Nghiên cứu về các hoạt động chống oxy hóa của glycoside Phenylethanoid từ Cistanche Deserticola

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li và cộng sự (Phòng thí nghiệm trung tâm của Đại học Sư phạm Trường Xuân, Trường Xuân, Cát Lâm 130032)

Trừu tượng[ Mục tiêu ] Nghiên cứu nhằm nghiên cứu một cách có hệ thống các hoạt động chống oxy hóa của glycoside phenylethanoid từCistanche ·sa mạc. [Phương pháp ] Hai hệ thống mô hình, xét nghiệm gốc tự do 2,2-diphenyl-l -picrylhydrazyl ( DPPH ') và xét nghiệm phát quang hóa học (PCL) ảnh, đã được sử dụng để đo hoạt động chống oxy hóa của chiết xuất C. deserticola, acteoside, isoacteoside và echinacoside. [ Kết quả ] Kết quả cho thấy tổng hàm lượng phenolic (TPC) trong echinacoside, acteoside, isoacteoside và 80% chiết xuất ethanol của C. deserticola là 753,95, 659,94, 356,14 và 14,73 mg axit gallic / g mẫu. Chiết xuất C. deserticola cho thấy hoạt động chống oxy hóa记ant mạnh mẽ trong thí nghiệm PCL, tiếp theo là echinacoside, acteoside và isoacteoside. Tuy nhiên, echinacoside thể hiện hoạt động chống oxy hóa mạnh mẽ trong thí nghiệm DPPH, tiếp theo là acteoside, isoacteoside và chiết xuất C. deserticola.

[ Kết luận ]Nghiên cứu này có thể cung cấp tài liệu tham khảo cho nghiên cứu dược lý và hoạt động sinh học của glycoside phenylethanoid từ C. deserticola.

Từ khóa Cistanche deserticola ; Acteoside ; Isoacteoside ; Echinacoside ; Hoạt động chống oxy hóa ; ĐHQGHN ; PCL

Cistanche ·(Cistanche sa mạcY.C. Ma.) là một nhà máy củaCistanche ·chi (Oro-banehaeeeae) củaCistanche ·chi (Cistanche ·). Thân thịt khô của Cistanche có lá có vảy. Một số lượng lớn các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng các thành phần hoạt chất chính của cây Cistanche là các hợp chất glycoside rượu phenethyl. . Hợp chất phenylethanol glycoside thuộc về một loại hợp chất polyphenol, được phân phối rộng rãi trong nhiều loại thực vật. Các nghiên cứu thử nghiệm dược lý đã chỉ ra rằng các hợp chất này có một loạt các hoạt động dược lý và sinh học, chẳng hạn như chống độc tố gan, chống viêm, giảm đau và các hoạt động chống oxy hóa. Trong số đó, điều nổi bật nhất là hợp chất glycoside phenoxyethanol có hoạt tính chống oxy hóa rất tốt. Tác giả chủ yếu tiến hành phân tích có hệ thống về hoạt động chống oxy hóa của các hợp chất glycoside rượu phenethyl trongCistanche ·, sử dụng hai phương pháp đánh giá trong ống nghiệm chống oxy hóa, đó là Photoehemilumilumineseence (PCL) và 2,2-diphenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH') Hai hệ thống khác nhau đã được sử dụng để đo hoạt động chống oxy hóa của chiết xuất ethanol 80% củaCistanche ·,ergosteroside,isoergosidevàechinacoside.

1 Vật liệu và phương pháp

1.1 Mẫu và thuốc thử

Cistanche (Cistanche deserticola)nguyên liệu thuốc được mua từ Nhà thuốc Bắc Kinh Tongrentang.Ergosteroside ·, isoergoside,echinacoside, Folin. Thuốc thử Ciocalteu, axit gallic, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH.), v.v. đã được mua từ SigmaChemicalCo. Công ty (St. Louis, Mo). Dung môi được sử dụng để phân tích PCL được cung cấp bởi Analytik Jena AG (Berlin, Đức). Các thuốc thử khác đều là thuốc thử phân tích (do Nhà máy hóa chất Bắc Kinh sản xuất). Nước là nước siêu tinh khiết (18,2 nPa).

1.2 Chiết xuất mẫu

Cân chính xác 2.0005gCistanche ·bột mẫu, sử dụng 50rnl ethanol 80% để khai thác siêu âm ở nhiệt độ phòng trong 0,5h, chiết xuất hai lần, lọc dung dịch mẫu, bay hơi quay để khô (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche sa mạc.

1.3 Xác định tổng hàm lượng polyphenol của mẫu

Tổng hàm lượng phenol của mẫu được xác định bằng phương pháp F0-lin-Ciocaheu và kết quả được biểu thị bằng miligam axit gallic trên mỗi gram chiết xuất. Lấy dung dịch mẫu có nồng độ nhất định là 0,2rnI (để làm cho độ hấp thụ rơi vào đường cong tiêu chuẩn), thêm 1ml thuốc thử Folin-Ciocaheu với nồng độ 0,5mol / L, sau đó thêm 0,8ml dung dịch natri cacbonat với nồng độ 7,5% để trộn đều, Đặt ở nhiệt độ phòng trong 0,5h, sau đó đo độ hấp thụ ở 765nm (máy đo quang phổ nhìn thấy tia cực tím: DU800, Beckman Couher, Inc. Hoa Kỳ). Sử dụng dung dịch axit gallic (phạm vi nồng độ khối lượng là 0,02 ~ 0,20me, / m1) để tạo đường cong tiêu chuẩn và tất cả các thử nghiệm được lặp lại hai lần.

1.4 Phân tích hoạt động chống oxy hóa trong ống nghiệm

1.4.1 Xác định phương pháp PCL.

Thử nghiệm được sử dụng Photochem@ (Berlin, Ger-many) chất chống oxy hóa cực nhanh và máy phân tích tự động gốc tự do. Nguyên tắc là tạo ra các gốc tự do bằng phương pháp quang hóa và sử dụng phương pháp phát quang hóa học để phát hiện các gốc tự do. Trong thí nghiệm, một chất cảm quang có hiệu ứng kích thích quang hóa đã được sử dụng để kích thích các phân tử phản ứng, do đó dưới tác động của đèn cực tím, phản ứng oxy hóa xảy ra nhanh hơn 1000 lần so với điều kiện bình thường và các gốc tự do nhanh chóng được tạo ra". Chọn phương pháp PCL-ACW-Kit Đo hoạt động chống oxy hóa của các thành phần hòa tan trong nước của các mẫu phụ psyllium. Pipet đệm phản ứng 1,0ml (bao gồm nồng độ 0,1moL/L SodiumCarbonate, giá trị pH là 10,5 và nồng độ 0,1mmol/LNA, một EDTA, 1,5ml ACW- pha loãng (nước), nồng độ 1mmol/LLumino1) hoạt động như một chất cảm quang để kích thích các phân tử phản ứng, để các gốc tự do nhanh chóng được tạo ra, đồng thời như một chất quang hóa phát quang. Cả mẫu và tiêu chuẩn đều là 10 "l. Bằng cách đo các nồng độ khác nhau (0,5, 1,0, 2,0 và 3,0 nmol / L) của L. Phương trình đường cong tiêu chuẩn cho axit ascobic là Y = 24,640Ox + 2,9311, R² = 0,9969. Cần pha loãng mẫu hoặc dung dịch tiêu chuẩn trong thử nghiệm để khoảng thời gian trễ nằm trong phạm vi tuyến tính của đường cong tiêu chuẩn. Photochem tạo ra đường cong tiêu chuẩn và kiểm tra hoạt động chống oxy hóa của mẫu tự động, và hoạt động chống oxy hóa của mẫu tương đương với L. Được tính bằng số lượng nanomol của axit ascobic.

1.4.2 Xác định phương pháp DPPH.

Gốc diphenylpicrylhydrazino [DPPH ·] là một gốc tập trung vào nitơ ổn định với sự hấp thụ tối đa ở bước sóng 515nm. [DPPH ·] dung dịch methanol có màu tím và nồng độ của nó có mối quan hệ tuyến tính với sự hấp thụ. Sau khi thêm chất chống oxy hóa vào dung dịch methanol [DPPH ·], chất chống oxy hóa có thể kết hợp với các gốc tự do [DPPH ·] hoặc thay thế chúng để tạo ra [DPPH ·] ] Số lượng gốc tự do giảm và màu sắc của dung dịch trở nên nhạt hơn, được biểu hiện bằng việc giảm liên tục độ hấp thụ ở bước sóng 515nm cho đến khi đạt được độ ổn định". Trong thử nghiệm, ethanol đã được sử dụng thay vì methanol. Cân chính xác [DPPH ·] và định cấu hình nồng độ thành 0. [DPPH ·] dung dịch ethanol 0,040 76mg / ml, đường cong tiêu chuẩn của [DPPH ·] thu được: Y: 18,032x-0,0016, R = 0,9993. Phương pháp đo tỷ lệ còn lại của các gốc tự do đề cập đến tài liệu [16]. Sử dụng ethanol làm dung môi, chuẩn bị các nồng độ mẫu và dung dịch tiêu chuẩn khác nhau, lấy mẫu 0,1ml hoặc dung dịch tiêu chuẩn tương ứng và thêm dung dịch tiêu chuẩn [DPPH ·] 3,9ml với nồng độ khối lượng 2,5mg / L (hiện đang được sử dụng hiện nay), thay thế dung dịch mẫu bằng ethanol làm trống. Lắc dung dịch hỗn hợp, sử dụng cuvet để đo độ hấp thụ của nó tại các thời điểm khác nhau ở bước sóng 515nm và chuyển đổi nó thành nồng độ khối lượng của [DPPH ·] theo đường cong tiêu chuẩn để tính tốc độ dư của [DPPH ·]. Theo tỷ lệ còn lại của [DPPH ·] và lượng mẫu tương ứng được thêm vào, một đường cong để loại bỏ các gốc tự do [DPPH -] khỏi mẫu có thể được rút ra. Theo đường cong mối quan hệ giữa nồng độ khối lượng của [DPPH ·] và độ hấp thụ, độ hấp thụ được đo sau khi bổ sung chất nhặt rác gốc tự do có thể được chuyển đổi thành nồng độ khối lượng của [DPPH ·] để tính toán [DPPH ·] sau khi bổ sung chất nhặt rác gốc tự do. Công thức tính toán cho tỷ lệ còn lại như sau: [DPPH ·] REM =[DPPH·] /[DPPH·] r = 0×100% trong đó [DPPH ·] là nồng độ khối lượng của DPPH · tại một thời điểm nhất định trong quá trình nhặt rác gốc tự do, [DPPH ·]:. Là nồng độ khối lượng ban đầu của DPPH ·. Theo số lượng chất chống oxy hóa được thêm vào và tỷ lệ còn lại của [DPPH ·], đường cong mối quan hệ giữa cả hai được thực hiện và phương trình hồi quy có thể thu được thông qua phân tích hồi quy tuyến tính. Theo phương trình hồi quy, có thể tính toán được liều chống oxy hóa khi tỷ lệ dư của [DPPH ·] là 50%. Một nửa ức chế. Theo đường cong nhặt rác gốc tự do [DPPH·] của các nồng độ mẫu hoặc tiêu chuẩn khác nhau, hãy tính toán lượng EC của mẫu khi nồng độ khối lượng ban đầu của [DPPH ·] giảm xuống 50% (trạng thái ổn định). EC càng nhỏ, khả năng nhặt rác gốc tự do càng mạnh". Kiểm tra 3 lần song song.

cistanche

2 Kết quả và phân tích

2.1 Xác định tổng hàm lượng polyphenol của mẫu Trong việc xác định tổng hàm lượng polyphenol, tổng hàm lượng polyphenol củaechinacosidelà cao nhất, đó là 753,95 mg axit gallic/g. Tiếp theo là glycoside ergosteroid, glycoside isoergosteroid và chiết xuất thô củaCistanche ·, lần lượt là 468,3, 356,14 và 14,73 mg axit gallic/g.

2.2 Xác định hoạt động chống oxy hóa của mẫu

2.2.1 Kết quả xác định phương pháp PCL- ACW. Trong thử nghiệm chống oxy hóa PCL-ACW, khả năng chống oxy hóa 1txgCistanche ·nguyên liệu làm thuốc tương đương với khả năng chống oxy hóa của 15,68nmol L-ascorbic acid; 1 gechinacosidetương đương với khả năng chống oxy hóa của axit ascorbic 14,03nmol Hoạt động: 1txgergosterosidetương đương với 11,44nmolL một khả năng chống oxy hóa của axit ascobic; 1Ixg isomergosteroside tương đương với hoạt tính chống oxy hóa của axit ascobic 8,24nmol.

2.2.2 Kết quả đo phương pháp DPPH. Có thể thấy từ Bảng 1 rằng nó đã bị xóa. Thứ tự về khả năng của các gốc tự do làergosteroside,echinacoside, isoergoside và chiết xuất thô củaCistanche ·, trong đó có ergo bên vàechinacosidevề cơ bản có cùng khả năng chống oxy hóa trong thử nghiệm DPPH. Nó có thể được nhìn thấy từ điều này. Bởi vì các hệ thống kiểm tra chất chống oxy hóa trong ống nghiệm khác nhau được sử dụng để đo mẫu, cơ chế tác dụng chống oxy hóa là khác nhau và kết quả có thể không nhất quán. Điều này cũng đã được xác minh trong bài kiểm tra. Do đó, cần phải chọn các hệ thống phân tích chất chống oxy hóa khác để xác minh thêm.

echinacosie

Tham khảo

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Tiến độ nghiên cứu súp thịt[J]· Nguyên liệu làm thuốc Trung Quốc, 2001, 24 (12): 907-909.

[2] Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Tiến bộ nghiên cứu về các thành phần hóa học của thực vật Cistanche [J]. Thuốc thảo dược Trung Quốc,2003,34(5):473 -476.

[3] HIROMI KOBAYASHI, HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Các nghiên cứu về các thành phần Cistanchis Herba. CHÀO BẠN. Phân lập và cấu trúc của glycoside phenylpropanoid mới, Cistanoside A và B [J]. Chem. Pharm Bull, 19 ^,32(10):3009 -3014.

[4] LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Phân lập và tinh chế glycoside phenylethanoid từCistanche sa mạcbằng sắc ký ngược dòng tốc độ cao[ J ]. Hóa học thực phẩm,2008,1(^:702-710.

[5] LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Cô lập và tinh chế actec^ide và isoacteoside từ Plantago psyllium L. bằng sắc ký ngược dòng tốc độ hi南 [J]. Tạp chí Sắc ký A,2005,1063: 161-169.

[6] RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Các hợp chất phenolic từ Plantago Asiatica[J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7] TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Glycoside phenolic từ rễ bệnh của Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Cistanche cistanche tổng số glycoside trong Vitro nhặt rác các gốc tự do và tác dụng bảo vệ đối với tổn thương DNA do OH [J] gây ra. Tạp chí Dược phẩm Trung Quốc, 2001, 36 (1): 29-31.

[9] XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Hoạt động bảo vệ gan của phenylethanoids từCistanche sa mạc[J]. Planta Med, 1998,64:120.

[10] SCHAPOVAL E E S, WINTER DE VARGAS M R, CHAVES C G, et al. Các hoạt động chống viêm và chống thụ tinh của chiết xuất và các hợp chất bị cô lập từ Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG R L, et al. Bảo vệ glycoside phenylpropanoid từ Pedicularies chống lại sự tan máu oxy hóa trong ống nghiệm [J]. Planta Med, 1993,59:315—317.

[12] HE Z D, LAU KM, Xu H X, et al. Hoạt tính chống oxy hóa của glycoside phenylethanoid từ ung thư Brandisia [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71: 483-486.

[13] XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Tác dụng chống oxy hóa của phenylethanoid từCistanche sa mạc[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14] TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Những hợp chất polyphenolic nào góp phần vào tổng số hoạt động chống oxy hóa của táo? [J] J Agric Food Chem, 2005,53: 4989-4995.

[15] POPOV I N, LEWIN G. Phát hiện phát hiện hiotochemiluminescent về hoạt tính chống bệnh: U. thử nghiệm các chất chống oxy hóa hòa tan trong nước không có kích thích [J]. Rad Biol Med miễn phí, 1994, 17: 267-271.

[16] BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER M E, BERGET C. Sử dụng phương pháp gốc tự do để đánh giá hoạt động chống oxy hóa [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28: 25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. Phương pháp DPPH để xác định khả năng của proanthocyanidin hạt nho trong việc nhặt rác các gốc tự do [J]. Tạp chí Thực phẩm và Công nghệ sinh học, 2006, 25 (2) "02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Đánh giá hoạt động chống oxy hóa bằng cách sử dụng các phương pháp in vitro khác nhau [J]. Nghiên cứu cấp tiến tự do, 2002,36 (2): 177-187.