trừu tượng

Bối cảnh: Thận là một cơ quan rất phức tạp với nhiều chức năng cần thiết cho sức khỏe. Bệnh thận xảy ra khi thận bị tổn thương và không hoạt động bình thường. Phân tích đơn bào là một kỹ thuật mạnh mẽ cung cấp cái nhìn sâu sắc chưa từng có về các loại tế bào thận bình thường và bất thường và sẽ thay đổi hiểu biết của chúng ta về cơ chế của các bệnh thận phổ biến.

Tóm tắt: Sự hiểu biết của chúng ta về cơ chế bệnh sinh của bệnh thận bị hạn chế bởi đặc tính phân tử không đầy đủ của các loại tế bào chịu trách nhiệm về chức năng thận. Việc áp dụng công nghệ đơn bào trong nghiên cứu thận đã cho thấy tính không đồng nhất của tế bào, hồ sơ biểu hiện gen và động lực học phân tử trong sự phát triển và tiến triển của bệnh thận. Phân tích đơn bào của mô cơ quan thận và mô ghép đồng loại đã cung cấp những hiểu biết mới về quá trình hình thành cơ quan thận, cơ chế bệnh và kết quả điều trị. Nhìn chung, hiểu rõ hơn về tính không đồng nhất của tế bào thận và động lực học phân tử của bệnh thận sẽ cải thiện độ chính xác của chẩn đoán và giúp xác định các chiến lược điều trị mới trong thận học.

Thông điệp chính: Trong bài đánh giá này, chúng tôi tóm tắt nghiên cứu đơn bào gần đây về bệnh thận và thảo luận về tác động của công nghệ đơn bào đối với nghiên cứu thận cơ bản và lâm sàng.

từ khóa

Công nghệ đơn bào; Bệnh thận; Tế bào miễn dịch; Thận hữu cơ; ghép đồng loại;lợi ích cistanche.

Giới thiệu

Thận là hai cơ quan có hình hạt đậu chịu trách nhiệm lọc chất thải, nước dư thừa và các tạp chất khác trong máu và tạo ra nước tiểu. Thận cũng điều chỉnh nồng độ pH, muối, kali và huyết áp; kiểm soát quá trình sản xuất hồng cầu; và kích hoạt một dạng vitamin D giúp cơ thể hấp thụ canxi. cho đến nay, ước tính có khoảng 850 triệu người trên toàn thế giới mắc bệnh thận, bao gồm bệnh thận mãn tính (CKD), tổn thương thận cấp tính, suy thận và nhiều bệnh lý khác. Bệnh thận xảy ra khi thận bị tổn thương và không thể thực hiện các chức năng của mình. Thiệt hại có thể do bệnh tiểu đường, huyết áp cao và nhiều tình trạng mãn tính (dài hạn) khác gây ra. Bệnh thận có thể dẫn đến các vấn đề sức khỏe khác, bao gồm loãng xương, tổn thương thần kinh, suy dinh dưỡng và bệnh tim. Các chiến lược điều trị hiện tại cho bệnh nhân vẫn là ghép thận hoặc lọc máu, vốn rất tốn kém.

Nhiều loại tế bào trong thận, bao gồm tế bào biểu mô, thylakoid, nội mô và tế bào thần kinh, cũng như mạng lưới tế bào miễn dịch, tương tác để duy trì chức năng thận bình thường. Hiểu sâu hơn về tính không đồng nhất của thận khỏe mạnh và các quá trình tiềm ẩn của bệnh thận sẽ tinh chỉnh định nghĩa kiểu hình phân tử và mô bệnh học của thận và hỗ trợ phát triển các phân loại bệnh mới. Công nghệ đơn bào có tiềm năng thuận lợi trong việc xác định các phân nhóm, trạng thái và tần số thay đổi của tế bào trong quá trình khởi phát và tiến triển của bệnh thận. Trong những năm gần đây, với sự phát triển nhanh chóng của công nghệ giải trình tự RNA đơn bào (scRNA-seq) thông lượng cao, một bản đồ tế bào toàn diện của thận bình thường đã được xây dựng để nghiên cứu y học chính xác về thận. Dự án Y học Chính xác về Thận (KPMP) đã được phát triển trên toàn cầu để thu thập các sinh thiết thận của con người, tạo ra các mô thận, xác định các quần thể bệnh và cuối cùng xác định các tế bào, con đường và mục tiêu chính cho các liệu pháp mới. Dựa trên bộ dữ liệu phiên mã đơn bào liên quan đến thận, các nhà nghiên cứu cũng đã phân tích hồ sơ biểu hiện gen của ACE2, TMPRSS2 và SLC6A19 trong các phân nhóm tế bào thận, điều này rất quan trọng để hiểu cơ chế bệnh sinh của hội chứng hô hấp cấp tính nặng do vi-rút corona 2. Trong bài đánh giá này, chúng tôi sẽ tập trung vào (1) phát triển và ứng dụng công nghệ đơn bào, (2) sử dụng scRNA-seq để nghiên cứu sự phát triển và tiến triển của bệnh thận, (3) lập bản đồ phân tử của các tế bào miễn dịch trong bệnh thận, ( 4) ứng dụng của scRNA-seq cho các cơ quan giống thận, và (5) việc sử dụng scRNA-seq để nghiên cứu chuyên sâu về ghép thận đồng loại (Hình 1).

Nhấn vào đây để có đượctác dụng của Cistanche đối với thận

Phát triển và ứng dụng công nghệ phiên mã đơn bào

Một tế bào đơn lẻ là đơn vị cơ bản của sự sống. Các kỹ thuật phân tích đơn bào đã cách mạng hóa khả năng của chúng ta trong việc xác định thành phần tế bào, theo dõi động lực học phân tử và tiết lộ các cơ chế bệnh lý. Phân tích biểu hiện gen đơn bào toàn cầu ban đầu được thực hiện bằng kỹ thuật microarray và qPCR. Tietjen et al. đã sử dụng các vi mô đơn bào để theo dõi cấu hình biểu hiện phân tử của các tế bào thần kinh và tế bào tiền thân riêng lẻ và để xác định các lộ trình truyền tín hiệu ở các giai đoạn phát triển khác nhau. Ngoài ra, phân tích biểu hiện tế bào đơn đã xác định một số phân nhóm tế bào đang phát triển có gen tụy mới, cung cấp những hiểu biết mới về sự phát triển của tuyến tụy. Lớp này đã phát triển các kỹ thuật qPCR đơn bào và áp dụng chúng vào nghiên cứu các gen điều hòa quan trọng trong quá trình phát triển phôi nang chuột và phân biệt dòng máu.

Với sự ra đời của các công nghệ giải trình tự thế hệ tiếp theo, scRNA-seq đã cho thấy những lợi thế rõ ràng trong việc phân biệt các dạng đồng phân khác nhau, biểu hiện alen và bản phiên mã mới trong các ô đơn lẻ với chi phí thấp hơn. năm 2009, Tang et al. đã báo cáo toàn bộ trình tự phiên mã mRNA đơn bào đầu tiên, chứng minh sự phức tạp của các biến thể phiên mã trong tế bào trứng hoặc tế bào trứng chuột đơn lẻ. smart-seq ra đời năm 2012 đã được phát triển để phát hiện các bản phiên mã có độ dài đầy đủ trong các tế bào đơn lẻ và bằng cách áp dụng nó cho các tế bào hiếm, các nhà nghiên cứu đã xác định được các dấu ấn sinh học ứng cử viên cho các tế bào khối u ác tính lưu hành. Một năm sau, Smart-seq2 với khả năng sao chép ngược, phạm vi đọc, độ lệch và độ chính xác được cải thiện đã được giới thiệu. những phát triển gần đây trong Smart-seq3 đã cải thiện đáng kể độ nhạy của nó trong việc phát hiện hàng nghìn bản sao đơn bào ở độ phân giải allelic và isoform. Không giống như các phương pháp khuếch đại dựa trên PCR, CEL-seq thu nhận các bản phiên mã đơn bào hiệu quả bằng cách khuếch đại tuyến tính ghép kênh. Một nghiên cứu sử dụng CEL-seq để nghiên cứu quá trình phát triển phôi sớm của Cryptobacterium hidradenoma cho thấy các kết quả nhạy cảm và có thể tái sản xuất của nó ở độ phân giải đơn bào. Nền tảng tự động đầu tiên của scRNA-seq là Fluidigm C1, sử dụng hệ thống vi lỏng để thu giữ các tế bào đơn lẻ trong 96 hoặc 384 ngăn, sau đó là ly giải tế bào, phiên mã ngược và khuếch đại PCR.

Kể từ năm 2015, nghiên cứu đơn bào đã hoàn toàn bước vào kỷ nguyên của thông lượng cao, chi phí thấp và tự động hóa với sự sẵn có liên tục của Drop-seq, inDrop, 10× Genomics, Seq-well, Microwell-seq và SPLiTseq. Drop-seq và inDrop tách các ô riêng lẻ thành các giọt có kích thước nano lít và trộn chúng với một mã vạch duy nhất để dán nhãn cho từng ô. Mặt khác, Cyto-seq, Seq-well và Microwell-seq cho phép giải trình tự mRNA của một ô có thông lượng cao bằng cách chụp một ô và một hạt mã vạch trong một microwell. Nhóm của chúng tôi đã xây dựng bản đồ tế bào chuột đầu tiên và cảnh quan tế bào người ở cấp độ tế bào đơn lẻ bằng cách sử dụng Microwell-seq. Gần đây hơn, thông lượng cao hơn và các phương pháp đơn giản hơn được gọi là SPLiT-seq và sci-RNA-seq cho scRNA-seq. Các phương pháp này sử dụng chính tế bào hoặc nhân làm buồng phản ứng để mã hóa các tế bào được dán nhãn thông qua một số vòng phân chia nhóm. Tất cả các tế bào sau đó được khuếch đại và giải trình tự PCR cDNA. Cao et al. đã sử dụng sci-RNA-seq3 để phân tích các bản phiên mã của khoảng 2 triệu tế bào cơ quan chuột và 4 triệu tế bào thai nhi của con người, cung cấp một cái nhìn toàn cầu về các quá trình phát triển của động vật có vú. Các công nghệ đơn bào khác bao gồm các phân tích bộ gen, proteomic và biểu sinh cũng đã phát triển mạnh mẽ; tuy nhiên, chúng nằm ngoài phạm vi của bài viết này.

Sự xuất hiện và tiến triển của bệnh thận

Thận có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều bệnh phổ biến và nghiêm trọng, bao gồm tổn thương thận cấp tính, viêm cầu thận, nhiễm trùng tăng dần (viêm bể thận) và ung thư. Nhìn chung, sự hiểu biết của chúng ta về cơ chế bệnh sinh của bệnh thận bị hạn chế bởi đặc tính phân tử không đầy đủ của các loại tế bào chịu trách nhiệm cho các chức năng cụ thể của cơ quan. Để thu hẹp khoảng cách kiến ​​thức này, nhóm của chúng tôi và Park et al. đã xây dựng một bản đồ phiên mã của thận chuột khỏe mạnh bằng cách sử dụng scRNA-seq. Các phân nhóm chính của tế bào biểu mô đơn vị thận bao gồm tế bào cuống, tế bào biểu mô ống lượn gần, vòng Henle, ống lượn xa và tế bào ống góp. Nghiên cứu đã xác định một loại tế bào di cư mới để thu thập quần thể tế bào ống dẫn, xác nhận những phát hiện trước đây về sự chuyển đổi xen kẽ giữa các tế bào xen kẽ và tế bào chính trong các nghiên cứu scRNA-seq. Ngoài ra, Ransick et al. đã phân tích thận trưởng thành của nam và nữ và tạo ra một tập bản đồ giải phẫu của các yếu tố thận chuột ở cấp độ đơn bào. Nhóm của chúng tôi cũng đã thực hiện phân tích Microwell-seq về mô thận của người trưởng thành và thai nhi. Ngoài các tế bào biểu mô, tế bào nội mô, tế bào mô đệm và tế bào miễn dịch trong mô, chúng tôi đã xác định được các loại tế bào soma loại s chưa được mô tả trước đây trong thận của thai nhi và một loại tế bào di cư mới ở thận người trưởng thành. Hồ sơ phân tử đơn bào của hệ thống mạch máu thận tiết lộ hồ sơ biểu hiện chuyên biệt của các nephron xây dựng và tiết lộ cơ chế bệnh sinh của bệnh thận. Hơn nữa, tất cả các loại tế bào cầu thận được xác định từ những con chuột khỏe mạnh và các mô hình bệnh khác nhau bằng phân tích phân cụm phiên mã tế bào đơn, và các gen mới liên quan đến bệnh và các con đường điều hòa đã được phát hiện trong các mô hình bệnh, chẳng hạn như con đường Hippo được kích hoạt trong các tế bào podocytes sau khi miễn dịch gây độc cho thận. chấn thương.

Xơ hóa thận là một dấu hiệu đặc trưng của CKD và ảnh hưởng đến hơn 10 phần trăm dân số thế giới. Trong một mô hình cùng tồn tại không đồng nhất của xơ hóa thận, Kramann et al. đã sử dụng scRNA-seq để xác nhận rằng bạch cầu đơn nhân đóng góp một tỷ lệ nhỏ nguyên bào sợi cơ, nhưng hầu hết nguyên bào sợi cơ đều có nguồn gốc từ tế bào trung mô. Sau đó, Kuppe et al. [37] đã phân tích bản phiên mã của khoảng 135,000 tế bào từ ống lượn gần và không phải ống lượn gần và xác nhận thêm rằng các dạng đồng phân khác nhau của MSC là tác nhân chính gây xơ hóa thận ở người. Hơn nữa, trong một phân tích so sánh giữa bạch cầu đơn nhân khỏe mạnh và thận bị xơ hóa, một gen đặc hiệu của nguyên bào sợi cơ, tương đồng tế bào sừng trần 2 (NKD2), đã được xác định là mục tiêu điều trị tiềm năng cho bệnh xơ hóa thận ở người. Dựa trên 402 mẫu sinh thiết thận, fibrinogen trong nước tiểu đã được dự đoán là một dấu ấn sinh học không xâm lấn ở bệnh nhân mắc bệnh thận mạn.

Cistanche tiêu chuẩn hóa

Bệnh thận đái tháo đường (DN) được đặc trưng bởi tổn thương đồng thời cầu thận và kẽ ống thận. Tuy nhiên, người ta biết tương đối ít về tình trạng và tần số tế bào thay đổi như thế nào khi bệnh khởi phát và tiến triển của biểu hiện gen. Để làm sáng tỏ những thay đổi trong biểu hiện gen tế bào cầu thận ở chuột DN, Fu et al. đã thực hiện phân tích scRNA-seq và xác định một số dấu hiệu tiềm năng mới của các tế bào cầu thận, bao gồm Magi2, Robo2, Ramp3 và Fabp4. Trong bệnh thận đái tháo đường (DKDs), quá trình điều hòa các con đường tạo mạch và di cư bị thay đổi trong các tế bào nội mô, trong khi các quá trình điều hòa ổn định protein và dịch mã được làm giàu cao trong các tế bào thylakoid. Nhìn chung, những thay đổi trong động lực học phân tử của tế bào nội mô và tế bào thylakoid sẽ giúp xác định các yếu tố sinh lý bệnh quan trọng góp phần vào sự tiến triển của DN. Chung et al. mô tả bản phiên mã đơn bào của cầu thận trong mô hình chuột mắc bệnh đái tháo đường. Biểu hiện gen đã bị thay đổi trong thylakoid và podocytes của chuột ob / ob so với đối chứng. Các con đường tăng sinh được tạo ra trong các tế bào thylakoid và các con đường liên quan đến sự chết của tế bào được tạo ra trong các tế bào podocytes, phù hợp với những thay đổi về tỷ lệ số lượng tế bào. Phân tích toàn diện về bộ dữ liệu DKD scRNA-seq đã xuất bản đã xác định được 17 gen then chốt, làm phong phú thêm hiểu biết của chúng ta về các cơ chế phân tử làm cơ sở cho quá trình sinh bệnh của DKD. Ngoài ra, giải trình tự RNA nhân đơn không thiên vị (snRNA-seq) của các mẫu thận đái tháo đường ở người được bảo quản lạnh đã mang lại 23.980 bản phiên mã từ ba mẫu đối chứng và ba mẫu DN ban đầu. Kết quả cho thấy những thay đổi cụ thể của loại tế bào trong biểu hiện gen cho thấy sự gia tăng bài tiết kali trong DN của con người. Một nghiên cứu trước đây so sánh scRNA-seq và snRNA-seq ở thận chuột trưởng thành cho thấy loại sau có khả năng bắt giữ hiệu quả hơn. Ví dụ, các tế bào chân cầu thận, tế bào thylakoid và tế bào nội mô được bắt bởi snRNA-seq chứ không phải bởi scRNA-seq. Việc áp dụng snRNA-seq giảm thiểu các tác động giả của quá trình tiêu hóa enzyme và có thể được thực hiện trên các mẫu đông lạnh, dự kiến ​​sẽ dẫn đến một ứng dụng rộng rãi hơn để đẩy nhanh nghiên cứu về cơ chế bệnh lý trong các bệnh thận khác nhau.

Một bản sao tế bào chính xác có thể tiết lộ nguồn gốc của các tế bào khối u thận và quỹ đạo phiên mã hỗ trợ chuyển đổi ác tính. trẻ và cộng sự. đã xác định các loại tế bào thận bình thường và ung thư của con người từ một danh mục gồm 72.501 bản phiên mã đơn bào. Bằng cách xác định các tương quan tế bào bình thường cụ thể của các tế bào ung thư thận (RCC), một nghiên cứu đã cung cấp bằng chứng cho giả thuyết rằng các tế bào khối u của Wilms là các tế bào thai nhi bất thường và RCC có thể bắt nguồn từ một phân nhóm tế bào ống lượn gần ít được biết đến. Do đó, scRNA-seq cung cấp một chiến lược thử nghiệm có thể mở rộng để mô tả các tế bào ung thư thận ở người với độ phân giải phân tử tế bào định lượng chính xác.

Atlas phân tử tế bào miễn dịch trong bệnh thận

Tế bào miễn dịch là thành phần cơ bản của mô người và đóng vai trò quan trọng trong chuyển hóa sinh lý và bệnh lý. Thật vậy, khả năng của hệ thống miễn dịch nhận ra các tín hiệu gây bệnh hoặc nguy hiểm hoặc các tế bào ác tính là rất quan trọng. Việc áp dụng công nghệ đơn bào vào nghiên cứu các tế bào miễn dịch thận có khả năng giúp hiểu rõ hơn về vai trò của hệ thống miễn dịch trong cơ chế bệnh sinh của thận khỏe mạnh và bệnh tật, cũng như xác định các chiến lược điều trị mới. Những nỗ lực này đang bắt đầu lập bản đồ cảnh quan miễn dịch phức tạp trong thận và tiết lộ mối quan hệ giữa các tế bào miễn dịch cư trú trong mô và các tế bào lân cận được kích hoạt lẫn nhau của chúng.

Vào năm 2018, ứng dụng của scRNA-seq trong mô thận chuột đã cung cấp một bối cảnh tế bào miễn dịch toàn diện bao gồm các đại thực bào thường trú, bạch cầu trung tính, tế bào lympho B và T và tế bào NK. Một năm sau, một nghiên cứu đơn bào chưa từng có về tổ chức không gian thời gian của các tế bào miễn dịch thận của con người đã được thành lập. Các mạng lưới tế bào miễn dịch myeloid và bạch huyết cư trú tại mô đã được xác định ở thận của thai nhi và người trưởng thành, đồng thời các nghiên cứu đã xác định các chương trình phiên mã thu được sau khi sinh nhằm thúc đẩy khả năng chống nhiễm trùng. Ngoài ra, sự trao đổi chéo giữa các tế bào biểu mô thận trưởng thành và các tế bào miễn dịch đã được dự đoán sẽ thu hút các đại thực bào kháng khuẩn và bạch cầu trung tính đến các vùng thận nhạy cảm nhất. Nhìn chung, bối cảnh miễn dịch toàn diện của thận góp phần nghiên cứu các cơ chế gây bệnh và xác định các mục tiêu điều trị trong các bệnh thận miễn dịch và nhiễm trùng.

Viêm thận Lupus (LN) là một bệnh tự miễn dịch có khả năng gây tử vong mà các liệu pháp điều trị hiện tại không hiệu quả và thường độc hại. Các quá trình phân tử và tế bào dẫn đến tổn thương thận và tính không đồng nhất của LN vẫn chưa rõ ràng. scRNA-seq đã được sử dụng bởi Arazi et al. để xác định 21 quần thể bệnh cụ thể của myeloid, T, kẻ giết người tự nhiên và tế bào B ở bệnh nhân LN. Tương tự, Der et al. áp dụng scRNA-seq cho các mô sinh thiết thận và da từ bệnh nhân LN. Điểm đáp ứng interferon loại I của các tế bào biểu mô ống được báo cáo là cao hơn ở bệnh nhân LN so với nhóm chứng khỏe mạnh. Ngoài ra, các đặc điểm viêm và xơ của tế bào ống thận có liên quan đến việc điều trị không hiệu quả. Trong DKD, phân tích scRNA-seq cho thấy số lượng tế bào miễn dịch ở cầu thận tiểu đường cao hơn đáng kể so với nhóm chứng. Những nghiên cứu này gợi ý rằng hồ sơ biểu hiện gen của các tế bào miễn dịch trong nước tiểu, da và thận có mối tương quan cao, cho thấy rằng sinh thiết nước tiểu và da có thể là nguồn tiềm năng của các dấu hiệu chẩn đoán và tiên lượng bệnh thận.

Các nghiên cứu gần đây đã chứng minh vai trò của các tế bào miễn dịch trong các mô hình bệnh thận với khả năng phân giải đơn bào. Các mô hình tắc nghẽn niệu quản một bên được sử dụng rộng rãi cho bệnh xơ hóa kẽ thận, nơi các đại thực bào và tế bào viêm xâm nhập vào kẽ thận, dẫn đến những thay đổi rõ rệt về huyết động và chuyển hóa thận. scRNA-seq đã được sử dụng trong các mô hình tắc nghẽn niệu quản một bên có thể đảo ngược để phân tích cảnh quan tế bào tủy trong quá trình tiến triển và thoái hóa xơ hóa. Conway et al. tiết lộ sự không đồng nhất trong các tế bào myeloid, với những thay đổi năng động về tỷ lệ tương đối của các quần thể phụ, bạch cầu đơn nhân được tuyển dụng sớm trong chấn thương, Ccr2 cộng với đại thực bào tích lũy muộn trong chấn thương và một cụm đại thực bào Mmp12 mới đóng vai trò trong quá trình sửa chữa. Trong bệnh thận và ghép tạng, tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ (IRI) có liên quan đến tình trạng viêm và huy động bạch cầu. các mô hình thử nghiệm của IRI đã được sử dụng để đánh giá vai trò chức năng của 2 nhóm tế bào giống bạch huyết bẩm sinh trong thận và dữ liệu cho thấy các tế bào này có chức năng dư thừa trong tổn thương thận. Bằng cách áp dụng scRNA-seq cho mô hình IRI ghép thận, Kremann et al. phát hiện ra rằng CXCR5 tiếp theo cộng với thâm nhiễm bạch cầu dẫn đến mức CXCL13 toàn thân tăng cao. knRNA-seq cũng được Kirita et al. áp dụng cho mẫu chuột IRI. để mô tả các phản ứng chi tiết của tế bào sau chấn thương và để xác định trạng thái tế bào ống lượn gần tiền viêm và tiền xơ hóa khác biệt. Axit uric, sản phẩm oxy hóa cuối cùng của quá trình chuyển hóa purine, có liên quan chặt chẽ với tình trạng viêm thận trong một số mô hình bệnh tật. Ví dụ, NLRP3 (miền cấu trúc 3 có chứa NOD-, LRR- và pyrin) cảm nhận các tín hiệu dư thừa axit uric và các túi viêm được kích hoạt trong bệnh thận do tăng axit uric máu. Tuy nhiên, các cơ chế miễn dịch cụ thể gây tổn thương thận do tăng axit uric máu vẫn chưa được biết. Việc xây dựng cảnh quan cơ thể bị viêm ở cấp độ đơn bào trong mô hình tổn thương thận do tăng axit uric máu dự kiến ​​sẽ được thực hiện trong tương lai gần.

Xâm nhập miễn dịch tồn tại trong các khối u thận và bị ảnh hưởng bởi vi môi trường khối u. Một nghiên cứu trước đây cho thấy quần thể đại thực bào thâm nhiễm khối u biểu hiện yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu A và tham gia vào con đường truyền tín hiệu VEGF phức tạp trong mô RCC. Nghiên cứu hiện tại chứng minh rằng scRNA-seq có thể giải quyết nguyên nhân khối u và xác định các cơ chế sinh lý bệnh giả định và mạng tín hiệu tế bào có thể đóng vai trò là mục tiêu cho điều trị bằng thuốc. Nhìn chung, nghiên cứu nêu bật những tiến bộ trong scRNAseq cung cấp thông tin chi tiết về hệ thống miễn dịch và mạng lưới tế bào hoạt động ở thận khỏe mạnh và thận bị bệnh.

thảo dược

Ứng dụng của scRNA-seq cho Organoids thận

Ngoài nghiên cứu về các mô thận bị bệnh, các cơ quan thận đã trở thành một công cụ chính để nghiên cứu về cơ chế phát sinh cơ quan và bệnh tật, đồng thời có khả năng đẩy nhanh sự phát triển của các liệu pháp như một nguồn mô thay thế. Song song đó, những tiến bộ trong scRNA-seq đã dẫn đến phân tích chi tiết hơn về các quần thể tế bào khác nhau và sự thay đổi biểu hiện gen trong các cơ quan giống như thận.

Nhìn chung, sự hiểu biết tốt hơn về sự phát triển phôi thận ở cấp độ đơn bào là cần thiết để hướng dẫn sự trưởng thành của các cơ quan giống như thận. Các nghiên cứu phiên mã đơn bào của thận thai nhi đã xác định được 22 loại tế bào và các gen đánh dấu tương ứng.

Việc so sánh các giai đoạn phát triển khác nhau cho thấy tính liên tục của động học phân tử của các tế bào chân. Một phân tích đơn bào khác được thực hiện trên thận của thai nhi và các cơ quan giống như thận có nguồn gốc từ tế bào gốc phôi thai. Phân tích so sánh các quỹ đạo phát triển của một tế bào trong thận cho thấy các biểu hiện gen tương tự in vivo và in vitro, ngoại trừ các tế bào podocytes giai đoạn cuối, cho thấy một quá trình trưởng thành không hoàn chỉnh của các cơ quan giống như podocyte. Các thí nghiệm cấy ghép gợi ý thêm rằng thylakoid và lòng mạch máu có thể được tối ưu hóa bằng cách sử dụng các mô hình organoid. Một nghiên cứu gần đây sử dụng các tế bào giống chồi niệu quản và trung mô thận phía sau để tạo ra các cơ quan thận cho thấy rằng scRNA-seq đã cải thiện sự trưởng thành của ống lượn gần và giảm quần thể tế bào ngoài mục tiêu. Phân tích scRNA-seq của các cơ quan thận có nguồn gốc từ tế bào gốc đa năng (PSC) của con người được thực hiện bởi Subramanian et al. và Wu et al. So với bộ dữ liệu đơn bào của thận người trưởng thành và thai nhi, các cơ quan giống như thận khác nhau cho thấy phần lớn các loại tế bào có thể tái tạo, nhưng với tỷ lệ tế bào khác nhau do sự hiện diện của các tế bào ngoài mục tiêu. Ngoài ra, phân tích mạng yếu tố phiên mã cho thấy các con đường biệt hóa cơ quan thận, làm nổi bật sức mạnh của công nghệ đơn bào trong việc mô tả và hướng dẫn sự khác biệt của cơ quan.

Tóm lại, các cơ quan giống như thận của con người là một nguồn tài nguyên hữu ích để khai thác các mô hình bệnh tật, các cơ chế điều tiết tiềm năng, sàng lọc thuốc thông lượng cao và cuối cùng là các liệu pháp tái tạo. Những nghiên cứu này nêu bật tiềm năng sử dụng scRNA-seq trong các hệ thống mô hình thận để làm sáng tỏ các quá trình sinh lý và bệnh lý in vivo và cung cấp hướng dẫn cho nghiên cứu trong tương lai trong chẩn đoán và điều trị các bệnh về thận.

Hiểu biết sâu sắc về Allogcraft thận bằng scRNA-seq

Ghép thận dị loại là một trong những phương pháp điều trị lâm sàng hiệu quả nhất đối với bệnh thận giai đoạn cuối. Công nghệ đơn bào mang đến cơ hội mô tả chính xác các loại tế bào thận và trạng thái bằng cách sử dụng các mẫu sinh thiết người sau khi cấy ghép dị loại. Báo cáo được công bố đầu tiên về các mẫu sinh thiết ghép thận đã phân tích 8746 bản phiên mã đơn bào và xác định các phản ứng viêm khác biệt. Các bạch cầu đơn nhân hình thành nhóm cộng với CD16 phi cổ điển và nhóm 16- CD cổ điển; các tế bào nội mô biểu hiện trạng thái nghỉ ngơi và 2 trạng thái đào thải qua trung gian kháng thể. Những phát hiện này góp phần giúp chúng ta hiểu rõ hơn về thải ghép miễn dịch trong ghép thận. Trong một nghiên cứu so sánh về bạch cầu đơn nhân thận từ nguồn người nhận và người cho, các mẫu sinh thiết thận cho thấy biểu hiện gen phiên mã khác nhau đáng kể. Các đại thực bào được kích hoạt bằng phản ứng viêm và các tế bào T biểu hiện độc tính tế bào đã được quan sát thấy ở những người nhận. Tương tự, Liu et al. các tế bào được phân tích từ quá trình thải ghép thận mãn tính và các quả thận trưởng thành khỏe mạnh phù hợp ở cấp độ đơn bào. Phân tích phân cụm không giám sát cho thấy rằng số lượng tế bào miễn dịch và nguyên bào sợi cơ tăng lên trong nhóm thải ghép thận mãn tính có thể góp phần vào quá trình thải ghép và xơ hóa thận. Đáng chú ý, một nghiên cứu gần đây đã mô tả tập bản đồ đơn bào đầu tiên của nước tiểu trưởng thành và xác định SOX9 cộng với quần thể tế bào gốc/tế bào tiền thân trong nước tiểu. Các tế bào tiền thân đã tăng sinh và biệt hóa thành công trong cơ thể sống, thu được một số đặc tính của tế bào hình ống và cung cấp một nguồn tài nguyên hữu ích cho liệu pháp ghép thận trong tương lai. Nhìn chung, công nghệ scRNA-seq cung cấp những hiểu biết sâu sắc và mới lạ về thải ghép thận ở người, cuối cùng cải thiện độ chính xác của chẩn đoán và đẩy nhanh việc áp dụng diễn giải sinh thiết phân tử.

chất bổ sung cistache

Phần kết luận

Trong thập kỷ qua, scRNA-seq đã trở thành một công cụ không thể thiếu để phân tích biểu hiện gen khác biệt trên toàn bộ phiên mã để nghiên cứu sinh lý sinh lý và xác định các bất thường điều hòa phân tử trong bệnh. Trái ngược với các kiểu hình riêng biệt truyền thống, đặc tính phân tử ở cấp độ đơn bào có thể cung cấp một tiêu chuẩn có hệ thống để mô tả các kiểu hình bệnh thận. Việc áp dụng công nghệ đơn bào trong mô thận khỏe mạnh hoặc các mẫu sinh thiết thận lâm sàng cung cấp một tập bản đồ phân tử toàn diện về thận và mở rộng hiểu biết của chúng ta về thận học. Bản đồ tế bào đơn thận sẽ là một phần không thể thiếu trong công trình quốc tế về Bản đồ tế bào người, nhằm mục đích tạo ra một bản đồ tham khảo toàn diện và có hệ thống về cơ thể con người. Trong các nghiên cứu trong tương lai, các phân tích phiên mã không gian và thông lượng siêu cao đơn bào dự kiến ​​sẽ mở rộng hiểu biết của chúng ta về thận. Việc tích hợp dữ liệu đa omics sẽ cải thiện hơn nữa việc chẩn đoán và điều trị bệnh thận được cá nhân hóa.

NGƯỜI GIỚI THIỆU

1. Kriz W, Bankir L. Danh pháp tiêu chuẩn cho các cấu trúc của thận. Ủy ban thận của liên minh khoa học sinh lý quốc tế (IUPS). Thận Int. Tháng 1 năm 1988; 33(1):1–7.

2. Kurts C, Panzer U, Anders HJ, Rees AJ. Hệ thống miễn dịch và bệnh thận: các khái niệm cơ bản và ý nghĩa lâm sàng. Miễn dịch Nat Rev. 2013 Tháng 10;13(10):738–53.

3. Luyckx VA, Al-Aly Z, Bello AK, Bellorin Font E, Carlini RG, Fabian J, et al. Các mục tiêu phát triển bền vững có liên quan đến sức khỏe thận: cập nhật về tiến độ. Nat Rev Nephrol. Tháng 1 năm 2021;17(1):15–32.

4. Clark AR, Greka A. Sức mạnh của một: những tiến bộ trong bộ gen đơn bào ở thận. Nat Rev Nephrol. Tháng 2 năm 2020;16(2):73–4.

5. Han X, Wang R, Zhou Y, Fei L, Sun H, Lai S, et al. Ánh xạ bản đồ tế bào chuột bằng microwell-seq. Tế bào. Tháng 2 năm 2018;172(5):1091–107.e17.

6. Park J, Shrestha R, Qiu C, Kondo A, Huang S, Werth M, et al. Phiên mã đơn bào của thận chuột cho thấy các mục tiêu tế bào tiềm năng của bệnh thận. Khoa học. tháng 5 năm 2018; 360(6390):758–63.

7. Hochane M, van den Berg PR, Fan X, Bérenger-Currias N, Adegeest E, Bialecka M, et al. Phiên mã đơn bào cho thấy động lực biểu hiện gen của sự phát triển thận của thai nhi. PLoS sinh học. 2019 tháng 2;17(2): e3000152.

8. Han X, Zhou Z, Fei L, Sun H, Wang R, Chen Y, et al. Xây dựng cảnh quan tế bào người ở cấp độ đơn bào. Thiên nhiên. tháng 5 năm 2020; 581(7808):303–9.

9. Liao J, Yu Z, Chen Y, Bao M, Zou C, Zhang H, et al. Trình tự RNA đơn bào của thận người. Dữ liệu Khoa học. Tháng 1 năm 2020;7(1):4.

10. Y học chính xác trong thận học. Nat Rev Nephrol. 2020 tháng 11;16(11):615.

11. Chen QL, Li JQ, Xiang ZD, Lãng Y, Guo GJ, Liu ZH. Bản địa hóa các gen liên quan đến thụ thể tế bào của SARS-CoV-2 ở thận thông qua phân tích phiên mã đơn bào. Thận Dis. Tháng 7 năm 2020;6(4):258–70.

12. Tietjen I, Rihel JM, Cao Y, Koentges G, Zakhary L, Dulac C. Phân tích phiên mã đơn bào của các tế bào thần kinh tiền thân. tế bào thần kinh. Tháng 4 năm 2003;38(2):161–75.

13. Tưởng MK, Melton DA. Phân tích bảng điểm đơn bào của sự phát triển tuyến tụy. Tế bào Dev. Tháng 3 năm 2003;4(3):383–93.

14. Guo G, Huss M, Tong GQ, Wang C, Li Sun L, Clarke ND, et al. Độ phân giải của các quyết định về số phận tế bào được tiết lộ bằng phân tích biểu hiện gen đơn bào từ hợp tử đến phôi nang. Tế bào Dev. Tháng 4 năm 2010;18(4):675–85.

15. Guo G, Luc S, Marco E, Lin TW, Peng C, Kerenyi MA, et al. Lập bản đồ phân cấp tế bào bằng cách phân tích một ô của tiết mục bề mặt tế bào. Tế Bào Gốc Tế Bào. 2013 Tháng 10;13(4):492–505.

16. Wang Z, Gerstein M, Snyder M. RNA-Seq: một công cụ mang tính cách mạng cho phiên mã. Nat Rev Genet. Tháng 1 năm 2009;10(1):57–63.

17. Tang F, Barbacioru C, Wang Y, Nordman E, Lee C, Xu N, et al. phân tích toàn bộ phiên mã mRNA-Seq của một tế bào. Phương pháp Nat. Tháng 5 năm 2009;6(5):377–82.

18. Ramsköld D, Luo S, Wang YC, Li R, Deng Q, Faridani OR, et al. MRNA-seq có độ dài đầy đủ từ các mức RNA đơn bào và các tế bào khối u lưu hành riêng lẻ. Công nghệ sinh học Nat. 2012 Tháng 8;30(8):777–82.

19. Picelli S, Björklund ÅK, Faridani OR, Sagasser S, Winberg G, Sandberg R. Smart-seq2 cho hồ sơ phiên mã có độ dài đầy đủ nhạy cảm trong các ô đơn lẻ. Phương pháp Nat. Tháng 11 năm 2013;10(11): 1096–8.

20. Hagemann-Jensen M, Ziegenhain C, Chen P, Ramsköld D, Hendriks GJ, Larsson AJM, et al. Đếm RNA đơn bào ở độ phân giải alen và đồng phân bằng Smart-seq3. Công nghệ sinh học Nat. Tháng 6 năm 2020;38(6):708–14.

21. Hashimshony T, Wagner F, Sher N, Yanai I. CEL-seq:RNA-seq đơn bào bằng cách khuếch đại tuyến tính đa kênh. Đại diện di động 2012 Tháng 9;2(3): 666–73.

22. Yanai I, Hashimshony T. CEL-seq2-giải trình tự RNA đơn bào bằng khuếch đại tuyến tính ghép kênh. Phương pháp Mol Biol. 2019;1979: 45–56.

23. Streets AM, Zhang X, Cao C, Pang Y, Wu X, Xiong L, et al. Trình tự phiên mã toàn bộ tế bào vi lỏng. Proc Natl Acad Sci US A. Tháng 5 năm 2014;111(19):7048–53.

24. Klein AM, Mazutis L, Akartuna I, Tallapragada N, Veres A, Li V, et al. Mã vạch giọt cho phiên mã tế bào đơn được áp dụng cho tế bào gốc phôi. Tế bào. Tháng 5 năm 2015;161(5): 1187–201.

25. Macosko EZ, Basu A, Satija R, Nemesh J, Shekhar K, Goldman M, et al. Cấu hình biểu hiện trên toàn bộ bộ gen song song cao của các tế bào riêng lẻ bằng cách sử dụng các giọt nanoliter. Tế bào. Tháng 5 năm 2015;161(5):1202–14.

26. Quạt HC, Fu GK, Fodor SP. Hồ sơ biểu hiện. Ghi nhãn kết hợp của các tế bào đơn cho tế bào học biểu hiện gen. Khoa học. Tháng 2 năm 2015; 347(6222):1258367.

27. Gierahn TM, Wadsworth MH, Hughes TK, Bryson BD, Butler A, Satija R, et al. Seq-well: trình tự RNA di động, chi phí thấp của các tế bào đơn lẻ với thông lượng cao. Phương pháp Nat. Tháng 4 năm 2017;14(4):395–8.

28. Cao J, Packer JS, Ramani V, Cusanovich DA, Huynh C, Daza R, et al. Hồ sơ phiên mã đơn bào toàn diện của một sinh vật đa bào. Khoa học. Tháng 8 năm 2017;357(6352): 661–7.

29. Rosenberg AB, Roco CM, Muscat RA, Kuchina A, Mẫu P, Yao Z, et al. Hồ sơ đơn bào của não chuột đang phát triển và tủy sống với mã vạch phân chia nhóm. Khoa học. Tháng 4 năm 2018;360(6385):176–82.

30. Cao J, Spielmann M, Qiu X, Huang X, Ibrahim DM, Hill AJ, et al. Cảnh quan phiên mã đơn bào của cơ quan động vật có vú. Thiên nhiên. Tháng 2 năm 2019;566(7745):496–502.

31. Cao J, O'Day DR, Pliner HA, Kingsley PD, Deng M, Daza RM, et al. Một tập bản đồ tế bào người biểu hiện gen của thai nhi. Khoa học. 2020; 370(6518):370.

32. Chen L, Lee JW, Chou CL, Nair AV, Battistone MA, Păunescu TG, et al. Bản phiên mã của các loại tế bào ống góp thận chính ở chuột được xác định bởi RNA-seq đơn bào. Proc Natl Acad Sci US A. Tháng 11 năm 2017;114(46): E9989–98.

33. Ransick A, Lindström NO, Liu J, Zhu Q, Guo JJ, Alvarado GF, et al. Hồ sơ đơn bào cho thấy giới tính, dòng dõi và sự đa dạng khu vực trong thận chuột. Tế bào Dev. Tháng 11 năm 2019;51(3):399– 413.e7.

34. Barry DM, McMillan EA, Kunar B, Lis R, Zhang T, Lu T, et al. Các yếu tố quyết định phân tử của chuyên môn hóa mạch nephron ở thận. xã Nat. Tháng 12 năm 2019;10(1):5705.

35. Chung JJ, Goldstein L, Chen YJ, Lee J, Webster JD, Roose-Girma M, et al. Hồ sơ phiên mã đơn bào của cầu thận xác định các loại tế bào chính và phản ứng với chấn thương. J Am Sóc Nephrol. 2020 tháng 10;31(10): 2341–54.

36. Kramann R, Machado F, Wu H, Kusaba T, Hoeft K, Schneider RK, et al. Parabiosis và giải trình tự RNA đơn bào cho thấy sự đóng góp hạn chế của bạch cầu đơn nhân vào myofibroblasts trong bệnh xơ hóa thận. Thông tin chi tiết về JCI. Tháng 5 năm 2018;3(9): e99561.

37. Kuppe C, Ibrahim MM, Kranz J, Zhang X, Ziegler S, Perales-Patón J, et al. Giải mã nguồn gốc myofibroblast trong xơ hóa thận ở người. Thiên nhiên. Tháng 1 năm 2021;589(7841):281–6.

38. Wang H, Zheng C, Lu Y, Jiang Q, Yin R, Zhu P, et al. Fibrinogen niệu như một yếu tố dự báo tiến triển của CKD. Phòng khám J Am Soc Nephrol. 2017 Tháng 12;12(12):1922–9.

39. Fu J, Akat KM, Sun Z, Zhang W, Schlondorff D, Liu Z, et al. Hồ sơ RNA đơn bào của các tế bào cầu thận cho thấy những thay đổi năng động trong bệnh thận do tiểu đường thực nghiệm. J Am Sóc Nephrol. Tháng 4 năm 2019;30(4):533–45.

40. Zhang Y, Li W, Zhou Y. Xác định các gen trung tâm trong bệnh thận do tiểu đường thông qua phân tích đa microarray. Ann Transl Med. 2020 Tháng 8;8(16):997.

41. Wilson PC, Wu H, Kirita Y, Uchimura K, Ledru N, Rennke HG, et al. Bối cảnh phiên mã đơn bào của bệnh thận đái tháo đường sớm ở người. Proc Natl Acad Sci US A. 2019 Tháng 9;116(39):19619–25.

42. Wu H, Kirita Y, Donnelly EL, Humphreys BD. Ưu điểm của trình tự đơn nhân so với trình tự RNA đơn bào của thận trưởng thành: các loại tế bào hiếm và trạng thái tế bào mới được bộc lộ trong quá trình xơ hóa. J Am Sóc Nephrol. Tháng 1 năm 2019;30(1):23–32.

43. MD trẻ, Mitchell TJ, Vieira Braga FA, Tran MGB, Stewart BJ, Ferdinand JR, et al. Bản phiên mã đơn bào từ thận người tiết lộ danh tính tế bào của khối u thận Khoa học. Tháng 8 năm 2018;361(6402):594–9.

44. Stewart BJ, Ferdinand JR, Young MD, Mitchell TJ, Loudon KW, Riding AM, et al. Phân vùng miễn dịch không gian của thận người. Khoa học. Tháng 9 năm 2019;365(6460):1461–6.

45. Arazi A, Rao DA, Berthier CC, Davidson A, Liu Y, Hoover PJ, et al. Cảnh quan tế bào miễn dịch ở thận của bệnh nhân viêm thận lupus. miễn dịch tự nhiên. Tháng 7 năm 2019;20(7):902–14.

46. ​​Der E, Ranabothu S, Suryawanshi H, Akat KM, Clancy R, Morozov P, et al. Giải trình tự RNA đơn bào để phân tích tính không đồng nhất phân tử trong bệnh viêm thận lupus. Thông tin chi tiết về JCI. Tháng 5 năm 2017;2(9):e93009.

47. Der E, Suryawanshi H, Morozov P, Kustagi M, Goilav B, Ranabothu S, et al. Phiên mã đơn tế bào tế bào hình ống và tế bào sừng áp dụng cho viêm thận lupus tiết lộ IFN loại I và các con đường liên quan đến xơ hóa. miễn dịch tự nhiên. Tháng 7 năm 2019;20(7):915–27.

48. Conway BR, O'Sullivan ED, Cairns C, O'Sullivan J, Simpson DJ, Salzano A, et al. Bản đồ đơn bào thận cho thấy sự không đồng nhất của tủy trong quá trình tiến triển và hồi quy của bệnh thận. J Am Sóc Nephrol. tháng 12 năm 2020; 31(12):2833–54.

49. Cameron GJM, Cautivo KM, Loering S, Jiang SH, Deshpande AV, Foster PS, et al. Các tế bào bạch huyết bẩm sinh nhóm 2 là dư thừa trong tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ thận thực nghiệm Miễn dịch phía trước. 2019;10:826.

50. Kreimann K, Jang MS, Rong S, Greite R, von Vietinghoff S, Schmitt R, et al. Tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ kích hoạt giải phóng CXCL13 và tuyển dụng tế bào B sau khi ghép thận allogen. Miễn dịch phía trước. 2020;11:1204.

51. Kirita Y, Wu H, Uchimura K, Wilson PC, Humphreys BD. Hồ sơ tế bào của chấn thương thận cấp tính của chuột cho thấy các phản ứng tế bào được bảo tồn đối với chấn thương. Proc Natl Acad Sci US A. 2020 Tháng 7;117(27):15874–83.

52. Wen L, Yang H, Ma L, Fu P. Vai trò của các con đường truyền tín hiệu qua trung gian hồng cầu NLRP3 trong bệnh thận tăng axit uric máu. Sinh hóa tế bào Mol. Tháng 3 năm 2021;476(3):1377–86.

53. Nishinakamura R. Các cơ quan thận của con người: tiến bộ và những thách thức còn lại. Nat Rev Nephrol. 2019 Tháng 10;15(10):613–24.

54. Tran T, Lindström NO, Ransick A, De Sena Brandine G, Guo Q, Kim AD, et al. Quỹ đạo phát triển in vivo của các tế bào podocytes của con người cho thấy sự khác biệt trong ống nghiệm của các tế bào podocytes có nguồn gốc từ tế bào gốc đa năng. Tế bào Dev. Tháng 7 năm 2019;50(1):102–e6.

55. Uchimura K, Wu H, Yoshimura Y, Humphreys BD. Các cơ quan thận có nguồn gốc từ tế bào gốc đa năng của con người với sự trưởng thành của ống góp được cải thiện và mô hình chấn thương. Đại diện di động 2020 tháng 12;33(11):108514.

56. Subramanian A, Sidhom EH, Emani M, Vernon K, Sahakian N, Zhou Y, et al. Điều tra đơn bào của các cơ quan thận của con người cho thấy khả năng tái tạo và giảm các tế bào ngoài mục tiêu sau khi cấy ghép. xã Nat. Tháng 11 năm 2019;10(1):5462.

57. Wu H, Uchimura K, Donnelly EL, Kirita Y, Morris SA, Humphreys BD. Phân tích so sánh và sàng lọc sự khác biệt của cơ quan thận được khử từ PSC của con người với phiên mã tế bào đơn. Tế Bào Gốc Tế Bào. Tháng 12 năm 2018;23(6):869–e8.

58. Czerniecki SM, Cruz NM, Harder JL, Menon R, Annis J, Otto EA, et al. Sàng lọc thông lượng cao giúp tăng cường sự khác biệt của cơ quan thận từ các tế bào gốc đa năng của con người và cho phép tạo kiểu hình đa chiều tự động. Tế Bào Gốc Tế Bào. Tháng 6 năm 2018;22(6): 929–e4.

59. Dvela-Levitt M, Kost-Alimova M, Emani M, Kohnert E, Thompson R, Sidhom EH, et al. Phân tử nhỏ nhắm mục tiêu TMED9 và thúc đẩy quá trình thoái hóa lysosomal để đảo ngược bệnh lý protein. Tế bào. Tháng 7 năm 2019;178(3):521–e23.

60. Wu H, Malone AF, Donnelly EL, Kirita Y, Uchimura K, Ramakrishnan SM, et al. Bản phiên mã đơn bào của mẫu sinh thiết ghép thận người xác định phản ứng viêm đa dạng. J Am Sóc Nephrol. Tháng 8 năm 2018;29(8):2069–80.

61. Malone AF, Wu H, Fronick C, Fulton R, Gaut JP, Humphreys BD. Khai thác thể hiện biến thể nucleotide đơn lẻ và trình tự RNA đơn bào để xác định hiện tượng khảm tế bào miễn dịch trong ca ghép thận thải loại. J Am Sóc Nephrol. 2020 tháng 9;31(9):1977–86.

62. Liu Y, Hu J, Liu D, Zhou S, Liao J, Liao G, et al. Phân tích đơn bào cho thấy bối cảnh miễn dịch ở thận của bệnh nhân thải ghép mãn tính. trị liệu. 2020; 10(19):8851–62.

63. Wang Y, Zhao Y, Zhao Z, Li D, Nie H, Sun Y, et al. Phân tích RNA-Seq đơn bào đã xác định các tế bào tiền thân của thận từ nước tiểu của con người. Tế bào Protein 2021 tháng 4;12(4):305–12.

64. Stark R, Grzelak M, Hadfield J. Giải trình tự RNA: những năm thiếu niên. Nat Rev Genet. 2019 tháng 11;20(11):631–56. 65 Regev A, Teichmann SA, Lander ES, Amit I, Benoist C, Birney E, et al. Bản đồ tế bào người. cuộc sống. 2017;12:6.

Mạnh Mạnh Giang^a,b; Hải Đức Trần^{b, c}; Quách tỷ Quách^{a, b, c, d, e}

a: Phòng thí nghiệm Liangzhu, Trung tâm Y tế Đại học Chiết Giang, Hàng Châu, Trung Quốc;

b: Trung tâm Tế bào gốc và Y học tái tạo, Đại học Y khoa Chiết Giang, Hàng Châu, Trung Quốc;

c: Phòng thí nghiệm trọng điểm về kỹ thuật mô và y học tái tạo tỉnh Chiết Giang, Tiến sĩ Li Dak Sum & Yip Yio Chin, Trung tâm tế bào gốc và y học tái tạo, Hàng Châu, Trung Quốc;

d: Trung tâm cấy ghép tủy xương, Bệnh viện trực thuộc đầu tiên, Đại học Y khoa Chiết Giang, Hàng Châu, Trung Quốc;

e: Viện Huyết học, Đại học Chiết Giang, Hàng Châu, Trung Quốc