Xác định nhanh chóng đồng thời sáu thành phần hiệu quả trong Cistanche Tubulosa bằng phương pháp quang phổ hồng ngoại gần

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Xinhong Wang, Xiaoguang Wang và Yuhai Guo

Trừu tượng:

Việc xác định định lượng nhiều thành phần hữu hiệu trong một loại cây nhất định thường đòi hỏi một lượng rất lớn các sản phẩm tự nhiên đích thực. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đề xuất một phương pháp nhanh chóng và không phá hủy để xác định đồng thời echinacoside, verbascoside, mannitol, sucrose, glucose và fructose trongCistanche tubulosabằng phương pháp quang phổ cận hồng ngoại (NIRS). Phương pháp quang phổ phản xạ khuếch tán cận hồng ngoại (DRS) và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được tiến hành trên 116 lô mẫu Cistanche tubulosa. Dữ liệu DRS được xử lý bằng cách sử dụng phương pháp đa dạng thông thường (SNV) và phương pháp hiệu chỉnh phân tán nhân (MSC). Hồi quy bình phương nhỏ nhất một phần (PLSR) được sử dụng để xây dựng mô hình hiệu chuẩn cho các thành phần quan tâm ở Cistanche tubulosa. Tất cả các mô hình sau đó được đánh giá bằng cách tính toán sai số trung bình bình phương của hiệu chuẩn (RMSEC), hệ số tương quan của hiệu chuẩn (r). Giá trị r của tất cả sáu mô hình hiệu chuẩn được xác định là lớn hơn 0. 94, cho thấy mỗi mô hình đều đáng tin cậy. Do đó, các mô hình NIR định lượng được báo cáo trong nghiên cứu này có thể đủ điều kiện để định lượng chính xác hàm lượng của sáu thành phần thuốc trongCistanche tubulosa.

Từ khóa: Cistanche tubulosa; sắc ký lỏng hiệu năng cao; quang phổ cận hồng ngoại; phần bình phương tối thiểu

Giới thiệu

Cistanche(Hoffmg. Et Link) là một chi thực vật lâu năm của họ thực vật Orobanchaceae. Hầu hết các loài thuộc chi Cistanche đã được sử dụng làm thuốc trong nhiều thiên niên kỷ ở Trung Quốc; có danh tiếng như một loại thuốc bổ cao cấp; và được gọi là "Nhân sâm của sa mạc" [1,2].Cistanche tubulosalà loài ký sinh bắt buộc trên rễ của cây lâu năm Tamarix Chinensis. Nó đã được ghi trong Dược điển Trung Quốc như là nguồn chính thống của Cistanches Herba (tên tiếng Trung: Roucongrong) từ ấn bản năm 2005 [3]. Nghiên cứu dược lý hiện đại về các loài Cistanche được bắt đầu vào những năm 1980 [4]. Các cuộc điều tra dược lý cho thấy các chất chiết xuất từ ​​cây Nhục thung dung có nhiều hoạt tính, chẳng hạn như chữa bệnh thiếu thận và táo bón do tuổi già, tăng cường khả năng học hỏi và ghi nhớ, chống bệnh Alzheimer, tăng cường khả năng miễn dịch, chống lão hóa, chống mệt mỏi, v.v. . [1,5–7]. Trong ba thập kỷ gần đây, các nghiên cứu dược lý toàn diện và có hệ thống đã được kết hợp với điều tra hóa thực vật để làm sáng tỏ cơ sở vật chất về tác dụng có lợi của rễ cây Cistanche. Những cuộc khảo sát này chỉ ra rằng phenylethanoid glycoside (PhGs) là thành phần hiệu quả chính trong cây Cistanche đóng vai trò quan trọng trong việc điều trị chứng thiếu thận, liệt dương [8], chống lão hóa [9] và chống bệnh Alzheimer [10]. Nội dung của hai PhG (echinacoside và verbascoside) được yêu cầu trong Dược điển Trung Quốc. Trong khi đó, các carbohydrate như mannitol, sucrose, glucose và fructose trong cây Cistanche sở hữu chức năng nhuận tràng và các cụm carbohydrate của cây Cistanche đã được sử dụng để điều trị táo bón [11].

Tài nguyên hoang dã củaCistanche tubulosachủ yếu phân bố ở khu vực xung quanh sa mạc Taklamakan thuộc khu tự trị Tân Cương phía nam Trung Quốc. Tương tự như nhiều loài khác được sử dụng làm thuốc truyền thống của Trung Quốc (TCM), C. tubulosa có giá trị kinh tế lớn và gần như tuyệt chủng trong môi trường sống hoang dã vì bị thu hái quá mức. Việc trồng C. tubulosa bắt đầu từ những năm 1990 ở Trung Quốc nhằm đảm bảo nguồn cung cấp nguyên liệu cho Cistanches Herba cũng như bảo vệ tài nguyên thực vật hoang dã. Tính đến năm 2017, gần 13 nghìn ha C. tubulosa được trồng ở tỉnh Hotan ở Tân Cương [12,13]. Những tiến bộ trong công nghệ trồng trọt đòi hỏi phải mở rộng việc trồng trọt cũng như nâng cao chất lượng củaCistanche tubulosa.

Mục đích chính của việc tu luyệnCistanche tubulosalà sản xuất Cistanches Herba, rất giàu các thành phần hữu hiệu đó. Tuy nhiên, hàm lượng của các thành phần hữu hiệu trong Cistanches Herba, chẳng hạn như PhGs và oligosaccharides, có thể bị ảnh hưởng đáng kể bởi nhiều yếu tố trong quá trình sản xuất [12,13]. Cần khám phá hệ thống phát hiện chất lượng của C. tubulosa theo thời gian thực. Vì vậy, cần phải phát triển một phương pháp thông lượng cao để đáp ứng đầy đủ yêu cầu phân tích một số lượng lớn mẫu trong một khoảng thời gian ngắn. Theo truyền thống, việc xác định các thành phần hữu hiệu chính, chẳng hạn như PhG và carbohydrate, trong C. tubulosa thường đạt được bằng cách sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [14,15]. Mặc dù chính xác và đáng tin cậy nhưng việc thu thập và xử lý dữ liệu lại tốn nhiều thời gian và công sức. Ngoài ra, cũng cần rất nhiều thời gian và công sức để chuẩn bị mẫu, thường bao gồm nghiền, chiết và lọc, của các xét nghiệm HPLC. Do đó, cần có nguyên tắc rõ ràng và công cụ dễ vận hành để thu được lượng dữ liệu tương đối lớn. May mắn thay, quang phổ cận hồng ngoại (NIRS) đã được sử dụng rộng rãi để đánh giá nông sản [16], thực phẩm [17], mẫu y tế [18] và dược phẩm [19] vì nó nhanh chóng cũng như không phá hủy. Do đó, NIRS có thể đáp ứng chính xác các yêu cầu để đo hiệu quả các bệnh TCM, và không có gì ngạc nhiên khi NIRS đã được áp dụng để nhận dạng định tính [20,21] và định lượng các hợp chất [22] trong bệnh TCM.

Trong nghiên cứu này, hàm lượng của sáu thành phần hiệu quả, bao gồm echinacoside, verbascoside, mannitol, sucrose, glucose và fructose trong 116 lô mẫu C. tubulosa được thu thập từ tỉnh Hotan ở Tân Cương trong giai đoạn 2013–2015 lần đầu tiên được xác định bởi HPLC. Sau đó, các mô hình hiệu chuẩn của sáu thành phần này được thiết lập bằng phương pháp hồi quy bình phương nhỏ nhất từng phần (PLSR). Các mô hình này sau đó đã được xác nhận hệ số tương quan và sai số dự đoán trong các bộ hiệu chuẩn. Các kết quả đã chứng minh rằng phương pháp đã phát triển có thể được sử dụng như một phương pháp đáng tin cậy để phân tích định lượng C. tubulosa.

Kết quả

Phân tích HPLC

Hàm lượng của echinacoside và verbascoside được xác định bằng phương pháp HPLC-UV được xác định rõ trong tài liệu [3,23] và bốn carbohydrate (mannitol, sucrose, glucose và fructose) được xác định bằng phương pháp HPLC-ELSD được xác định rõ ràng trong tài liệu [24] cho tất cả 116 mẫu. Phương pháp chuẩn bị và xác định mẫu được mô tả trong Phần 3.1 và 3.3. Hình 1 cho thấy sắc ký đồ đặc trưng của các chất chuẩn hỗn hợp. Có thể thấy rằng tất cả sáu thành phần hiệu quả đã được phân tách đường cơ sở và do đó có thể được định lượng. Phương pháp HPLC đã được xác nhận trước khi thử nghiệm mẫu. Các kết quả chính của phương pháp HPLC được liệt kê trong Bảng 1. Một quan hệ tuyến tính thuận lợi (r=0. 9998) và độ thu hồi (98,5 phần trăm) của phương pháp xác định echinacoside được hiển thị trong kết quả, cùng một kết quả với tất cả các năm thành phần. Do đó, hàm lượng của sáu thành phần hiệu quả có thể được xác định chính xác. Tất cả các phạm vi nội dung xác định được tóm tắt trong Bảng 1.

Phân tích NIRS

Hình 2 cho thấy phổ NIR (4 000 - 10, 000 cm-1) của các mẫu C. tubulosa. Các đỉnh hấp thụ đáng kể xuất hiện từ 4000 cm − 1 đến 7500 cm − 1 trong tất cả các mẫu, trong khi dao động nhẹ xuất hiện từ 7500 cm − 1 đến 10.000 cm − 1. Hiện tượng trôi đường cơ sở của phổ NIR xảy ra do mẫu dễ bị ảnh hưởng bởi các yếu tố như kích thước hạt và màu sắc (Hình 2A). Tiền xử lý toán học của quang phổ được sử dụng để giảm ảnh hưởng của thông tin không cần thiết ở một mức độ nào đó. Các tiền xử lý toán học bao gồm dẫn xuất đầu tiên (dẫn xuất thứ nhất), dẫn xuất thứ hai (dẫn xuất thứ hai), giống bình thường tiêu chuẩn (SNV) và hiệu chỉnh phân tán nhân (MSC). Hình 2B cho thấy nguồn gốc thứ hai của phổ NIR của C. tubulosa, và các biến thể đáng kể xảy ra từ ba vùng, 4000–4500 cm-1, 5000–5500 cm-1, và 7000–7500 cm-1, rõ ràng đã được quan sát thấy .

Thiết lập các mô hình hiệu chuẩn định lượng

Hồi quy bình phương nhỏ nhất từng phần (PLSR) là một phương pháp mô hình cổ điển và nó đã được áp dụng rộng rãi trong các mô hình định lượng vì chất lượng kết quả cao. Ưu điểm của PLSR bao gồm khả năng dự báo tốt và tương đối đơn giản. PLSR cũng đã được áp dụng rộng rãi trong việc thiết lập các mô hình hiệu chuẩn định lượng của các bệnh TCM [25]. Dựa trên phổ NIR đã được xử lý trước, và mô hình phân tích định lượng NIR cho sáu thành phần hiệu quả trong C. tubulosa được thiết lập bằng phương pháp PLSR với dữ liệu phân tích HPLC là giá trị thực. 116 mẫu được chia ngẫu nhiên thành các bộ hiệu chuẩn và xác nhận với tỷ lệ 3: 1. Các điều kiện phù hợp nhất cho việc hiệu chuẩn được chọn bởi RMSEC thấp và hệ số tương quan cao.

Lựa chọn dải sóng cho các mô hình hiệu chuẩn

Việc lựa chọn một dải sóng phù hợp là một bước quan trọng để xây dựng mô hình hiệu chuẩn. Trong nghiên cứu này, phổ khoảng NIR 4 000 - 7500 cm -1 (do phần mềm TQ analyst khuyến nghị) và 4 000 - 10.000 cm -1 đã được so sánh. Quan sát thấy rằng phạm vi này không phù hợp cho việc hiệu chuẩn trong khoảng từ 4000 cm -1 đến 7500 cm -1 từ Bảng 2. Do đó, trong nghiên cứu hiện tại, khoảng phổ của sáu thành phần hóa học là tất cả được chọn trong khoảng từ 4000 đến 10.000 cm -1 bằng cách so sánh hiệu suất của RMSEC và hệ số tương quan.

Lựa chọn số lượng yếu tố tối ưu cho mô hình hiệu chuẩn

PLSR giải thích lượng biến thiên tối đa trong dữ liệu bằng cách giảm kích thước của dữ liệu phổ bằng cách tính toán các yếu tố. Vấn đề "thiếu thông tin" xuất hiện do thông tin không đầy đủ do một số yếu tố hạn chế; tuy nhiên, việc chọn các hệ số lớn hơn giá trị tối ưu được giới thiệu trong mô hình sẽ dẫn đến vấn đề "quá mức". Hoặc "dưới mức" hoặc "quá mức" sẽ làm giảm khả năng dự đoán của các mô hình đã thiết lập [22]. Hình 3 cho thấy mối quan hệ giữa RMSECV và các yếu tố đối với tất cả sáu hợp chất. Do đó, chúng tôi đã chọn những yếu tố tương ứng với các giá trị thấp nhất của RMSECV. Lựa chọn tối ưu các yếu tố cho các mô hình hiệu chuẩn được liệt kê trong Bảng 3.

Lựa chọn tiền xử lý quang phổ cho các mô hình hiệu chuẩn

Một yếu tố quan trọng nhất trong các mô hình hiệu chuẩn là tiền xử lý quang phổ nhằm mục đích giảm thiểu sự tán xạ và trôi đường cơ sở, tăng cường tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu và loại bỏ các biến thể bất thường. Phương pháp hiệu chỉnh tán xạ đa nhân (MSC) và phương pháp biến thiên chuẩn thông thường (SNV) đã được sử dụng để loại bỏ sự tồn tại của phong tục tán xạ bức xạ. Để giải quyết các ảnh hưởng của độ trôi đường nền, phổ đạo hàm 1 và 2 được so sánh và chọn đạo hàm thứ 2 [26]. Để có hiệu ứng mong muốn, chúng tôi đã làm mịn phổ bằng thuật toán Savitzky – Golay (SG) fi lter trước khi dẫn xuất để ngăn cation phóng đại nhiễu. Bảng 3 cho thấy thông tin về tiền xử lý quang phổ và kết quả của nó đối với các mô hình hiệu chuẩn.

Đánh giá các mô hình đã được thiết lập

Một mô hình hiệu chuẩn NIRS tốt phải có giá trị RMSEC và RMSEP thấp, cũng như hệ số tương quan cao (r) và sự khác biệt nhỏ giữa RMSEC và RMSEP [27–29]. Các mô hình hiệu chuẩn của sáu hợp chất đã chọn được thiết lập theo các quy trình nêu trên (Bảng 3). Giá trị RMSEC và r cho bộ hiệu chuẩn của echinacoside lần lượt là 27,6 và 0. 9808. Các thông số hoạt động của các mô hình hợp chất hóa học khác được liệt kê trong Bảng 3, từ đó chúng tôi có thể kết luận rằng các mô hình đã thiết lập cho kết quả dự đoán thỏa đáng và có thể được sử dụng để phân tích định lượng nhanh C. tubulosa. Biểu đồ phân tán của sáu hợp chất hóa học được thể hiện trong Hình 4 để làm cho các mô hình hiệu chuẩn có tính mô tả và quan sát trực quan hơn. Như thể hiện trong Hình 4, có sự khác biệt nhỏ giữa giá trị dự đoán và giá trị đo được, bởi vì hầu hết các điểm được phân bố xung quanh đường cong hồi quy với phương trình là y=x. Do đó, các hiệu suất dự đoán tuyệt vời đã được quan sát trong Hình 4.

Nguyên liệu và phương pháp

Chuẩn bị mẫu

Một trăm mười sáu mẫu C. tubulosa được thu thập từ tỉnh Hotan ở khu tự trị Tân Cương từ năm 2013 đến năm 2015. Tất cả các mẫu đều được nuôi cấy, nhưng chúng được thu thập ở các giai đoạn sinh trưởng khác nhau. Khối lượng tươi của các mẫu dao động từ 20 g đến 1000 g. Sau khi phơi nắng, các mẫu khô được nghiền nhỏ và sàng qua rây 60- lưới [3,23].

Thu thập dữ liệu quang phổ NIR

Phổ NIR của các mẫu được thu thập ở khoảng cách 8 cm -1 trên vùng phổ 4 000 - 10.000 cm -1 bằng Hệ thống Antaris MXFT-NIR (Thermo Scienti fi c, Madison, WI, USA) được trang bị bộ chuyển đổi quang học cầm tay. Mỗi phổ thu được bằng cách quét trung bình 64 lần. Tất cả các mẫu được để cân bằng về nhiệt độ phòng (25 C) trước khi quét phổ NIR để đảm bảo rằng các mẫu được phân tích ở cùng một nhiệt độ. Độ ẩm trong phòng thí nghiệm được giữ ở mức môi trường xung quanh.

Thu thập dữ liệu HPLC

Chuẩn bị chiết xuất

Một gam bột C. tubulosa được chiết xuất với 50 mL metanol 50% trong bình nón với sóng siêu âm (500 W, 40 kHz) trong 30 phút. Dịch chiết được bảo quản ở 4 ◦C. Phần nổi phía trên của dịch chiết được lọc để lấy mẫu phân tích HPLC [3,23].

Xác định đồng thời Echinacoside và Verbascoside bằng HPLC-UV

Phân tích sắc ký lỏng được tiến hành trên hệ thống Shimadzu UHPLC (Shimadzu, Kyoto, Nhật Bản) bao gồm hai bộ phân phối dung môi LC -20 ADXR, một máy bơm LC -20 AD, một bộ lấy mẫu SIL -20 ACXRauto , lò cột AC CTO -20, máy dò SPD-M20A DAD, máy khử khí DGU -20 A3R và bộ điều khiển ICBM -20 A.

Cột Grace Prevail Carbohydrate ES (15 0 × 2,1 mm, 2,7 mm) được sử dụng để phân tách sắc ký được duy trì ở 35 ◦C. Pha động bao gồm axetonitril (A) và 0. 1 phần trăm axit fomic (B) và được phân phối theo chương trình gradient như sau: 0 - 7 phút, gradient tuyến tính 10–20 phần trăm A; 7–15 phút, 20 phần trăm A; và 15–20 phút, gradient tuyến tính 20–10 phần trăm A. Tốc độ đồng nhất của pha động là 0,4 mL / phút. Giám sát UV được thực hiện ở bước sóng 330 nm.

Xác định đồng thời Mannitol, Sucrose, Glucose và Fructose bằng HPLC-ELSD

HPLC được thực hiện trên hệ thống Agilent 1100 series LC (Palo Alto, CA, Hoa Kỳ) bao gồm bộ khử khí aG1322A, máy bơm bậc bốn G1311A, bộ lấy mẫu tự động G1311A, bộ điều khiển nhiệt độ cột G1316A và bộ dò DAD G1315B.

Cột Sigma Prevail Carbohydrate ES (4,6 × 25 0 mm, 5 µm) được sử dụng để tách sắc ký và duy trì ở nhiệt độ cột 25 ◦C. Pha động bao gồm acetonitril và nước (77:23, v / v) và đồng minh đẳng cấp được cung cấp với tốc độ 0,7 mL / phút. Nước thải đầu ra được theo dõi bằng máy dò tán xạ ánh sáng bay hơi (ELSD) với các thông số mặc định [23,24].

Xử lí dữ liệu

TQ Analyst (phiên bản 8. 0, Thermo Scientific, Madison, WI, USA) được sử dụng để thực hiện phân chia các bộ hiệu chuẩn và xác nhận, xử lý trước toán học của phổ, thiết lập các mô hình hiệu chuẩn và các phép tính khác. Nguồn gốc (phiên bản 9.1) đã được sử dụng để tạo ra các số liệu.

Kết luận

Lời cảm ơn: Công việc này được hỗ trợ bởi Dự án Kế hoạch Khoa học và Công nghệ Quốc gia Trung Quốc (2015BAD29B 00-04).

Đóng góp của tác giả: Xinhong Wang đã hình thành và thiết kế các thí nghiệm. Xinhong Wang và Xiaoguang Wang đã thực hiện tốt các thí nghiệm. Xinhong Wang và Yuhai Guo đã viết bài báo.

Xung đột lợi ích: Các tác giả tuyên bố rằng không có xung đột lợi ích.

Người giới thiệu

1. Giang, Y .; Tu, PF Phân tích các thành phần hóa học ở các loài cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

2. Xu, R.; Chen, J .; Chen, S.-L.; Liu, T.-N.; Zhu, W.-C.; Xu, J. Cistanche Desticola Ma được trồng như một loại cây trồng mới ở Trung Quốc. Genet. Nguồn lực. Cắt Evol. 2008, 56, 137–142. [CrossRef]

3. Ủy ban Dược điển Trung Quốc biên tập. Dược điển Trung Quốc, xuất bản lần thứ 2005; Nhà xuất bản Công nghiệp Hóa chất: Bắc Kinh, Trung Quốc, 2005; Tập 1, tr. 90.

4. Kobayashi, H.; Komatsu, J. Các thành phần của cistanchE herba (1). Yakugaku Zasshi 1983, 103, 508–511. [CrossRef] [PubMed]

5. Bài hát, ZH; Lei, L.; Tu, PF Những tiến bộ trong nghiên cứu hoạt tính dược lý của cây bìm bìm biếc. Liên kết Et. Cái cằm. Truyền thống. Thảo mộc. Thuốc 2003, 34, 473–476.

6. Xiong, Q.; Kadota, S .; Tani, T.; Namba, T. Tác dụng chống oxy hóa của phenylethanoids từ Cistanche Desticola. Biol. Dược phẩm. Bò đực. Năm 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

7. Xuan, GD; Liu, CQ Nghiên cứu về tác dụng của phenylethanoid glycosides (PEG) của Cistanche Desticola đối với việc chống lão hóa ở chuột già do D-galactose gây ra. J. Chin. Med. Mater. 2008, 31, 1385–1388.

8. Sato, T.; Kozima, S.; Kobayashi, K .; Kobayashi, H. Nghiên cứu dược lý trên Cistanchis Herba. I. Ảnh hưởng của các thành phần của Cistanchis Herba đối với tình dục và hành vi học tập ở chuột bị căng thẳng mãn tính. Yakugaku Zasshi 1986, 105, 1131–1144. [CrossRef]

9. Shen, CY; Jiang, JG; Yang, L.; Wang, DW; Zhu, W. Các thành phần hoạt tính chống lão hóa từ thảo mộc và nutraceuticals được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc: cơ chế dược lý và ý nghĩa đối với việc khám phá thuốc. Br. J. Pharmacol. 2016, 11, 1395–1425. [CrossRef] [PubMed]

10. Li, N.; Wang, J .; Ma, J .; Gu, Z; Giang, C.; Yu, L.; Fu, X. Tác dụng bảo vệ thần kinh của liệu pháp Cistanches Herba đối với bệnh nhân mắc bệnh Alzheimer mức độ trung bình. Sống động. Bổ sung dựa trên cơ sở. Altern. Med. 2015, 2015. [CrossRef] [PubMed]

11. Gao, JY; Giang, Y .; Đại, F.; Han, ZL; Liu, HY; Bao, Z .; Zhang, TM; Tu, PF Nghiên cứu về các thành phần nhuận tràng ở Cistanche Desticola YC Ma. Mod. Cái cằm. Med. 2015, 17, 307–310.

12. Tu, PF; Chen, QL; Giang, Y .; Guo, YH; Dương, TX; Wang, XY; Aierkan, M.; Li, XB; Du, Y.; Nan, ZD; et al. Kỹ thuật nuôi trồng Cistanche tubulosa và ký chủ của nó là Tamarix spp. Mod. Cái cằm. Med. 2015, 17, 349–358.

13. Tu, PF; Giang, Y .; Guo, YH; Tian, ​​YZ; Li, XB; Wang, XY; Wei, J.; Chen, QL; Aierkan, M. Phát triển ngành công nghiệp sinh thái của cistanches herba để thúc đẩy nền văn minh sinh thái của vùng sa mạc phía tây. Mod. Cái cằm. Med. 2015, 17, 297–301.

14. Lu, DY; Zhang, JY; Yang, ZY; Liu, HM; Li, S.; Ngô, BJ; Ma, ZG Phân tích định lượng cistanches herba bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp với phát hiện dãy diode và khối phổ có độ phân giải cao kết hợp với các phương pháp đo hóa học. J. Sep. Khoa học viễn tưởng. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed] Molecules 2017, 22, 843 9 / 9

15. Giang, Y .; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Phân biệt herba cistanches bằng dấu vân tay với sắc ký lỏng hiệu năng cao-phát hiện mảng diode-khối phổ. J. Chromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

    ---