Thực vật Thái Lan có mức độ chống oxy hóa cao, hoạt động nhặt rác triệt để miễn phí, hoạt động chống tyrosinase và chống collagenase

Tiếp xúc:

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Moragot Chatatikun1 và Anchalee Chiabchalard2

trừu tượng

Tiểu sử:Bức xạ tia cực tím từ ánh sáng mặt trời gây ra sản xuất quá mức các loại oxy phản ứng (ROS), dẫn đến rối loạn hình ảnh da và tăng sắc tố. Các hợp chất làm trắng da và chống nhăn mới lạ từ các sản phẩm tự nhiên gần đây đang ngày càng được quan tâm. Mục đích của nghiên cứu này là tìm ra các sản phẩm làm giảm ROS trong 14 chất chiết xuất từ ​​thực vật Thái Lan.

Phương pháp:Để xác định tổng phenolic vàflavonoidNội dung,chất chống oxy hóahoạt động,chống lạityrosinasehoạt động và hoạt tính chống collagenase, chúng tôi đã so sánh các chất chiết xuất của 14 loại cây Thái Lan được chuẩn bị bằng cách sử dụng các dung môi khác nhau (ete dầu hỏa, dichloromethane và etanol).Chất chống oxy hóacác hoạt động được xác định bằng các xét nghiệm DPPH và ABTS.

Kết quả:Tổng hàm lượng phenolic trong 14 chất chiết xuất từ ​​thực vật Thái Lan được tìm thấy ở mức cao nhất trong etanol, tiếp theo là chất chiết xuất diclometan và ete dầu mỏ, trong khiflavonoidhàm lượng thường được tìm thấy trong phân đoạn diclometan. Hoạt động nhặt rác dao động từ 7 đến 99% nhặt rác được đánh giá bằng các xét nghiệm DPPH và ABTS. Chiết xuất lá etanol của Ardisia elliptica Thunb. có hàm lượng phenolic cao nhất, hoạt động chống oxy hóa và ức chế collagenasein, trong khi Cassia alata (L.) Roxb. trích xuất có phong phú nhấtflavonoidNội dung. Điều thú vị là ba chất chiết xuất từ ​​thực vật, là các phân đoạn etanolic của Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. và Senna alata (L.) Roxb. đã caochất chống oxy hóanội dung và hoạt động và ức chế đáng kể cả haityrosinasevà collagenase.

Sự kết luận:Phát hiện của chúng tôi cho thấy rằng các phân đoạn etanol của Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. và Senna alata (L.) Roxb. cho thấy hứa hẹn là thành phần tiềm năng cho các sản phẩm mỹ phẩm như chất chống nhăn và sản phẩm làm trắng da.

Từ khóa:Ardisia elliptica Thunb.,Chất chống oxy hóanội dung, hoạt động nhặt rác,Chống tyrosinasehoạt động, Chống cắt dán

Flavonoid là một trong những yếu tố củacistanche

Tiểu sử

Bức xạ tia cực tím (UVR) từ ánh sáng mặt trời là yếu tố nguy cơ đáng kể nhất đối với ung thư tế bào hắc tố và ung thư tế bào hắc tố [1]. Tiếp xúc quá nhiều với ánh sáng mặt trời, đặc biệt là UVA và UVB, gây ra sự biểu hiện quá mức của các loài phản ứng oxy hóa (ROS) làm hỏng lipid, protein và axit anddeoxyribonucleic. Collagen là chất nền tảng chính tạo nên chất nền ngoại bào trong lớp hạ bì của da. ROS quá mức làm tăng sự biểu hiện của collagenase, một loại protease làm suy giảm collagen, có thể dẫn đến ảnh hưởng và nếp nhăn của da [2]. Ngoài ra, tiếp xúc với tia cực tím gây ra sự sản sinh melanin, dẫn đến tình trạng mất sắc tố da.Tyrosinaselà enzyme quan trọng kích hoạt sắc tố da. Đầu tiên, L-tyrosine được hydroxyl hóa thành dạng 3, 4- dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) bởi tyrosinase. Sau đó, L-DOPA bị oxy hóa thành DOPA quinone bởi tyrosinase. DOPA quinone tiếp tục được chuyển đổi thành DOPAchrome có thể được chuyển đổi thành 5, 6- dihydroxyindole (DHI) hoặc 5, 6- dihydroxyindole -2- axit cacboxylic (DHICA) [3]. Các phương pháp điều trị lão hóa da hiện nay bao gồm hydroxylacid để làm bong lớp biểu bì, retinoids để giảm da sần sùi và chất làm đầy da được thực hiện bằng cách tiêm collagen vào da. Tuy nhiên, những phương pháp điều trị này có những tác dụng phụ, chẳng hạn như tăng sắc tố, viêm nhiễm, độc tế bào, kích ứng và nhiễm khuẩn [4]. Chất làm trắng da phổ biến nhất là hydroquinone, chất này ức chếtyrosinase, nhưng các tác dụng phụ của nó bao gồm viêm da, phù nề, phản ứng dị ứng và viêm da dầu [5]. Gần đây, các nhà nghiên cứu đã tập trung vào các sản phẩm tự nhiên có tác dụng ức chế ROS do tia UV gây ra, ức chế các enzym và giảm sự hình thành sắc tố melanin như là những lựa chọn thay thế cho các phương pháp điều trị hiện nay. Ví dụ, hợp chất phyto hoạt tính, chẳng hạn như arbutin, aloesin, axit gentisic,flavonoid, hesperidin, cam thảo, niacinamide, các dẫn xuất của nấm men, và polyphenol, ức chế sự hình thành hắc tố mà không gây độc tế bào tomelanocytes [6]. Do đó, thực vật có thể làm giảm sự hình thành nếp nhăn và tăng sắc tố do tiếp xúc với ánh nắng mặt trời.

Mục đích của nghiên cứu này là phân tích 14 loại thực vật Thái Lan được chiết xuất từ ​​ba loại dung môi khác nhau để tìm ra các thành phần chống nhăn và làm trắng da tiềm năng của chúng. Số lượngchất chống oxy hóaphenol vàflavonoidđã được đánh giá về mối tương quan với các hoạt chất nhặt rác gốc tự do, và chống collagenase vàchống tyrosinasecác hoạt động. Các chất chiết xuất cóchất chống oxy hóaloại bỏ các chất tự do và các enzym ức chế liên quan đến sự hình thành nếp nhăn và sắc tố. Chúng tôi xác định Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L., và Senna alata (L.) Roxb là một ứng cử viên sáng giá để sử dụng trong các sản phẩm mỹ phẩm.

thể hình cistanche

Phương pháp

Hóa chất và thuốc thử

Thuốc thử phenol của Folin Ciocalteu, natri cacbonat (Na2CO3), axit gallic, quercetin, 10% nhôm clorua, etanol, 2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl (DPPH), ascorbicacid, 2,2′-Azino- bis (3- ethylbenzthiazoline -6- axit sulphonic) (ABTS), kali persulfat, axit kojic, tyrosinase nấm (EC 1.14.18.1), 3, 4- dihydroxy-L-phenylalanin (L- DOPA), N - [3- (2- furyl) acryloyl] -Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), collagenase từ Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), epigallocatechin gallate (EGCG) , natri clorua, canxi clorua và dimethyl sulfoxide (DMSO) được mua từ Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Ete dầu mỏ, diclometan, etanol tuyệt đối, metanol, dinatri hydro photphat và natri dihydro photphat được mua từ Merck (Darmstadt, Đức). Tất cả các hóa chất và thuốc thử đều là chất phân tích.

Nguyên liệu thực vật và chiết xuất

Mười ba loài lá Thái Lan được thu thập từ Vườn Thảo mộc Công chúa Sirindhorn, tỉnh Rayong, Thái Lan. Mangost Queen được lấy từ tỉnhChanthaburi, Thái Lan. Những cây này đã được xác thực và lưu ký tại Herbarium, Departmentof Botany, Khoa Khoa học, Đại học Chulalongkorn, Thái Lan. Tên khoa học, số chứng từ và các bộ phận của cây được trình bày trong Bảng 1. Cây được chiết bằng thiết bị Soxhlet. Tóm lại, 10 g cây khô được chiết tách riêng biệt với dầu hỏa, diclometan và etanol. Dung môi được loại bỏ bằng thiết bị cô đặc quay chân không dưới áp suất giảm bằng thiết bị cô đặc MiVac Quattro. Các mẫu đậm đặc được hòa tan trong DMSO ở 100 mg / ml và được bảo quản ở -20 độ cho đến khi sử dụng. Sản lượng của chất chiết khô được trình bày trong Bảng 1 dưới dạng phần trăm w / w nguyên liệu thực vật khô.

Xác định tổng hàm lượng phenol

Tổng hàm lượng phenol trong chiết xuất thực vật được đánh giá bằng phương pháp Folin-Ciocalteu [7]. Một cách ngắn gọn, 5 {{8} ul ofextracts ở 1 mg / ml trong nước cất được trộn với 50 ul thuốc thử Folin-Ciocalteu 10% và 50 ul của 0,1 M Na2CO3. Hỗn hợp phản ứng được ủ trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Độ hấp thụ ở 750 nm được đo bằng đầu đọc vi tấm (Biotek, Hoa Kỳ.). Axit gallic từ 1,56 đến 100 ug / ml được sử dụng làm tiêu chuẩn. Tổng hàm lượng phenol của các chất chiết được biểu thị bằng mg đương lượng axit gallic (GAE) trên mỗi g nguyên liệu cà tím. Tất cả các mẫu được phân tích trong ba lần.

Xác định hàm lượng flavonoid

Tổng cộngflavonoidHàm lượng (TFC) được xác định bằng cách sử dụng xét nghiệm so màu nhôm clorua (AlCl3) [7]. Một cách ngắn gọn, 50 ul chất chiết xuất ở 1 mg / ml trong 80% ethanol được trộn với 50 ul dung dịch AlCl3 2% trong giếng của tấm dán tường 96. Đĩa được ủ trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ ở bước sóng 435 nm được đo bằng đầu đọc vi tấm. Quercetin từ 1,56 đến 100 ug / ml phục vụ như một tiêu chuẩn. Tổng hàm lượng flavonoid được biểu thị bằng mg quercetin đương lượng (QE) trên g nguyên liệu cà tím. Các mẫu được phân tích ba lần.

Hoạt động nhặt rác DPPH

Thử nghiệm hoạt động nhặt rác DPPH được thực hiện như mô tả của Yamasaki et al. [số 8]. Dung dịch DPPH mới được chuẩn bị cho mỗi thử nghiệm. Tóm lại, chất chiết xuất từ ​​1 0 0 ug / ml hoặc chất chuẩn axit ascorbic 1,56 đến 100 ug / ml trong metanol tuyệt đối được trộn với thuốc thử DPPH 180 ul trong một đĩa 96 giếng. Hỗn hợp này được ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Sau đó, độ hấp thụ ở bước sóng 517 nm được đo bằng đầu đọc vi tấm. Các thí nghiệm được thực hiện trong ba lần. Độ hấp thụ ở bước sóng 517 nm của DPPH là 0,70 ± 0,02 và giảm hoạt động nhặt rác được đo độ hấp thụ. Khả năng nhặt rác được tính toán dưới dạng hoạt động nhặt rác (phần trăm)=100 phần trăm × [(훥 A517 ofcontrol - 훥 A517 of sample) / 훥 A517 of control]. Phần trăm hoạt động thu nhặt DPPH của các chất chiết xuất được so sánh với hoạt động của axit ascorbic và được biểu thị bằng mgvitamin C tương đươngchất chống oxy hóacông suất (VCEAC) trên mỗi nguyên liệu nhà máy gdry. IC5 0 được xác định từ biểu đồ tỷ lệ phần trăm ức chế đối với nồng độ (từ 0,78–100 ug / ml của mỗi dịch chiết).

Hoạt động nhặt rác ABTS

Hoạt động thu dọn gốc tự do ABTS đã được thực hiện như đã mô tả trước đây [9]. ABTS • cộng với thuốc thử làm việc được chuẩn bị bằng cách trộn 7 mM ABTS • và 2,45 mM kali persulfat với tỷ lệ thể tích / thể tích 8:12. Dung dịch làm việc được giữ từ 16 đến 18 giờ ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Dung dịch ABTS • plus được pha loãng bằng etanol tuyệt đối để có độ hấp thụ 0 7 0 ± 0,02 ở bước sóng 734 nm. Sau đó, 100 ug / ml chiết xuất hoặc 1,56 đến 100 ug / ml axit ascorbic chuẩn trong etanol tuyệt đối được thêm vào 180 ul của ABTS • cộng với thuốc thử làm việc trong các giếng của đĩa 96well. Đĩa được ủ trong 45 phút ở nhiệt độ phòng, và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 734. Các thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần. Khả năng nhặt rác được tính bằng hoạt động nhặt rác (phần trăm)=100 × [(훥 A734 kiểm soát - 훥 A734 mẫu) / 훥 A734 kiểm soát]. Tỷ lệ phần trăm của hoạt động thu gom ABTS của các chất chiết xuất được so sánh với tỷ lệ của axit ascorbic, và được trình bày dưới dạng tương đương mg vitamin Cchất chống oxy hóacông suất (VCEAC) trên g nguyên liệu thực vật khô. IC50 được xác định từ agraph phần trăm ức chế so với nồng độ (từ 15,62–1000 ug / ml của mỗi dịch chiết).

Xác định sự ức chế tyrosinase của nấm

Phương pháp dopachrome được thực hiện với một chút sửa đổi [10]. Tóm lại, 20 ul chiết xuất thực vật hoặc DMSO (như đối chứng), 20 ul của 203,3 đơn vị / ml tyrosinase nấm và 140 ul của 20 mM đệm phosphat atpH 6,8 đã được ủ trước trong 10 phút ở 25 độ. Sau khi ủ trước, 20 ul của 2,5 mM L-DOPA được thêm vào và các mẫu sau đó được ủ thêm 20 phút ở 25 độ. Lượng dopachrome được đo ở bước sóng 492 nm bằng đầu đọc vi tấm. Axit Kojic (KA) được sử dụng như một chất kiểm soát tích cực đối với sự ức chế. Phần trăm ức chế hoạt động tyrosinase (phần trăm) là phần trăm expressastyrosinaseức chế {{0}} × [(훥 A492 kiểm soát - 훥 A492 mẫu) / 훥 A492 kiểm soát]. Nồng độ cuối cùng của các chất chiết xuất và axit kojic lần lượt là 1 và 0,1 mg / ml. IC50 được xác định từ agraph phần trămtyrosinaseức chế chống lại nồng độ (từ 15,62–1000 ug / ml của mỗi dịch chiết).

thể hình cistanche

Xác định sự ức chế collagenase

Sự ức chế collagenase được xác định bằng một phương pháp đã được mô tả trước đó [11]. Tóm lại, 4 0 ul của collagenase từClostridium histolyticum ở 0. 25 đơn vị / ml trong dung dịch đệm Tricine 50 mM chứa 10 mM CaCl2 và 400 mM NaCl, và 10 ul của đệm Tricine 50 mM được trộn với 10 ul của các chất chiết xuất hoặc DMSO (như đối chứng). Epigallocatechin gallate (EGCG) được sử dụng như một chất đối chứng tích cực. Sau 15- phút ủ ở nhiệt độ phòng, 50 ul của N - [3- (2- furyl) acryloyl] -Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) đã được bổ sung. Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 340 nm ngay lập tức và liên tục trong 20 phút. Hoạt động của enzyme được đánh giá bằng cách giảm độ hấp thụ trong khoảng thời gian. Phần trăm ức chế hoạt động của collagenase được tính bằng 100 × [(Hoạt động kiểm soát - Hoạt động của mẫu) / Hoạt động kiểm soát]. Nồng độ cuối cùng của các chất chiết xuất và epigallocatechin gallate lần lượt là 1 và 0,1 mg / ml. IC50 được xác định từ agraph phần trăm ức chế collagenase so với nồng độ (từ 15,62–1000 ug / ml của mỗi dịch chiết).

Phân tích thống kê

Tất cả các thí nghiệm được thực hiện ba lần và kết quả được biểu thị bằng sai số trung bình ± tiêu chuẩn. Hiệu quả tương quan (R2) giữachất chống oxy hóanội dung và các hoạt động chống oxy hóa được xác định bằng cách sử dụng phần mềm SigmaPlotversion 12.2. Sự khác biệt giữa hai phương tiện được đánh giá bằng phép thử t của Student. Sự khác biệt được coi là đáng kể khi giá trị P nhỏ hơn 0. 05.

Kết quả

Sản lượng chiết xuất

Bảng 1 cho thấy tên khoa học, số chứng từ và các bộ phận thực vật của 14 loại cây Thái Lan được sử dụng trong nghiên cứu này. Phần trăm sản lượng chiết xuất dao động từ 0. 73 phần trăm đến 31,11 phần trăm trọng lượng (Bảng 1). Ardisia elliptica Thunb. có sản lượng cao nhất trong chiết xuất ete dầu hỏa (19,89 phần trăm) andethanol (31,11 phần trăm), trong khi Garcinia mangostanaL. có năng suất phần trăm cao nhất từ ​​phân đoạn dichloromethaneextraction (11,07 phần trăm).

Hàm lượng phenolic trong 14 loại cây Thái Lan

Do đó, tổng hàm lượng phenol trong cây được xác định bằng phương pháp Folin-Ciocalteu. Các chất chiết xuất có số lượng phenol như được trình bày trong Bảng 2, và các giá trị thay đổi 33- lần giữa các chất chiết xuất. Ardisiaelliptica Thunb. có hàm lượng phenol cao nhất trong tất cả các loại chiết xuất, trong khi hàm lượng phenol thấp nhất có trong Stemona curtissi Hook. f. etherextract dầu mỏ.

Hàm lượng flavonoid của 14 loại cây Thái Lan

Tương tự với phenol, tổngflavonoidHàm lượng thay đổi đáng kể giữa các loài thực vật, dao động từ 2. 0 4 ± 0. 16 đến 31.38 ± 0.81 mg QE trên g nguyên liệu khô (Bảng 2). Nói chung, chiết xuất dichloromethane mang lại hiệu quả cao nhấtflavonoidmức độ so với các dung môi khác. Trong số tất cả các chất chiết xuất, số lượng flavonoid cao nhất được tìm thấy trong chiết xuất ethanol từ lá Senna alata (L.) Roxb (31,38 ± 0. 81 mg QE trên mỗi g nguyên liệu khô). Mặt khác, Ardisia elliptica Thunb. (23,14 ± 1,10 mg QE trên g nguyên liệu khô). có hàm lượngflavonoid phong phú nhất trong phần dichloromethane. Hơn nữa, Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. có hàm lượng flavonoid cao nhất trong số các chất chiết xuất từ ​​ete dầu mỏ (27,48 ± 2,59 mg QE trên g nguyên liệu khô). Mức flavonoid thấp nhất có thể phát hiện được là trong chiết xuất ethanol từ Daturametel L. Trái ngược hoàn toàn,flavonoidkhông được tìm thấy trong các chất chiết xuất từ ​​ete thepetroleum và dichloromethane từ Stemona curtisii Hook.f., và các chất chiết xuất từ ​​ete dầu mỏ từ Streblus asper Lour. và Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Tổng hàm lượng flavonoid không tương quan với tổng hàm lượng phenolic (R 2=0. 0284, Hình 1a).

Hoạt động thu gom gốc DPPH trong các chiết xuất khác nhau từ 14 loại cây Thái Lan

Hoạt động thu gom gốc tự do sử dụng DPPH làm chỉ thị cơ bảnchất chống oxy hóakhảo nghiệm [12]. Như được trình bày trong Bảng 3, các hoạt động nhặt rác của các chất chiết xuất rất khác nhau, từ 7,11 ± 0. 59 phần trăm đến 96,17 ± 0. 05 phần trăm. Chiết xuất etanol Ardisia ellipticaThunb có hoạt tính nhặt rác cao nhất 96%. Hơn nữa, mạnh nhất tiếp theochất chống oxy hóa activities (>90%) được quan sát thấy trong các phân đoạn ethanol từ Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus (L.) Skeels. và Garcinia mangostana Linn. Xét về các dung môi khác, Ardisia elliptica Thunb cũng có hoạt động nhặt rác trong các phân đoạn ete dầu mỏ, và Garcinia mangostana L. có hoạt tính chống oxy hóa cao nhất trong các phân đoạn diclometan. Khả năng nhặt rác thấp nhất đã được phát hiện ở Croton sublyratus Kurz trong phần ete dầu mỏ. Không có hoạt động nhặt rác nào được phát hiện trong 7 dịch chiết ete dầu mỏ và 2 dịch chiết diclometan.

Hoạt động thu gom tận gốc ABTS trong các chiết xuất khác nhau từ 14 loại cây Thái Lan

Chất chống oxy hóaHoạt động của các pha nước và lipid trong chất cấy cũng đã được đánh giá bằng xét nghiệm khử màu bằng ABTS [13]. Một lần nữa, axit ascorbic được coi là tiêu chuẩnchất chống oxy hóa. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90%, và hoạt động của chất ăn xác thối đã được phát hiện trong tất cả các chất chiết xuất dichloromethane, và chất chiết xuất từ ​​dầu mỏ từ Annona squamosa L. và Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. mà xét nghiệm DPPH không phát hiện được.

Ức chế hoạt động tyrosinase bằng chiết xuất thực vật

Khả năng của các hợp chất từ ​​cây Thái Lan trong việc ức chế phòng vệ sinhtyrosinasehoạt tính được đánh giá bằng cách sử dụng xét nghiệm invitro với L-DOPA làm chất nền. Axit Kojic được coi là một chất ức chế đã biết và gây ra sự ức chế tối đa là 93,38 ± 1,63 phần trăm. Như được trình bày trong Bảng 5, chỉ có chiết xuất ethanol mới ức chế đáng kể hoạt động của tyrosinase, với Ardisia elliptica Thunb. chuẩn bị là ngoại lệ. Các phân đoạn ete dầu mỏ và diclometan của Ardisia elliptica Thunb. ức chế hoạt động của tyrosinase khoảng 20 phần trăm. Phần ethanolfraction từ Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (IC 50 giá trị 271,50 ug / ml) là chất ức chế tyrosinase mạnh nhất, tiếp theo là chiết xuất ethanol từ Ardisia ellipticaThunb. và Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Các chất chiết xuất khác làm giảm đáng kể hoạt động của enzym hơn 20 phần trăm (Bảng 5), trong khi các chất chiết xuất còn lại không có hoạt tính ức chế có thể phát hiện được (dữ liệu không được hiển thị).

Sự ức chế hoạt động của collagenase bởi 14 loài thực vật

Các chất chiết xuất đã được kiểm tra hoạt động chống collagenase bằng cách sử dụng Clostridium histolyticum collagenase và N - [3- (2- furyl) acryloyl] -Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) làm chất nền. Epigallatecatechin gallate là một đã biết chất ức chế collagenase và làm giảm hoạt động của enzym 90,51 ± 2,79 phần trăm. Trong Bảng 5, chỉ có 4 dịch chiết etanol chứa hoạt tính ức chế collagenase có thể phát hiện được. Trong số những người gây ức chế, Ardisia elliptica Thunb. (Giá trị IC 50 là 157,78 ug / ml) thể hiện mức độ ức chế collagenasein cao nhất, tiếp theo là Annona squamosa L. (giá trị IC 50 là 466,67 ug / ml), Senna alata (L.) Roxb., Và Croton sublyratusKurz. gọi món. Các chất chiết xuất từ ​​thực vật khác không ức chế đáng kể hoạt động của collagenase trong các điều kiện phản ứng được sử dụng trong nghiên cứu này (dữ liệu không được hiển thị).

Thảo luận

Bức xạ mặt trời là một yếu tố môi trường quan trọng trong skindamage và có thể gây ung thư da [14]. Bức xạ UV gây ra phản ứng tiền viêm, phân hủy chất nền ngoại bào vàchất chống oxy hóasự suy kiệt [15, 16]. UV gây ra sự hình thành các loại oxy phản ứng (ROS) gây tăng sắc tố và biểu hiện collagenase [17, 18]. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng ete dầu mỏ, diclometan và etanol để chiết xuất thực vật bằng thiết bị Soxhlet. Ardisia elliptica Thunb. có năng suất cao nhất trong chiết xuất ete dầu mỏ và etanol, trong khi Garcinia mangostana L. có năng suất cao nhất từ ​​chiết xuất diclometan. Các dung môi này là một loạt các dung môi hữu cơ có độ phân cực tăng dần. Sự khác biệt giữa phần trăm sản lượng phụ thuộc vào các loài thực vật, và có lẽ phản ánh sự khác biệt trong thành phần hóa học của thực vật.

Phenolics là nhóm hóa chất thực vật lớn nhất được tìm thấy trong thực vật và chúng có các hoạt động sinh học khác nhau ở động vật, bao gồm cả con người [19]. Tổng hàm lượng phenol trong cây được xác định bằng phương pháp Folin Ciocalteu. Nhìn chung, phần etanol có hàm lượng phenol cao nhất, tiếp theo là diclometan, trong khi ete dầu mỏ có độ phân cực thấp có hàm lượng phenol thấp nhất so với các dung môi khác. Trong nghiên cứu này, Ardisia elliptica Thunb. có hàm lượng phenolic cao nhất trong cả ba loại chiết xuất. Trong các nghiên cứu trước đây, chất chiết xuất từ ​​lá dichloromethane của Ardisia elliptica Thunb. Có hàm lượng phenolic là 1 0 1 ± 1,3 mg GAE trên mỗi g nguyên liệu cà tím, cao hơn hàm lượng trong một cây hai mảnh [20]. Hơn nữa, chiết xuất methanol của quả Ardisia chín chứa 5,64 ± 0,37 g GAE trên 100 g chiết xuất [21]. Do đó, lá và quả của Ardisia ellipticaThunb. có hàm lượng phenol cao có thể dễ dàng phân tách với metanol, diclometan và etanol.

Flavonoidlà sắc tố ở hoa, lá, quả, hạt. Các hợp chất này là chất chuyển hóa thứ cấp của cây trồng và được phân bố rộng rãi giữa các loài thực vật [22]. Tiếp theo, hàm lượng flavonoid trong cây Thái Lan được đánh giá bằng cách sử dụng xét nghiệm so màu nhôm clorua. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng số lượng flavonoid cao nhất được tìm thấy trong chiết xuất ethanol từ Senna alata (L.) Roxbleaves. Trong một nghiên cứu trước đây, hàm lượng flavonoid cao được tìm thấy trong nước (4,25 mg QE trên 100 g) và các phân đoạn metanol (3,97 mg QE trên 100 g) của Senna alata (L.) Roxb. [23]. Vì vậy, chế phẩm Senna alata (L.) Roxb có hàm lượng flavonoid cao khi chiết xuất với dung môi có độ phân cực cao bao gồm etanol, metanol và nước. Ardisiaelliptica Thunb. có hàm lượng flavonoid phong phú nhất trong phần dichloromethane. Quả của cây này cũng có hàm lượng flavonoid cao 36,91 ± 2,37 mg QE trên mỗi g chiết xuất [24]. Do đó, quả và lá của Ardisia elliptica Thunb. là flavonoid richin. Tổng hàm lượng flavonoid không tương quan với tổng hàm lượng phenol. Tuy nhiên,flavonoidcó nhiều hoạt tính sinh học như chống tia UVB [25], chống viêm [26], chống độc cho gan [27] và chống ung thư [28].

Hoạt động thu dọn gốc tự do sử dụng DPPH và ABTSassay. Trong xét nghiệm DPPH, DPPH nhận hydrogenatom từ mộtchất chống oxy hóa[29]. Chúng tôi nhận thấy rằng chiết xuất etanol Ardisiaelliptica Thunb có hoạt tính nhặt rác cao nhất. Các nhà điều tra khác cũng đã báo cáo các phân đoạn dichloromethane của Ardisia elliptica Thunb. Lò vi sóng và thân cây có hàm lượngchất chống oxy hóahoạt tính được xác định bởi xét nghiệm DPPH, và do đó, loài cây này rất thú vị để nghiên cứu thêm như một phương pháp điều trị bằng thảo dược [20]. Các chất chiết xuất từ ​​phân đoạn etanol có độ phân cực cao cho thấy rõ ràng hơnchất chống oxy hóahoạt tính hơn các phân đoạn có độ phân cực thấp hơn chứa diclometan và ete dầu mỏ. Các chất chiết xuất từ ​​etanol có hoạt tính loại bỏ gốc tự do ở mức cao nhất so với các chất chiết xuất khác và tất cả các chất chiết xuất từ ​​etanol đều có hoạt tính. Trong xét nghiệm ABTS, ABTS được chuyển đổi thành gốc của nó bằng cách bổ sung kali persulfat. Khi có chất chống oxy hóa, cation ABTS phản ứng (hoặc ABTS • cộng) được chuyển thành dạng tự nhiên không màu của nó [9]. Phù hợp với xét nghiệm DPPH, các chất chiết xuất từ ​​etanol chứa mức hoạt tính cao nhất so với các chất chiết xuất khác. Một lần nữa, các hoạt động thu gom cao nhất chiết xuất inethanol, dichloromethane và ete dầu mỏ được thực hiện từ cùng một loại thực vật như được thể hiện trong xét nghiệm DPPH.

Tuy nhiên, tổngflavonoidHàm lượng của chất chiết xuất từ ​​thực vật không tương quan với hoạt động của chất nhặt rác gốc tự do được phát hiện bằng xét nghiệm DPPH (Hình 1c) hoặc bằng phương pháp ABTSassay (Hình 1e). Phát hiện của chúng tôi không có mối quan hệ đáng kể nào giữaflavonoidnội dung và hoạt động của người nhặt rác sử dụng xét nghiệm ABTS nhất quán với kết quả của các nhà điều tra khác [30]. Ngược lại, tổng hàm lượng phenolic trong chế phẩm cấy ghép có tương quan thuận với tính năng thu dọn xác được đo bằng cả hai thử nghiệm (Hình 1b và d) không phù hợp với nghiên cứu trước đây [31]. Đáng chú ý, hoạt động nhặt rác phụ thuộc vào tổng hàm lượng phenol và dung môi có độ phân cực cao, chẳng hạn như etanol và diclometan. Những kết quả này cho thấy phenoliccontent là thành phần chính củachất chống oxy hóahoạt động trong 14 nhà máy Thái Lan.

Melanin, sắc tố chính của màu da và tóc, được tổng hợp bởi các tế bào hắc tố trong các melanosome. Sản xuất quá mức và tích tụ melanin trong da có thể dẫn đến rối loạn sắc tố và các vấn đề thẩm mỹ. Tăng sắc tố da xảy ra ở những vùng da tiếp xúc với ánh nắng mặt trời [32]. Trong quá trình hình thành hắc tố,tyrosinaselà enzyme quan trọng trong bước giới hạn tốc độ trong đó L-tyrosine được hydroxyl hóa thành L-DOPA, enzyme này tiếp tục được oxy hóa thành DOPAquinone. Sau đó, nó được chuyển đổi thành DOPAchrome, một chất nền để tổng hợp melanin [3]. Điều chỉnh giảm củatyrosinasehoạt động đã được đề xuất là chịu trách nhiệm cho việc giảm sản xuấtmelanin. Sự phát triển của các hợp chất làm trắng da mới từ các sản phẩm tự nhiên gần đây đã trở thành một xu hướng ngày càng tăng. Phát hiện của chúng tôi cho thấy rằng phần etanol từ Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz là chất ức chế tyrosinase mạnh nhất, tiếp theo là chiết xuất etanol từ Ardisia elliptica Thunb. và Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Rõ ràng, 7 cây từ 14 mẫu cấy có hàm lượng phenol cao, đặc biệt là Ardisiaelliptica Thunb. và Annona squamosa L. Hơn nữa, Senna alata (L.) Roxb. giàu nhấtflavonoidnội dung có thể ức chế hoạt động của tyrosinase. Các hợp chất hoạt tính từ thực vật như arbutin, aloesin, axit gentisic, flavonoid, hesperidin, cam thảo, niacinamide, các dẫn xuất của nấm men và polyphenol, có thể ức chế sự hình thành hắc tố mà không gây độc tế bào đối với tế bào hắc tố [6].

Collagenase là một peptidase kẽm xuyên màng làm giảm liên kết X-Gly của collagen. Collagen là một protein có cấu trúc phong phú và thành phần chất nền ngoại bào [33]. Các sợi collagen và elastin bị suy giảm sẽ tăng lên khi bị tổn thương do bức xạ UV gây ra da nhăn nheo [34]. Ức chế collagenase đã được đề xuất để ngăn ngừa lão hóa da. Trong số những người gây ức chế trong nghiên cứu của chúng tôi, Ardisiaelliptica Thunb. thể hiện mức độ ức chế collagenasein cao nhất, tiếp theo là Annona squamosa L., Senna alata (L.) Roxb., và Croton sublyratus Kurz theo thứ tự xếp hạng. Trong nghiên cứu trước đó, chiết xuất vỏ ca cao có axit phenolic vàflavonoidức chế hoạt động của elastase và collagenase [35]. Đặc biệt, ba chất chiết xuất từ ​​ethanol (Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L., và Senna alata (L.) Roxb. bị ức chế)tyrosinasevà collagenase. Những loài thực vật này cũng có hàm lượngphenolic và flavonoid cao, vàchất chống oxy hóaĐiều thú vị là, những chiết xuất này có thể được sử dụng làm thành phần cho các sản phẩm mỹ phẩm.

Sự kết luận

Kết quả của chúng tôi chứng minh rằng chất chiết xuất từ ​​14 loại cây Thái Lan có mức độ khác nhau của tổng phenolic vàflavonoidhàm lượng cũng như các hoạt động thu dọn gốc tự do, phụ thuộc vào dung môi chiết xuất. Có một mối tương quan cao giữa tổng hàm lượng phenolic và hoạt động loại bỏ gốc tự do được đánh giá bằng các xét nghiệm DPPH vàABTS. Phần etanol của Ardisia ellipticaThunb. có hàm lượng phenolic cao nhất, tiếp theo là Annona squamosa L. Cả hai cây đều ức chế đáng kể các hoạt động của tyrosinase và collagenase, trong khi Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz cho thấy sự ức chế tyrosinase cao nhất. Hơn nữa, Senna alata (L.) Roxb. giàu hàm lượng flavonoid nhất, và cũng được trưng bàytyrosinasevà hành vi ức chế collagenase. Phần ethanol của ba loại thực vật, cụ thể là Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb, và Senna alata (L.) Roxb., Có tiềm năng trở thành thành phần trong các sản phẩm mỹ phẩm để chống nhăn cũng như làm trắng da. Các nghiên cứu sâu hơn là cần thiết để điều tra các thành phần hoạt tính và độ an toàn của các chất chiết xuất này.

thể hình cistanche

Người giới thiệu

1. Moehrle M. Thể thao ngoài trời và ung thư da. Clin Dermatol. 2008; 26 (1): 12–5.

2. Lopez-Camarillo C, Ocampo EA, Casamichana ML, Perez-Plasencia C, Alvarez-Sanchez E, Marchat LA. Protein kinase và các yếu tố phiên mã kích hoạt phản ứng với bức xạ tia cực tím của da: tác động đến quá trình sinh ung thư.Int J Mol Sci. 2012; 13 (1): 142–72.

3. Iwata M, Corn T, Iwata S, Everett MA, Fuller BB. Mối quan hệ betweentyrosinase hoạt động và màu da ở da người. J Investig Dermatol.1990; 95 (1): 9–15.

4. RS nghiêm khắc. Điều trị Photoaging. N Engl J Med. 2004; 350 (15): 1526–34.

5. Levin CY, Maibach H. Bệnh trứng cá ngoại sinh. Bản cập nhật về các đặc điểm lâm sàng, tác nhân gây bệnh và các lựa chọn điều trị. Là J Clin Dermatol. 2001; 2 (4): 213–7.

6. Zhu W, Gao J. Việc sử dụng các chiết xuất thực vật làm chất làm sáng da tại chỗ để cải thiện các rối loạn sắc tố da. J Investig DermatolSymp Proc. 2008; 13 (1): 20–4.

7. Zongo C, Savadogo A, Ouattara L, Bassole IHN, Ouattara CAT, Ouattara AS, Barro N, Koudou J, TraoreI AS. Hàm lượng polyphenol, các hoạt động chống oxy hóa và kháng khuẩn của Ampelocissus Grantii (baker) Planch. (Vitaceae): cây thuốc từ Burkina Faso. Int J Pharmacol. 2010; 6 (880–887)

8. Yamasaki K, Hashimoto A, Kokusenya Y, Miyamoto T, Sato T. Electrochemicalmethod để ước tính tác dụng chống oxy hóa của các loại thuốc chiết xuất từ ​​methanol. Chem Pharm Bull (Tokyo). 1994; 42 (8): 1663–5.

9. Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice-Evans C. Hoạt động chống oxy hóa áp dụng thử nghiệm cải thiện độ vàng hóa gốc ABTS. Miễn phí Radic Biol Med. 1999; 26 (9–10): 1231–7.

10. Nithitanakool S, Pithayanukul P, Bavovada R, Saparpakorn P. Nghiên cứu thả giống và hoạt tính chống tyrosinase của hạt xoài Thái kernelextract. Các phân tử. 2009; 14 (1): 257–65.

11. Bonvicini F, Antognoni F, Iannello C, Maxia A, Poli F, Gentilomi GA. Hoạt tính chọn lọc và liên quan của Pancratium Illyricum L. chống lại các phân lập Candida Albicansclinical: tác động tổng hợp lên sự phát triển và độc lực của nấm men. BMCComplement Altern Med. 2014; 14 (1): 409.

12. Sharma OP, Bhat TK. Kiểm tra chất chống oxy hóa DPPH được xem xét lại. Chem chép thực phẩm. 2009; 113 (4): 1202–5.

13. MacDonald-Wicks LK, Wood LG, Garg ML. Phương pháp luận để xác định khả năng chống oxy hóa sinh học in vitro: một đánh giá. J Sci Food Agric. Năm 2006; 86 (13): 2046–56.

14. Armstrong BK, Kricker A. Dịch tễ học ung thư da do tia cực tím. JPhotochem Photobiol B Biol. 2001; 63 (1–3): 8–18.

15. Bashir MM, Sharma MR, Werth VP. UVB và tế bào tiền viêm kích hoạt tự nhiên sản xuất TNF- trong tế bào sừng thông qua phiên mã gen tăng cường. J Điều tra Dermatol. 2009; 129 (4): 994–1001.

16. Watson RE, Gibbs NK, Griffiths CE, Sherratt MJ. Tổn thương ngoại bào da do tiếp xúc với tia cực tím. Tín hiệu oxy hóa khử chống oxy hóa. 2014; 21 (7): 1063–77.

17. D'Orazio J, Jarrett S, Amaro-Ortiz A, Scott T. Bức xạ tia cực tím và da. Int JMol Khoa học viễn tưởng. 2013; 14 (6): 12222–48.

18. Pittayapruek P, Meephansan J, Prapapan O, Komine M, Ohtsuki M. Vai trò ofmatrix Metalloproteinases trong Photoaging và Photocarcinogenesis. Int J MolSci. 2016; 17 (6): 868.

19. Sulaiman CT, Balachandran I. Tổng số phenol và tổng số flavonoid đã chọn lọc các cây thuốc Ấn Độ. Khoa học dược J Pharm của Ấn Độ. 2012; 74 (3): 258–60.

20. Mamat N, Jamal JA, Jantan I, Husain K. Xanthine Oxidase ức chế và hoạt động nhặt rác gốc DPPH của một số loài Primulaceae. SainsMalaysiana. 2014; 43 (12): 1827–33.

21. Wetwitayaklung P, Charoenteeraboon J, Limmatvapirat C, Phaechamud T. Hoạt động chống oxy hóa của một số loại trái cây Thái Lan và ngoại lai được trồng ở Thái Lan.Res J Pharm, Biol Chem Sci. 2012; 3 (1): 12–21.

22. Falcone Ferreyra ML, Rius SP, Casati P. Flavonoids: sinh tổng hợp, chức năng sinh học và ứng dụng công nghệ sinh học. Khoa học thực vật phía trước. 2012; 3: 222.

23. Devendra K, Kiran D, Ritesh V, Satyendra B, Abhishek K. Để đánh giá Tổng số Phenolics và Flavonoid trong các cây Chhattisgarh khác nhau. JPharmacognosy Phytochem. 2013; 2 (4): 116–8.

24. Siti-Azima AM, Northam A, Nurhuda M. Hoạt động chống oxy hóa của SyzygiumCumini và ArdisiaElliptica liên quan đến các chế phẩm Phenolic ước tính và đặc tính màu của chúng. Int J Biosci Biochem Bioinform. 2013; 3 (4): 314–7.

25. Solovchenko A, Schmitz-Eiberger M. Ý nghĩa của chất flavonoid bảo vệ da khỏi tia UV-B trong quả táo. J Exp Bot. 2003; 54 (389): 1977–84.

26. Gonzalez-Gallego J, Sanchez-Campos S, Tunon MJ. Các đặc tính chống viêm của flavonoid trong chế độ ăn uống. Nutr Hosp. 2007; 22 (3): 287–93.

27. Sudha A, Sumathi K, Manikandaselvi S, Prabhu NM, Srinivasan P. Hoạt tính chống độc gan của phần Flavonoid thô của Lippia Nodiflora L. tổn thương gan do onethanol gây ra ở chuột. Châu Á J Anim Sci. 2013; 7 (1): 1–13.

28. Sak K. Độc tính tế bào của flavonoid trong chế độ ăn uống đối với các loại ung thư ở người khác nhau.Pharmacogn Rev. 2014; 8 (16): 122–46.

29. Kedare SB, Singh RP. Sự ra đời và phát triển của phương pháp thử nghiệm chất chống oxy hóa DPPH. J Food Sci Technol. 2011; 48 (4): 412–22.

30. Boo HO, Kim TS, Koshio K, Shin JH, Chon SU. Tổng hàm lượng Phenolics và đặc tính chống oxy hóa trong dịch chiết metanol từ một số cây cà dại Việt Nam. J Plant Res của Hàn Quốc. 2011; 24 (6): 659–65.

31. Dudonne S, Vitrac X, Coutiere P, Woillez M, Merillon JM. Nghiên cứu so sánh về đặc tính chống oxy hóa và tổng hàm lượng phenolic của 30 chiết xuất thực vật được quan tâm trong công nghiệp bằng cách sử dụng các xét nghiệm DPPH, ABTS, FRAP, SOD và ORAC. J AgricFood Chem. 2009; 57 (5): 1768–74.

32. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Sắc tố melanin trên da động vật có vú và sự điều hòa nội tiết tố của nó. Physiol Rev. 2004; 84 (4): 1155–228.

33. Vai MD, Raines RT. Cấu trúc và sự ổn định của collagen. Annu RevBiochem. 2009; 78: 929–58.

34. Cửa AB, Wilhelm KP, Maibach HI. Đặc tính đàn hồi của da người: tương đối theo tuổi, giới tính và vùng giải phẫu. Arch Dermatol Res. Năm 1990; 282 (5): 283–8.

35. Karim AA, Azlan A, Ismail A, Hashim P, Gani SSA, Zainudin BH, Abdullah NA Thành phần kích thích hoạt tính chống oxy hóa, chống nhăn và ức chế tyrosinase của chiết xuất vỏ ca cao. BMC bổ sung Altern Med. 2014; 14 (381): 1–13.