Vai trò của vỏ não sơ khai PKC và PKMζ trong việc củng cố lại trí nhớ sợ hãi và sự bền bỉ sau khi kích hoạt lại

Để biết thêm thông tin:ali.ma@wecistanche.com

Sự tồn tại của những ký ức mới có được được hỗ trợ bởi hoạt động của PKMC, một dạng đồng dạng không điển hình của protein kinase C (PKC). Liệu hoạt động của các đồng dạng PKC thông thường và không điển hình có góp phần vào việc kích hoạt lại ký ức vẫn tồn tại hay không vẫn chưa được biết. Tương tự, liệukỉ niệmViệc kích hoạt lại là điều kiện tiên quyết cho các biện pháp can thiệp để có thể thay đổi độ bền của bộ nhớ hiếm khi được nghiên cứu. Dựa trên những điều trên, chúng tôi đã xem xét vai trò của các dạng đồng dạng PKC thông thường và không điển hình trong việc tái hợp nhất vỏ não trước và sự tồn tại của chứng sợ hãi theo ngữ cảnh được kích hoạt trở lại.kỉ niệmở chuột Wistar đực. Nó được chứng minh rằng việc ức chế hoạt động PKC bằng che Dao kéothrine hoặc hoạt động PKMK với ZIP sẽ làm giảm sự tồn tại của hoạt động đã được kích hoạt của chúng tôikỉ niệmtrong ít nhất 21 ngày; (i) ZIP được cung cấp ngay sau đókỉ niệmquá trình tái hoạt động không ảnh hưởng đến quá trình tái hợp nhất và bền vững. Ngược lại, khi đưa ra 1 giờ sau đó, làm giảmkỉ niệmsự bền bỉ; (ii) hóa chất được cung cấp ngay lập tức sau khi kích hoạt lại trí nhớ làm suy giảm sự hợp nhất lại; (v) bỏ quakỉ niệmviệc kích hoạt lại ngăn cản các tác động gây ra bởi chesionthrine và ZIP: (v) hành động ZIP độc lập với thời gian trôi qua giữa lần quản lý và lần đầu tiênkỉ niệmkiểm tra. Kết quả chỉ ra rằng PKC và PKM vỏ não trước, có liên quan đếnkỉ niệmsự hợp nhất lại và sự bền bỉ.

Thiago Rodrigues da Silva1, Ana Maria Raymundi1, Leandro José Bertoglio2,

RobertoAndreatini1 & CristinaA. Sao 1 *

Họ của protein kinase C (PKC) bao gồm các dạng thông thường (, và), mới (δ, ɛ, η và θ) và không điển hình (ζ, ι, và λ) đồng dạng 1,2. Vai trò của từng dạng đồng dạng PKC này hiện đang được điều tra. Tích lũy bằng chứng cho thấy rằng sự hoạt hóa dai dẳng của đồng dạng protein kinase C không điển hình (PKMζ) ở giai đoạn muộn củakỉ niệmhợp nhất có trách nhiệm duy trì quyền lực lâu dài và lâu dàibộ nhớ 3–5. PKMζ cũng đã được báo cáo là cần thiết cho sự tồn tại của các ký ức về thủ tục, không gian, cảm giác ngon miệng (bổ ích) và thù địch mới có được 4,6–8. Sự biểu hiện quá mức của PKMζ trong vỏ não trước (PL) đã được chứng minh là có khả năng tăng cường khả năng tồn tại của trí nhớ ác cảm9. Mặt khác, sự methyl hóa DNA của nó trong vỏ não PL, hoặc sự kết hợp của nó với các đám rối sợi thần kinh trong vùng hải mã, có liên quan đếnkỉ niệmsuy giảm hoặc suy giảm ở các mô hình động vật mắc các bệnh liên quan đến tuổi già10,11.

Nhấp vào Cistanche hữu cơ để ghi nhớ

Người ta đã đề xuất rằng một thời gian ngắn kích hoạt lại trí nhớ gây ra một giai đoạn muộn (ngoài cửa sổ thời gian tái hợp nhất) của quá trình tổng hợp protein có thể làm nền tảng cho sự tồn tại của những ký ức thù nghịch được kích hoạt lại12. Theo đó, một chất ức chế tổng hợp protein được sử dụng trong 9,5 giờ sau khi kích hoạt lại đã được báo cáo là làm giảm sự tồn tại của trí nhớ sợ hãi được kích hoạt trở lại13. Tương tự, sự ức chế PKC 6 hoặc 9 giờ sau khi bộ nhớ được kích hoạt trở lại đã làm suy giảm tính bền bỉ của nó mà không ảnh hưởng đến quá trình tái hợp nhất14. Có một số điểm tương đồng giữa việc củng cố trí nhớ nỗi sợ hãi và sự củng cố lại, chẳng hạn như khoảng thời gian xuất hiện của chúng 15–17. Các cơ chế hỗ trợ trí nhớ bền bỉ trong và sau khi củng cố trí nhớ được nghiên cứu tương đối nhiều hơn .18,19. Việc điều tra các cơ chế duy trì bộ nhớ trong và sau khoảng thời gian tái hợp nhất vẫn đang ở giai đoạn đầu. Nó sẽ liên quan đến khoa học và điều trị để nâng cao kiến ​​thức của chúng ta về câu hỏi thứ hai. vỏ não PKC và PKM (về sự tồn tại của trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh ở chuột. Ban đầu, chúng tôi tập trung vào các mốc thời gian cụ thể sau khi kết thúc cửa sổ thời gian tái hợp nhất bộ nhớ (từ 6 đến 18h sau khi kích hoạt lại bộ nhớ). Tiếp theo, bằng cách bỏ qua kích hoạt lại bộ nhớ, chúng tôi đánh giá yêu cầu của quá trình này là tạo ra cơ chế duy trì bộ nhớ. Cuối cùng, chúng tôi đã giải quyết liệu PKC và / hoặc PKMC cũng quan trọng đối với việc hợp nhất bộ nhớ và / hoặc sự bền bỉ trong khoảng thời gian hợp nhất lại (0 và / hoặc 1 giờ sau khi kích hoạt lại bộ nhớ ).

Kết quả

Ảnh hưởng của sự ức chế PKC của vỏ não PL bởi chelerythrine đối với sự tồn tại của ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh được kích hoạt trở lại.

Chúng tôi đã thử nghiệm can thiệp dược lý này vào 6, 9, 12 và 18h để kích hoạt lại trí nhớ (Hình. 1A). Tại điểm thời gian đầu tiên được chọn, ANOVA hỗn hợp hiển thị các điểm hoàn chỉnh đáng kể của các phiên [F (2,44)=33. 7; P<0.0001], the="" treatment="" [f(1,22)="8.77;" p="0.007]," and="" the="" interaction="" between="" these="" factors="" [f(2,44)="22.0;" p="0.00001]," for="" freezing="" time.="" as="" shown="" in="" fig.="" 1b,="" the="" tukey="" post-hoc="" test="" showed="" a="" signifcant="" diference="" between="" control="" and="" chelerythrine="" groups="" (n="13" and="" 11,="" respectively)="" during="" test="" a2="" (p="0.0001;" hedges'="" g="" efect="" size="2.65)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.90;" g="0.40)" or="" test="" a1="" (p="0.95;" g="">

Tại thời điểm thứ hai được chọn (9 giờ), một ANOVA hỗn hợp cho thấy các phần hoàn chỉnh đáng kể của các phiên [F (2,36)=25. 1; P<0.0001], the="" treatment="" [f(1,18)="8.95;" p="0.0078]," and="" their="" interaction="" [f(2,36)="7.06;" p="0.0026]." as="" shown="" in="" fig.="" 1c,="" there="" was="" a="" signifcant="" diference="" between="" control="" and="" chelerythrine="" groups="" (n="12" and="" 8,="" respectively)="" during="" test="" a2="" (p="0.001;" g="1.92)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.81;" g="0.63)" or="" test="" a1="" (p="0.53;" g="">

Tại thời điểm thứ ba được chọn (12h), ANOVA hỗn hợp cho thấy ảnh hưởng đáng kể của các phiên [F (2,28)=20. 9; P<0.0001], the="" treatment="" [f(1,14)="11.3;" p="0.0047]," and="" their="" interaction="" [f(2,28)="18.0;"><0.0001]. as="" shown="" in="" fig.="" 1d,="" there="" was="" a="" signifcant="" diference="" between="" control="" and="" chelerythrine="" groups="" (n="7" and="" 9,="" respectively)="" during="" test="" a2="" (p="0.0002;" g="3.15)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.31;" g="0.75)" or="" test="" a1="" (p="0.96;" g="">

Tại thời điểm thứ tư được chọn (18h), ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có sự thay đổi đáng kể [F (2,24)=9. 43; P<0.0001], and="" an="" interaction="" between="" sessions="" and="" treatment="" [f(2,24)="5.00;" p="0.02]," but="" not="" the="" treatment="" [f(1,12)="0.66;" p="0.43]." as="" shown="" in="" fig.="" 1e,="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" test="" a2="" and="" the="" reactivation="" session="" in="" animals="" treated="" with="" vehicles="" (p="0.03;" g="1.12;" n="7)," but="" not="" chelerythrine="" (p="0.57;" g="0.76;" n="7)." there="" were="" no="" significant="" differences="" between="" groups="" during="" any="" session="" performed.="" altogether,="" the="" results="" associate="" the="" pl="" cortex="" pkc="" activity="" 6,="" 9,="" or="" 12h="" after="" reactivating="" an="" aversive="" memory="" with="" its="">

Suy giảm khả năng bền bỉ của trí nhớ do ức chế PKC trong vỏ não PL đòi hỏi phải kích hoạt lại trí nhớ trước.

Những thay đổi về khả năng duy trì trí nhớ gây ra bởi cheearchthrine cũng tương tự khi loại thuốc này được dùng vào 6, 9 hoặc 12 giờ sau phiên kích hoạt lại. Dựa trên điều này, thời điểm đầu tiên được chọn để tiến hành thử nghiệm tiếp theo, trong đó phiên kích hoạt lại bộ nhớ được bỏ qua (Hình 2A) để điều tra xem liệu đó có phải là điều kiện tiên quyết cho việc quan sát kết quả nêu trên hay không. Để đạt được mục đích này, các động vật có điều kiện sợ hãi theo ngữ cảnh được tiếp xúc với Bối cảnh B trung lập và không ghép đôi (phiên không kích hoạt lại) và 6h sau đó được điều trị bằng phương tiện hoặc thuốc hóa học (n =6 mỗi nhóm). ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có sự thay đổi đáng kể [F (2,20)=167, 48; P =0. 000001], nhưng không phải là xử lý [F (1,10)=0. 75; P =0. 40] hoặc tương tác của chúng [F (2.20)=0. 34; Tr =0. 71]. Như thể hiện trong Hình 2B, cả hai nhóm đều có giá trị đóng băng cao hơn trong Thử nghiệm A1 và A2 so với trong phiên không kích hoạt lại (P<0.0001), confirming="" that="" this="" conditioned="" behavior="" is="" observed="" predominantly="" when="" the="" animals="" are="" re-exposed="" to="" the="" conditioning="" context.="" further,="" no="" treatment="" effect="" was="" observed,="" indicating="" that="" memory="" reactivation="" is="" essential="" for="" chelerythrine-induced="" impairments="" in="" its="">

Sự xuất hiện của sự ức chế PKMζ vỏ não PL do ZIP về sự tồn tại của ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh được kích hoạt trở lại. Sự biểu hiện quá mức của PKMζ trong vỏ não PL đã được chứng minh là có khả năng tăng cường độ bền bỉ của trí nhớ ác cảm9. Dựa trên những phát hiện này và những phát hiện trước đó về chất hóa học, chúng tôi đã điều tra xem liệu hoạt động PKMζ trong vỏ não PL 6h sau khi kích hoạt lại ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh có liên quan đến sự tồn tại của nó hay không (Hình 3A). Một ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có nhiều sai sót đáng kể [F (3,36)=31. 4; P<0.0001], the="" treatment="" [f(1,12)="25.9;" p="0.0003]," and="" their="" interaction="" [f(3,36)="15.1;" p="0.0001]." as="" shown="" in="" fig.="" 3b,="" there="" were="" significant="" differences="" between="" control="" and="" zip="" groups="" (n="7" in="" both="" cases)="" during="" test="" a2="" (p="0.0001;" g="2.53)," and="" test="" a3="" (p="0.0001;" g="4.11)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.99;" g="0.13)" or="" test="" a1="" (p="0.54;" g="1.35)." altogether,="" the="" results="" associate="" the="" pl="" cortex="" pkmζ="" activity="" 6h="" after="" reactivating="" an="" aversive="" memory="" with="" its="">

Để điều tra xem kích hoạt lại bộ nhớ có phải là điều kiện tiên quyết để ZIP ảnh hưởng đến quá trình tồn tại lâu dài hay không, trong thử nghiệm tiếp theo, các động vật được tiếp xúc với Bối cảnh B trung lập và không được ghép nối (phiên không kích hoạt lại) và 6 giờ sau được xử lý bằng phương tiện (n =6 ) hoặc ZIP (n =9) (Hình 3C). Một ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên khác nhau đáng kể [F (3,39)=202; P =0. 00001], nhưng không phải là xử lý [F (1,13)=0. 33; P =0. 57] hoặc tương tác của chúng [F (3,39)=0. 17; Tr =0. 91]. Như thể hiện trong Hình 3D, cả hai nhóm đều cho thấy thời gian đóng băng cao hơn trong các Thử nghiệm A1, A2 và A3 so với trong phiên không kích hoạt lại (P<0.0001), confirming="" that="" fear="" expression="" is="" more="" selective="" to="" the="" conditioning="" context.="" moreover,="" no="" treatment="" effect="" was="" observed,="" indicating="" that="" memory="" reactivation="" is="" necessary="" for="" the="" zip-induced="" changes="" in-memory="">

Hình 3. Ảnh hưởng của sự ức chế PKM vỏ não prelimbic (PL) bởi ZIP đối với sự tồn tại của nó được kích hoạt trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh. (A) Trong thiết kế thử nghiệm chung được sử dụng, Động vật ban đầu được làm quen với ngữ cảnh. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Mỹ). Vào ngày hôm sau, 6 giờ sau khi kích hoạt lại trí nhớ (Bối cảnh A tái tiếp xúc), các con vật được truyền hai bên ZIP hoặc Scr-ZIP (10nmol) Intra-PLcortex. Một, bảy và 21 ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh ghép nối (TestsA, A và A,) để đánh giá tác động của ZIP đối với bộ nhớ, (B) Ảnh hưởng của ZIP đối với sự bền bỉ của bộ nhớ khi được 6 giờ sau khi kích hoạt lại. ZIP. Động vật được điều trị có thời gian đóng băng ít hơn so với đối chứng trong các Thử nghiệm A và A, cho thấy sự suy giảm trí nhớ kéo dài. (C) Thiết kế thử nghiệm chung đã được sử dụng. Các con vật ban đầu được làm quen với Bối cảnh A. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Hoa Kỳ). Vào ngày hôm sau, 6 giờ sau khi bỏ qua việc kích hoạt lại trí nhớ (tiếp xúc với bối cảnh B trung tính và không ghép đôi), các con vật được truyền song phương ZIP hoặc Scr-ZIP trong vỏ não PL. Một, bảy và 21 ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh được ghép nối (Bài kiểm tra A. A2 và A3) để đánh giá ảnh hưởng của ZIP đối với bộ nhớ. (D) ZIP ảnh hưởng đến độ bền của bộ nhớ khi được đưa ra 6 giờ sau khi bỏ qua việc kích hoạt lại bộ nhớ. Động vật được xử lý ZIP cho thấy thời gian đóng băng tương tự như đối chứng trong bất kỳ thử nghiệm nào cho thấy không có thay đổi về độ bền trong bộ nhớ. (E) Thiết kế chung được sử dụng. Các con vật ban đầu được làm quen với Bối cảnh A. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Mỹ). Vào ngày hôm sau, 6 giờ sau khi kích hoạt lại trí nhớ (tái tiếp xúc với bối cảnh A), các con vật được truyền song phương ZIP hoặc Scr-ZIP trong vỏ não PL, 10 ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh ghép nối (Thử nghiệm A) để đánh giá hiệu ứng ZIP trên bộ nhớ. (F) Ảnh hưởng của ZIP đối với sự bền bỉ của bộ nhớ khi được đưa ra sau 6 giờ sau khi kích hoạt lại, động vật được xử lý ZIP có thời gian đóng băng ít hơn so với đối chứng trong Thử nghiệm A, cho thấy sự suy giảm khả năng tồn tại của bộ nhớ. Giá trị được biểu thị dưới dạng trung bình ± SEM (số lượng động vật mỗi nhóm: B =7 / nhóm; D =6-9; F =7-9). Trong "B" và "F", dấu hoa thị biểu thị một sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P< 0.05)="" from="" the="" respective="" control="" group="" (mixed="" anova="" followed="" by="" the="" tukey="" test).in"d,="" the="" fence="" (hashtag)="" denotes="" a="" statistically="" significant="" difference="">< 0.05)from="" tests="" a,="" a,="" and,="" relative="" to="" the="" no="" reactivation="" session="" in="" both="" groups="" (mixed="" anova="" followed="" by="" the="" tukey="">

Người ta đã lập luận rằng việc ức chế PKMζ có thể làm giảm sự biểu hiện của trí nhớ hơn là can thiệp vĩnh viễn vào sự tồn tại của nó23. Để điều tra xem liệu thuốc gây ra có lây nhiễm trên sự tồn tại của trí nhớ được kích hoạt lại hay không phụ thuộc vào thời gian trôi qua giữa quá trình điều trị và Thử nghiệm A1 (Hình 3E), trong thí nghiệm tiếp theo, các con vật được điều trị được truyền dịch truyền vào vỏ não PL sau 6 giờ kích hoạt lại trí nhớ, và Bài kiểm tra A1 được thực hiện sau 10 ngày (thay vì 1 ngày sau đó). ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có sự thay đổi đáng kể [F (1,14)=5. 68; P<0.03], the="" treatment="" [f(1,14)="7.40;" p="0.01]," and="" their="" interaction="" [f(1,14)="19.41;" p="0.0006]." as="" shown="" in="" fig.="" 3f,="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" control="" and="" zip="" groups="" (n="7–9" animals/group)="" during="" test="" a1="" (p="0.01;" g="2.37)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.78;" g="0.50)." these="" results="" corroborate="" that="" pl="" cortex="" pkmζ="" activity="" 6h="" after="" reactivating="" a="" contextual="" fear="" memory="" is="" involved="" in="" its="" persistence,="" and="" indicate="" the="" zip="" action="" is="" independent="" of="" the="" time="" elapsed="" between="" its="" administration="" and="" test="">

Hinh 4. Ảnh hưởng của sự ức chế PKC của vỏ não trước (PL) bởi chelerythrine (Che) đối với việc tái hợp nhất trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh đã được kích hoạt trở lại (A) Thiết kế thí nghiệm chung được sử dụng. Động vật ban đầu được làm quen với bối cảnh A. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Hoa Kỳ). Vào ngày hôm sau, ngay sau khi kích hoạt lại trí nhớ (tái tiếp xúc với bối cảnh A), động vật nhận được hai phương tiện truyền thông (Veh ) hoặc Che (3. 0 nmol) trong PLcortex. Một, bảy và 21 ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh được ghép nối (Kiểm tra A, A và A,) để đánh giá tác động của Che đối với trí nhớ, (B) Ảnh hưởng của Che đối với việc củng cố lại trí nhớ khi được đưa ra ngay sau đó. kích hoạt lại. Động vật được điều trị bằng che phủ cho thấy thời gian đóng băng ít hơn so với đối chứng trong các Thử nghiệm A, A và Az cho thấy sự suy giảm khả năng củng cố trí nhớ. (C) Thiết kế thử nghiệm chung đã được sử dụng. Động vật ban đầu đã được làm quen với bối cảnh. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Hoa Kỳ). Vào ngày hôm sau, ngay sau khi bỏ qua việc kích hoạt lại bộ nhớ (tiếp xúc với bối cảnh B trung tính và không ghép đôi), các con vật được truyền Veh hoặc Che bên trong vỏ não. Một và bảy ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh được ghép nối (Bài kiểm tra A, và,) để đánh giá tác động của Che đối với trí nhớ. (D) Che hoàn thành việc củng cố lại bộ nhớ khi được đưa ra ngay sau khi bỏ qua việc kích hoạt lại bộ nhớ. Động vật được điều trị bằng che phủ cho thấy thời gian đóng băng tương tự như đối chứng trong Thử nghiệm A, cho thấy không có thay đổi nào trong việc củng cố trí nhớ. Giá trị được biểu thị bằng 土 SEM （số động vật trung bình trên mỗi nhóm∶B =7 / nhóm; D =6 / nhóm). Trong "B", dấu hoa thị biểu thị sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (* P<0.05)from the="" respective="" control="" group="" (mixed-anova="" followed="" by="" the="" tukey="" test).in="" "d"="" the="" fence(hashtag)="" denotes="" a="" statistically="" significant="" difference=""><0.05)from tests="" a,="" and="" a,="" relative="" to="" the="" no="" reactivation="" session="" in="" both="" groups(mixed="" anova="" followed="" by="" the="" tukey="">

xử lý [F (1,14)=7. 40; P =0. 01], và tương tác của chúng [F (1,14)=19. 41; P =0. 0006]. Như thể hiện trong Hình 3F, có sự khác biệt đáng kể giữa nhóm đối chứng và nhóm ZIP (n =7 - 9 con / nhóm) trong Thử nghiệm A1 (P =0. 01; g =2. 37), nhưng không phải là phiên kích hoạt lại (P =0. 78; g =0. 50). Những kết quả này chứng minh rằng hoạt động PKMζ của vỏ não PL 6h sau khi kích hoạt lại trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh có liên quan đến tính bền bỉ của nó và cho biết hành động ZIP độc lập với thời gian trôi qua từ khi quản lý đến Bài kiểm tra A1.

Sự xuất hiện của sự ức chế PKC vỏ não PL bằng cách hóa trị liệu trên sự tái hợp nhất của ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh đã được kích hoạt trở lại.

Chúng tôi đã thử nghiệm biện pháp can thiệp dược lý này ngay sau phiên kích hoạt lại bộ nhớ (Hình 4A). ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có sự thay đổi đáng kể [F (3,36)=22. 5; P<0.0001], the="" treatment="" [f(1,12)="40.8;" p="0.0001]," and="" their="" interaction="" [f(3,36)="5.68;" p="0.0027]." as="" shown="" in="" fig.="" 4b,="" there="" were="" significant="" differences="" between="" control="" and="" chelerythrine="" groups="" (n="7" in="" both="" cases)="" during="" test="" a1="" (p="0.0003;" g="2.95)," test="" a2="" (p="0.0001;" g="4.30)," and="" test="" a3="" (p="0.003;" g="1.26)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.60;" g="0.79)." these="" results="" indicate="" that="" pl="" cortex="" pkc="" activity="" immediately="" after="" reactivating="" a="" contextual="" fear="" memory="" is="" involved="" in="" its="" reconsolidation,="" and="" the="" drug-induced="" reconsolidation="" impairment="" was="" still="" present="" 21="" days="">

Để điều tra xem liệu việc kích hoạt lại trí nhớ có phải là điều kiện tiên quyết để hóa trị liệu ảnh hưởng đến quá trình tái hợp nhất hay không, trong thử nghiệm tiếp theo, phiên kích hoạt lại đã bị bỏ qua vì động vật được tiếp xúc với bối cảnh B và sau đó được điều trị bằng phương tiện hoặc hóa chất tẩy tế bào chết (Hình 4C; n {{1} }/tập đoàn). Một ANOVA hỗn hợp cho thấy các phiên có nhiều sai sót đáng kể [F (2,26) = 379. 7; P =0. 0001], nhưng không phải là xử lý [F (1,13) = 5. 71; P =0. 06], hoặc tương tác của chúng [F (2, 26) = 2. 76; Tr =0. 09]. Như thể hiện trong Hình 4D, cả hai nhóm đều cho thấy thời gian đóng băng cao hơn trong các Thử nghiệm A1 và A2 so với trong phiên không kích hoạt lại (P<0.0001), confirming="" that="" fear="" expression="" is="" more="" selective="" to="" the="" conditioning="" context.="" moreover,="" there="" was="" no="" treatment="" effect,="" indicating="" that="" memory="" reactivation="" is="" also="" necessary="" for="" drug-induced="" efects="" in="" memory="">

Hình 5. Ảnh hưởng của sự ức chế PKM vỏ não trước (PL) bởi ZlP đối với việc tái hợp nhất trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh đã được kích hoạt trở lại. (A) Thiết kế thử nghiệm chung đã được sử dụng. Động vật ban đầu được làm quen với bối cảnh A. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Hoa Kỳ), Vào ngày hôm sau, ngay sau khi kích hoạt lại trí nhớ (tái tiếp xúc với bối cảnh A), động vật được truyền song phương ZIP hoặc Scr -ZIP (10 nmol) trong vỏ não. Một, bảy và 21 ngày sau, các con vật được tiếp xúc lại với bối cảnh được ghép nối (TestsA, A và A) để đánh giá tác động của ZIP đối với bộ nhớ. (B) ZIP ảnh hưởng đến việc tái hợp nhất bộ nhớ khi được cung cấp ngay sau khi kích hoạt lại bộ nhớ. Động vật được xử lý bằng ZIP cho thấy thời gian đóng băng tương tự như đối chứng trong các Thử nghiệm A, A và, cho thấy không có thay đổi nào trong việc củng cố lại trí nhớ. (C) Thiết kế thử nghiệm chung đã được sử dụng. Động vật ban đầu được làm quen với bối cảnh A. Một ngày sau, bối cảnh được ghép nối với ba cú sốc (Hoa Kỳ). Vào ngày hôm sau, 1 giờ sau khi kích hoạt lại trí nhớ (tái tiếp xúc với bối cảnh A), các con vật nhận được một lượng ZIP hai bên hoặc Scr-ZIP trong vỏ não PL. Một, bảy và 21 ngày sau, các con vật được tiếp xúc với bối cảnh được ghép nối (Kiểm tra A, A và A,) để đánh giá ảnh hưởng của IP đối với trí nhớ. (D) ZIP ảnh hưởng đến độ bền của bộ nhớ khi được 1 giờ sau khi kích hoạt lại. Động vật được xử lý bằng ZIP cho thấy thời gian đóng băng ít hơn so với đối chứng trong các Thử nghiệm A2 và A, cho thấy sự suy giảm khả năng bền bỉ của trí nhớ. Giá trị được biểu thị bằng giá trị trung bình ± SEM (số lượng động vật mỗi nhóm: B =7 / nhóm; D =7-8). Trong "B", ANOVA hỗn hợp theo sau bởi thử nghiệm Tukey cho thấy không có sự khác biệt đáng kể trong ngữ cảnh được ghép nối số lần phơi sáng (ngữ cảnh A). Trong "D", dấu hoa thị biểu thị sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P<0.05)from the="" respective="" control="" group="" (mixed="" anova="" followed="" by="" the="" tukey="">

Sự xuất hiện của sự ức chế PKMζ vỏ não PL bởi ZIP về sự hợp nhất lại ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh đã được kích hoạt trở lại.

Chúng tôi đã thử nghiệm biện pháp can thiệp dược lý này ngay lập tức để ngăn chặn sự kích hoạt lại trí nhớ của ses sion và 1h sau đó. Tại thời điểm đầu tiên được chọn (Hình 5A), ANOVA hỗn hợp cho thấy không có lỗi quan trọng nào của các phiên [F (3,36)=4. 33; P<0.303], the="" treatment="" [f(1,12)="0.109;" p="0.7472]," and="" their="" interaction="" [f(3,36)="1.62;" p="0.19]." as="" shown="" in="" fig.="" 5b,="" there="" were="" no="" signifcant="" diferences="" between="" control="" and="" zip="" groups="" (n="7" in="" both="" cases)="" during="" any="" session="" performed,="" suggesting="" that="" pkmζ="" activity="" in="" the="" pl="" cortex="" immediately="" afer="" reactivating="" a="" contextual="" fear="" memory="" is="" not="" involved="" in="" its="" reconsolidation="" (and="" persistence).="" at="" the="" second="" time="" point="" selected="" (fig.="" 5c),="" a="" mixed="" anova="" showed="" signifcant="" efects="" of="" the="" sessions="" [f(3,39)="42.2;"><0.0001], the="" treatment="" [f(1,13)="20.2;" p="0.0006]," and="" their="" interaction="" [f(3,39)="7.82;" p="0.0003]." as="" shown="" in="" fig.="" 5d,="" there="" were="" signifcant="" diferences="" between="" control="" and="" zip="" groups="" (n="8" and="" 7,="" respectively)="" during="" test="" a2="" (p="0.0005;" g="2.25)," and="" test="" a3="" (p="0.0002;" g="2.19)," but="" not="" the="" reactivation="" session="" (p="0.99;" g="0.48)" or="" test="" a1="" (p="0.35;" g="1.48)." altogether,="" the="" results="" associate="" the="" pl="" cortex="" pkmζ="" activity="" as="" early="" as="" 1h="" afer="" reactivating="" an="" aversive="" memory="" with="" its="">

Thảo luận

Nghiên cứu hiện tại đã tìm cách điều tra vai trò của PKC và PKMζ trong vỏ não PL trong việc tái hợp nhất và tồn tại của trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh được kích hoạt trở lại ở chuột. Nó chỉ ra rằng: 1) hoạt động của cả PKC và PKMζ là cần thiết cho sự tồn tại của một bộ nhớ được kích hoạt lại; 2) sự xuất hiện của PKC hoặc ức chế PKMζ yêu cầu kích hoạt lại bộ nhớ trước; 3) các đợt ức chế PKMζ không phụ thuộc vào thử nghiệm ban đầu 1 ngày sau khi truyền ZIP; 4) hoạt động của PKC, nhưng không phải PKMζ, cũng liên quan đến việc hợp nhất lại bộ nhớ được kích hoạt lại; 5) hoạt động của PKMζ trong cửa sổ thời gian hợp nhất là rất quan trọng đối với sự bền bỉ của bộ nhớ. Những phát hiện của Tese chỉ ra rằng PKC và PKMζ của vỏ não PL có sự tham gia khác nhau vào các quá trình được kiểm tra.

Sự ức chế PKC do hóa chất gây ra trong vòng 6 giờ sau khi kích hoạt lại trí nhớ không bị lây nhiễm vào thời gian đóng băng khi các con vật được thử nghiệm một ngày sau đó (Thử nghiệm A1). Kết quả này chứng thực bằng chứng trước đó cho thấy rằng các biện pháp can thiệp thử nghiệm khác nhau được thực hiện tại thời điểm này không còn có thể can thiệp vào việc tái hợp nhất trí nhớ nghịch đảo 15,16,24. Tuy nhiên, sau bảy ngày (Thử nghiệm A2), có sự khác biệt giữa các nhóm, cho thấy rằng hoạt động PKC trong vỏ não PL là cần thiết để trí nhớ chống đối được kích hoạt trở lại vẫn tồn tại. Mô hình kết quả này (giảm thời gian đóng băng 7 ngày nhưng không phải 24 giờ sau khi điều trị bằng thuốc) phù hợp với kết quả được báo cáo sau khi truyền chất ức chế tổng hợp protein vào hạch hạnh nhân 13 bên cơ bản, chất ức chế con đường ERK vào vùng hải mã lưng 25, và sử dụng toàn thân đối với không -chất ức chế PKC chọn lọc14.

Các quá trình liên quan đến sự bền bỉ của bộ nhớ nghịch đảo, chẳng hạn như làn sóng thứ hai của biểu hiện protein Arc trong hạch hạnh nhân bên cơ bản, thường được báo cáo là xảy ra đến 12 giờ sau khi nó được kích hoạt trở lại. Để nghiên cứu thêm xem liệu hoạt động PKC trong vỏ não PL có quan trọng đối với sự bền bỉ của trí nhớ hay không, các tác động từ xương sống đã được đánh giá ở các nhóm động vật độc lập 9,12 hoặc 18h sau khi kích hoạt lại trí nhớ. Có sự giảm thời gian đóng băng do thuốc gây ra so với các đối chứng trong Thử nghiệm A khi nó được đưa ra 9 hoặc 12 giờ sau khi kích hoạt lại bộ nhớ, nhưng không phải 18h sau đó cho thấy rằng khoảng thời gian mà PLcortex PKCisinyolyedin tồn tại được kích hoạt trí nhớ chống lại phạm vi từ 6 đến 12 giờ. Điều đáng nói là các động vật được điều trị bằng phương tiện 18h sau khi kích hoạt lại bộ nhớ có thời gian đóng băng ít hơn trong Bài kiểm tra A, khi so sánh với phiên kích hoạt lại của chúng, cho thấy rằng khả năng tuyệt chủng có thể xảy ra ở nhóm đối chứng. Điều thú vị là sự khác biệt này không được quan sát thấy ở những động vật được điều trị bằng thuốc bằng hóa chất. Các nghiên cứu trong tương lai được đảm bảo để kiểm tra xem liệu sự ức chế PKC của vỏ não PL có ảnh hưởng đến quá trình tuyệt chủng hay không

Nếu độ bền trong bộ nhớ của PKCinvolvement phụ thuộc vào việc kích hoạt lại bộ nhớ trước đó (tức là tiếp xúc ngắn với bối cảnh điều hòa), thì người ta sẽ không mong đợi sự tồn tại của bộ nhớ ở những động vật được truyền vào vỏ não PL bằng thuốc hóa học 6 giờ sau khi chúng tiếp xúc với bối cảnh không điều hòa. . Thật vậy, không có tác dụng ức chế PKC nào được quan sát thấy khi bỏ qua quá trình kích hoạt lại bộ nhớ, một kết quả đồng ý với những kết quả đó cho thấy rằng sự cảm ứng của các cơ chế liên quan đến sự bền bỉ được kích hoạt bởi sự kích hoạt lại bộ nhớ4,25:

Vai trò của đồng dạng PKC thông thường đã được nghiên cứu từ lâu trong các mô hình học tập nghịch đảo 7-29. Gần đây, người ta tập trung vào sự tham gia tiềm tàng của một số dạng đồng dạng PKC không điển hình, đặc biệt là PKMC, trong sự tồn tại của các ký ức thù địch mới thu được và kích hoạt trở lại -33, xem xét rằng chất hóa học có ái lực với cả dạng PKC không điển hình và thông thường? .3435 , một thí nghiệm bổ sung đã được thực hiện trong đó ZIP PKMCin ức chế chọn lọc được truyền vào trong vỏ não PL 6 giờ sau khi kích hoạt lại bộ nhớ. Có sự giảm thời gian đóng băng do thuốc gây ra khi so sánh với các đối chứng trong cả hai Thử nghiệm A và Aa. Điều này cho thấy yêu cầu PKMC đối với sự bền bỉ của bộ nhớ được kích hoạt trở lại. Kết quả này đồng ý với những kết quả cho thấy rằng việc truyền ZIP vào các vùng não rời rạc khác ảnh hưởng đến sự tồn tại của nhiều loại ký ức mới có được-. Điều quan trọng là, vì tác dụng của chesionthrine và ZIP đối với sự bền bỉ của trí nhớ là tương tự nhau, nên tác dụng của chelerythrine có thể là trung gian, ít nhất là một phần, bằng cách ức chế hoạt động của PKMC, bất kể trường hợp nào, như được hiển thị với cheearchthrine. Hiệu ứng ZIP yêu cầu kích hoạt lại bộ nhớ. Kết quả này có liên quan đặc biệt vì sự ức chế PKMG trong trường hợp không kích hoạt lại bộ nhớ đã được báo cáo là làm giảm tính bền bỉ của nó -3439. Tính đặc hiệu của ZIP cũng đã bị thách thức, vì nó có thể làm giảm khả năng duy trì LTP ở chuột loại trực tiếp PKM "9 và ức chế hoạt động của đồng dạng PKC không điển hình được gọi là PKC / λ³, hiện chỉ được liên kết với các giai đoạn đầu của bộ nhớ hợp nhất và LTP5 sớm. Do đó, người ta có thể tranh luận rằng hiệu ứng ZIP chỉ liên quan một phần đến sự ức chế PKMC. Trên thực tế, như một cơ chế bù trừ, những con chuột bị loại cho PKM làm tăng biểu hiện của PKC, do đó làm trung gian cho quá trình duy trì bộ nhớ. Bên cạnh đó , trong nghiên cứu của chúng tôi, động vật không chuyển gen, nên ít có khả năng xảy ra các tác động do ZIP gây ra phụ thuộc vào các cơ chế khác với cơ chế do PKMC làm trung gian.

Một nghiên cứu báo cáo rằng các tác động do ZIP gây ra phụ thuộc vào thử nghiệm ban đầu xảy ra vào ngày sau khi nó được truyền vào hạch hạnh nhân hai bên khi sử dụng biện pháp giật mình gây sợ hãi2. Ở đây, việc truyền ZIP6h trong PILinfusion sau khi kích hoạt lại bộ nhớ đã làm giảm biểu hiện đóng băng khi các con vật được kiểm tra lại trong vòng I hoặc 10 ngày sau đó, cho thấy rằng thời gian trôi qua giữa việc dùng thuốc và thử nghiệm ban đầu không phải là yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hành động ZIP. Hơn nữa, có báo cáo rằng ZIP truyền vào vỏ não trong làm suy giảm trí nhớ ác cảm vị giác kéo dài 1 tháng sau khi truyền24. Chúng tôi đã điều tra PL. vỏ não ZIP ảnh hưởng đến sự bền bỉ của trí nhớ bằng cách sử dụng một giao thức điều hòa nỗi sợ hãi theo ngữ cảnh với một phiên làm quen, trong đó sự đóng góp của vỏ não trung gian trước trán vào trí nhớ dài hạn nhiều hơn so với các giao thức không tiếp xúc trước với bối cảnh được điều hòa4 Như được sử dụng trong các công trình đó3 Do đó, sự khác biệt về giao thức và vùng não nơi ZIP được truyền vào có thể giải thích cho những phát hiện hỗn hợp được quan sát thấy.

Hiện vẫn chưa rõ liệu cơ chế tái kết hợp và cơ chế tồn tại có chồng chéo lên nhau trong vỏ não hay không. Để bắt đầu giải quyết câu hỏi này, người ta đã đưa ra thuốc chesionthrine ngay sau khi bộ nhớ được kích hoạt trở lại. Có sự giảm thời gian đóng băng do thuốc gây ra so với đối chứng trong Thử nghiệm A, cho thấy rằng hoạt động PKC cũng ảnh hưởng đến việc củng cố lại trí nhớ sợ hãi theo ngữ cảnh. Kết quả này đồng ý với những người cho thấy tầm quan trọng của hoạt động PKC trong quá trình tái hợp nhất trí nhớ ở các vùng não khác43, và sự đóng góp của vỏ não PL trong việc củng cố lại những ký ức thù hận .., Điều đáng nói là nhóm hóa trị liệu cũng hết hạn mức độ đóng băng thấp hơn so với nhóm chứng tương ứng khi được thử nghiệm 7 và 21 ngày sau đó (Thử nghiệm A và A), kết quả phù hợp với các nghiên cứu cho thấy rằng các biện pháp can thiệp nhắm mục tiêu đến sự hợp nhất lại không liên quan đến các tính năng liên quan đến sự tuyệt chủng, chẳng hạn như phục hồi và phục hồi tự phát ký ức sợ hãi ban đầu4. Hơn nữa, nó đã được chỉ ra rằng tác dụng của checutthrine đối với sự tái hợp nhất đòi hỏi phải kích hoạt lại trí nhớ trước đó.

Các tác động tiềm tàng đối với việc củng cố lại trí nhớ cũng đã được nghiên cứu. Không có thay đổi do thuốc gây ra trong thời gian đóng băng so với đối chứng trong các Thử nghiệm A..A và Aa khi nó được đưa ra ngay sau khi kích hoạt lại trí nhớ, cho thấy rằng việc ức chế PKMC tại thời điểm này trong vỏ não PL không ảnh hưởng đến

sự hợp nhất lại cũng như sự tồn tại của một bộ nhớ được kích hoạt lại. Người ta đã đề xuất rằng cơ chế truy xuất và kích hoạt lại bộ nhớ có thể bị ZIP ức chế một phần. Ví dụ: hoạt động buôn bán tiểu đơn vị GluR2A của thụ thể AMPA vào các khớp thần kinh được tạo ra bằng cách truy xuất bộ nhớ và cần thiết để hợp nhất lại bộ nhớ --17. Vì hành động của ZIP có liên quan đến việc ức chế buôn bán GluR2A, loại thuốc này có thể đã làm giảm khả năng kích hoạt lại trí nhớ và do đó, quá trình tái hợp nhất không được tạo ra đủ, do đó ngăn cản hoạt động của ZIP xảy ra, nó đã được chứng minh rằng ức chế PKMC thành CAI làm suy giảm sự hợp nhất của bộ nhớ không gian, Bên cạnh đó. sự tăng cường hoạt động PKMC do hợp nhất gây ra trong hạch hạnh nhân có liên quan đến việc duy trì trí nhớ khứu giác sợ hãi ở chuột vị thành niên. Thật hợp lý khi sự khác biệt trong các mô hình được sử dụng (tạp dề-công cụ của trí nhớ không gian và trí nhớ sợ hãi) có thể giải thích cho những phát hiện hỗn hợp được báo cáo, Thật vậy. người ta cho rằng PKM (duy trì trí nhớ sợ hãi ở hạch hạnh nhân ba bên] và PL, vỏ não, nhưng không có trong hải mã lưng3, mặc dù vấn đề này vẫn còn đang được tranh luận. Hơn nữa, tuổi của động vật cũng có thể ảnh hưởng đến kết quả kể từ khi chuột trưởng thành Hiện nay khả năng duy trì trí nhớ ít hơn so với những con trưởng thành. Ở đây, để giải quyết thêm vai trò PKMC trong việc tái hợp nhất trí nhớ, một nhóm chuột khác được truyền ZIP vào vỏ não PL 1 giờ sau khi bộ nhớ đạt đến mức tối ưu. Như được mô tả trong Hình 5D. một ngày sau, không Sự khác biệt trong hành vi đóng băng đã được quan sát thấy ở động vật được điều trị tất cả so với đối chứng, cho thấy rằng tại thời điểm này không có tác động của ức chế PKM đối với việc tái hợp nhất trí nhớ. Tuy nhiên, có sự giảm mức độ đóng băng khi so sánh với đối chứng trong các thử nghiệm A và Ay , cho thấy rằng PKM vỏ não PL (hoạt động trung gian các khía cạnh liên quan cụ thể đến sự bền bỉ của trí nhớ sớm nhất là 1 giờ sau khi kích hoạt lại trí nhớ, Kết quả này phù hợp với kết quả từ nghiên cứu của Krawczyket al. liên quan đến cả việc củng cố lại bộ nhớ và sự bền bỉi725.

Cùng với đó, các tác động gây ra bởi hóa chất tẩy độc đối với việc tái hợp nhất bộ nhớ và việc thiếu hiệu ứng ZIP trong giai đoạn bộ nhớ này cho thấy sự đóng góp khác biệt của PKC thông thường trong việc tái hợp nhất bộ nhớ và PKC không điển hình, chẳng hạn như PKMC, đối với sự bền bỉ của bộ nhớ sau khi kích hoạt lại, các nghiên cứu trong tương lai có thể giải quyết PKC nào isoforms tham gia vào mỗi quá trình ghi nhớ trong vỏ não PL. Nhìn chung, những phát hiện hiện tại chỉ ra rằng PL. vỏ não PKC và PKMC tham gia vào quá trình tái hợp nhất và tồn tại của ký ức sợ hãi theo ngữ cảnh được kích hoạt trở lại. Hơn nữa, những phát hiện hiện tại đã chứng minh rằng sau khi kết thúc khoảng thời gian tái hợp nhất, có một cơ hội mở rộng để giảm bớt ký ức sợ hãi.