PHẦN 2 Chống oxy hóa và bảo vệ tế bào của Acteoside và các dẫn xuất của nó: Hóa học so sánh và cơ học
Mar 08, 2022
Phần 2 Chất chống oxy hóa Cistanche Acteoside bảo vệ tế bào như thế nào?
Bấm vào đây để đến phần 1
Vui lòng liên lạc để biết thêm thông tin:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche Desticola có nhiều tác dụng, click vào đây để biết thêm
3. Thảo luận
Hoạt động chống oxy hóa của các hợp chất phenolic tự nhiên được biết là tham gia vào quá trình chuyển điện tử (ET) [18,19]. Do đó, một số xét nghiệm khử kim loại dựa trên ET đã được sử dụng rộng rãi để đánh giá mức độ chống oxy hóa của phenol, chẳng hạn như xét nghiệm FRAP và CUPRAC. Các hướng dẫn xét nghiệm FRAP phải được đáp ứng với độ pH nhỏ hơn 3,6. Một môi trường axit như vậy đã ngăn chặn thành công sự ion hóa H cộng từ phenol; do đó, xét nghiệm FRAP được coi là một quá trình ET đơn thuần [20,21]. Hiệu quả củaacteosidevà các dẫn xuất của nó trong thử nghiệm FRAP ngụ ý rằng, khi acteoside và các dẫn xuất của nó hoạt động như chất chống oxy hóa, chúng có thể sử dụng con đường ET để phát huy tác dụng chống oxy hóa.
Bên cạnh đó, chúng tôi cũng thực hiện xét nghiệm CUPRAC trong dung dịch đệm pH 7,4. Như đã thấy trong Suppl. 1,acteosidevà liều lượng các dẫn xuất của nó làm tăng Cu của chúng một cách phụ thuộc2 cộng-giảm tỷ lệ phần trăm năng lượng, chỉ ra rằng chúng có thể vẫn còn tiềm năng ET ở pH sinh lý. Tuy nhiên, tiềm năng TBCN của chúng giảm theo thứ tự sau:acteoside> forsythoside B> poliumoside (Bảng 1). Động lực này cho thấy rõ ràng rằng gốc apiosyl trong forsythoside B và gốc rhamnosyl trong poliumoside đã làm giảm tiềm năng ET.
Để kiểm tra khả năng ET xảy ra trong quá trình thu dọn gốc của chúng, một PTIO gốc tự do tập trung oxy ・ đã được đưa vào nghiên cứu. Bằng chứng đo điện thế theo chu kỳ cho thấy rằng PTIO ・ -sử dụng dưới pH 5. 0 là một phản ứng ôxy hoá khử đơn điện tử. Quan sát rằngacteosidevà các dẫn xuất của nó có thể quét gốc PTIO ở pH 4,5 một cách hiệu quả, cho thấy khả năng ET trong quá trình thu dọn gốc của chúng. Rõ ràng, phát hiện này hỗ trợ thêm cho các kết quả nói trên từ các thử nghiệm FRAP và CUPRAC, và các kết quả trước đó rằng một điện tử hiến tặng (e) là một đặc điểm của chất chống oxy hóa phenolic [23].
Tuy nhiên, ở pH sinh lý 7,4, bài luận thu hồi PTIO không chỉ đơn thuần là một con đường ET mà còn bao gồm một con đường chuyển proton- (H cộng). Trong quá trình này, PTIO ・ đã được đề xuất chấp nhận Hthêmtừ phenol để tạo ra đỉnh sản phẩm ([PTIO-H]thêm). Vì Hthêm-transfer luôn đi kèm với ET theo cơ chế từng bước hoặc đồng bộ [24], sản phẩm thực tế (hoặc cuối cùng) là một phân tử [PTIO-H] [22]. PTIO ・ -tìm ở pH 7.4 (Suppl. 1) ngụ ý rằngacteosidevà các dẫn xuất của nó cũng có tiềm năng truyền dẫn cộng H. Các giá trị IC50 (Bảng 1) chỉ ra rằng H tương đốithêm-truy cập tiềm năng theo thứ tự giảm dần củaacteoside>forsythoside B> poliumoside. Rõ ràng, các nguyên tố apiosyl và rhamnosyl cũng làm suy yếu Hthêm-truyền tiềm năng trong quá trình chống oxy hóa.
Như đã thảo luận trước đây, trong quá trình chống oxy hóa của phenol, ET thường đi kèm với proton (Hthêm) chuyển để tạo thành một số cơ chế chống oxy hóa [24], chẳng hạn như chuyển nguyên tử hydro (HAT) [23, 25-27], chuyển electron-proton tuần tự (SEPT) [26,27], mất proton liên tiếp một electron chuyển (SPLET) [26] và chuyển điện tử kết hợp với proton (PCET) [24-26, 28]. Ví dụ, ABTS cộng với • -tìm, một phản ứng bị chi phối bởi sự chuyển đơn điện tử (SET) [29], cũng đã được chứng minh là bị ảnh hưởng bởi mức H cộng gần đây [30]. ABTS cộng với • -tải rác do đó là một xét nghiệm chống oxy hóa dựa trên đa con đường [21,31]. Thực tế làacteosidevà các dẫn xuất của nó có thể quét các gốc ABTS cộng với ・ cho thấy rằng hoạt động chống oxy hóa của chúng cũng có thể được thực hiện thông qua nhiều con đường. Giả thuyết này được khẳng định thêm bởi bằng chứng từ xét nghiệm thu nhận DPPH, một phản ứng bao gồm nhiều con đường HAT, ET, SEPT và PCET [26,32]. Tuy nhiên, phân tích định lượng dựa trên IC50giá trị (Bảng 1) tiết lộ rằng trong ABTS dựa trên đa con đường cộng với các khía cạnh nhặt rác -- và DPPH *,acteosidecao hơn so với forsythoside B và rhamnoside poliumoside tổng hợp của nó. Do đó, có thể suy ra rằng các nguyên tố apiol và rhamnosyl cuối cùng cản trở các điện thế đa đường (đặc biệt là ET và Hthêm-transfer) trong quá trình nhặt rác gốc tự do.
Theo ghi nhận của các tác giả và những người khác [14,26], trong quá trình chống oxy hóa, phản ứng RAF cũng có thể xảy ra. Tuy nhiên, để xác minh khả năng RAF, ba phenylpropanoid glycoside cùng với axit caffeic đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng phân tích UPLC-ESI-Q-TOF-MS / MS. Axit caffeic được tìm thấy để tạo ra một sản phẩm dimer, trong khi ba phenylpropanoid glycoside không tạo ra sản phẩm RAF cao nhất. Phát hiện này cho thấy rõ ràng rằng ba phenylpropanoid glycoside không thể trải qua con đường RAF để phát huy tác dụng chống oxy hóa của chúng. Vì ba phenylpropanoid glycoside có thể được coi là este của axit caffeic (Hình 1), sự khác biệt như vậy giữa axit caffeic và este của axit caffeic cũng chỉ ra rằng gốc rất lớn có thể cản trở việc tạo RAF.
Tổng hợp lại, từ khía cạnh quét sạch gốc tự do,acteosidevà các dẫn xuất của nó có thể trải qua nhiều con đường để phát huy tác dụng chống oxy hóa của chúng. Các con đường chống oxy hóa này ít nhất có liên quan đến ET và H cộng với -transfer (nhưng không phải RAF). Phát hiện của chúng tôi được hỗ trợ một phần bởi nghiên cứu lý thuyếtacteosidecó thể tác động chống oxy hóa thông qua con đường SPLET. Trong quá trình này, trước tiên, acteoside có thể deprotonate (Hthêm-truyền) để nhường anion. Sự deproto hóa được cho là xảy ra trong các chất catechol có tính axit yếu. Sau đó, anion tặng electron để tạo ra dạng gốc phenoxy [33]. Tuy nhiên, các gốc phenoxy với sự liên hợp pn là ổn định ở một mức độ nào đó. Tất nhiên, về khía cạnh này, cần phải có nhiều công việc thử nghiệm hơn nữa trong tương lai.
Điều đáng nói là stress oxy hóa tế bào cũng có thể bắt nguồn từ các kim loại chuyển tiếp (đặc biệt là Fe2 cộng). Fe2 cộngTuy nhiên, ion có thể biến đổi H2O2phân tử thành gốc • OH có hại nhất thông qua phản ứng Fenton (Fe2cộng với H2O2 T Fe3cộng với ・ OH cộng với OH-). Do đó, sự suy giảm của Fe2mức cộng có thể ức chế hiệu quả các gốc ・ OH để giải phóng stress oxy hóa tế bào. Trên thực tế, thải sắt bằng các chất chống oxy hóa phenolic tự nhiên hiện nay đã được phát triển thành một liệu pháp hữu hiệu đối với một số bệnh do stress oxy hóa [34,35].
Trong nghiên cứu này, acteoside và các dẫn xuất của nó được đề xuất là Fe hiệu quả2 cộng- bộ lọc bởi những thay đổi trong quang phổ và màu sắc của dung dịch (Hình 2). Tuy nhiên, acteoside kém hơn hai glucoside trong việc chelat hóa Fe2 cộngvà forsythoside B với gốc apiosyl kém hơn poliumoside với gốc rhamnosyl. Dựa trên sự so sánh các quy cách ưu tiên của chúng (Hình 1, bên phải), người ta đề xuất rằng gốc apiosyl (hoặc rhamnosyl) có thể hỗ trợ phối tử chính (nhóm phenylpropanoid) trong việc chelat hóa Fe2 cộng. Một hiệu ứng tổng hợp như vậy chắc chắn tăng cường Fe2 cộng-khả năng mạ và mở rộng các đỉnh UV-vis. Tuy nhiên, rhamnosyl hiệu quả hơn apiosyl trong Fe của nó2 cộng-khả năng đo sáng. Sự khác biệt có thể là do thực tế là rhamnosyl xảy ra ở dạng ngoại vòng (tức là, aL-rhamnopyranosyl), trong khi apiosyl ở dạng pentacyclic (tức là, pD-apiofuransyl). Một dạng ngoại vòng được biết là lớn hơn và ổn định hơn. Do đó, rhamnosyl ngoại vòng có hiệu quả hơn so với apiosyl pentacyclic trong Fe của nó2 cộng-khả năng đo sáng.
Để kiểm tra xem acteoside và các dẫn xuất của nó có thể loại bỏ ROS hay không, chúng tôi đã tiến hành một thử nghiệm tự oxy hóa pyrogallol. Như đã thấy trong Suppl. 1, tất cả đều có thể quét một cách hiệu quả - gốc, một ROS điển hình xảy ra trong tế bào. Tuy nhiên, hoạt tính sinh học tương đối giảm theo thứ tự poliumoside> forsythoside B>acteoside. Thứ tự này cũng song song với thứ tự của các tác động bảo vệ tế bào (Bảng 2). Phát hiện này chỉ ra rằng tác dụng chung của gốc rhamnosyl hoặc apiosyl là tăng cường tác dụng thu gom ROS hoặc bảo vệ tế bào.
4. Nguyên liệu và phương pháp
4.1. Hóa chất và Động vật
Acteoside (số CAS: 61276-17-3, 97 phần trăm), forsythoside B (số CAS: 81525-13-5, 97 phần trăm) được lấy từ BioBioPha (Côn Minh, Trung Quốc, Phần bổ sung 3). Poliumoside (số CAS: 94079-81-9, 97 phần trăm) đã được nhóm của chúng tôi phân lập từ loại thảo mộc truyền thống của Trung QuốcCallicarpa periHT Chang (Bổ sung 3). DPPH ・, (±) -6- hydroxyl -2, 5,7, 8- tetramethlychromane -2- axit cacboxylic (Trolox), 2, 9- đimetyl {{ 9}}, 10- phenanthroline (neocuproine), 2,4, 6- tripyridyltriazine (TPTZ) và pyrogallol đã được mua từ Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (Thượng Hải, Trung Quốc). (NHq'ABTS [2,2'-azino-bis (3- ethylbenzene-thiazoline -6- muối diammonium axit sulfonic)] được lấy từ Amresco Chemical Co. (Solon, OH, Hoa Kỳ). PTIO ・gốc được mua từ Công ty TNHH Phát triển TCI (Thượng Hải, Trung Quốc). Axit caffeic được mua từ Viện Quốc gia Kiểm soát Dược phẩm và Sản phẩm Sinh học (Bắc Kinh, Trung Quốc). Môi trường Eagle's cải tiến (DMEM) của Dulbecco, huyết thanh bò thai (FBS) và trypsin được mua từ Gibco (Grand Island, NY, Hoa Kỳ). Bộ xét nghiệm AnnexinV / propidium iodide (PI) được mua từ Invitrogen (Carlsbad, CA, Hoa Kỳ). Tất cả các thuốc thử khác đều là loại phân tích.
Chuột Sprague-Dawley (SD) 4 tuần tuổi được lấy từ Trung tâm Động vật của Đại học Trung y Quảng Châu. Quy trình của thử nghiệm này được thực hiện dưới sự giám sát của Ủy ban Đạo đức Động vật của Tổ chức tại Đại học Trung Quốc Quảng Châu (Số phê duyệt 20170306A).
4.2. Các thử nghiệm khử kim loại (FRAP& CUPRAC)
Các xét nghiệm khử kim loại bao gồm Fe3 cộng-reducing thử nghiệm sức mạnh và Cu2 cộng-điểm tra sức mạnh giáo dục. Fe3 cộngkhảo nghiệm -reducing được thành lập bởi Benzie và Strain và được chính thức đặt tên là FRAP [20]. Quy trình thử nghiệm của xét nghiệm này đã được mô tả trong một báo cáo trước đây [9]. Tóm lại, thuốc thử FRAP được điều chế mới bằng cách trộn 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl3,và {{0}}. đệm axetat 25 M với tỷ lệ 1: 1: 10 ở pH 3,6. Mẫu thử nghiệm (x=4-20 L, 0,05 mg / mL) được thêm vào (20 - x) etanol 95%, sau đó là 80 RL thuốc thử FRAP. Sau khi ủ 30- phút ở nhiệt độ môi trường, độ hấp thụ được đo ở bước sóng 595 nm bằng đầu đọc vi tấm (Multiskan FC, Thermo Scientific, Thượng Hải, Trung Quốc). Công suất giảm tương đối của mẫu được tính theo công thức sau:
nơi mộttối đalà độ hấp thụ tối đa của hỗn hợp phản ứng với mẫu, và Aminlà độ hấp thụ tối thiểu trong thử nghiệm. A là độ hấp thụ của mẫu.
Cu2 cộng-công suất đào tạo cũng có thể đặc trưng cho mức độ chống oxy hóa và do đó được gọi là CUPRAC. Thử nghiệm này được thực hiện theo một phương pháp đã được công bố trước đây [36]. Một cách ngắn gọn, 12 RL dung dịch nước CuSOq (10 mmol / L), 12 RL dung dịch etanol neocuproine (7,5 mmol / L) và (75 - x) RL CH3COONH4dung dịch đệm ({{{0}}. 1 mol / L, pH 7,5) được thêm vào các giếng với các thể tích mẫu khác nhau (0,05 mg / mL, 4-20|^ L). Độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm sau 30 phút được đo bằng đầu đọc vi tấm đã nói ở trên. Công suất CUPRAC tương đối được tính bằng công thức cho FRAP. Mộttối đalà độ hấp thụ tối đa của hỗn hợp phản ứng với mẫu, và Aminlà độ hấp thụ tối thiểu trong thử nghiệm. A là độ hấp thụ của mẫu.
4.3. PTI 0・- Nhặt rác
Các xét nghiệm tìm kiếm PTIO * (ở pH 4,5 hoặc pH 7,4) được thực hiện dựa trên phương pháp của chúng tôi [16]. Tóm lại, dung dịch mẫu thử nghiệm (x=0-20 ^ L, 1 mg / mL cho pH 4,5 và {{1 0}}. 5 mg / mL cho pH 7,4) đã được thêm vào (20 - x) rL của 95% etanol, tiếp theo là 80 RL của dung dịch nước PTIO *. Dung dịch nước PTIO * được chuẩn bị bằng cách sử dụng dung dịch phốt phát-bơ (0,1 mM, pH 4,5 hoặc pH 7,4). Hỗn hợp được duy trì ở 37 độ trong 2 giờ, và độ hấp thụ sau đó được đo ở bước sóng 560 nm bằng cách sử dụng đầu đọc vi tấm đã nói ở trên. Phần trăm ức chế PTIO * được tính như sau:
trong đó A là độ hấp thụ của đối chứng không có mẫu và A là độ hấp thụ của hỗn hợp phản ứng với mẫu.
4.4. ABTSthêm*- Nhặt rác và DPPH*- Thử nghiệm nhặt rác
ABTS *thêm- Hoạt động nhặt rác được đánh giá theo phương pháp [37]. ABTS plus * được tạo ra bằng cách trộn 0. 2 mL muối ABTS diammonium (7,4 mmol / L) với 0. 2 mL kali persulfat (2,6 mmol / L). Hỗn hợp được giữ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 12 giờ để cho phép hoàn thành quá trình tạo gốc trước khi được pha loãng với nước cất (theo tỷ lệ khoảng 1: 2 0) sao cho độ hấp thụ của nó ở 734 nm là { {16}}. 35 土 0. 01 bằng cách sử dụng trình đọc vi tấm đã nói ở trên. Để xác định hoạt tính nhặt rác, mẫu thử (x=4-20 RL, 0,05 mg / mL) được thêm vào (20 - x) RL nước cất, sau đó là 80 RL thuốc thử ABTS plus * và độ hấp thụ ở 734 nm được đo 3 phút sau khi trộn ban đầu, sử dụng nước cất làm mẫu trắng.
Hoạt động thu gom tận gốc DPPH * được xác định như đã mô tả trước đây [18]. Tóm lại, 75 RL dung dịch DPPH * (0. 1 rM) được trộn với các nồng độ đã chỉ định của mẫu (0. 025 mg / mL, 5-25 RL) được hòa tan trong metanol. Hỗn hợp được duy trì ở nhiệt độ phòng trong 30 phút, và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 519 nm bằng cách sử dụng đầu đọc vi tấm đã nói ở trên.
Tỷ lệ phần trăm của ABTS cộng với • hoạt động nhặt rác và DPPH *-hoạt động nhặt rác được tính toán dựa trên công thức được trình bày trong Phần 4.3.
4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—MS / MS Phân tích PPH* Sản phẩm phản ứng
Phương pháp này dựa trên nghiên cứu trước đây của chúng tôi [25]. Dung dịch metanol của acteosit được trộn với dung dịch của các gốc DPPH * trong metanol theo tỷ lệ mol 1: 2, và hỗn hợp thu được được ủ trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng. Hỗn hợp sản phẩm sau đó được lọc qua bộ lọc 0. 22- Rm và phân tích bằng hệ thống UPLC được trang bị cột C18 (2. 0 mm id x 1 0 0 mm, 1,6 Rm, Phenomenex, Torrance, CA, Hoa Kỳ). Pha động được sử dụng để rửa giải hệ thống và bao gồm hỗn hợp metanol (pha A) và nước (pha B). Cột được rửa giải ở tốc độ dòng 0,3 mL / phút với chương trình rửa giải gradient sau: 0-10 min, 60-100 phần trăm A; 10-15 min, 100% A. Thể tích bơm mẫu được đặt ở 1 RL để tách các thành phần khác nhau. Phân tích ESI-Q-TOF-MS / MS được thực hiện bằng Triple TOF 5600thêmKhối phổ kế (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) được trang bị nguồn ESI, được chạy ở chế độ ion hóa âm. Phạm vi quét được đặt tại 100-2000 Da. Hệ thống được chạy với các thông số sau: điện áp phun ion, —4500 V; nguồn ion nóng, 550 độ C; khí rèm (CUR, N2), 30 psi; khí phun sương (GS1, Air), 50 psi; Tis khí (GS2, Không khí), 50 psi. Thế năng phân rã (DP) được đặt ở —100 V, trong khi năng lượng va chạm (CE) được đặt ở —40 V với sự lan truyền năng lượng va chạm (CES) là 20 V. Các sản phẩm RAF
được định lượng bằng cách chiết xuất công thức phân tử tương ứng từ sắc ký đồ ion tổng (Suppl. 2).
Thí nghiệm nói trên được lặp lại bằng cách sử dụng forsythoside B, mặt bục và axit caffeic. Tương ứngm/zcác pic được chiết xuất từ công thức phân tử tương ứng từ sắc ký đồ ion tổng (Phần bổ sung 2).
4.6. Phân tích phổ UV-Vis-củaFe2 cộng-Sản phẩm giá
Fe2 cộng-sản phẩm phản ứng mạ của acteoside-Fe2 cộngđược đánh giá bằng phương pháp quang phổ UV-Vis [13]. Đối với thí nghiệm, 3 0 0 của một dung dịch methanolic của acteoside (0,24 mM) được thêm vào 700 rL của một dung dịch FeCl trong nước? 4H2O (168 mM). Dung dịch sau đó được trộn mạnh. Sau đó, hỗn hợp thu được được quét bằng máy quang phổ UV-Vis sau một giờ (Unico 2600A, Thượng Hải, Trung Quốc) ở bước sóng 200-850 nm.
Thí nghiệm nói trên được lặp lại bằng cách sử dụng forsythoside B, hoặc bên bục, thay vì acteoside.
4.7. Thử nghiệm tự động oxy hóa Pyrogallol cho Superoxide Anion (•O2~) Nhặt rác
Phép đo hoạt động nhặt rác superoxide anion (・. {{0}}) dựa trên phương pháp của chúng tôi [17]. Một cách ngắn gọn, mẫu được hòa tan trong etanol ở 1 mg / mL. Dung dịch mẫu (x rL) được trộn với đệm Tris-HCl (980 - x rL, 0,05 M, pH 7,4) có chứa EDTA (1 mM). Khi thêm 20 RL pyrogallol (60 mM trong 1 mM HCl), hỗn hợp được lắc ở nhiệt độ phòng ngay lập tức. Độ hấp thụ ở bước sóng 325 nm của hỗn hợp được đo (Unico 2100, Thượng Hải, Trung Quốc) trên dung dịch đệm Tris-HCl làm mẫu trắng cứ sau 30 s trong 5 phút. - Khả năng nhặt rác được tính toán như sau:
4.8. Hiệu ứng bảo vệ tế bào đối với bmMSCs được nén oxy hóa (Thử nghiệm MTT)
Các bmMSC được nuôi cấy theo các báo cáo trước đây của chúng tôi [38] với những sửa đổi nhỏ. Tóm lại, tủy xương được lấy từ xương đùi và xương chày của một con chuột. Các mẫu tủy được pha loãng với DMEM (glucose thấp) có chứa 1 0 phần trăm FBS. Các bmMSC được chuẩn bị bằng cách ly tâm gradient ở 900 g trong 30 phút ở 1,073 g / mL Percoll. Các tế bào đã chuẩn bị được tách ra bằng cách xử lý với 0,25% trypsin và được chuyển vào bình nuôi cấy ở 1 x 104 / cm2. Các bmMSC ở đoạn 3 được đánh giá về tính đồng nhất của tế bào nuôi cấy bằng cách phát hiện CD44 bằng xét nghiệm MTT [39].
Thử nghiệm MTT được sử dụng để đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào của acteoside và các dẫn xuất của nó đối với bmMSCs [40]. Mô hình tổn thương được thiết lập dựa trên nghiên cứu trước đó [41]. Quy trình thử nghiệm được minh họa ngắn gọn trong Hình 3.
4.9. Phân tích thống kê
Mỗi thử nghiệm trong Phần 4. 2-4. 4 và 4.7 được thực hiện trong ba lần và thử nghiệm kiểm tra MTT được thực hiện trong pentaplicate. Dữ liệu được ghi lại là giá trị trung bình土SD (độ lệch chuẩn). Các đường cong đáp ứng liều được vẽ bằng phần mềm chuyên nghiệp Origin 6. 0 (OriginLab, Northampton, MA, USA). Giá trị IC5 0 được xác định là nồng độ cuối cùng của 50 phần trăm ức chế triệt để (công suất giảm tương đối) [42]. So sánh thống kê được thực hiện bởi ANOVA một chiều để phát hiện những khác biệt đáng kể khi sử dụng SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) dành cho Windows.p<0. 05 được coi là có ý nghĩa thống kê.
5. Kết Luận
Ba glycoside phenylpropanoid tự nhiên, cụ thể là, acteoside, forsythoside B, và mặt bục, có thể tham gia vào nhiều con đường để phát huy tác dụng chống oxy hóa, bao gồm ET, H cộng với chất truyền dẫn; và Fe2 cộng-chelating, nhưng không phải RAF. ET và Hthêm- con đường vận chuyển có thể bị cản trở bởi gốc rhamnosyl hoặc apiosyl; tuy nhiên, Fe2 cộng- Con đường tạo thành có thể được tăng cường bởi bã đường (đặc biệt là gốc rhamnosyl). Tác dụng chung của gốc rhamnosyl hoặc apiosyl là tăng cường khả năng thu gom ROS liên quan đến nhiều con đường. Do đó, forsythoside B và poliumoside vượt trội hơn acteoside về tác dụng bảo vệ tế bào.
Nguyên liệu bổ sung:Các tài liệu bổ sung có sẵn trực tuyến. 1. Các đường cong liều lượng đáp ứng; 2. Phổ HPLC-MS; 3. Giấy chứng nhận phân tích của acteoside, forsythoside B, và poliumoside.
Sự nhìn nhận:Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ Khoa học Quốc gia Trung Quốc (81573558, 81603269), Dự án Khoa học và Công nghệ Quảng Đông (2017A050506043) và Quỹ Khoa học Tự nhiên tỉnh Quảng Đông (2 017 A030312009, 2015A030310491).
Sự đóng góp của tác giả:Xian Li và Dongfeng Chen hình thành và thiết kế các thí nghiệm; Aichi Wu điều chế poliumoside; Yulu Xie, Qian Guo và Penghui Xue đã thực hiện các thí nghiệm chống oxy hóa; Ke Li và Wei Zhao thực hiện các thí nghiệm MTT; Hong Xie phân tích dữ liệu; Jiasong Guo tiến hành thí nghiệm oi Hình 2D; Xian Li viết giấy. Tất cả các tác giả đã đọc và duyệt bản thảo cuối cùng.
Xung đột lợi ích:Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.
acteosideTrongcistanche
Một từ viết tắt
ABTS cộng với gốc • 2,2'-azino-bis (3- ethylbenzo-thiazoline -6- sulfonic acid)
bmMSCs tế bào gốc trung mô có nguồn gốc từ tủy xương
CUPRAC cupric giảm khả năng chống oxy hóa
dAMP 2'-deoxyadenosine -5 '- gốc monophosphat
Phương tiện Eagle's được sửa đổi của DMEM Dulbecco
dGMP 2/-deoxyguanosine -5 '- gốc monophosphat
DPPHe 1, gốc picryl-hydrazine 1- diphenyl {2}}
ET chuyển điện tử; FBS: Huyết thanh bò thai
FRAP chống oxy hóa khử ion sắt;
Chuyển nguyên tử hydro HAT
MTT 3- (4, 5- dimethylthiazol -2- yl) -2, 5- diphenyl
Chuyển điện tử kết hợp với proton PCET
PTIOe Gốc oxit 2- phenyl -4, 4,5, 5- tetramethylimidazoline -1- oxyl 3-
Sự hình thành sản phẩm gốc RAF
Các loại oxy phản ứng ROS
SCNT chuyển nhân tế bào soma
Chuyển giao electron-proton tuần tự SEPT
SPLET mất proton tuần tự chuyển electron đơn
TPTZ 2,4, 6- tripyridyl triazine
Trolox (±) Axit cacboxylic -6- hydroxyl -2, 5,7, 8- tetramethlychromane -2-
Người giới thiệu
1. Kubica, P.; Szopa, A.; Ekiert, H. Sản xuất verbascoside và axit phenolic trong sinh khối của Verbena Officinalis L. (vervain) được nuôi cấy trong các điều kiện in vitro khác nhau. Nat. Sản phẩm. Res. 2017, 31, 1663-1668.
2. Lee, JH; Chun, JL; Kim, KJ; Kim, EY; Kim, DH; Lee, BM; Han, KW; Công viên, KS; Lee, KB; Kim, MK Tác dụng của Acteoside như một chất bảo vệ tế bào để tạo ra một con chó nhân bản. PLoS ONE 2016,11, e0159330.
3. Vương, HQ; Xu, YX; Yang, J .; Zhao, XY; Mặt trời, XB; Zhang, YP; Guo, JC; Zhu, CQ Acteoside Bảo vệ Tế bào U nguyên bào thần kinh SH-SY5Y của Con người chống lại Tổn thương tế bào do amyloid gây ra. Brain Res. 2009,1283, 139-147.
4. Yang, JH; Yan, Y .; Lưu, HB; Wang, JH; Hu, JP Tác dụng bảo vệ của Acteoside chống lại Thiệt hại do tia X gây ra trong nguyên bào sợi da người. Mol Med. Bản 2015,12, 2301-2306.
5. Lưu, CH; Liu, TS; Luo, CQ; Zhang, J .; Zeng, XY; Cui, L.; Xie, LJ Xác định forsythiaside B và poliumoside có nguồn gốc và các bộ phận khác nhau từ Callicarpa kwangtungensis. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013, 38, 3324-3326.
6. Giang, WL; Tian, JW; Fu, FH; Zhu, HB; Hou, J. Cửa sổ điều trị và hiệu quả bảo vệ thần kinh của Forsythoside B: Ina Rat Mô hình Thiếu máu não và Chấn thương do tái tưới máu. Eur. J. Pharmacol. 2010, 640, 75-81.
7. Chảo, N.; Hori, H. Hành động chống oxy hóa của Acteoside và các chất tương tự của nó trên quá trình peroxy hóa lipid. Đại diện oxy hóa khử năm 1996, 2, 149-154.
8. Zheng, RL; Shi, YM; Jia, ZJ; Zhao, CY; Zhang, Q.; Tan, XR Sửa chữa nhanh các gốc DNA. Chèm. Soc. Rev. 2010, 39, 2827-2834.
9. Li, XC; Mai, WQ; Chen, DF Nghiên cứu hóa học về tác dụng bảo vệ chống lại sự phá hủy DNA do Hydroxyl gây ra và Cơ chế chống oxy hóa của Myricitrin. J. Chin. Chèm. Soc. 2014, 61, 383-390.
10. Shi, YM; Wang, WF; Hoàng, CY; Jia, ZJ; Yao, S .; Zheng, RL Sửa chữa nhanh các tổn thương DNA bị oxy hóa bởi Phenylpropanoid Glycoside và các chất tương tự của chúng. Sự phát sinh đột biến 2008, 23, 19-26.
11. Jiang, Q.; Li, XC; Tian, YG; Lin, QQ; Xie, H.; Lu, WB; Chi, YG; Chen, DF Chiết xuất dung dịch nước đông khô của Mori Fructus và Mori Ramulus Bảo vệ tế bào gốc trung mô khỏi thiệt hại được xử lý bằng eOH: Cơ chế phân tích sinh học và chống oxy hóa. BMC bổ sung. Altern. Med. 2017,17, 242.
12. Wang, TT; Zeng, GC; Li, XC; Zeng, HP Nghiên cứu trong ống nghiệm về tác dụng chống oxy hóa và bảo vệ của các dẫn xuất hydroxyquinoline 2- được thay thế -8- chống lại H2O 2- gây ra căng thẳng oxy hóa trong BMSC. Chèm. Biol. Thuốc Des. 2010, 75, 214-222.
13. Liu, JJ; Li, XC; Lin, J .; Li, YR; Wang, TT; Giang, Q.; Chen, DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) Bảo vệ tế bào gốc trung mô khỏi stress oxy hóa: Đánh giá sinh học và hóa học cơ học. BMC bổ sung. Altern. Med. 2016, 16, 423.
14. Li, XC; Han, L.; Li, YR; Zhang, J .; Chen, JM; Lu, WB; Zhao, XJ; Lai, YT; Chen, DF; Wei, G. Tác dụng bảo vệ của Sinapine chống lại Thiệt hại do gốc Hydroxyl gây ra đối với các tế bào gốc trung mô và các cơ chế có thể xảy ra. Chèm. Dược phẩm. Bò đực. 2016, 64, 319-325.
15. Bertolo, A.; Capossela, S.; Frankl, G.; Baur, M.; Potzel, T.; Stoyanov, J. Trạng thái oxy hóa dự báo chất lượng trong tế bào gốc trung mô của con người. Tế bào gốc Res. Họ. 2017, 8, 3.
16. Li, XC 2- Phenyl -4, 4,5, 5- Tetramethylimidazoline -1- oxyl 3- Oxit (PTIOe): Chất chống oxy hóa mới và đơn giản Thử nghiệm trong ống nghiệm. J. Agric. Chem chép thực phẩm. 2017, 65, 6288-6297.
17. Li, X. Phương pháp tự động khử ôxy hóa Pyrogallol được cải tiến: Một thử nghiệm nhặt rác Superoxide đáng tin cậy và rẻ tiền, phù hợp cho tất cả các chất chống ôxy hóa. J. Agric. Chem chép thực phẩm. 2012, 60, 6418-6424.
18. Li, XC; Giang, Q.; Wang, TT; Liu, JJ; Chen, DF So sánh tác dụng chống oxy hóa của Quercitrin và Isoquercitrin: Tìm hiểu vai trò của nhóm 6〃-OH. Phân tử 2016, 21,1246.
19. Leopoldini, M.; Marino, T.; Russo, N.; Toscano, M. Tính chất chống oxy hóa của các hợp chất phenolic: Nguyên tử H so với Cơ chế chuyển electron. J. Vật lý. Chèm. A 2004,108, 4916 ^ 922.
20. Benzie, IFF; Strain, JJ Khả năng khử Ferric của Plasma (FRAP) như một thước đo "Sức mạnh chống oxy hóa": Thử nghiệm FRAP. Hậu môn. Hóa sinh. Năm 1996, 239, 70-76.
21. Gulcin, I. Hoạt động chống oxy hóa của các thành phần thực phẩm: Tổng quan. Vòm. Toxicol. 2012, 86, 345-391.
22. Goldstein, S.; Russo, A.; Samuni, A. Phản ứng của PTIO và Carboxy-PTIO với ・ NO, ・ NO2 và O2. J. Biol. Chèm. 2003, 278, 50949-50955.
23. Li, X.; Han, WJ; Mai, WQ; Wang, L. Hoạt động và Cơ chế chống oxy hóa của Tetrahydroamentoflavone trong ống nghiệm. Nat. Sản phẩm. Commun. 2013, 8, 787-789.
24. Zhang, HY; Ngô, W .; Mo, YR Nghiên cứu về sự chuyển giao điện tử kết hợp với proton (PCET) với bốn trạng thái tiểu đường rõ ràng ở cấp độ khởi đầu ab. Tính toán. Theor. Chèm. 2017, 1116, 50-58.
25. Lin, J.; Li, XC; Chen, L.; Lu, WZ; Chen, XW; Han, L.; Chen, DF Tác dụng Bảo vệ Chống lại Sự phá hủy DNA do gốc Hydroxyl gây ra và Cơ chế Chống oxy hóa của [6] -gingerol: Một Nghiên cứu Hóa học. Bò đực. Chem chép Hàn Quốc. Soc. 2014, 35, 1633-1638.
26. Iuga, C.; Alvarez-Idaboy, JR; Russo, N. Hoạt động chống oxy hóa của Trans-Resveratrol Hướng tới các gốc Hydroxyl và Hydroperoxyl: Một Nghiên cứu Động học Tính toán và Hóa học Lượng tử. J. Tổ chức. Chèm. 2012, 77, 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]
27. Li, XC; Hu, QP; Jiang, SX; Li, F.; Lin, J .; Han, L.; Hồng, YL; Lu, WB; Gao, YX; Chen, DF Flos Chrysanthemi Indici Bảo vệ chống lại các thiệt hại do Hydroxyl gây ra đối với DNA và MSCs thông qua Cơ chế chống oxy hóa. J. Saudi Chem. Soc. 2015,19, 454-460.
28. Amic, A.; Markovic, Z .; Markovic, JMD; Stepanic, V; Lucic, B.; Amic, D. Hướng tới dự đoán được cải thiện về khả năng thu dọn cơ bản miễn phí của Flavonoid: Tầm quan trọng của cơ chế Double PCET. Chem chép thực phẩm. 2014, 152, 578-585.
29. Lee, CH; Yoon, JY Quang phân trực tiếp tia cực tím 2,2'-và-bis (3- ethylbenzothiazoline -6- sulfonate) (ABTS) trong Dung dịch nước: Động học và Cơ chế. J. Quang hóa. Photobiol. A 2008, 197, 232-238.
30. Aliaga, C.; Lissi, EA. Phản ứng của 2,2'-Azinobis (3- Ethylbenzothiazoline -6- Các chất chiết xuất từ axit sulfonic (ABTS) với Hydroperoxit. Động học và Cơ chế. Int. J. Chem. Kinet. 1998, 30, { {số 8}}.
31. Osman, AM; Wong, KKY; Fernyhough, A. ABTS Quá trình oxy hóa theo hướng triệt để của polyphenol: Cô lập và làm bóng cấu trúc của các chất cộng hóa trị. Hóa sinh. Lý sinh. Res. Commun. 2006, 346, 321-329.
32. Osman, AM Nhiều con đường của phản ứng 2, 2- Diphenyl -1- Picrylhydrazyl Radical (DPPHe) với (cộng) -catechin: Bằng chứng về sự hình thành cộng hóa trị giữa DPPHe và Dạng oxy hóa của Polyphenol. Hóa sinh. Lý sinh. Res. Commun. 2011, 412, 473-478.
33. Lopez-Munguia, A.; Hernandez-Romero, Y. Pedraza-Chaverri, J .; Miranda-Molina, A. .; Regla, tôi; Martinez, A. .; Các chất tương tự glycoside của Castillo, E. PLoS ONE 2011, 6, e20115.
34. Perron, NR; Brumaghim, JL Một đánh giá về cơ chế chống oxy hóa của hợp chất polyphenol liên quan đến liên kết sắt. Hóa sinh tế bào. Lý sinh. 2009, 53, 75-100.
35. Devos, D.; Moreau, C.; Devedjian, JC; Kluza, J.; Perrault, M.; Laloux, C.; Jonneaux, A. .; Ryckewaert, G .; Garcon, G.; Rouaix, N.; et al. Nhắm mục tiêu Chelatable Iron như một phương pháp điều trị trong bệnh Parkinson. Chất chống oxy hóa. Tín hiệu oxy hóa khử. 2014, 21, 195-210.
36. Cekic, SD; Baskan, KS; Vật tổ, E.; Apak, R. Thử nghiệm làm giảm khả năng chống oxy hóa Cupric đã sửa đổi (CUPRAC) để đo khả năng chống oxy hóa của protein chứa Thiol trong hỗn hợp với Polyphenol. Talanta 2009, 79, 344-351.
37. Li, XC; Chen, DF; Mai, Y. Ôn, B.; Wang, XZ Sự phù hợp giữa các hoạt động chống oxy hóa trong ống nghiệm và các thành phần hóa học của Radix Astragali (Huangqi). Nat. Sản phẩm. Res. 2012, 26, 1050-1053.
38. Chen, DF; Li, XC; Xu, ZW; Lưu, XB; Du, SH; Li, H.; Chu, JH; Zeng, HP; Hua, ZC Axit hexadecanoic từ nước sắc Buzhong Yiqi gây tăng sinh tế bào gốc trung mô tủy xương. J. Med. Thực phẩm 2010,13, 967-975.
39. Li, X.; Liu, JJ; Lin, J .; Wang, TT; Hoàng, JY; Lin, YQ; Chen, DF Tác dụng bảo vệ của Dihydromyricetin chống lại »Thiệt hại tế bào gốc trung mô do OH và Hóa học cơ học. Phân tử 2016,21, 604.
40. Wang, GR; Li, XC; Zeng, Tổng hợp HP, Hoạt động chống oxy hóa của (E) -9- p-Tolyl -3-2- (8- hydroxy-quinol - 2- yl) vinyl-carbazole và (E) {{8 }} (p-Anisyl) -3-2- (8- hydroxy-quinol -2- yl) vinyl-carbazole và sự tăng sinh tế bào gốc trung mô của chúng. Acta Chim. Tội. 2009, 67, 974-982.
41. Li, X.; Wei, G.; Vương, X.; Lưu, D.; Đặng, R.; Li, H.; Zhou, J.; Li, Y. Zeng, H.; Chen, D. Nhắm mục tiêu của Con đường Shh bằng atractylenolides thúc đẩy sự biệt hóa chondrogenic của tế bào gốc trung mô. Biol. Dược phẩm. Bò đực. 2012, 35, 1328-1335.
42. Li, XC; Gao, YX; Li, F.; Liang, AF; Xu, ZM; Bai, Y .; Mai, WQ; Han, L.; Chen, DF Maclurin bảo vệ chống lại các tổn thương do gốc hydroxyl gây ra đối với tế bào gốc trung mô: Đánh giá chất chống oxy hóa và hiểu biết về cơ học. Chèm. Biol. Tương tác. 2014, 219, 221-228.
Tính sẵn có của mẫu: Một mẫu của hợp chất poliumoside có sẵn từ các tác giả.
© 2 0 18 của các tác giả. Đơn vị được cấp phép MDPI, Basel, Thụy Sĩ. Bài viết này là một bài viết truy cập mở được phân phối theo các điều khoản và điều kiện của giấy phép Creative Commons Attribution (CC BY) (http: ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).
