Dự đoán vai trò của LncRNA đối với quá trình lão hóa thận dựa trên trình tự RNA Ⅱ

Mối tương quan của lncRNA Gm43360 và các mRNA mục tiêu tiềm năng của nó

LncRNA Gm43360 được chọn để nghiên cứu vì nó kết nối hai mạng cùng biểu hiện lncRNA-mRNA. Mức độ biểu hiện của Adra1a có mối tương quan thuận (rho=0.8650, p=0.026) với mức độ biểu hiện của Gm43360, Csnk1a1 (casein kinase 1A1) có mối tương quan nghịch (rho{{12 }}.8084, p{14}}.0084) (Hình 5a). Để xác minh thêm mối tương quan của lncRNA Gm43360 và các mRNA mục tiêu tiềm năng của nó là Adra1a và Csnk1a1, một plasmid biểu hiện quá mức của lncRNA Gm43360 đã được thiết kế trong nghiên cứu này. Biểu hiện của Csnk1a1 giảm như mong đợi và biểu hiện Adra1a cũng giảm nhưng không đáng kể. Tiếp theo, chúng tôi loại bỏ lncRNA Gm43360 bằng siRNA để phát hiện xem biểu hiện của mRNA mục tiêu của nó có bị ảnh hưởng hay không. Đúng như dự đoán, Csnk1a1 đã tăng lên trong các ô phân tích lncRNA Gm43360 so với nhóm kiểm soát âm tính siRNA (Hình 5b). Thứ mười, chúng tôi đã phát hiện được vai trò của lncRNA Gm43360 trong chu trình tế bào. Kết quả của bộ đếm tế bào-8 (CCK-8) cho thấy lncRNA Gm43360 đã thúc đẩy khả năng tồn tại của tế bào (Hình 5c). Kết quả cho thấy lncRNA Gm43360 đã tăng tỷ lệ tế bào pha S và giảm tỷ lệ tế bào pha G1 so với đối chứng âm (Hình 5d). Protein Te p53 và p21 tham gia vào quá trình điều hòa chu kỳ tế bào và do đó là dấu hiệu của sự lão hóa tế bào. Mức độ biểu hiện của p53 và p21 giảm đáng kể ở nhóm biểu hiện quá mức so với nhóm đối chứng. Mức độ biểu hiện của p53 và p21 tăng đáng kể ở nhóm siRNA so với nhóm kiểm soát siRNA (Hình 5e). Sự biểu hiện quá mức của lncRNA Gm43360 đã làm giảm số lượng tế bào dương tính với SA{46}}gal và các tế bào dương tính với -gal tăng lên trong nhóm truyền Gm43360 (Hình 5f). Kết hợp lại với nhau, những kết quả này chỉ ra rằng lncRNA Gm43360 đã ức chế sự lão hóa của các tế bào biểu mô ống thận bằng cáchức chế sự biểu hiện của Csnk1a1.

NHẤP VÀO ĐÂY ĐỂ NHẬN CHIẾT XUẤT CISTANCHE HỮU CƠ TỰ NHIÊN VỚI 25% ECHINACOSIDE VÀ 9% ACTEOSIDE CHO CHỨC NĂNG THẬN

Cuộc thảo luận

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã đánh giá dữ liệu biểu hiện mRNA từ thận chuột non và già, đồng thời tiến hành phân tích thông tin sinh học để tiết lộ chức năng của các mRNA được biểu hiện khác thường. Chúng tôi đã quan sát thấy 347 mRNA được điều hòa tăng và 355 mRNA được điều hòa giảm cũng như 130 lncRNA được điều hòa tăng và 91 lncRNA được điều hòa giảm trongthận chuột già so với thận chuột non. Ngoài ra, những mRNA này đã được chứng minh là có liên quan đến các con đường liên quan đến lão hóa, chẳng hạn nhưoxy hóa phosphoryl, đường truyền tín hiệu AMPK, đường truyền tín hiệu Wnt, đường truyền tín hiệu Rap1 và bệnh liên quan đến tuổi tác, chứng tỏ chức năng của các mRNA được biểu hiện khác nhau trong cơ chế bệnh sinh của lão hóa thận.

RNA không mã hóa dài NEAT1 là yếu tố bảo vệ trong sự tiến triển của bệnh xơ hóa thận ở các tế bào biểu mô ống thận [21]. Thật trùng hợp, trong kết quả giải trình tự của chúng tôi, lncRNA NEAT1 được biểu hiện ở mức độ thấp hơn trong thận của chuột già so với chuột non, điều này phù hợp với những phát hiện trước đó. LincRNA-Gm4419 làm tăng tốc độ viêm và xơ hóa bằng các cơ chế qua trung gian hồng cầu NF-kB/NLRP3 trong bệnh thận tiểu đường [22]. Trong kết quả giải trình tự, chúng tôi cũng nhận thấy rằng biểu hiện Gm4419 ở thận của chuột già cao hơn ở chuột non, nhưng không có sự khác biệt đáng kể. LncRNA Gm43360 nằm trên nhiễm sắc thể số 5 (Chr5:122494022–122,494,908, 2887 bp). Theo UCSC Genome Browser, Gm43360 nằm trong intron của gen mã hóa protein Atp2a2. Tuy nhiên, cho đến nay vẫn chưa có báo cáo nào về sự liên quan của lncRNA Gm43360 trong các bệnh. Trong nghiên cứu này, sự phân hủy lncRNA Gm43360 đã thúc đẩy quá trình lão hóa tế bào biểu mô ống thận. Ngoài ra, chúng tôi đã xác định được nhiều lncRNA được biểu hiện khác nhau trong kết quả giải trình tự và nghiên cứu chúng.

LncRNA được phân loại thành điều hòa cis hoặc điều hòa chuyển hóa dựa trên cơ chế điều hòa lncRNA. Các lncRNA tác dụng cis có thể ảnh hưởng đến sự biểu hiện của các gen lân cận bằng cách tùy thuộc vào các yếu tố tác động cis, chẳng hạn như chất xúc tiến, chất tăng cường và trình tự điều hòa, là khoảng cách giữa lncRNA và mRNA dưới 100 kb. Các lncRNA tác động chuyển hóa đề cập đến các lncRNA rời khỏi vị trí truyền và hoạt động ở các vị trí ở xa (tức là khoảng cách giữa lncRNA và mRNA là hơn 100 kb) [23]. LncRNA MAAT làm tăng sự biểu hiện của gen lân cận Mbnl1 thông qua mô-đun điều hòa cis [24]. LncRNA Pnky đóng vai trò là chất điều hòa chuyển hóa trong sự phát triển vỏ não [25]. Trong nghiên cứu này, có mối quan hệ điều hòa giữa lncRNA Gm43360 và Csnk1a1. Csnk1a1 là gen ức chế khối u [26] mã hóa một loại protein tham gia vào chu trình tế bào và quá trình phân chia tế bào [27]. Điều chỉnh giảm Csnk1a1 gây raviêm liên quan đến tuổi giàphản ứng với việc ngừng tăng trưởng ở khối u đại trực tràng [26]. Csnk1a1 đã được điều chỉnh lại khi Gm43360 được điều chỉnh lại; do đó, rất có thể lncRNA Gm43360 tham gia vàolão hóa thậnquađiều chỉnh biểu thức Csnk1a1.

Kết luận

Nghiên cứu của chúng tôi về mạng lưới cùng biểu hiện lncRNA-mRNA tronglão hóa thậntiết lộ một lncRNA, lncRNA Gm43360, có thể đóng vai trò bảo vệ quá trình lão hóa thận và mở rộng hiểu biết của chúng ta về các cơ chế liên quan đếnlão hóa thận

Nguyên liệu và phương pháp

Các mẫu chuột C57BL/6J đực non ({0}}tháng tuổi) và già ({2}}tháng tuổi) được mua từ Trung tâm Động vật Thực nghiệm của Đại học Hạ Môn và được nuôi trong môi trường tiêu chuẩn. Tất cả chuột đều được tiếp cận miễn phí thức ăn và nước uống. Những con chuột được làm quen với cơ sở mới trong một tháng trước khi chúng bị hiến tế. Chuột được gây mê bằng urethane bằng cách tiêm trong màng bụng với liều 750 mg/kg trước khi lấy mẫu. Chuột già và chuột non được hiến tế trong cùng một ngày.Thận chuột còn sót lạimô được sử dụng để giải trình tự trong mỗi xét nghiệm. RNA-seq và mô bệnh học được thực hiện trênthận riêng biệttừ cùng một con chuột. Mô thận được thu thập từ chuột. Một quả thận ngay lập tức được ngâm trong formalin đệm trung tính 10% để nhúng phần tiếp theo, và quả thận còn lại được chia thành nhiều mô và ngay lập tức được đặt vào nitơ lỏng rồi bảo quản ở nhiệt độ -80. Nghiên cứu được hỗ trợ bởi Ủy ban Đạo đức của Bệnh viện liên kết đầu tiên của Đại học Giao thông Tây An (Thiểm Tây, Trung Quốc) (Số 2018-G-164). Tất cả các phương pháp được thực hiện theo các hướng dẫn và quy định về đạo đức động vật. Nghiên cứu này được thực hiện tuân thủ các hướng dẫn ARRIVE.

Mô bệnh học thận

Các mẫu mô thận của chuột non và chuột già được cố định trong dung dịch paraformaldehyde 10% qua đêm. Mười phần trong số đó được khử nước, nhúng parafin và được cắt ở độ dày 4-µm. Nhuộm ba màu của PAS và Masson được thực hiện bằng các giao thức chuẩn. Hình ảnh được máy ảnh chụp lại và đo vùng dương tính nhuộm màu. Diện tích dành cho hình ảnh camera mô bệnh học được tính toán bằng Image-Pro Plus 6.0.

Nhuộm SA-gal

Hoạt động SA{0}}gal được phân tích bằng bộ nhuộm SA- -gal (Công nghệ tín hiệu tế bào #9860) theo giao thức của nhà sản xuất. Diện tích nhuộm màu dương tính được đo và các tế bào dương tính SA{3}}gal được tính toán bằng Image-Pro Plus 6.0.

Xây dựng và giải trình tự thư viện trích xuất RNA

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.0 được sử dụng để xây dựng thư viện giải trình tự. Sau khi chiết tách RNA tổng số, mRNA được tinh chế khỏi RNA tổng số (5ug) bằng cách sử dụng Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, CA, USA) với hai vòng tinh chế. Sau khi tinh chế, mRNA được tách thành các đoạn ngắn bằng cách sử dụng cation hóa trị hai ở nhiệt độ cao (Mô-đun phân mảnh Magiê RNA (NEB, cat. e6150, USA) dưới 94 độ 5-7 phút). Sau đó, các đoạn RNA đã tách được sao chép ngược để thu được cDNA nhờ SuperScript™ II Reverse Transcriptase (Invitrogen, cat. 1.896.649, USA), men này tiếp theo được sử dụng để tổng hợp các DNA chuỗi thứ hai được đánh dấu chữ U bằng E. coli DNA polymerase I ( NEB, cat.m0209, USA), RNase H (NEB, cat.m0297, USA) và dUTP Solution (Termo Fisher, cat.R0133, USA). Sau đó, đế chữ A được thêm vào các đầu cùn của mỗi sợi, chuẩn bị cho việc buộc chúng vào các bộ điều hợp được lập chỉ mục. Mỗi bộ chuyển đổi chứa phần nhô ra của đế chữ T để nối bộ chuyển đổi với DNA phân mảnh đuôi A. Bộ điều hợp chỉ số kép được nối với các mảnh và việc lựa chọn kích thước được thực hiện bằng hạt AMPureXP. Sau khi xử lý enzyme UDG không bền với nhiệt (NEB, cat.m0280, Hoa Kỳ) đối với DNA sợi thứ hai được gắn nhãn chữ U, các sản phẩm được gắn nhãn được khuếch đại bằng PCR theo các điều kiện sau: biến tính ban đầu ở 95 độ trong 3 phút; 8 chu kỳ biến tính ở 98 độ trong 15 giây, ủ ở 60 độ trong 15 giây và kéo dài ở 72 độ trong 30 giây; và sau đó kéo dài lần cuối ở 72 độ trong 5 phút. Độ dài chèn trung bình của các thư viện cDNA cuối cùng là 300±50 bp. Cuối cùng, chúng tôi đã thực hiện giải trình tự kết thúc ghép đôi 2×150 bp (PE150) trên Illumina Novaseq™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hàng Châu, Trung Quốc) theo giao thức của nhà sản xuất [28].

Phân tích tin sinh học Trình tự và lọc các lần đọc sạch

Thư viện cDNA được xây dựng bằng công nghệ từ RNA tổng hợp từmẫu thậnchuột được giải trình tự và chạy trên nền tảng trình tự Illumina NovaseqTM 6000. Bằng cách sử dụng phương pháp tiếp cận RNA-seq kết thúc theo cặp của Illumina, chúng tôi đã giải trình tự bản phiên mã, tạo ra tổng số lần đọc kết thúc theo cặp 2 × 150 bp. Các lần đọc thu được từ máy giải trình tự bao gồm các lần đọc thô chứa bộ điều hợp hoặc đế chất lượng thấp sẽ ảnh hưởng đến quá trình lắp ráp và phân tích sau đây. Do đó, để có được số lần đọc rõ ràng chất lượng cao, số lần đọc đã được Cutadapt lọc thêm [29] (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, version:cutadapt-1.9). Các thông số như sau:

1) xóa các lần đọc có chứa bộ điều hợp;

2) loại bỏ các lần đọc có chứa polyA và poly;

3) loại bỏ các lần đọc chứa hơn 5% nucleotide chưa biết (N);

4) loại bỏ các số đọc chất lượng thấp chứa hơn 20% cơ sở chất lượng thấp (giá trị Q nhỏ hơn hoặc bằng 20).

Chất lượng mười chuỗi đã được xác minh bằng FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/, 0.11.9). bao gồm nội dung Q20, Q30 và GC của dữ liệu sạch. Sau đó, tổng số G bp số lần đọc kết thúc được làm sạch đã được tạo ra. Dữ liệu trình tự thô đã được gửi tới bộ dữ liệu NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) với số đăng nhập GSE154223.

Bộ gen/chú thích tham chiếu là Mus{0}}musculus.GRCm38. Nguồn và phiên bản của chú thích gen được sử dụng để phân tích là Ensembl_v88.

Tập hợp biên bản

Đầu tiên, Cutadapt [29] được sử dụng để loại bỏ các kết quả đọc chứa ô nhiễm bộ điều hợp, bazơ chất lượng thấp và các bazơ không xác định. Chất lượng mười chuỗi được cải thiện rất tốt khi sử dụng FastQC (//www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). Chúng tôi đã sử dụng Bowtie2 [31] và Hisat2 [32] để ánh xạ các lần đọc vào bộ gen của chuột. Các lần đọc ánh xạ của từng mẫu được tập hợp bằng StringTie [33]. Mười, tất cả bảng điểm từmẫu thậnđã được hợp nhất để xây dựng lại bản phiên âm toàn diện bằng cách sử dụng tập lệnh Perl. Sau khi bản phiên mã cuối cùng được tạo, StringTie [33] và edgeR [34] được sử dụng để ước tính mức biểu thức của tất cả các bản phiên mã.

Nhận dạng LncRNA

Trước hết, các bản phiên mã trùng lặp với các mRNA đã biết và các bản phiên mã ngắn hơn 200 bp sẽ bị loại bỏ. Sau đó, chúng tôi sử dụng CPC [35] và CNCI [36] để dự đoán các bản ghi có tiềm năng mã hóa. Tất cả bảng điểm có điểm CPC<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Phân tích gen phân tích biểu hiện khác nhau (DGE)

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>2 được coi là gen biểu hiện khác nhau.

Dự đoán gen mục tiêu và phân tích chức năng của lncRNA

Để khám phá chức năng chức năng của lncRNA, chúng tôi đã dự đoán gen mục tiêu cis của lncRNA. LncRNA có thể đóng vai trò cis trong việc tác động lên các gen mục tiêu lân cận. Trong nghiên cứu này, các gen mã hóa trong 100,000 ngược dòng và xuôi dòng đã được chọn lọc bằng tập lệnh Perl. Sau đó, chúng tôi đưa ra phân tích chức năng của các gen mục tiêu cho lncRNA bằng cách sử dụng các tập lệnh BLAST2GO [39]. Liên kết lệnh đầy đủ tới miền công cộng là Jie-Li/README.md tại main · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Các danh mục bản thể gen (GO) và phân tích Bách khoa toàn thư về gen và bộ gen (KEGG) của Kyoto

Phân tích tin sinh học để giải trình tự RNA được thực hiện bằng các công cụ OmicStudio (//www.omicsudio.cn/tool). Phân tích làm giàu chức năng Gene Onology (GO) và phân tích làm giàu bộ gen và bộ gen của Bách khoa toàn thư Kyoto (KEGG) [37–39] đã được sử dụng để phân tích chức năng sinh học của các gen mục tiêu được dự đoán. Phân tích GO làm rõ các quá trình sinh học chính thông qua ba khía cạnh: thành phần tế bào, chức năng phân tử và quá trình sinh học (//www.geneontology.org/). Việc phân tích trước tiên sẽ đưa tất cả các gen biểu hiện khác nhau và các gen nền vào cơ sở dữ liệu GO. Mỗi mục được ánh xạ, số lượng gen trong mỗi mục được tính toán và phân bố siêu hình học được sử dụng để thực hiện kiểm tra giả thuyết nhằm thu được giá trị P của kết quả làm giàu. Giá trị P càng thấp thì kết quả làm giàu càng có ý nghĩa. KEGG là nguồn cơ sở dữ liệu phân tích các mRNA được biểu hiện khác nhau bằng sinh học di truyền để khám phá các con đường quan trọng liên quan đến gen mục tiêu (https://www.genome.jp/kegg/). Kết quả được biểu thị bằng giá trị p; giá trị p càng thấp thì kết quả làm giàu càng có ý nghĩa.

qRT–PCR

GAPDH được sử dụng làm đối chứng nội sinh. Sau đó, mức độ biểu hiện tương đối của các gen chưa biết được tính toán. Tất cả các mồi đều được thiết kế và tổng hợp đặc biệt cho thí nghiệm này. Mồi cho GAPDH đã được thương mại hóa. Độ đặc hiệu của mồi Adra1a và Csnk1a1 được xác định bằng đỉnh đơn của đường cong nóng chảy.

Xây dựng mạng lưới cùng biểu hiện mRNA-lncRNA

Sự chuyển hóa dựa trên nghiên cứu và sau đó năng lượng chuyển hóa được tính toán. Năng lượng chuyển hóa càng nhỏ thì khả năng liên kết càng cao. Sau đó, hệ số tương quan của mRNA-lncRNA cũng được tính toán. Mạng mRNA-lncRNA được xây dựng bằng cách chọn hệ số tương quan Spearman vượt quá 0.9. Mạng cùng tồn tại mRNA-lncRNA được xây dựng bằng phần mềm Cytoscape (v3.7.1).

Nuôi cấy tế bào

Các tế bào biểu mô ống thận gần của chuột (MRPT-EpiCs) được nuôi cấy trong môi trường tế bào biểu mô động vật (EpiCM-a, Cat. #4131) chứa 2% huyết thanh bò bào thai (FBS, Cat. #0010) và Bổ sung tăng trưởng tế bào biểu mô-động vật (EpiCGS-a, Cat. #4182) không có kháng sinh trong tủ ấm tạo ẩm ở 37 độ và 5% CO2. Môi trường nuôi cấy được thay đổi 2-3 ngày một lần. Các tế bào trong giai đoạn tăng trưởng logarit được nuôi cấy phụ khi tốc độ tăng trưởng đạt 90%. Huyền phù tế bào được tiêu hóa bởi trypsin được gieo vào các đĩa giếng 6-có 2*104 -5*104 tế bào trong mỗi giếng. Các tế bào được sử dụng để truyền máu đều thuộc thế hệ 2 và 5.

Xây dựng plasmid và truyền tế bào

Plasmid biểu hiện quá mức lncRNA Gm43360 được chế tạo bởi GeneChem (Thượng Hải, Trung Quốc). Xương sống của plasmid là GV658 và chất kích thích CMV điều khiển sự biểu hiện lncRNA. Trình tự nucleotit nhân bản được cung cấp trong vật liệu bổ sung. Để phân hủy lncRNA Gm43360, ba lncRNA ENS PHẢI00000197656-siRNA mục tiêu (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCACUCA UGAAGUUTT-3'; và lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') được thiết kế và tổng hợp tại GenePharma (Thượng Hải, Trung Quốc). Theo quy trình của nhà sản xuất, các tế bào được truyền 2500 ng plasmid hoặc 100 pmol siRNA với 6 µl Thuốc thử chuyển hóa Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen, Hoa Kỳ) trong mỗi giếng. Mức độ biểu hiện RNA và protein được phát hiện vào lúc 48 giờ sau khi truyền máu và mỗi thí nghiệm được lặp lại ít nhất ba lần. PCR định lượng thời gian thực đã được sử dụng để xác nhận tính hiệu quả của việc biểu hiện quá mức và loại bỏ lncRNA Gm43360.

Phân tích Western blot

Các tế bào nuôi cấy được rửa bằng PBS lạnh như đá, thêm 120 µl dung dịch đệm RIPA (Heart, Trung Quốc) và thêm chất ức chế protease và PMSF (Heart, Trung Quốc) vào đá trong 30 phút. Sau khi thu thập tế bào vào các ống vi ly tâm khác nhau, nồng độ protein sẽ được định lượng. Dung dịch đệm được thêm vào từng mẫu và sau đó đun sôi trong 7 phút. Ba mươi microgam của mẫu được phân tách bằng TRANG WEB SDS 12% (Beyotime, Trung Quốc) và được truyền điện sang màng PVDF (Thermo Fisher, Hoa Kỳ). Sau đó, màng được chặn bằng sữa 5%. Các màng này được ủ với các kháng thể chính cụ thể: anti-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), anti-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP) và anti-GAPDH (1:3000, Profintech , 60004-1-Ig) qua đêm ở nhiệt độ 4 độ . Sau khi rửa bằng TBST, màng được ủ với kháng thể thứ cấp trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. Các dải protein được quan sát bằng cách sử dụng bộ phát quang hóa học (Millipore, Hoa Kỳ). Biểu hiện của GAPDH được sử dụng để bình thường hóa mức protein.

Xét nghiệm tăng sinh tế bào

Khả năng tăng sinh tế bào được xác định bằng xét nghiệm bộ đếm tế bào-8 (CCK-8). Bốn mươi tám giờ sau khi truyền máu, 90 µl môi trường mới và 10 µl dung dịch CCK-8 được thêm vào từng giếng (Beyotime, C0042). Các tế bào được ủ trong 1–4 giờ ở 37 độ trong 5% CO2 và được đo ở bước sóng 450 nm bằng máy đọc vi đĩa đa năng (Bio-Tek, Hoa Kỳ).

Phân tích tế bào học dòng chảy

Tế bào được đặt vào các đĩa 6-giếng một ngày trước khi truyền máu. Bốn mươi tám giờ sau khi truyền máu, các tế bào được cố gắng cố định và ly tâm ở tốc độ 1000 vòng / phút trong 5 phút. Sau đó, các tế bào được cố định trong ethanol 70% ở 4 độ trong ít nhất 4 giờ. Sau khi ly tâm, dung dịch nhuộm RNase A và propidium iodide (PI) được thêm vào các tế bào và sau đó các tế bào được ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Các tế bào nhuộm màu được phân tích bằng ACEA NovoCyte (Bioscatics, USA).

Phân tích thống kê

Dữ liệu đo theo phân phối chuẩn được trình bày dưới dạng giá trị trung bình±SD. Sự khác biệt giữa hai nhóm khác nhau được xác định bằng cách sử dụng các bài kiểm tra t của Học sinh không ghép đôi hai đuôi và giá trị p < 0.05 được coi là có ý nghĩa thống kê. Tất cả các tính toán được thực hiện bằng GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., USA).

Người giới thiệu

1. Docherty MH, O'Sullivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Lão hóa tế bào ở thận. J Am Sóc Nephrol. 2019;30(5):726–36.

2. Gà gô L, Deelen J, Slagboom PE. Đối mặt với những thách thức toàn cầu về lão hóa. Thiên nhiên. 2018;561(7721):45–56.

3. Pan JX. LncRNA H19 thúc đẩy quá trình xơ vữa động mạch bằng cách điều chỉnh các đường truyền tín hiệu MAPK và NF-kB. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017;21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. RNA HOTAIR dài không mã hóa thúc đẩy hoạt động myofibroblast phụ thuộc EZH2- trong hệ thống xơ cứng thông qua việc kích hoạt NOTCH phụ thuộc vào miRNA 34a. Ann Thấp khớp Dis. 2020;79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN, et al. LncRNA-p21 làm thay đổi sự biệt hóa thần kinh nội tiết ung thư tuyến tiền liệt do antiandrogen enzalutamide gây ra thông qua việc điều chỉnh tín hiệu EZH2/STAT3. Xã Nat. 2019;10(1):2571.

6. Wang Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D, et al. LncRNA MCM3AP-AS1 mới thúc đẩy sự phát triển của ung thư biểu mô tế bào gan bằng cách nhắm vào trục miR-194-5p/FOXA1. Ung thư Mol. 2019;18(1):28.

7. Ngô YY, Kuo HC. Vai trò chức năng và mạng lưới của các RNA không mã hóa trong cơ chế bệnh sinh của các bệnh thoái hóa thần kinh. J Khoa học sinh học. 2020;27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Lão hóa thận và các bệnh liên quan đến lão hóa. Thí nghiệm Adv Med Biol. 2018;1086:169–87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Rule AD. Tuổi tác, chức năng thận và các yếu tố nguy cơ có liên quan khác nhau với thể tích vỏ và tủy thận. Thận Int. 2014;85(3):677–85.

10. Lin Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lin Y. LncRNA HOTAIR nhắm đến miR-126-5p để thúc đẩy sự tiến triển của bệnh Parkinson thông qua RAB3IP. Biol Chem. 2019;400(9):1217–28.

Dịch vụ hỗ trợ của Wecistanche-Nhà xuất khẩu cistanche lớn nhất ở Trung Quốc:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Điện thoại:+86 15292862950

Mua sắm để biết thêm thông số kỹ thuật

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop