AKT được kích hoạt bằng điều kiện tiên quyết kiểm soát khả năng chịu đựng của tế bào thần kinh đối với bệnh thiếu máu cục bộ thông qua con đường MDM2–p53Ⅱ

3. Thảo luận

Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng việc kích hoạt đường truyền tín hiệu PI3K/AKT qua trung gian IPC sẽ kích hoạt CNTT của tế bào thần kinh bằng cách kiểm soát phức hợp MDM2–p53 trong các tế bào thần kinh vỏ não sơ cấp. Trước tiên, chúng tôi xác nhận hiệu quả của điều kiện tiên quyết về mặt bảo vệ thần kinh [33,39–41] bằng cách sử dụng mô hình thử nghiệm IPC đã được xác thực.

Nhấp để xem tác dụng phụ của cistanche tubulosa đối với Neuron

Chúng tôi thấy rằng IPC thử nghiệm gây ra bởi sự thiếu hụt oxy và glucose (OGD) ngắn (20 phút), sau đó là 2 giờ tái tạo oxy dẫn đến bảo vệ thần kinh, thể hiện qua việc ngăn chặn cả quá trình chết theo chương trình của tế bào thần kinh và kích hoạt caspase-3 do kéo dài OGD (90 phút) sau đó là 4 giờ tái tạo oxy (OGD/R). Chúng tôi cho thấy rằng IPC làm giảm kích hoạt caspase-3 trong các tế bào thần kinh vỏ não, điều này tương quan với việc giảm quá trình chết theo chương trình sau một đợt thiếu máu cục bộ tiếp theo và nghiêm trọng hơn.

Sự cân bằng giữa các tín hiệu pro- và antiapoptotic là cơ bản để đảm bảo sự sống sót của tế bào thần kinh sau khi thiếu máu cục bộ [3,33,38,42–44]. Mặc dù sự liên quan của các sự kiện như vậy đã được thể hiện trong cả mô hình đột quỵ in vivo do xuất huyết và thiếu máu cục bộ [43,45], nhưng các cơ chế điều chỉnh các đường truyền tín hiệu này vẫn chưa được hiểu đầy đủ trong bối cảnh dung nạp thiếu máu cục bộ. Vai trò của AKT chống chết theo chương trình và các con đường liên quan của nó đã được nghiên cứu rộng rãi trong các tế bào ung thư [46,47] và mô não [38,48]; tuy nhiên, cho đến nay, vai trò của con đường truyền tín hiệu AKT/MDM2– p53 trong dung nạp tế bào thần kinh qua trung gian IPC đối với tổn thương do thiếu máu cục bộ vẫn còn khó nắm bắt.

Ở đây, chúng tôi nhận thấy rằng việc kích hoạt đường dẫn tín hiệu PI3K/AKT do IPC gây ra sẽ thúc đẩy quá trình phosphoryl hóa MDM2 tại Ser166, kích hoạt chuyển vị hạt nhân và ổn định protein của nó, ngăn ngừa p53-gây ra quá trình chết theo chương trình thông qua kích hoạt caspase-3 sau thiếu máu cục bộ. Việc kích hoạt AKT thông qua quá trình phosphoryl hóa thúc đẩy sự sống sót của tế bào thần kinh [24,49] và có thể góp phần tạo ra IT [25,50]. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng sự phong phú tương đối của protein AKT không thay đổi dưới các kích thích thiếu máu cục bộ hoặc điều kiện tiên quyết. Thật thú vị, chúng tôi thấy rằng quá trình phosphoryl hóa AKT qua trung gian PI3K sớm tại Ser473 ngăn chặn sự ổn định p53 do thiếu máu cục bộ trong các tế bào thần kinh được điều hòa trước.

Hiệu ứng này không phải do sửa đổi mức p53 mRNA [33,34,44] mà do giảm mức protein p53 do IPC trước OGD/R. Do MDM2 là bộ điều chỉnh chính của quá trình ổn định p53 và cũng là mục tiêu trực tiếp của AKT, nên kết quả của chúng tôi chỉ ra vai trò của đường dẫn tín hiệu AKT/MDM2–p53 đối với khả năng chịu thiếu máu cục bộ của tế bào thần kinh. MDM2 mRNA tăng nhanh sau OGD [34], nhưng hoạt động của MDM2 chủ yếu được kiểm soát bởi các sửa đổi sau dịch mã, đặc biệt là quá trình phosphoryl hóa [51]. Đồng ý với điều này, chúng tôi nhận thấy rằng một khi được kích hoạt bởi quá trình phosphoryl hóa sau IPC, AKT, lần lượt, phosphoryl hóa MDM2 tại dư lượng Ser166, nằm gần tín hiệu định vị hạt nhân [52] và hiệu ứng này được duy trì sau tổn thương OGD/R.

Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng quá trình phosphoryl hóa MDM2 tại Ser166 là đủ để phát huy tác dụng bảo vệ thần kinh qua trung gian IPC thông qua quá trình mất ổn định p53. Do đó, ở đây, chúng tôi đã xác định được sự kích hoạt phụ thuộc vào thời gian của con đường AKT/MDM2–p53 sau tổn thương do thiếu máu cục bộ và thực tế, chúng tôi chứng minh rằng AKT được kích hoạt bởi IPC đã kích hoạt sự chuyển vị hạt nhân của MDM2 ngoài tử cung, cũng như sự ổn định protein nội sinh.

Hơn nữa, AKT vẫn hoạt động trong nhân, nơi PI3K cũng có thể di chuyển để đáp ứng với stress oxy hóa và sau đó giải thích cho quá trình phosphoryl hóa AKT [53]. Sự ức chế quá trình phosphoryl hóa qua trung gian PI3K của sự phân hủy AKT hoặc AKT thúc đẩy quá trình lưu giữ protein MDM2 trong tế bào chất, và nó ngăn cản quá trình phosphoryl hóa Ser166 của MDM2, cũng như bảo vệ thần kinh qua trung gian IPC chống lại quá trình chết theo chương trình của tế bào thần kinh do thiếu máu cục bộ. Ngược lại, chúng tôi đã chỉ ra rằng AKT hoạt động liên kết với protein MDM2 trong hạt nhân.

Do đó, AKT hoạt động thúc đẩy cả quá trình phosphoryl hóa MDM2 và ổn định hạt nhân của nó, góp phần bảo vệ thần kinh qua trung gian IPC. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng bảo vệ thần kinh do IPC thúc đẩy phụ thuộc vào kích hoạt AKT qua trung gian PI3K, chất này đã phosphoryl hóa MDM2 tại Ser166, thúc đẩy tích lũy hạt nhân MDM2 sau khi bị thiếu máu cục bộ.

Theo đó, sự ức chế PI3K/AKT do suy giảm wortmannin hoặc AKT bởi siRNA đã hủy bỏ bảo vệ thần kinh do IPC thúc đẩy, dẫn đến ổn định p53 và quá trình chết theo chương trình của tế bào thần kinh sau thiếu máu cục bộ. Do đó, kết quả của chúng tôi giúp làm rõ vai trò thiết yếu của việc kích hoạt con đường AKTTHER MDM2 phụ thuộc vào IPC trong sự sống sót của tế bào thần kinh chống lại tổn thương do thiếu máu cục bộ.

Protein p53 có liên quan đến việc kiểm soát tiên lượng tử vong/sống sót của tế bào thần kinh ở bệnh nhân đột quỵ [34,42,54], cũng như ở bệnh nhân TIA [3]. Ổn định P53 làm ảnh hưởng đến quá trình bảo vệ thần kinh qua trung gian điều kiện tiên quyết đối với tổn thương do thiếu máu cục bộ/tái tưới máu [33]. Do đó, tương tác MDM2–p53 sẽ rất quan trọng đối với sự sống sót của tế bào thần kinh trong bối cảnh này [34] và đối với khả năng dung nạp qua trung gian IPC chống lại tổn thương do thiếu máu cục bộ [33].

Thus, the control of such interaction will also have an impact on stroke outcomes. In this context, we recently found that a single-nucleotide polymorphism (SNP) 309T>G trong chất khởi động MDM2 xác định biểu hiện của MDM2 và do đó, điều chỉnh sự phục hồi của bệnh nhân bị đột quỵ [34].

Ngoài ra, chúng tôi quan sát thấy rằng SNP gen Tp53 (rs1042522) điều chỉnh sự ổn định của ty lạp thể p53 và khả năng chịu thiếu máu cục bộ của tế bào thần kinh trong khi dự đoán sự phục hồi chức năng của bệnh nhân bị TIA trước khi đột quỵ [3]. Do đó, việc kiểm soát các con đường apoptotic p53 sẽ rất cần thiết để đảm bảo tác dụng bảo vệ thần kinh của IPC.

Những kết quả này cung cấp một cách tiếp cận tịnh tiến cho nghiên cứu có thể được triển khai trong tương lai vì lợi ích của bệnh nhân và chúng đặt đường truyền tín hiệu PI3K/AKT–MDM2–p53 làm mục tiêu thiết yếu cho các chiến lược CNTT thúc đẩy điều kiện tiên quyết trong đột quỵ thiếu máu cục bộ. Tóm lại, chúng tôi chứng minh rằng con đường truyền tín hiệu PI3K / AKT được tăng cường bởi IPC thúc đẩy quá trình phosphoryl hóa MDM2 tại Ser166, dẫn đến sự chuyển vị hạt nhân MDM2 và sự ổn định của nó, kích hoạt CNTT thần kinh bằng cách thúc đẩy quá trình mất ổn định p53 và sau đó là sự bất hoạt của cái chết apoptotic gây ra sau sự xúc phạm thiếu máu cục bộ.

Kết quả của chúng tôi nêu bật những lợi ích tiềm năng của việc kích hoạt sớm AKT trong dung nạp tế bào thần kinh qua trung gian IPC, điều chỉnh con đường apoptotic MDM2 tựa p53 trong tổn thương do thiếu máu cục bộ. Những phát hiện này nêu bật một cơ hội để hiểu các cơ chế điều chỉnh con đường truyền tín hiệu AKT–MDM2–p53 của tế bào thần kinh để phát triển các chiến lược bảo vệ thần kinh mới cho các rối loạn liên quan đến CNTT.

4. Vật liệu và phương pháp

4.1. Nền văn hóa chính của tế bào thần kinh vỏ não

Nuôi cấy tế bào thần kinh được điều chế từ vỏ phôi chuột C57Bl/6J hoặc p53-null (Tp53−/−, B6.129S2, Phòng thí nghiệm Jackson) (14,5E). Tế bào thần kinh được gieo hạt với kích thước 1,8 × 105 tế bào/cm2 trong môi trường Neurobasal bổ sung 2% B27 và 2 mM glutamine (Invitrogen, Madrid, Tây Ban Nha) và được ủ ở 37 ◦C trong môi trường có 5% CO2-làm ẩm [ 55].

4.2. Các mô hình tiền điều hòa và thiếu oxy glucose

Sau 9–1{{10}} ngày trong ống nghiệm (DIV), các tế bào thần kinh được tiếp xúc với tình trạng thiếu oxy và glucose (OGD) bằng cách ủ các tế bào ở 37 ◦C trong 90 phút trong tủ ấm được trang bị khóa khí và được cấp khí liên tục với 95% N2/5% CO2. Môi trường ủ (dung dịch đệm Hanks không có glucose: 5,26 mM KCl, 0,43 mM KH2PO4, 132,4 mM NaCl, 4,09 mM NaHCO3, 0,33 mM Na2HPO4, 2 mM CaCl2 và 20 mM HEPES, pH 7,4) trước đây được tạo khí với 95% N2 /5 phần trăm CO2 trong 30 phút. Trong những điều kiện này, nồng độ oxy trong môi trường ủ là 6,7 ± 0,5 µM khi được đo bằng điện cực oxy loại Clark [56,57].

Khi được chỉ định, các tế bào thần kinh đã tiếp xúc với điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ (IPC; OGD ngắn trong 20 phút sau đó là 2 giờ tái tạo oxy) trước khi thiếu máu cục bộ kéo dài sau đó (OGD, 90 phút) và 4 giờ tái tạo oxy (IPC cộng với OGD/R) (Hình S1B ). Song song, các tế bào thần kinh được ủ trong Normoxia (Nx) ở 37 ◦C trong môi trường ẩm có 95% không khí/5% CO2 hoặc điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ (IPC). Khi được chỉ định, các tế bào thần kinh được ủ 30 phút trước IPC trong dung dịch đệm của Hanks (pH 7,4), trong trường hợp không có hoặc có mặt wortmannin (100nmol/L), như đã mô tả trước đây [19].

4.3. Truyền tế bào

Các tế bào thần kinh (8 DIV) hoặc HEK-293T được thay thế bằng một vec tơ plasmid biểu hiện Mdm2 được gắn thẻ YFP từ trình khởi đầu MDM2 của con người. MDM2p/Mdm2-YFP là một món quà từ Uri Alon & Galit Lahav (Addgene plasmid # 53962, Watertown, MA, USA) [58]. Khi được yêu cầu, một vectơ trống (pYFP) đã được sử dụng làm điều khiển trong cùng điều kiện. Theo hướng dẫn của nhà sản xuất, quá trình truyền plasmid được thực hiện bằng Lipofectamine® LTX (Invitrogen, Carlsbad, MA, USA). Các tế bào được thay thế bằng 1,5 µg/µL vectơ plasmid và được sử dụng sau 24 giờ.

Việc hạ gục AKT trong 6 tế bào thần kinh DIV đã đạt được bằng cách truyền với các ribonucleotide sợi đôi can thiệp nhỏ (siRNA). Các trình tự được nhắm mục tiêu như sau: 50–CUCAAGUACUCAUUCCAGAtt–30, antisense: 5 0–UCUGGAAUGAGUACUUGAGgg–30 (chuột, s62216, tương ứng với nucleotide 1006–1025, số gia nhập GenBank NM_009652) [59]. Để kiểm soát âm tính, chúng tôi đã sử dụng siRNA (siControl) Số 1 của Bộ giảm thanh™ Chọn Kiểm soát Âm tính. Tất cả các siRNA đã được mua từ Ambion®, Invitrogen® và Thermo Fischer Khoa học (Offenbach, Đức). Theo mức độ phân hủy protein, hiệu quả của việc truyền siRNA được ước tính là 70–80 phần trăm sau 3 ngày sau khi truyền. Đối với các thí nghiệm im lặng, tế bào thần kinh được thay thế bằng siRNA (10 nM) bằng cách sử dụng Lipofectamine® RNAiMAX (Invitrogen), theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các tế bào thần kinh được tiếp tục ủ trong môi trường Neurobasal trong 72 giờ trước khi sử dụng.

4.4. Phát hiện tế bào học dòng chảy của cái chết tế bào apoptotic

Các tế bào thần kinh được tách cẩn thận khỏi các tấm bằng cách sử dụng muối tetrasodium 1 mM EDTA trong PBS (pH 7,4) và được nhuộm bằng Annexin V/APC và 7-AAD, được thực hiện chính xác như mô tả trước đây [55].

4.5. Caspase-3 Thử nghiệm hoạt động

Hoạt tính của Caspase-3 được đánh giá trong dung dịch ly giải tế bào [33] và theo hướng dẫn của nhà sản xuất bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm Fluorimetric Assay CASP3F từ SIGMA và đọc ở mức phát xạ ở bước sóng 405 nm. Phương pháp này dựa trên sự giải phóng hợp chất huỳnh quang 7-amino4-metyl coumarin (AMC). Nồng độ AMC được tính bằng tiêu chuẩn AMC.

4.6. Xét nghiệm miễn dịch và đồng kích thích miễn dịch

Tế bào thần kinh được ly giải trong bộ đệm chứa 1 phần trăm SDS, 2 mM EDTA, 150 mM NaCl, 12,5 mM Na2HPO4 và 1 phần trăm Triton X-100 (NP40: 1 phần trăm NP40, EDTA diK cộng với 5 mM, Tris pH{{13 }} mM, NaCl 135 mM và 10 phần trăm glycerol) được bổ sung chất ức chế phosphatase (1 mM Na3VO4 và 50 mM NaF) và chất ức chế protease (100 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 50 µg/mL anti-papain, 50 µg/mL pepstatin, 50 µg/mL amastatin, 50 µg/mL leupeptin, 50 µg/mL bestatin và 50 µg/mL chất ức chế trypsin đậu tương), bảo quản trên nước đá trong 30 phút và đun sôi trong 5 phút. Các phần chiết xuất ly giải được cho vào gel polyacrylamide SDS (MiniProtean®, Bio-Rad) và thấm bằng kháng thể qua đêm ở 4 °C. Các kháng thể được sử dụng là kháng AKT (9272), kháng p(Ser473)AKT (9271), kháng caspase-3 (Asp175, 9661) (Cell Signaling, Danvers, MA, USA), kháng p53 ( 554157, BD Bioscatics), chống MDM2 (2A10, ab-16895), chống (Ser166)MDM2 (ab131355), chống GFP (ab290; cũng phát hiện YFP) (Abcam, Cambridge, UK), chống LAMIN B (sc-374015, Công nghệ sinh học Santa Cruz, Heidelberg, Đức) và antiGAPDH (Ambion, Cambridge, UK) qua đêm ở 4 ◦C. Sau khi ủ với IgG dê kết hợp với peroxidase peroxidase (Pierce, Thermo Science) hoặc IgG dê chống chuột (Bio-Rad), các màng ngay lập tức được ủ với SuperSignal West Dura (Pierce) phát quang hóa học tăng cường trong 5 phút trước khi tiếp xúc với Kodak phim XAR-5 trong 1 đến 5 phút và ký tự bức xạ được quét. Cường độ dải được định lượng bằng phần mềm ImageJ 1.48v, như đã mô tả trước đây [60].

Đối với thử nghiệm đồng kích thích miễn dịch, tế bào thần kinh được ly giải trong dung dịch đệm lạnh băng chứa 50 mM Tris (pH 7,5), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1% NP-40) ​​được bổ sung chất ức chế phosphatase được mô tả ở trên. Sau khi làm sạch các mảnh vụn bằng cách ly tâm, các chất ly giải tế bào thần kinh (100 mg) được ủ với 1 mg kháng thể trong 24 giờ ở 4°C, sau đó bổ sung 10 mL protein A-agarose (GE Healthcare Life Science) trong 2 giờ ở 4 ◦C. Chất kết tủa miễn dịch được rửa rộng rãi bằng dung dịch đệm ly giải và được phân giải bằng SDS-PAGE và được nhuộm miễn dịch bằng các kháng thể được chỉ định [61]. Sự phong phú protein tương đối được thể hiện trong Hình S1. Quét toàn bộ và quét gel được bao gồm trong Hình S3.

4.7. Hóa mô miễn dịch và phân tích hình ảnh

Các tế bào thần kinh được nuôi cấy trên các tấm kính che phủ bằng thủy tinh và được cố định bằng paraformaldehyd 4 phần trăm (w/v, tính bằng PBS) trong 30 phút và được tạo miễn dịch bằng thuốc kháng phosphoAKT của thỏ (Ser473; 9271; Cell Signaling, MA, USA), kháng MDM2 của chuột (2A10, ab-16895), chuột chống MAP2 (1:500; M#1406, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) [55], chuột chống p53 (1:200; 554157, BD Pharmingen , San Diego, CA, USA) và anti-GFP (1:1000; ab290; cũng được xác thực để phát hiện YFP). Việc dán nhãn miễn dịch đã được phát hiện bằng cách sử dụng kháng thể thứ cấp IgG–Cy3 chống chuột hoặc IgG–Cy2 chống chuột (1:500; Jackson ImmunoResearch. Cambridge, Vương quốc Anh).

Nhân được nhuộm bằng 40,6-diamidino-2 phenylindole (DAPI; D9542, Sigma-Aldrich). Các nắp trượt được rửa sạch, gắn trong thuốc thử chống phai màu SlowFade light (Invitrogen) trên các phiến kính và được kiểm tra bằng kính hiển vi (Kính hiển vi đảo ngược Nikon Eclipse Ti-E, (NY, Hoa Kỳ) được trang bị vật kính 40 ×, đèn chiếu sáng sợi quang định tâm trước Nikon Intensilight C-HGFI và máy ảnh kỹ thuật số thiết bị kết hợp điện tích đen trắng Hamamatsu ORCAER hoặc kính hiển vi quét đồng tiêu laser ("Đĩa quay" Roper Khoa học Olympus IX81, Tokyo, Nhật Bản) với ba tia laser 405, 491 và 561 nm, được trang bị vật kính ngâm dầu Apo 40×, 63× và 100× PL để chụp ảnh độ phân giải cao và thiết bị máy ảnh kỹ thuật số Evolve Photometrics.

Tất cả các cài đặt kính hiển vi được đặt để thu thập hình ảnh huỳnh quang dưới độ bão hòa và được giữ không đổi cho tất cả các hình ảnh được chụp trong thử nghiệm. Hình ảnh được phân tích bằng phần mềm ImageJ 1.48v (Viện Y tế Quốc gia). Tỷ lệ tế bào thần kinh p(Ser473)AKT plus và p53 plus và định lượng cường độ huỳnh quang protein tối đa của p(Ser473)AKT và p53 được thể hiện trong Hình S2A. Trong MDM2-tế bào thần kinh được chuyển hóa GFP, sự phân bố nhân tế bào chất của MDM2-GFP được tính bằng tỷ lệ giữa huỳnh quang trung bình của hạt nhân với huỳnh quang trung bình tế bào chất của MDM2 nội sinh, được đo bằng 24 tế bào thần kinh (sáu tế bào thần kinh trên mỗi tế bào thần kinh). trong bốn môi trường nuôi cấy tế bào thần kinh khác nhau) (Hình S2B) [62].

Để định lượng cường độ huỳnh quang hạt nhân tối đa của nhuộm MDM2 nội sinh và pSer473AKT, 40 tế bào thần kinh (10 tế bào thần kinh cho mỗi điều kiện ở bốn nền văn hóa khác nhau) đã được đo (Hình S2C), như được mô tả trước đây [44]. Trong các cấu hình cường độ mặt cắt ngang đại diện được minh họa trong Hình 5B, tỷ lệ phần trăm của p(Ser473)AKT và MDM2 được chỉ ra bên dưới mỗi điều kiện được định lượng là huỳnh quang trung bình hạt nhân. Trong mọi trường hợp, hạt nhân được xác định bằng nhuộm DAPI. Cường độ huỳnh quang MDM2 hạt nhân tối đa trong các tế bào thần kinh được xử lý bằng wortmannin hoặc siAkt được thể hiện trong Hình S2D.

4.8. Phân tích thống kê

Kết quả thí nghiệm được đánh giá bằng phân tích phương sai một chiều, sau đó là bài kiểm tra hậu đại học Bonferroni, được sử dụng để so sánh các giá trị giữa nhiều nhóm. Các kết quả được thể hiện dưới dạng phương tiện ± SEM. Bài kiểm tra t của sinh viên được sử dụng để so sánh giữa hai nhóm giá trị. Trong mọi trường hợp, p < 0.05 được coi là đáng kể (* p < 0,05 so với Nx; # p<0.05 versus OGD). Statistical analyses were performed using SPSS Statistics 24.0 for Macintosh (IBM).

Làm thế nào để Cistanche bảo vệ tế bào thần kinh?

Có một số bằng chứng cho thấy rằng Cistanche có thể bảo vệ tế bào thần kinh bằng cách giảm quá trình chết theo chương trình (chết tế bào theo chương trình) và thúc đẩy sự sống sót của tế bào thần kinh. Apoptosis là một quá trình tự nhiên xảy ra trong cơ thể để loại bỏ các tế bào bị hư hỏng hoặc không mong muốn, nhưng nó có thể gây hại khi xảy ra quá mức hoặc không phù hợp. Cistanche đã được tìm thấy để ức chế quá trình chết theo chương trình trong các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm và tác dụng này có thể giúp bảo vệ tế bào thần kinh khỏi bị hư hại.

Ngoài ra, Cistanche chứa một số hợp chất hoạt tính sinh học đã được chứng minh là có tác dụng bảo vệ thần kinh. Ví dụ, nó có chứa echinacoside, đã được chứng minh là bảo vệ tế bào thần kinh khỏi stress oxy hóa và viêm nhiễm. Nó cũng chứa acteoside, được phát hiện là có đặc tính chống viêm và chống oxy hóa.

Người giới thiệu

1. Emberson, J.; Lees, KR; Lyden, P.; Blackwell, L.; Albers, G.; Bluhmki, E.; Brott, T.; Cohen, G.; Davis, S.; Donnan, G.; et al. Ảnh hưởng của việc trì hoãn điều trị, tuổi tác và mức độ nghiêm trọng của đột quỵ đối với tác dụng của tiêu sợi huyết tĩnh mạch bằng alteplase đối với đột quỵ thiếu máu cục bộ cấp tính: Phân tích tổng hợp dữ liệu bệnh nhân riêng lẻ từ các thử nghiệm ngẫu nhiên. Lancet 2014, 384, 1929–1935. [Tham khảo chéo]

2. Wang, W.-W.; Chen, D.-Z.; Triệu, M.; Yang, X.-F.; Công, D.-R. Các cơn thiếu máu não thoáng qua trước đó có thể có tác dụng bảo vệ thần kinh ở những bệnh nhân bị đột quỵ do thiếu máu cục bộ. Vòm. y tế. Khoa học. 2017, 5, 1057–1061. [CrossRef] [PubMed]

3. Ramos-Araque, TÔI; Rodriguez, C.; Vecino, R.; Garcia, EC; Alfonso, MĐL; Bác sĩ Barba; Colàs-Campàs, L.; Purroy, F.; Arenillas, JF; Almeida, A.; et al. Khả năng chịu đựng thiếu máu cục bộ thần kinh được điều hòa bởi Đa hình Tp53 Arg72Pro. Bản dịch. Đột quỵ Res. 2019, 10, 204–215. [CrossRef] [PubMed]

4. Iadecola, C.; Anrather, J. Nghiên cứu đột quỵ ở ngã tư đường: Hỏi bộ não chỉ đường. tự nhiên Thần kinh học. 2011, 14, 1363–1368. [CrossRef] [PubMed]

5. Triệu, C.; Giang, M.; Trương, L.; Hu, Y.; Hu, Z.; Trương, M.; Tề, J.; Su, A.; Lou, N.; Tây An, X.; et al. Gamma thụ thể kích hoạt peroxisome proliferator kích hoạt tham gia vào việc đạt được khả năng dung nạp thiếu máu cục bộ do điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ thông qua chất vận chuyển glutamate thần kinh đệm 1 in vivo và in vitro. J. Hóa chất thần kinh. 2019, 151, 608–625. [Tham khảo chéo]

6. Rodriguez, C.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M. Tái tập trung não bộ: Phương pháp tiếp cận mới trong bảo vệ thần kinh chống lại tổn thương do thiếu máu cục bộ. Hóa chất thần kinh. độ phân giải 2021, 46, 51–63. [CrossRef] [PubMed] 7. Stenzel-Poore, MP; Stevens, SL; Hùng, Z.; Bài học, NS; Harrington, AC; Mori, M.; Meller, R.; Rosenzweig, HL; Trần.; Shaw, người ngoài hành tinh; et al. Ảnh hưởng của điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ đối với phản ứng gen đối với thiếu máu não: Điểm tương đồng với các chiến lược bảo vệ thần kinh ở trạng thái ngủ đông và trạng thái chịu thiếu oxy. Đầu ngón 2003, 362, 1028–1037. [Tham khảo chéo]

8. Gidday, JM Điều kiện tiên quyết của não và khả năng chịu thiếu máu cục bộ. tự nhiên Mục sư Thần kinh học. 2006, 7, 437–448. [CrossRef] [PubMed]

9. Stetler, RA; rò rỉ, R.; Gan, Y.; Lý, P.; Trương, F.; Hu, X.; Jing, Z.; Chen, J.; Zigmond, MJ; Gao, Y. Điều kiện tiên quyết cung cấp sự bảo vệ thần kinh trong các mô hình bệnh CNS: Mô hình và ý nghĩa lâm sàng. Ăn xin. thần kinh. 2014, 114, 58–83. [CrossRef] [PubMed]

10. Koch, S.; Della Morte, D.; Dave, KR; Sacco, RL; Perez-Pinzon, AM Dấu ấn sinh học cho điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ: Tìm người phản hồi. anh J. Dược phẩm. 2014, 34, 933–941. [Tham khảo chéo]

11. La Russa, D.; Frisina, M.; Thứ hai, A.; Bagetta, G.; Amantea, D. Điều chế yếu tố điều hòa đầu vào canxi do cửa hàng vận hành ở não (SARAF) và Orai ngoại vi1 sau bệnh thiếu máu não cục bộ và điều kiện tiên quyết ở chuột. Khoa học thần kinh 2020, 441, 8–21. [Tham khảo chéo]

12. Sisalli, MJ; Annunziato, L.; Scorziello, A. Các cơ chế tế bào mới để bảo vệ thần kinh trong điều kiện tiên quyết do thiếu máu cục bộ: Một cái nhìn từ các bào quan bên trong. Đằng trước. thần kinh. 2015, 6, 115. [Tham khảo chéo]

13. Durukan, A.; Tatlisumak, T. Khả năng chịu đựng thiếu máu cục bộ do điều kiện tiên quyết: Một cửa sổ vào việc trang bị nội sinh để bảo vệ não. hết hạn Bản dịch. Đột quỵ Med. 2010, 2, 2. [Tham khảo chéo]

14. Broughton, BR; Reutens, D.; Sobey, CG; Sims, K.; Lịch sự, J.; Banikazemi, M.; Lee, P. Cơ chế chết theo chương trình sau khi thiếu máu cục bộ não. Đột quỵ 2009, 40, 788–794. [Tham khảo chéo]

15. Triệu, H.; Sapolsky, RM; Steinberg, GK Phosphoinositide-3-Các đường dẫn tín hiệu sinh tồn của Kinase/Akt có liên quan đến sự sống còn của tế bào thần kinh sau đột quỵ. mol. thần kinh. 2006, 34, 249–270. [Tham khảo chéo]

16. Uzdensky, AB Quy định về quá trình chết theo chương trình ở vùng nửa tối sau đột quỵ thiếu máu cục bộ: Biểu hiện của các protein pro-và antiapoptotic. Apoptosis 2019, 24, 687–702. [CrossRef] [PubMed]

17. Fukunaga, K.; Kawano, T. Akt là mục tiêu phân tử cho liệu pháp truyền tín hiệu trong điều trị thiếu máu cục bộ não. J. Dược phẩm. Khoa học. 2003, 92, 317–327. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhao, EY; Efendizade, A.; Cái, L.; Ding, Y. Vai trò của Akt (protein kinase B) và protein kinase C trong tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ. thần kinh. độ phân giải 2016, 38, 301–308. [CrossRef] [PubMed]

19. Delgado-Esteban, M.; Martín-Zanca, D.; Andres-Martin, L.; Almeida, A.; Bolanos, JP Ức chế PTEN bằng peroxynitrite kích hoạt đường truyền tín hiệu bảo vệ thần kinh phosphoinositide-3-kinase/Akt. J. Hóa chất thần kinh. 2007, 102, 194–205. [Tham khảo chéo]

20. Quản lý, BD; Toker, A. Báo hiệu AKT/PKB: Điều hướng Mạng. Ô 2017, 169, 381–405. [CrossRef] [PubMed]

21. Diez, H.; Garrido, JJ; Wandosell, F. Vai trò cụ thể của các dạng iso Akt trong quá trình chết theo chương trình và điều hòa tăng trưởng sợi trục trong tế bào thần kinh. XIN MỘT 2012, 7, e32715. [Tham khảo chéo]

22. Santi, SA; Lee, H. Các đồng dạng Akt có mặt tại các vị trí dưới tế bào riêng biệt. Là. J. Vật lý. vật lý. 2010, 298, C580–C591. [Tham khảo chéo]

23. Dương, C.; Talukder, MH; Varadharaj, S.; Velayutham, M.; Zweier, JL Điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ sớm yêu cầu kích hoạt eNOS qua trung gian Akt và PKA thông qua quá trình phosphoryl hóa serine1176. Tim mạch. độ phân giải 2012, 97, 33–43. [CrossRef] [PubMed]

24. Âu Dương, Y.-B.; Tân, Y.; Lược, M.; Liu, C.-L.; Martone, TÔI; Siesjo, BK; Hu, B.-R. Các sự kiện thúc đẩy sự sống còn và cái chết sau khi thiếu máu cục bộ não thoáng qua: Phosphoryl hóa Akt, giải phóng Cytochrom C và kích hoạt các Protease giống Caspase. anh J. Dược phẩm. 1999, 19, 1126–1135. [CrossRef] [PubMed]

25. Lý, S.; Hafeez, A.; Noorulla, F.; Geng, X.; Shao, G.; Ren, C.; Lu, G.; Triệu, H.; Đinh, Y.; Ji, X. Điều kiện tiên quyết trong bảo vệ thần kinh: Từ tình trạng thiếu oxy đến thiếu máu cục bộ. Ăn xin. thần kinh. 2017, 157, 79–91. [CrossRef] [PubMed]

26. Mayo, LD; Donner, DB Một con đường phosphatidylinositol 3-kinase/Akt thúc đẩy sự chuyển vị của Mdm2 từ tế bào chất sang nhân. Proc. tự nhiên. học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 2001, 98, 11598–11603. [Tham khảo chéo]

27. Ashcroft, M.; Ludwig, RL; Rừng, DB; Copeland, TD; Weber, HO; Macrae, EJ; Vousden, KH Phosphoryl hóa HDM2 bởi Akt. Oncogene 2002, 21, 1955–1962. [Tham khảo chéo]

28. Chu, BP; Liêu, J.; Xia, W. HER-2/neu tạo ra sự phổ biến của p53 thông qua quá trình phosphoryl hóa MDM2 qua trung gian Akt. tự nhiên Tế bào sinh học. 2001, 3, 973–982. [Tham khảo chéo]

29. Grossman, SR; Pérez, M.; Kung, AL; Joseph, M.; Mansur, C.; Xiao, Z.-X.; Kumar, S.; Howley, P.; Phức hợp Livingston, DM p300/MDM2 Tham gia vào MDM2-Suy thoái p53 qua trung gian. mol. Ô 1998, 2, 405–415. [Tham khảo chéo]

30. Toth, A.; Nickson, P.; Tần, LL; Erhardt, P. Quy định khác biệt về sự sống sót và phì đại của tế bào cơ tim bằng MDM2, một Ligase Ubiquitin E3. J. Sinh học. hóa học. 2006, 281, 3679–3689. [Tham khảo chéo]

31. Hausenloy, DJ; Tsang, A.; Mocanu, MM; Yellon, Điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ DM bảo vệ bằng cách kích hoạt kinase thuận lợi khi tái tưới máu. Là. J. Vật lý. Vòng tròn. vật lý. 2005, 288, H971–H976. [CrossRef] [PubMed]

32. Mocanu, MM; Yellon, điều chỉnh giảm DM p53: Một cơ chế phân tử mới liên quan đến điều kiện tiên quyết thiếu máu cục bộ. Thư tháng 2. 2003, 555, 302–306. [Tham khảo chéo]

33. Vecino, R.; Burguete, MC; Jover-Mengual, T.; Agulla, J.; Bobo-Jiménez, V.; Salom, JB; Almeida, A.; Delgado-Esteban, M. Con đường MDM2-p53 có liên quan đến khả năng chịu đựng tế bào thần kinh do điều kiện tiên quyết gây ra đối với thiếu máu cục bộ. Khoa học. Rep. 2018, 8, 1610. [CrossRef] [PubMed]

34. Rodriguez, C.; Ramos-Araque, M.E.; Domínguez-Martínez, M.; Sobrino, T.; Sánchez-Morán, I.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M.; Gómez-Sánchez, J.C.; Bolaños, J.P.; Castillo, J.; et al. Single-Nucleotide Polymorphism 309T>G trong Trình khởi động MDM2 Xác định Kết quả Chức năng Sau Đột quỵ. Đột quỵ 2018, 49, 2437–2444. [Tham khảo chéo]

35. Feng, J.; Công viên, J.; Cron, P.; Hess, D.; Hemmings, BA Xác định Ser -473 Kinase kỵ nước PKB/Akt là Protein Kinase phụ thuộc DNA. J. Sinh học. hóa học. 2004, 279, 41189–41196. [Tham khảo chéo]

36. Lai, TW; Trương, S.; Wang, YT Kích thích và đột quỵ: Xác định các mục tiêu mới để bảo vệ thần kinh. Ăn xin. thần kinh. 2014, 115, 157–188. [CrossRef] [PubMed]

37. Constantino, LC; Chất kết dính, LB; Vandresen-Filho, S.; Viola, GG; Ludka, FK; Lopes, MW; Leal, RB; Tasca, CI Vai trò của Phosphatidylinositol-3 Con đường Kinase trong Điều kiện tiên quyết của NMDA: Các cơ chế khác nhau đối với chứng co giật và thoái hóa tế bào thần kinh vùng đồi thị do axit Quinolinic gây ra. chất độc thần kinh. độ phân giải 2018, 34, 452–462. [Tham khảo chéo]

38. Xie, R.; Thành, M.; Lý, M.; Hùng, X.; Daadi, M.; Sapolsky, RM; Zhao, H. Akt Isoforms Bảo vệ khác biệt chống lại tổn thương thần kinh do đột quỵ bằng cách điều chỉnh các hoạt động của mTOR. anh J. Dược phẩm. 2013, 33, 1875–1885. [Tham khảo chéo]

39. Soriano, Ngoại hối; Đu đủ, S.; Hofmann, F.; Hardingham, KNR; Bading, H.; Hardingham, GE Liều điều trị trước của NMDA thúc đẩy bảo vệ thần kinh bằng cách tăng cường tính dễ bị kích thích của tế bào thần kinh. J. Thần kinh học. 2006, 26, 4509–4518. [Tham khảo chéo]

40. Grabb, MC; Choi, DW Khả năng chịu thiếu máu cục bộ trong nuôi cấy tế bào vỏ não ở chuột: Vai trò quan trọng đối với các thụ thể NMDA. J. Thần kinh học. 1999, 19, 1657–1662. [Tham khảo chéo]

41. Trần, M.; Lu, T.-J.; Chen, X.-J.; Chu, Y.; Chen, Q.; Feng, X.-Y.; Từ, L.; Duẩn, W.-H.; Xiong, Z.-Q. Vai trò khác biệt của các phân nhóm thụ thể NMDA trong cái chết tế bào thần kinh do thiếu máu cục bộ và khả năng chịu đựng thiếu máu cục bộ. Đột quỵ 2008, 39, 3042–3048. [Tham khảo chéo]

42. Gomez-Sanchez, JC; Esteban, MD; Rodriguez-Hernandez, tôi.; Sobrino, T.; De La Ossa, NP; Hoàn nguyên, S.; Bolaños, JP; Gonzalez Sarmiento, R.; Castillo, J.; Almeida, A. Tính đa hình Tp53 Arg72Pro của con người giải thích các tiên lượng chức năng khác nhau trong đột quỵ. J. Exp. y tế. 2011, 208, 429–437. [Tham khảo chéo]

43. Xu, W.; Cao, L.; Lý, T.; Trịnh, J.; Thiệu, A.; Zhang, J. Yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc từ tế bào hình sao trung não (MANF) bảo vệ chống lại quá trình chết theo chương trình của tế bào thần kinh thông qua kích hoạt con đường truyền tín hiệu Akt/MDM2/p53 trong mô hình xuất huyết não của chuột. Đằng trước. mol. Thần kinh học. 2018, 11, 176. [CrossRef] [PubMed]

44. Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C.; Lapresa, R.; Agulla, J.; Sobrino, T.; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. Nuclear WRAP53 thúc đẩy sự sống sót của tế bào thần kinh và phục hồi chức năng sau đột quỵ. Khoa học. quảng cáo 2020, 6, eabc5702. [Tham khảo chéo]

45. Burmistrova, O.; Olias-Arjona, A.; Lapresa, R.; Jimenez-Blasco, D.; Eremeeva, T.; Shishov, D.; Romanov, S.; Zakurdaeva, K.; Almeida, A.; Fedichev, PO; et al. Nhắm mục tiêu PFKFB3 làm giảm tổn thương tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ ở chuột. Khoa học. Dân biểu 2019, 9, 1–13. [Tham khảo chéo]

46. ​​Tú, Y.; Kim, E.; Cao, Y.; Xếp hạng, ĐI; Lý, B.; Chen, YC Theaflavin-3, 30 -gallate gây ra quá trình chết theo chương trình và bắt giữ chu kỳ tế bào G2 thông qua con đường Akt/MDM2/p53 trong tế bào ung thư buồng trứng A2780/CP70 kháng cisplatin. quốc tế J.Oncol. 2016, 48, 2657–2665. [CrossRef] [PubMed]

47. Vạn, W.; Hầu, Y.; Vương, K.; Cheng, Y.; Pu, X.; Ye, X. LXR-623-tạo ra RNA dài không mã hóa LINC01125 ngăn chặn sự phát triển của các tế bào ung thư vú thông qua con đường truyền tín hiệu PTEN/AKT/p53. Tế bào chết Dis. 2019, 10, 248. [CrossRef] [PubMed]

48. Tao, J.; Cui, Y.; Duẩn, Y.; Trương, N.; Vương, C.; Zhang, F. Puerarin làm giảm sự thiếu hụt vận động và nhận thức cũng như tổn thương tế bào thần kinh hồi hải mã thông qua con đường truyền tín hiệu PI3K/Akt1/GSK-3 trong mô hình thiếu máu não in vivo. Oncotarget 2017, 8, 106283–106295. [CrossRef] [PubMed]

49. Janelidze, S.; Hu, B.-R.; Siesjo, P.; Siesjö, BK Các thay đổi của Akt1 (PKB ) và p70S6K trong Thiếu máu cục bộ thoáng qua. thần kinh. Dis. 2001, 8, 147–154. [CrossRef] [PubMed]

50. Pignataro, G.; Boscia, F.; Esposito, E.; Sirabella, R.; Cuomo, O.; Vinciguerra, A.; Di Renzo, G.; Annunziato, L. NCX1, và NCX3: Hai tác nhân mới của điều kiện tiên quyết bị trì hoãn trong thiếu máu cục bộ não. thần kinh. Dis. 2012, 45, 616–623. [Tham khảo chéo]

51. Li, J.; Kurokawa, M. Quy định về tính ổn định của MDM2 sau khi làm hỏng DNA. J. Tế bào. vật lý. 2015, 230, 2318–2327. [Tham khảo chéo]

52. Olson, DC; Hầu tước, V.; Momand, J.; Chen, J.; Romocki, C.; Levine, AJ Nhận dạng và mô tả đặc tính của nhiều protein mdm-2 và phức hợp protein mdm-2-p53. Oncogene 1993, 8, 2353–2360. [PubMed]

53. Uranga, RM; Katz, S.; Salvador, GA Tăng cường Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Tín hiệu Akt có các mục tiêu hướng tâm thần trong tế bào thần kinh vùng đồi thị tiếp xúc với ứng suất oxy hóa do sắt gây ra. J. Sinh học. hóa học. 2013, 288, 19773–19784. [CrossRef] [PubMed]

54. Almeida, A.; Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C. Buôn bán hạt nhân p53 ty thể kiểm soát tính nhạy cảm của tế bào thần kinh trong đột quỵ. IUBMB Life 2021, 73, 582–591. [CrossRef] [PubMed]

55. Delgado-Esteban, M.; Garcia-Higuera, I.; Maestre, C.; Moreno, S.; Almeida, A. APC/C-Cdh1 điều phối sự hình thành thần kinh và kích thước vỏ não trong quá trình phát triển. tự nhiên cộng đồng. 2013, 4, 2879. [CrossRef] [PubMed]

56. Constantino, LC Vai trò của các thụ thể NMDA trong việc phát triển sức đề kháng của não thông qua giai đoạn trước và sau điều hòa. lão hóa Dis. 2014, 5, 430–441. [Tham khảo chéo]

57. Almeida, A.; Esteban, MD; Bolaños, JP; Medina, JM Thiếu hụt oxy và glucose gây ra rối loạn chức năng ty thể và stress oxy hóa ở tế bào thần kinh nhưng không phải ở tế bào hình sao trong môi trường nuôi cấy sơ cấp. J. Hóa chất thần kinh. 2002, 81, 207–217. [Tham khảo chéo]

58. Lahav, G.; Rosenfeld, N.; Sigal, A.; Geva-Zatorsky, N.; Levine, AJ; Elowitz, MB; Alon, U. Động lực của vòng phản hồi p53-Mdm2 trong các ô riêng lẻ. tự nhiên gien. 2004, 36, 147–150. [Tham khảo chéo]

59. Li, J.; Karaplis, AC; Hoàng, DC; Siegel, Thủ tướng; Camirand, A.; Dương, XF; Muller, WJ; Kremer, R. PTHrP thúc đẩy sự khởi đầu, tiến triển và di căn của khối u vú ở chuột và là mục tiêu điều trị tiềm năng. J. Lâm sàng. điều tra. 2011, 121, 4655–4669. [Tham khảo chéo]

60. Maestre, C.; Esteban, MD; Gomez-Sanchez, JC; Bolaños, JP; Almeida, A. Cdk5 phosphoryl hóa Cdh1 và điều chỉnh tính ổn định của cyclin B1 trong độc tính kích thích. EMBO J. 2008, 27, 2736–2745. [Tham khảo chéo]

61. De Tudela, MV-P.; Esteban, MD; Maestre, C.; Bobo-Jiménez, V.; Jiménez-Blasco, D.; Vecino, R.; Bolaños, JP; Almeida, A. Quy định về tương tác tổng hợp Bcl-xL-ATP bởi cyclin ty thể B1-Kinase phụ thuộc cyclin-1 quyết định sự sống sót của tế bào thần kinh. J. Thần kinh học. 2015, 35, 9287–9301. [CrossRef] [PubMed]

62. Bobo-Jiménez, V.; Esteban, MD; Angibaud, J.; Sánchez-Morán, I.; de la Fuente, A.; Yajeya, J.; Nagerl, UV; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. APC/CCdh1-Lộ trình Rock2 kiểm soát tính toàn vẹn và bộ nhớ đuôi gai. Proc. tự nhiên. học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 2017, 114, 4513–4518. [CrossRef] [PubMed]