Hành động thúc đẩy của Oenothera Biennis trên các nguyên bào sợi ở da người già nua Phần 2

3. Thảo luận

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã nghiên cứu tác động của chiết xuất tế bào Oenothera biennis ưa nước (ObHEx) đối với sự lão hóa của tế bào, vì nó cho thấy đặc tính chống lão hóa da khi thử nghiệm trong các mô hình in vitro và ex vivo [18]. Chúng tôi đã sử dụng một mô hình lão hóa tương tự của NHDF chịu SIPS để xử lý bằng H2O2 [21,22].

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và khả năng loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn các gốc tự do-

gây ra sự suy thoái collagen, và cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do thymine.

Nhấp vào Tôi có thể mua Cistanche ở đâu

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Để hiểu cơ chế hoạt động của ObHEx đối với các nguyên bào sợi ở da người già yếu, bằng cách tiết lộ các con đường sinh học bị thay đổi bởi chiết xuất, chúng tôi đã thực hiện phương pháp phân tích protein siêu sâu khối phổ độc lập với dữ liệu. Nó cho phép chúng tôi có được phân tích hệ protein hoàn chỉnh nhất của các tế bào bạch cầu cho đến nay và lần đầu tiên, định lượng đồng thời nhiều dấu hiệu lão hóa.

Trước hết, để đánh giá cảm ứng lão hóa bằng cách xử lý H2O2 trên các tế bào NHFD, chúng tôi đã định lượng các dấu hiệu lão hóa đã biết. Dữ liệu proteomics của chúng tôi đã xác nhận cảm ứng lão hóa do stress oxy hóa: thực sự, chúng tôi đã quan sát thấy mức độ thay đổi của các dấu hiệu lão hóa đã biết liên quan đến hàm lượng lysosomal tăng (GLB1 và ​​FUCA1), tổn thương DNA (ATR, ATM, MACROH2A1 và MACRO2A2) và chu kỳ tế bào pha G2 bắt giữ (CDK1NA và MKI67). Hơn nữa, phân tích làm giàu con đường của các protein được điều hòa giảm nhất trong H2O2 được xử lý so với các tế bào đối chứng chỉ ra quá trình nguyên phân, phản ánh sự bắt giữ tăng sinh tuổi già.

So sánh hệ protein của các tế bào SIPS NHDF được điều trị bằng ObHEx so với các tế bào không được điều trị, chúng tôi thấy rằng việc điều trị bằng chiết xuất có thể khôi phục một phần mức protein và phức hợp đóng vai trò quan trọng trong một số giai đoạn nguyên phân. Quá trình ủ ObHEx làm tăng mức độ CDK1, một loại protein phân bào quan trọng kích hoạt quá trình xâm nhập vào quá trình nguyên phân bằng cách hình thành phức hợp với cyclin B [34]. Hơn nữa, tất cả năm tiểu đơn vị của phức hợp ngưng tụ I đều được điều chỉnh lại. Phức hợp này bao gồm hai tiểu đơn vị duy trì cấu trúc của nhiễm sắc thể (SMC), SMC2 và SMC4, và ba tiểu đơn vị không phải SMC, NCAPD2, NCAPH và NCAPG. Trong kỳ đầu, chức năng của phức hợp ngưng tụ I là thúc đẩy kiểu ngưng tụ của nhiễm sắc thể bằng cách đưa các siêu xoắn dương vào DNA theo cách phụ thuộc ATP [35]. Ngoài ra, dịch chiết đã điều hòa tăng cường KNTC1, NUF2 và TRIP13, là ba protein liên kết với kinetochore, một phức hợp lớn, trong quá trình tiền phân kỳ, kết nối chất nhiễm sắc tâm động với các vi ống từ các cực của trục chính đối diện để tạo điều kiện thuận lợi cho sự phân tách của các nhiễm sắc thể chị em [ 36,37]. Khôi phục một phần mức protein MCM cũng đã được phát hiện. Những protein này là cốt lõi của phức hợp helicase sao chép giúp giải phóng DNA sợi kép để cung cấp các sợi đơn làm khuôn mẫu cho DNA polymerase. Phức hợp MCM được chuyển đổi thành một helicase hoạt động trong pha S nhưng đã được nạp vào chất nhiễm sắc trong telophase [38,39]. Chiết xuất cũng làm tăng mức IQGAP3, PBK và DHFR. Đầu tiên, IQGAP3, là một yếu tố điều chỉnh quan trọng của quá trình phân bào vì nó thúc đẩy hoạt động của cdk7, cần thiết cho hoạt hóa Cdc2 [40,41]; PBK là một kinase chỉ hoạt động trong quá trình nguyên phân; khi bị phosphoryl hóa, nó tương tác với p53, làm mất ổn định nó và làm suy yếu con đường phá hủy DNA [42]; và DHFR là một enzyme quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp DNA có mức độ suy giảm rõ rệt trong các nguyên bào sợi của người già [43].

Các thử nghiệm trực giao sinh học cũng cho thấy khả năng ObHEx phục hồi một phần các dấu hiệu lão hóa, cụ thể là hoạt động lysosomal và bắt giữ chu kỳ tế bào. Thật vậy, để xác minh xem việc khôi phục biểu hiện protein phân bào của ObHEx có chuyển thành việc kích hoạt lại chu kỳ tế bào hay không, chúng tôi đã thực hiện các thí nghiệm FACS (Phân loại tế bào được kích hoạt bằng huỳnh quang) trên các tế bào SIPS NHDF được xử lý hay không bằng dịch chiết. Họ đã chỉ ra rằng ObHEx có thể giảm tỷ lệ tế bào bị chặn trong pha G2 và thúc đẩy quá trình tái nhập của chúng vào chu kỳ tế bào của tế bào lão hóa.

4. Vật liệu và phương pháp

4.1. Nuôi cấy tế bào

Nguyên bào sợi da người bình thường (NHDF; Promocell) được nuôi cấy trong môi trường Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco) của Dulbecco được bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò (FBS; Gibco) và 500 U/mL penicillin-streptomycin (Gibco) trong 95% không khí , 5 phần trăm CO2 và bầu không khí ẩm ở 37 ◦C.

4.2. Cảm ứng lão hóa sớm do căng thẳng (SIPS)

Tổng số 10 1200 000 tế bào NHDF đã được cấy vào từng đĩa nuôi cấy tế bào 60 mm, một ngày trước khi ủ chúng với 100 µM H2O2 ở 37 ◦C trong 2 giờ [21,22]. Sau đó, H2O2 được rửa bằng dung dịch muối đệm phốt phát (PBS; Gibco) để kết thúc quá trình xử lý và các tế bào được nuôi cấy trong môi trường bình thường trong 4 ngày. Đối với các tế bào không lão hóa, được sử dụng làm đối chứng, các tế bào NHDF 2240 000 được gieo vào từng đĩa nuôi cấy tế bào 60 mm. Thí nghiệm được thực hiện trong 5 lần lặp lại sinh học.

4.3. Chuẩn bị Oenothera Biennis Hydrophilic Extract (ObHEx)

Dịch chiết được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm của Arterra Bioscience SpA [18]. Nuôi cấy tế bào thu được từ lá của cây Oenothera biennis (do GEEL Floricultura ss cung cấp) bằng cách tạo ra sự tăng sinh của các tế bào mô phân sinh trên các đĩa thạch đặc cho đến khi thu được các vết chai. Các tế bào được chuyển sang môi trường tăng trưởng dạng lỏng (Gamborg B5, bổ sung 2,4 dichloro phenoxy acetic acid (1 mg/L), adenine (1 mg/L) và kinetin (0.01 mg/L )) và được trồng dưới dạng nuôi cấy huyền phù dưới sự rung chuyển của quỹ đạo. Sau khi thu được lượng dịch cấy khoảng 150 g/L, các tế bào được thu thập và ly giải trong PBS ở pH 7,4 để chuẩn bị dịch chiết hòa tan trong nước. Sau khi đông khô, bột thu được được hòa tan trong nước hoặc môi trường nuôi cấy tế bào với nồng độ thích hợp để thử nghiệm.

4.4. Điều trị chiết xuất ưa nước Oenothera Biennis (ObHEx)

Các tế bào NHDF được ủ trong 24 giờ với 0.01 phần trăm (p/v) ObHEx trong môi trường hoàn chỉnh. Sau đó, các tế bào được rửa ba lần bằng PBS và được xử lý thêm 24 giờ với 0,01 phần trăm (p/v) ObHEx trong môi trường không có huyết thanh. Sau đó, chúng được tách ra bằng quá trình trypsin hóa, ly tâm ở 500 g trong 10 phút ở 4 ◦C và rửa hai lần bằng PBS. Các tế bào đối chứng không được xử lý trải qua quá trình ủ tương tự mà không có ObHEx.

4.5. Chuẩn bị mẫu để phân tích proteomic

Các viên nhỏ được tạo huyền phù lại trong 60µL dung dịch đệm xét nghiệm ức chế miễn dịch phóng xạ (RIPA) và được ly giải bằng sóng siêu âm. Nồng độ protein ly giải tế bào được định lượng bằng cách sử dụng Bộ xét nghiệm Protein DC™ (Biorad; #5000112). Quá trình tiêu hóa cột quay siêu nhỏ S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, USA) được thực hiện trên 50 µg dịch ly giải tế bào theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Tóm lại, các mẫu được khử bằng 20 mM tris(2- carboxyethyl)phosphine (TCEP) và được kiềm hóa bằng 50 mM thioacetamide (CAA) trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Axit photphoric dạng nước sau đó được thêm vào để đạt nồng độ cuối cùng là 2,5 phần trăm, sau đó bổ sung dung dịch đệm liên kết S-Trap (methanol 90 phần trăm dạng nước, 100 mM TEAB, pH 7,1). Các hỗn hợp này sau đó được nạp vào các cột S-Trap. Năm bước rửa bổ sung đã được thực hiện để loại bỏ triệt để SDS. Sau đó, dịch ly giải tế bào được tiêu hóa với 2,5 µg trypsin (Promega) ở 47 ◦C trong 1 giờ. Sau khi rửa giải, các peptit được làm khô chân không, được tạo huyền phù lại trong 2% ACN, 0,1% FA và được định lượng bằng Nanodrop.

4.6. Định lượng và định lượng protein nanoLC-MS/MS

Tổng cộng 400 ng của mỗi mẫu được bơm vào một tấm nano (Bruker Daltonics, Bremen, Đức) hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) kết hợp với timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen , Đức) khối phổ kế. Quá trình tách HPLC (Dung môi A: {{30}}.1% axit formic trong nước; Dung môi B: 0,1% axit formic trong axetonitril) được thực hiện ở tốc độ 250 L/phút bằng cách sử dụng cột bộ phát đặc (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Australia) sử dụng rửa giải gradient (2 đến 13 phần trăm dung môi B trong 41 phút; 13 đến 20 phần trăm trong 23 phút; 20 phần trăm đến 30 phần trăm trong 5 phút; 30 phần trăm đến 85% trong 5 phút, và cuối cùng là 85% trong 5 phút để rửa cột). Dữ liệu khối phổ được thu thập bằng phương pháp thu thập phân mảnh nối tiếp tích lũy song song phân tích độc lập dữ liệu (diaPASEF). Cài đặt tã là: phạm vi khối lượng từ 400 đến 1200 Da, phạm vi di động từ 0,60 đến 1.43 1/k0, số cửa sổ di động là 1, ước tính thời gian chu kỳ là 1,79 giây, bước khối lượng trên mỗi chu kỳ là 32.

4.7. Xử lý dữ liệu MS và phân tích tin sinh học

Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm DIA-NN (phiên bản 1.8) [44]. Tìm kiếm đối với cơ sở dữ liệu UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens của con người (bản phát hành tháng 2 năm 2021, 20.408 mục nhập) đã được thực hiện bằng quy trình làm việc không có thư viện. Với mục đích này, các tùy chọn "Thông báo FASTA để tạo thư viện/tìm kiếm miễn phí trong thư viện" và "Dự đoán phổ học sâu, RT và IM" đã được kiểm tra để tạo ion tiền chất. Cho phép tối đa 2 lần phân tách bị mất trypsin và mức sửa đổi biến tối đa được đặt thành 5. Quá trình carbamidomethylation (Cys) được đặt làm mức sửa đổi cố định, trong khi quá trình cắt bỏ methionine ở đầu N của protein, quá trình oxy hóa methionine và acetyl hóa ở đầu N được đặt là biến sửa đổi. Phạm vi chiều dài peptide được đặt thành 7 axit3030 axit amin, phạm vi điện tích tiền chất 2–4, tiền chất m / z phạm vi 300–1800 và ion mảnh m / z phạm vi 200–1800. Để tìm kiếm khối lượng gốc và các ion phân mảnh, độ chính xác được DIA-NN suy ra tự động và được đặt ở khoảng 13 ppm cho mỗi phân tích. Tỷ lệ phát hiện sai (FDR) ở mức protein và peptide được đặt thành 1 phần trăm . Trận đấu giữa các lần chạy đã được cho phép. Đối với chiến lược định lượng, Robust LC (độ chính xác cao) đã được sử dụng như được tư vấn trong tài liệu phần mềm, trong khi cài đặt mặc định được giữ cho các tham số thuật toán khác.

Phân tích thống kê và tin sinh học được thực hiện với phần mềm Perseus (phiên bản 1.6.15) được cung cấp miễn phí trên trang web (truy cập vào ngày 22 tháng 6 năm 2021) [45] và R/R Studio và RStudio phiên bản 20 21.09.1 30 (truy cập ngày 12 tháng 11 năm 2021). Tất cả phân tích thống kê R được thực hiện bằng gói thống kê R. Đầu ra ma trận báo cáo pg của DIA-NN đã được sử dụng và cường độ được chuyển đổi log2 để phân tích thống kê. Để so sánh thống kê, chúng tôi đặt bốn nhóm, mỗi nhóm chứa 5 lần sao chép sinh học. Sau đó, chúng tôi đã lọc dữ liệu để chỉ giữ lại các protein có ít nhất 3 giá trị hợp lệ trong ít nhất một nhóm. Tiếp theo, dữ liệu được gán để lấp đầy các điểm dữ liệu bị thiếu bằng cách tạo phân phối Gaussian của các số ngẫu nhiên với độ lệch chuẩn là 33 phần trăm so với độ lệch chuẩn của các giá trị được đo và độ lệch chuẩn 1,8 của giá trị trung bình để mô phỏng phân phối thấp các giá trị tín hiệu. Bài kiểm tra t của học sinh được thực hiện giữa SEN và CTRL FDR < 0,05, S0=0.1 để xác nhận sự hiện diện của các dấu hiệu đặc trưng cho tuổi già. Sau đó, để điều tra xem sự khác biệt về kích thước hiệu ứng giữa sự vắng mặt hoặc sự hiện diện của phương pháp điều trị có giống nhau đối với các tế bào nơi gây ra lão hóa hay không, sự tương tác giữa cả hai yếu tố (nghĩa là Cảm ứng và Điều trị) đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng ANOVA hai chiều trong R. Sau đó, giá trị p thu được cho sự tương tác của cả hai yếu tố đã được điều chỉnh cho nhiều thử nghiệm bằng phương pháp Stewamini–Hochberg [46] để kiểm soát Tỷ lệ phát hiện sai (FDR). Cuối cùng, phân tích bài hoc Tukey HSD đã được thực hiện trên các protein hiển thị giá trị q <0,05. Dữ liệu proteomics phép đo khối phổ đã được gửi đến ProteomeXchange Consortium thông qua kho lưu trữ đối tác PRIDE [47] với mã định danh tập dữ liệu PXD034222.

4.8. Nhuộm ß-Galactosidase liên quan đến lão hóa

Hoạt động ß-galactosidase (SA-ß-gal) liên quan đến lão hóa được đánh giá bằng cách sử dụng bộ nhuộm Công nghệ Tín hiệu Tế bào (#9860). Tổng cộng 1250 000 tế bào/giếng NHDF đã được cấy vào đĩa giếng 6-một ngày trước SIPS; trong khi đó, dưới dạng điều khiển, 250 000 ô/giếng. Sau 4 ngày trong môi trường bình thường, các tế bào được ủ hoặc không ủ với 0.01 phần trăm (p/v) ObHEx trong 48 giờ. Sau đó, chúng được rửa bằng PBS và xử lý bằng dung dịch cố định trong 15 phút. Sau hai lần rửa bằng PBS, các tế bào được ủ với dung dịch nhuộm ß-gal (pH cuối cùng là 6,0) có chứa 5-bromo-4-chloro-3-indolyl- -D-galacto -pyranoside (X-Gal) ở 37 ◦C trong tủ ấm khô trong 20 giờ. Các tế bào tích cực có màu xanh lam. Màu này là do sự phân tách của X-Gal trong galactose và 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl (X) bởi SA-ß-gal. Indoxyl bị oxy hóa thành 5,50 -dibromo-4,40 -dichloro-indigo tạo thành kết tủa màu xanh đậm. Tỷ lệ tế bào dương tính trong tổng số ô được đánh giá bằng cách đếm 100 ô150150 trong 5 hình ảnh được chọn ngẫu nhiên được chụp bằng kính hiển vi, cho từng điều kiện. Các ô được đếm bằng phần mềm ImageJ. Thí nghiệm được thực hiện trong ba lần.

4.9. Phân tích sắp xếp tế bào được kích hoạt bằng huỳnh quang

Tổng số {{0}} tế bào/giếng NHDF đã được cấy vào đĩa giếng 6-một ngày trước SIPS; trong khi đó, dưới dạng điều khiển, 50 000 ô/giếng. Sau 4 ngày trong môi trường bình thường, các tế bào bạch cầu và đối chứng được xử lý hoặc không xử lý bằng 0,01 phần trăm (p/v) ObHEx trong 72 giờ. Sau đó, các tế bào này được ủ với sự có mặt của 5 µg/mL Hoechst 33342 trong 30 phút ở 37 ◦C. Sau khi trypsin hóa và ly tâm ở 500 g trong 2 phút, chúng được tạo huyền phù lại trong 200 µL PBS. Cuối cùng, huỳnh quang tế bào được đo bằng Máy phân tích tế bào BD LSRFortessa. Dữ liệu được phân tích bằng phần mềm FlowJo v10.8.1. Thí nghiệm được thực hiện trong ba lần.

5. Kết Luận

Cấu hình hệ protein toàn cầu liên quan đến lão hóa sâu thu được ở đây cung cấp hàng trăm protein được SIPS bãi bỏ quy định có thể được cộng đồng khoa học khai thác để hiểu rõ hơn về lão hóa và đánh giá tác động của các bộ điều biến tiềm năng mới. Hơn nữa, công việc của chúng tôi chứng minh một cơ chế hoạt động tiền phân bào của ObHEx đối với các nguyên bào sợi ở người già: thông qua sự gia tăng biểu hiện protein phân bào, nó thúc đẩy sự phục hồi sự tăng sinh của các tế bào già. Do đó, dựa trên những kết quả này, chúng tôi đề xuất ObHEx như một chất bổ trợ mạnh mẽ chống lão hóa liên quan đến lão hóa da.

Sự đóng góp của tác giả:Khái niệm hóa, SC, MCM và ICG; phương pháp luận, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) và ICG; phần mềm, KR; điều tra, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP và CC (Corinne Cordier); tài nguyên, MCM và ICG; viết—chuẩn bị bản thảo gốc, SC và ICG; viết—đánh giá và chỉnh sửa, SC, MCM và ICG Tất cả các tác giả đã đọc và đồng ý với phiên bản đã xuất bản của bản thảo.

Tuyên bố về tính khả dụng của dữ liệu:Dữ liệu proteomics khối phổ đã được gửi tới ProteomeXchange Consortium thông qua kho lưu trữ đối tác PRIDE [47] với mã định danh tập dữ liệu PXD034222 (Chi tiết tài khoản người đánh giá: Tên người dùng: người đánh giá_pxd034222@ebi.ac.uk; Mật khẩu: fK9Pjv90) .

Sự nhìn nhận: Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Chúng tôi cảm ơn các thành viên khác của nền tảng Proteomics, Necker Vincent Jung và Joanna Lipecka vì sự hỗ trợ khoa học vô giá và những gợi ý hiệu quả của họ.

Người giới thiệu

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Thợ làm bánh, D.; d'Adda di Fagagna, F. Lão hóa tế bào ở tuổi già: Từ cơ chế đến cơ hội trị liệu. tự nhiên Mục sư Mol. Tế bào sinh học. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Thợ làm bánh, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Hướng dẫn đánh giá sự lão hóa của tế bào trong ống nghiệm và trong ống nghiệm. THÁNG 2 J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Sự lão hóa của tế bào là gì và không phải là gì. Hóa sinh Postepy. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Các túi ngoại bào có nguồn gốc từ các nguyên bào sợi lão hóa làm giảm tác dụng của da đối với quá trình biệt hóa tế bào sừng. quốc tế J. Mol. Khoa học. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Nguyên bào sợi lão hóa thúc đẩy sự phát triển và phát sinh tế bào biểu mô: Mối liên hệ giữa ung thư và lão hóa. Proc. tự nhiên. học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 2001, 98, 12072–12077. [Tham khảo chéo]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Mô liên kết và lão hóa nguyên bào sợi trong quá trình lão hóa da. J. Đầu tư. da liễu. 2021, 141, 985–992. [Tham khảo chéo]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Nhắm mục tiêu các tế bào bạch cầu trong y học tịnh tiến. EMBO Mol. y tế. 2019, 11, e10234. [Tham khảo chéo]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Can thiệp trị liệu cho lão hóa: Trường hợp lão hóa tế bào. Thuốc Discov. Hôm nay 2017, 22, 786–795. [Tham khảo chéo]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, Nhân sự; Melzer, D.; Cox, LS; Xa hơn, RGA; Ostler, EL; et al. Điều chế phân tử nhỏ của biểu hiện yếu tố nối có liên quan đến việc giải cứu khỏi sự lão hóa của tế bào. Sinh học tế bào BMC. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Một đánh giá cập nhật về các hoạt động dược lý và thành phần hóa học của hoa anh thảo buổi tối (Chi Oenothera). Á Pác. J. Trop. sinh học. 2017, 7, 1046–1054. [Tham khảo chéo]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Hoa anh thảo buổi tối (Oenothera biennis) Hoạt động sinh học phụ thuộc vào thành phần hóa học. Chất chống oxy hóa 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Công viên, C.; Jeong, J.-W. Tác dụng bảo vệ của Oenothera Biennis chống lại stress oxy hóa do Hydrogen Peroxide gây ra và sự chết tế bào trong Keratinocytes của da. Cuộc sống 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, TÔI; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Thành phần hóa học, Hoạt động chống oxy hóa và chống viêm của các chất chiết xuất được điều chế từ các bộ phận trên không của Oenothera Biennis L. và Oenothera Paradoxa Hudziok Thu được sau khi gieo hạt. J. Nông nghiệp. Hóa chất thực phẩm 2013, 61, 801–810. [Tham khảo chéo]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, KCN; Muntean, D.; Cocan, tôi.; Watz, C.; Tâm trí, D.; Dehelean, CA; et al. Sàng lọc hóa chất thực vật và sinh học của chiết xuất cồn Oenothera Biennis L.. Phân tử sinh học 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Bổ sung dầu hoa anh thảo trong viêm da dị ứng: Ảnh hưởng đến axit béo trong bạch cầu trung tính và biểu bì. Lipid 1991, 26, 557–560. [Tham khảo chéo]

16. Barbulova, A.; xin lỗi, F.; Colucci, G. Nuôi cấy tế bào thực vật là nguồn thành phần hoạt tính của mỹ phẩm. Mỹ phẩm 2014, 1, 94–104. [Tham khảo chéo]

17. Caesar, LK; Cech, NB Sức mạnh tổng hợp và đối kháng trong chiết xuất sản phẩm tự nhiên: Khi 1 cộng 1 không bằng 2. Nat. sản xuất. Dân biểu 2019, 36, 869–888. [Tham khảo chéo]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Titô, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Một chiết xuất nuôi cấy tế bào Oenothera Biennis có hoạt tính chống lão hóa da cải thiện các đặc tính cơ học của tế bào. Chất chuyển hóa 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Kohler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentacyclic Triterpenes từ Terminalia Arjuna cho thấy nhiều lợi ích đối với da khô và lão hóa. Dược phẩm da. vật lý. 2014, 27, 71–81. [Tham khảo chéo]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Ảnh hưởng của Axit Asiatic, Axit Madecassic và Asiaticoside đối với quá trình tổng hợp Collagen I của con người. Thực vật Med. 1994, 60, 133–135. [Tham khảo chéo]

21. Chowdhary, S. Ảnh hưởng của stress oxy hóa đối với việc gây lão hóa ở nguyên bào sợi của con người. J. Nam Carol. học viện. Khoa học. 2018, 16, 2.

22. Vương, Z.; Ngụy, D.; Xiao, H. Các phương pháp cảm ứng lão hóa tế bào bằng ứng suất oxy hóa. Phương pháp Mol. sinh học. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fucosidase như một dấu ấn sinh học tiện lợi mới cho quá trình lão hóa tế bào. Chu kỳ tế bào 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Hân, JA; Im, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Seneshood-Associated Beta-Galactosidase là Lysosomal Beta-Galactosidase. Tế bào Lão hóa 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgulis, V.; Adams, Giám đốc điều hành; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Giám mục, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Sự lão hóa của tế bào: Xác định con đường phía trước. Ô 2019, 179, 813–827. [Tham khảo chéo]

26. Matsuoka, S.; Ballif, Cử nhân; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Triệu, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. Phân tích chất nền ATM và ATR tiết lộ mạng lưới protein mở rộng đáp ứng với tổn thương DNA. Khoa học 2007, 316, 1160–1166. [Tham khảo chéo]

27. Trương, R.; Trần, W.; Adams, PD Phân tích phân tử về sự hình thành của các chất dị nhiễm sắc liên quan đến tuổi già. mol. Tế bào sinh học. 2007, 27, 2343–2358. [Tham khảo chéo]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Châu, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Các hoạt động chức năng mới cho dòng chất ức chế CDK P21. Nhà phát triển gen 1997, 11, 847–862. [Tham khảo chéo]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Protein Ki-67: Từ cái đã biết và cái chưa biết. J. Sinh lý tế bào. 2000, 182, 311–322. [Tham khảo chéo]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Phương pháp sắp xếp tế bào của các tế bào non và già. Phương pháp Mol. sinh học. 2007, 371, 33–44.

31. Đại, Y.; Đường, H.; Pang, S. Vai trò quan trọng của Phospholipid trong Quy định về Lão hóa và Tuổi thọ. Đằng trước. vật lý. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Con đường truyền tín hiệu của Dashty, M. Hedgehog có liên quan đến các bệnh liên quan đến tuổi tác. J. Bệnh tiểu đường Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Vương, D.; Lu, P.; Lưu, Y.; Chen, L.; Trương, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Văn, F.; Âu Dương, H.-W.; et al. Phân lập tế bào lão hóa sớm sử dụng công nghệ FUCCI. Khoa học. Dân biểu 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Hoàng, J.; De Munter, S.; Leage, B.; Bollen, M. Cdk1 ra lệnh cho các sự kiện phân bào thông qua sự phối hợp của công tắc Phosphatase liên kết với nhiễm sắc thể. tự nhiên cộng đồng. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Vết cắt, EE; Chảo, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I và II thúc đẩy quá trình nén mở rộng phụ thuộc vào ATP của DNA liên kết Nucleosome. mol. Ô 2020, 79, 99–114.e9. [Tham khảo chéo]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Crowning the Kinetochore: The Fibrous Corona in Chromosome Segregation. Xu hướng Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [Tham khảo chéo]

37. Mã, HT; Poon, RYC TRIP13 Hoạt động trong Thiết lập Điểm kiểm tra Lắp ráp Trục chính bằng cách Bổ sung O-MAD2. Đại diện di động 2018, 22, 1439–1450. [Tham khảo chéo]

38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Cây phỉ, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Việc tải các protein Mcm có độ ổn định cao lên chất nhiễm sắc trong các tế bào sống yêu cầu sao chép để dỡ bỏ. J. Sinh học tế bào. 2011, 192, 29–41. [Tham khảo chéo]

39. Mạnh, Q.; Gao, J.; Chu, H.; Anh ấy, H.; Lu, Z.; Hồng, M.; Zhou, H. Nghiên cứu Proteomic về các tế bào nguyên bào sợi da người được truyền đi một cách liên tục đã phát hiện ra quá trình điều chỉnh giảm của các protein phức hợp ngưng tụ nhiễm sắc thể liên quan đến quá trình lão hóa sao chép. hóa sinh. lý sinh học. độ phân giải cộng đồng. 2018, 505, 1112–1120. [Tham khảo chéo]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Ngư dân, RP; Salz, Hồng Kông; Suter, B. Cdk7 Cần thiết cho Nguyên phân và cho Hoạt động Kinase Kích hoạt Cdk của Vivo. Nhà phát triển gen 1998, 12, 370–381. [Tham khảo chéo]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Kruger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, một mục tiêu YAP, là cần thiết cho sự phát triển của chu kỳ tế bào thích hợp và sự ổn định của bộ gen. mol. Ung thư Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, Sự suy giảm AP của Điểm kiểm tra thiệt hại DNA của PBK, một Kinase phân bào mới, liên quan đến tương tác Protein-Protein với chất ức chế khối u P53. hóa sinh. lý sinh học. độ phân giải cộng đồng. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Tốt, L.; Dimri, GP; Campisi, J.; Chen, KY Quy định về biểu hiện gen Dihydrofolate Reductase và các thành phần E2F trong nguyên bào sợi lưỡng bội ở người trong quá trình tăng trưởng và lão hóa. J. Sinh lý tế bào. 1996, 168, 580–588. [Tham khảo chéo]

44. Demichev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Mạng thần kinh và hiệu chỉnh can thiệp cho phép bảo hiểm hệ protein sâu với thông lượng cao. tự nhiên Phương pháp 2020, 17, 41–44. [Tham khảo chéo]

45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, CỦA TÔI; Geiger, T.; Man, M.; Cox, J. Nền tảng tính toán Perseus để phân tích toàn diện dữ liệu (Prote)Omics. tự nhiên Phương pháp 2016, 13, 731–740. [Tham khảo chéo]

46. ​​Stewamini, Y.; Hochberg, Y. Kiểm soát tỷ lệ phát hiện sai: Một cách tiếp cận hiệu quả và thiết thực đối với nhiều thử nghiệm. Chỉ số JR. Sóc. Ser. B (Phương pháp.) 1995, 57, 289–300. [Tham khảo chéo]

47. Pérez-Riverol, Y.; Bái, J.; Banla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. Tài nguyên cơ sở dữ liệu PRIDE năm 2022: Trung tâm cho các bằng chứng về proteomics dựa trên khối phổ. Axit nucleic Res. 2021, 50, D543–D552. [Tham khảo chéo]

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】