Tầm quan trọng của các giới hạn nội dung khác nhau đối với các thành phần đánh dấu của Cistanche sa mạc và C. tubulofloris trong dược phẩm Trung Quốc dựa trên các thành phần khác biệt ⅱ

Tóm tắt

Khách quan:Để nghiên cứu các thành phần khác biệt và so sánh nội dung của chúng giữa cistanche tubulosa và C. sa mạc và phân tích tầm quan trọng của các giới hạn nội dung khác nhau đối với các thành phần đánh dấu giữa hai cây trong Pharmacopoeia Trung Quốc (phiên bản 2020). Phương pháp: Các thành phần khác biệt được xác định bằng phương pháp quang phổ sắc ký lỏng kết hợp với phân tích thống kê đa biến và nội dung của các thành phần khác biệt được xác định bằng sắc ký lỏng hiệu suất cao. Kết quả: Các hợp chất khác biệt là cistanoside A, isoacteoside, echinacoside và acteoside. Echinacoside có hàm lượng cao nhất ở cả hai loại cây, tiếp theo là acteoside. Hàm lượng của echinacoside, acteoside và isoacteoside ở C. tubulosa cao hơn ở C. sa mạc (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Từ khóa: Cistanche sa mạc;Cistanche tubulosa; Cistanoside a; isoacteoside;Echinacoside; acteoside

 

 

 

 

Cistanche sa mạclà thân thịt khô với lá có vảy của cistanche sa mạc yc ma hoặc cistanche tubulosa (Schenk) Wight, một loại cây của gia đình Orobanchaceae [1]. Đó là một loại thuốc bổ và thực phẩm thuốc, được gọi là "nhân sâm sa mạc". Nó chủ yếu được phân phối ở Nội Mông, Ningxia, Gansu, Tân Cương và các khu vực khác [2]. Cistanche sa mạc là ấm áp trong tự nhiên, ngọt ngào và mặn trong hương vị, và đi vào thận và các kinh tuyến ruột lớn. Nó có tác dụng nuôi dưỡng gan và thận, mang lại lợi ích cho bản chất và máu, và làm ẩm ruột và tạo điều kiện cho đường đi tiêu. Nó có thể được sử dụng để điều trị thiếu hụt Yang thận, bất lực và vô sinh, đau nhức của eo và đầu gối, yếu của gân và xương, và táo bón do ruột khô [1]. Nghiên cứu hiện đại cho thấy các thân thịt với lá quy mô của sa mạc cistanche chủ yếu chứa nhiều thành phần hóa học như phenylethanoid glycoside, ether ether terpenes và glycoside, lignans và đường của chúng [3]. Trong số đó, glycoside phenylethanoid là các thành phần hoạt động quan trọng nhất, có tác dụng dược lý như chống lão hóa [4], chống oxy hóa, chống fatigue và thuốc nhuận tràng [5].
Có khoảng 20 loài cistanche trên thế giới và có 5 loài ở nước tôi: Cistanche sa mạc, Cistanche tubulosa, C. salsa (Comey.) G.Beck, C. sinensis G. Beck và C. salsa var. Albiflora pf tu et zclou. Phiên bản năm 2020 của Dược điển Cộng hòa Nhân dân Trung Quốc (sau đây gọi là "Pharmacopoeia Trung Quốc") quy định rằng hai loài đầu tiên là loài nguyên bản của sa mạc Cistanche [6].

Cistanche sa mạc

Trước phiên bản 2005 của dược điển Trung Quốc, nguồn gốc có nguồn gốc từ sa mạc cistanche duy nhất là Cistanche sa mạc. Do nhu cầu cao trên thị trường trong nước và quốc tế và sự thiếu hụt tài nguyên, Cistanche tubulosa đã được thêm vào làm nguồn gốc pháp lý. Tuy nhiên, giá của hai nguồn gốc của sa mạc cistanche trên thị trường rất khác nhau, với giá của cistanche tubulosa chỉ là 1/4 đến 1/6 so với cistanche sa mạc [7]. Sự khác biệt trong thành phần và tác dụng dược lý của hai nguồn gốc này có giá trị nghiên cứu và sử dụng chuyên sâu lâu dài. Về sự khác biệt trong các loại thành phần, Huang Xiongmei và cộng sự [8] nhận thấy rằng cistancheside A là thành phần khác biệt chính thông qua nghiên cứu phổ đặc trưng của hai nguồn gốc. Về sự khác biệt về nội dung thành phần, Gao Yan et al. . Zhu Nailiang et al. .
Nhóm nghiên cứu của chúng tôi đã sử dụng phép đo sắc ký lỏng khối lượng phổ kết hợp với phân tích thống kê đa biến để so sánh sự khác biệt trong các loại thành phần hóa học giữa sa mạc cistanche và cistanche tubulosa, xác định các dấu hiệu khác biệt và xác định nội dung của chúng, để cung cấp một tham chiếu để xác định nguồn gốc của các cơ sở. Ngoài ra, bằng cách so sánh sự khác biệt về nội dung của các thành phần chỉ số dược điển (echinacoside và verbascoside) của hai cistanches ban đầu, sự cần thiết của việc thiết lập các giới hạn kết hợp của hai thành phần của cistanchanch và cistanches Tubulosa được giải thích.

 

1 vật liệu

1.1 Dụng cụ

Ultimate 3 000 hiệu suất cực cao hiệu suất cao quang điện động vật điện tử song song ion Bẫy máy quang phổ khối lượng độ phân giải cao (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Khoa học, Hoa Kỳ); 2695 Sắc ký chất lỏng hiệu suất cao, 2489 Máy dò tia cực tím (Waters, Hoa Kỳ); BT125D 1/100.000 Cân bằng điện tử (Hệ thống thiết bị Sartorius, Đức); KQ -500 DE CNC Soltrasonic Cleaner (Công ty TNHH Nhạc cụ siêu âm Kunshan); PL2002 Cân bằng điện tử [Công ty TNHH Mettler-Toledo (Thượng Hải), Ltd.].

 

Cistanche tubulosa

1.2 Thuốc thử nghiệm

Các chất tham chiếu Echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverbosaside (độ tinh khiết lớn hơn 98%, số lô PS000867, PS010950, PS000683 và PS001059, tương ứng) Methanol lớp phổ khối (Fisher); Axit formic lớp phổ khối (độ tinh khiết: 99%, Sigma Aldrich); Nước là nước cất Watsons.

 

1.3 mẫu

10 lô lát cắt sa mạc cistanche và 10 lô lát cắt cistanche tubulosa được xác định bởi Giáo sư Li Xiangri của Đại học Y học Trung Quốc là thân cây khô với lá của Sesertanchea YCMA. Thông tin chi tiết được hiển thị trong Bảng 1.

 

2 Phương pháp

2.1 Nghiên cứu về các thành phần khác nhau của sa mạc Cistanche từ các nguồn gốc khác nhau

2.1.1 Chuẩn bị giải pháp kiểm tra

Lấy khoảng 0. 2 g bột mẫu khô (đi qua rây số 4), cân chính xác và đặt trong bình thể tích màu nâu 50 ml, thêm 25 ml methanol 50%, cân, giảm dần để có được.

 

2.1.2 Điều kiện sắc ký

Waters Acquility UPLCTM Beh C18 Cột sắc ký (1 0 0 mm × 2,1 mm, 1.7. .

 

2.1.3 Điều kiện phổ khối

Nguồn ion Electrospray (ESI) đã được sử dụng, quét chế độ ion âm, nhiệt độ mao quản là 350 độ, tốc độ dòng chảy khí đốt là 30 arb, tốc độ dòng khí phụ là 10 ARB, điện áp phun là 3 kV, điện áp mao quản là 55 v, phạm vi quét là M/Z100 ~ 1

Cistanche tubulosa

2.1.4 Phân tích thành phần chính (PCA)

Sau khi có được ma trận hai chiều của các cặp dữ liệu thời gian lưu chính xác chính xác, bảng điều khiển sẽ hiển thị tất cả thông tin thời gian lưu giữ chính xác được nhập tự động và phương pháp PCA của mô-đun thống kê mở rộng sẽ được sử dụng để phân tích.

 

2.1.5 Phân tích bình phương nhỏ nhất trực giao (OPLS-DA)

Bằng cách thực hiện phân tích dữ liệu hai chiều với OPLS-DA, đã thu được một số lượng lớn phổ trực giao, có thể cho thấy rõ sự khác biệt giữa hai nhóm mẫu. Ở định dạng âm mưu S, các cặp dữ liệu thời gian lưu khối lớn ở cả hai đầu của đường cong hình chữ S đại diện cho các ion đặc trưng đáng tin cậy nhất từ ​​mỗi nhóm mẫu.

 

2.2 Xác định các thành phần khác biệt

 

2.2.1 Chuẩn bị giải pháp tham chiếu hỗn hợp

 

Lấy một lượng thích hợp của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverascoside thành một bình thể tích màu nâu 1 0 ml, hòa tan và pha loãng đến dấu 0. 307, 0.384 và 0,312 mg · ml, 1, tương ứng.

 

2.2.2 Chuẩn bị giải pháp kiểm tra

 

Phương pháp này giống như trong 2.1.1.

 

2.2.3 Điều kiện sắc ký

Cột Agilent Eclipse XDB-C18 (25 0 mm × 4,6 mm, 5 m) đã được sử dụng, với metanol (a) {{6}. 15%~ 21%A;

 

2.2.4 Điều tra phương pháp

2.2.4.1 Điều tra mối quan hệ tuyến tính

Pipet chính xác {{0}}. 1, 0. 5, 1. 0, 2. Tiêm mẫu để xác định, sử dụng diện tích cực đại sắc ký làm thứ tự (y) và nồng độ là abscissa (x), vẽ một biểu đồ phân tán và thực hiện phân tích hồi quy để thu được các phương trình hồi quy tuyến tính của các chất tham chiếu khác nhau.

 

2.2.4.2 Thí nghiệm chính xác

Lấy dung dịch tham chiếu hỗn hợp của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverbaccoside, tiêm liên tục 6 lần, ghi lại diện tích cực đại của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverbaccoside và tính toán giá trị RSD của từng thành phần.

 

2.2.4.3 Thí nghiệm ổn định

Lấy cùng một cistanche sa mạc (số lô: 16 0 901) Giải pháp thử nghiệm, tiêm nó ở 0, 2, 4, 8, 12, 24 h, xác định hàm lượng của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và asoverbaccoside trong dung dịch thử nghiệm.

 

2.2.4.4 Thí nghiệm lặp lại

Lấy cùng một mẫu (số lô: 160901) Bột, chuẩn bị 6 dung dịch thử theo phương pháp theo 2.1.1, tiêm và đo, tính toán hàm lượng của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverbascoside trong mỗi dung dịch thử và tính giá trị RSD của mỗi thành phần.

 

2.2.4.5 Thí nghiệm phục hồi mẫu

Cân bằng chính xác 6 mẫu sa mạc cistanche (số lô: 160901) với nội dung đã biết, thêm giải pháp tham chiếu tương đương với nội dung đã biết của echinacoside, cistancheside A, verbascoside và isoverbascoside, chuẩn bị các giải pháp thử nghiệm theo phương pháp