hiện và mức độ phosphoryl hóa của PI3K / Akt đã được kiểm tra bằng phân tích Western blot. Kết quả cho thấy nồng độ p-PI3K và p-Akt giảm liên tục ở HSC sau 24 giờ điều trị với liposome CPhG, cho thấy rằng tác dụng chống tăng sinh của liposome CPhG chống lại HSC có liên quan đến việc vô hiệu hóa con đường PI3K / Akt. , như trong Hình 7.

2.5.4. Liiposomes CPhG có thể điều chỉnh giảm sự biểu hiện của protein con đường PI3K / Akt trong HSC của plasmid biểu hiện quá mức qua trung gian rrPDGF-BB

FAK là một gen quan trọng quy định con đường tín hiệu PI3K / Akt. FAK được kích hoạt có thể phosphoryl hóa PI3K, dẫn đến quá trình phosphoryl hóa Akt. FAK làm trung gian truyền tín hiệu của thụ thể tyrosine-protein kinase, Tích phân và các con đường khác đến tế bào, là điểm nối và trung tâm của một số con đường nội bào trong quá trình kích hoạt HSCs. Do đó, chúng tôi suy đoán

rằng các liposome CPhG có thể ngăn chặn hoạt động của con đường tín hiệu PI3K / Akt bằng cách làm suy giảm sự hoạt hóa của FAK. Sau đó, chúng tôi xác nhận giả thuyết này bằng cách chứng minh sự biểu hiện quá mức của gen FAK.

(pEX {{0}} NC) cộng với CPhG liposome nhóm 29,45 Lg / mL giảm đáng kể (p <0,01).

thấm estern với các kháng thể sơ cấp cụ thể. ** p <0. 01,="" khác="" biệt="" đáng="" kể="" so="">

kích thích rrPDGF-BB cộng với nhóm pEX -3- FAK. cộng với p <0. 0="" 5,="" khác="" biệt="" đáng="" kể="" so="" với="" nhóm="" được="" điều="" trị="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0,01, khác="" biệt="" đáng="" kể="" so="" với="" kích="" thích="">

cộng với nhóm NC -3- pEX. -actin đã được sử dụng như một kiểm soát nội bộ.

cistanche có thể chống ung thư

3. Thảo luận

CPhGs đã được chứng minh là có nhiều hoạt động sinh học, bao gồm hoạt động chống viêm [14,15], hoạt động chống loãng xương [16,17], tác dụng an thần [18], hoạt động chống mệt mỏi [19], tác dụng bảo vệ thần kinh [ 20], và hoạt động bảo vệ gan [21,22]. Yang và cộng sự. nhận thấy rằng một trích xuất củaC. tubulosacó thể trì hoãn đáng kể tiến trình xơ hóa gan bằng hóa chất thực nghiệm bằng cách ức chế tổng hợp collagen và giảm stress oxy hóa [22]. Tuy nhiên, hiệu quả của CPhGs như

chất bảo vệ nhiệt bị hạn chế bởi tính thấm kém và sinh khả dụng thấp [23]. Vì vậy, cần mở rộng việc áp dụng CPhGs bằng cách phát triển một hệ thống phân phối hiệu quả để khắc phục những trở ngại này.

Trong những năm gần đây, cả nghiên cứu thuốc và nghiên cứu lâm sàng đều xác nhận rằng việc sử dụng các hạt nano làm chất mang thuốc có thể cải thiện hiệu quả của thuốc in vivo. Liposome là một số hạt nano quan trọng nhất [24].

Liposome có thể được sử dụng làm chất vận chuyển thuốc để phân phối thành công thuốc chống viêm, thuốc chống ung thư, thuốc kháng sinh, thuốc chống nấm và các loại thuốc khác nhau [25]. Liposome cũng có thể cải thiện độ ổn định của thuốc, tăng khả năng hòa tan của thuốc và thúc đẩy tính tương hợp sinh học [26]. Mặt khác, các nghiên cứu đã chỉ ra rằng hệ thống phân phối thuốc của các hạt nano rắn (trong khoảng 10-1000 nm) có thể tập trung 8 0 phần trăm liều lượng thuốc trong gan, giúp thuốc đi vào tế bào gan [27]. Jing Zhu và cộng sự. phát hiện ra rằng galanin-liposome có tác dụng nhắm mục tiêu gan tốt [28]. Do đó, tác dụng nhắm mục tiêu thụ động của thuốc bắc nano có thể được sử dụng để điều trị các bệnh về gan hoặc các bệnh khác. Kích thước hạt của liposome CPhG được chuẩn bị trong nghiên cứu này, có một mức độ nhắm mục tiêu gan nhất định, là (216,7 ± 3,47) nm. Hành vi giải phóng thuốc là một thuộc tính quan trọng của hệ thống phân phối thuốc nano. Vì CPhG có khả năng hòa tan trong nước tốt, dung dịch đệm PBS (pH=6. 0) được sử dụng làm môi trường giải phóng. Từ đường cong giải phóng, có thể thấy rằng trước 2 giờ, tỷ lệ giải phóng các liposome CPhG nhỏ hơn 40%, không xảy ra hiện tượng phóng thích đột ngột và có một tác dụng giải phóng duy trì nhất định so với giải phóng CPhG. Từ phương trình đường cong giải phóng phù hợp, việc giải phóng các liposome CPhG trong dung dịch đệm photphat ở pH=6. 0 phù hợp với phương trình Higuchi.

cistanchecó thểchống apoptosis

Trong các bệnh gan mãn tính, sự hoạt hóa liên tục của các HSC dẫn đến xơ hóa gan [29]. Do đó, việc ức chế sự kích hoạt, tăng sinh và chu kỳ tế bào của HSC hoặc gây ra quá trình tự chết của HSC, có thể là điểm khởi đầu mới cho liệu pháp điều trị xơ hóa gan có mục tiêu [30-33]. Nhiều nghiên cứu đã phát hiện ra rằng quá trình apoptosis là chìa khóa để đảo ngược quá trình xơ hóa gan bằng cách thúc đẩy quá trình apoptosis [34]. Sự phát triển của xơ hóa gan phụ thuộc vào sự hoạt hóa của HSCs, có thể cung cấp khả năng ức chế hoạt hóa HSC và gây ra quá trình apoptosis để ngăn ngừa hoặc điều trị xơ hóa gan [35,36]. LDH là một enzym trong dịch bào, được giải phóng trong môi trường nuôi cấy khi màng tế bào bị tổn thương. Vì những lý do này, chúng tôi đã thực hiện các nghiên cứu trong ống nghiệm về tỷ lệ sống sót của tế bào, hàm lượng LDH trong tế bào, quá trình apoptosis và chu kỳ tế bào của HSC tiếp xúc với liposome CPhG. Kết quả cho thấy các liposome CPhG ức chế mạnh mẽ khả năng tồn tại và tăng sinh của HSC và tăng tỷ lệ tế bào apoptotic phụ thuộc vào nồng độ. Hơn nữa, kết quả của chu kỳ tế bào chỉ ra rằng các liposome CPhG có thể gây ra bắt giữ chu kỳ tế bào trong pha G1. Kết quả cho thấy chìa khóa để các liposome CPhG ngăn ngừa và điều trị bệnh xơ gan là điều chỉnh sự tăng sinh tế bào, quá trình chết rụng và chu kỳ tế bào. So với nhóm đối chứng trống, hàm lượng LDH giữa mỗi nhóm có xu hướng tăng dần. Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể (p> 0. 05), cho thấy rằng mặc dù hoạt động giảm đối với các HSC bị ảnh hưởng bởi các liposome CPhG, hầu hết các màng tế bào vẫn còn nguyên vẹn. Sự ức chế sự tăng sinh của HSCs bởi các liposome CPhG không phải do độc tính của thuốc đối với tế bào.

PDGF là yếu tố quan trọng nhất ảnh hưởng đến sự gia tăng của HSC. Các thụ thể PDGF (PDGF-Ra và -p) thuộc họ thụ thể tyrosine kinase. PDGF-AA liên kết riêng với PDGF-Ra, trong khi chuỗi PDGF-B liên kết và đồng phân hóa với cả PDGF-Ra và -p [37]. Sau khi liên kết phối tử với PDGF-R, các thụ thể đime hóa, sau đó dẫn đến quá trình phosphoryl hóa dư lượng tyrosine bên trong và kích hoạt một số con đường tín hiệu xuôi dòng, cuối cùng gây ra sự gia tăng và di chuyển của các HSC đã hoạt hóa. Quá trình này dẫn đến việc sản xuất và lắng đọng quá nhiều collagen và các ECM khác, do đó thúc đẩy sự phát triển và tiến triển của xơ hóa gan [38]. Breitkopf và cộng sự. cho thấy sự biểu hiện quá mức ở gan của PDGF-BB dẫn đến tăng sinh HSC và xơ hóa gan [39]. Trong nghiên cứu của mình, chúng tôi đã sử dụng rrPDGF-BB như một chất kích thích để kích hoạt HSC và mỗi nhóm liposome CPhG được định lượng có thể ức chế sự gia tăng của HSC và thể hiện mối quan hệ giữa liều lượng và hiệu ứng rõ ràng. Người ta cho rằng tác dụng ức chế của liposome CPhG trên HSC góp phần vào hoạt động chống tăng sinh của CPhG liposome.

Kích hoạt HSC có liên quan đến nhiều thay đổi trong các kiểu biểu hiện gen của tế bào. Đặc biệt, những thay đổi trong biểu hiện gen của collagen -1 và a-SMA có liên quan nhiều nhất đến đặc tính xơ hóa của các HSC được kích hoạt [40]. MMPs là các endopeptidase phụ thuộc vào kẽm, đóng vai trò quan trọng trong việc phân hủy tất cả các thành phần protein ECM trong các điều kiện sinh lý và bệnh lý. Các MMP và TIMP tương ứng làm trung gian cho sự tổng hợp và suy thoái của ECM. MMP có thể thúc đẩy suy thoái ECM. Sự cân bằng tinh tế giữa MMPs và TIMPs xác định sự xuất hiện của xơ hóa gan [29]. So với nhóm rrPDGF-BB, sự biểu hiện của TIMP -1, a-SMA và collagen -1 trong nhóm liposome CPhG tăng đáng kể, trong khi sự biểu hiện của MMP -9 giảm. Điều trị liposome CPhG đã đảo ngược đáng kể các biểu hiện bất thường do rrPDGF-BB gây ra ở HSC. Những dữ liệu này chỉ ra rằng liposome CPhG có thể ức chế việc tạo ra ECM bằng cách khôi phục sự cân bằng giữa MMP và TIMP, do đó làm tăng mức MMP -1 và giảm sự biểu hiện của TIMP -1, a-SMA và collagen -1 và có khả năng thúc đẩy sự suy thoái chất nền ngoại bào.

FAK là một loại phức hợp bám dính tiêu điểm. PDGF cũng có thể kích hoạt FAK bằng cách tương tác với protein ECM thông qua Integrarin [41]. Phức hợp kết dính tiêu điểm cung cấp một cảm biến trực tiếp về tính toàn vẹn của môi trường ngoại bào. Việc kích hoạt FAK dẫn đến việc kích hoạt PI3K. PI3K đã được chứng minh là có liên quan đến sự tăng sinh của một số loại tế bào [42]. Vai trò quan trọng của nó trong HSC đã được thể hiện thông qua việc sử dụng các chất ức chế đặc hiệu PI3K LY294002 và wortmannin để ngăn chặn quá trình phân bào và hóa học do PDGF gây ra mà không ảnh hưởng đến quá trình tự động phosphoryl hóa của thụ thể PDGF [43]. PI3K được tuyển chọn vào các thụ thể PDGF đã được phosphoryl hóa đime hóa, kích hoạt protein kinase C (PKC), Akt và p70S6 kinase (p70S6K) [44]. Người ta đã báo cáo rằng FAK âm tính trội (Ad-FAKCD) đã được sử dụng để ngăn chặn hoạt động của FAK và ức chế sự hoạt hóa PI3K gây ra bởi sự tăng sinh PDGF và HSCs sau khi điều trị PDGF [45]. Do đó, chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng con đường FAK / PI3K / Akt là mục tiêu khả dĩ cho các liposome CPhG.

Kết quả của chúng tôi chứng minh rằng so với kích thích rrPDGF-BB cộng với nhóm X -3- FAK, mức độ biểu hiện protein của FAK, PI3K được phosphoryl hóa và Akt được phosphoryl hóa được điều chỉnh giảm trong kích thích rrPDGF-BB cộng với X -3- FAK cộng với nhóm CPhG liposome 29,45 Lg / mL. Những kết quả này cho thấy rằng xử lý CPhG liposome 29,45 Lg / mL có thể làm giảm sự biểu hiện của protein FAK và các protein PI3K và Akt đã được phosphoryl hóa ở hạ lưu của FAK.

Với việc nghiên cứu sâu hơn về hóa học và dược lý của các loại thuốc Đông y, ngày càng có nhiều hoạt chất của các loại thuốc Đông y được tìm ra và khẳng định. Paclitaxel, artemisinin, và các loại thuốc khác đã được công nhận rộng rãi là thuốc điều trị đầu tay cho các bệnh liên quan trên khắp thế giới. Tuy nhiên, đồng thời cũng cho thấy rằng mặc dù tác dụng dược lý in vitro của nhiều dược liệu Trung Quốc rất mạnh, nhưng chúng có khả năng hòa tan trong nước kém, thời gian bán hủy ngắn, kém ổn định, sinh khả dụng thấp, tác dụng phụ độc hại và nhiều các vấn đề khác hạn chế nghiêm trọng ứng dụng y học và lâm sàng của chúng. Hệ thống phân phối thuốc nano là một hệ thống phân phối thuốc mới có nhiều tiềm năng phát triển và là một điểm nóng trong nghiên cứu dược phẩm hiện đại. Ứng dụng của nó trong việc nghiên cứu và phát triển các dạng thuốc Đông y mới không chỉ cải thiện các dạng thuốc Đông y mà còn nâng cao hiệu quả chữa bệnh của thuốc Đông y ở một mức độ nhất định và tăng tính ổn định của thuốc in vivo. Hơn nữa, liposome không biến tính hầu hết được hấp thụ bởi RES, tùy thuộc vào kích thước hạt, tính chất bề mặt và các yếu tố khác của chúng. Chúng cũng được nhắm mục tiêu thụ động đến gan. Để cải thiện hiệu quả nhắm mục tiêu gan của các liposome thông thường, nồng độ của mô đích có thể được tăng lên bằng cách kết nối các phối tử cụ thể hoặc các nhóm chức năng cụ thể.

Do đó, trong nghiên cứu trong tương lai, chúng ta nên chú trọng đến các tính chất vật lý và hóa học của chiết xuất và tinh chế CPhG, chẳng hạn như độ hòa tan, độ ổn định, tính axit và độ kiềm, cũng như nghiên cứu về dược sinh học và dược động học. Chúng ta nên thiết lập một lý thuyết thiết kế công thức độc đáo, nền tảng công nghệ bào chế và phương pháp đánh giá chất lượng cho CPhG và cũng phát triển nhiều hệ thống nạp thuốc nano cho CPhG, để đảm bảo CPhG được sử dụng triệt để nhất có thể. Việc tận dụng triệt để những ưu điểm này sẽ là hướng nghiên cứu trong tương lai của chúng tôi.