trừu tượng:Mục tiêu chính của nghiên cứu này là ước tính, thông qua phân tích khác biệt, các hoạt tính sinh học khác nhau của tổng hàm lượng phenolic trong chiết xuất cồn của ba giống chà là nhạy cảm hoặc kháng Fusarium oxysporum. sp Albidini. Ở đây, các sản phẩm stilbene có khả năng chống oxy hóa và hoạt tính sinh học đã được chứng minh trong giống kháng thuốc Taabdount (TAAR). Hơn nữa, phần metanol của giống chà là kháng TAAR chứa một sản phẩm quan trọng, được xác định bởi LCMS/MS và 1H, 13C NMR, thuộc họ hydroxy stilben, thể hiện khả năng chống oxy hóa, ức chế hoạt động tyrosinase của nấm và kích hoạt và có tác dụng bảo vệ đối với thiệt hại do hypochlorite gây ra trong 20S đáng tin cậy của các tế bào lão hóa nguyên bào sợi ở da người. Nhìn chung, các kết quả hiện tại chỉ ra rằng hydroxytoluene có trong Phoenix dactylifera L. kháng thuốc nên được nghiên cứu để hiểu cách thức mà stilbene có thể phát huy khả năng chống lão hóa.

Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có khả năng loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra, đồng thời cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.

Nhấp vào lợi ích rou cong rong

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

từ khóa:phượng dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (foA); hoạt động chống oxy hóa; hoạt động chống tyrosinase; kích hoạt đáng tin cậy; phân tích LC-MS/MS; dẫn xuất stilben

1. Giới thiệu

Cây chà là (Phoenix dactylifera L.) là một loại cây một lá mầm lâu năm thuộc họ Arecaceae. Cây này có tầm quan trọng tối đa trong cuộc sống của người dân vùng Sahara ở Nam và Đông Nam Ma-rốc, cả về mặt kinh tế và xã hội. Bệnh Bayoud do nấm đất Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], đã làm giảm đáng kể sản lượng chà là Ma-rốc trong những năm gần đây [2]. Người ta ước tính rằng FoA đã biến mất khỏi hai phần ba di sản phoenicicole của Ma-rốc nhưng vẫn tiếp tục phá hủy từ 4,5% đến 12% các giống chà là thương mại chất lượng cao nhất [2]. Nhiều nỗ lực đã được thực hiện để chống lại căn bệnh này và giải thích một số cơ chế bảo vệ cây chà là [3]. Các nghiên cứu đầu tiên về cơ chế bảo vệ có thể có của cây chà là đã nhấn mạnh vai trò của các hợp chất phenolic và khả năng chống oxy hóa trong khả năng chống lại FoA [4,5]. Phân tích sinh hóa của các giống hợp chất phenolic trong rễ kháng và nhạy cảm là nghiên cứu sinh hóa đầu tiên làm sáng tỏ lợi ích của các cơ chế bảo vệ của cây chà là. Thật vậy, tài liệu chỉ ra rằng các giống cây có rễ kháng giàu 5-axit caffeoyl shikimic và các đồng phân vị trí của nó hơn các giống có rễ nhạy cảm [5]. Các hợp chất này đã thể hiện hiệu quả hoạt tính kháng nấm tiềm tàng trong ống nghiệm chống lại FoA [6].

Khả năng tuyệt vời của các chất chống oxi hóa tự nhiên trong việc loại bỏ các gốc tự do đang thúc đẩy sự phổ biến ngày càng tăng của chúng trong các nghiên cứu về thực phẩm và y học [7–10].

Ví dụ, các loại oxy phản ứng là yếu tố làm trầm trọng thêm quá trình lão hóa và tổn thương tế bào [11] và do đó có liên quan đến nhiều bệnh. Do đó, các phân tử chống oxy hóa có thể giúp ích cho sức khỏe con người bằng cách ngăn ngừa các bệnh thoái hóa và làm chậm hậu quả của quá trình lão hóa [12]. Trong nghiên cứu này, chúng tôi quan tâm đến khả năng của các chất chống oxy hóa trong việc thúc đẩy kích hoạt 20S-proteasome và bảo vệ chống lại tác hại oxy hóa của nó. Proteasome thực sự góp phần duy trì cân bằng nội môi tế bào bằng cách cho phép quá trình loại bỏ các protein bị hư hỏng của tế bào và phá hủy có kiểm soát các protein tồn tại trong thời gian ngắn [13]. Do đó, kích hoạt proteasome bằng chất chống oxy hóa có thể chứng tỏ là một chiến lược chống lão hóa mới [14]. Hơn nữa, công việc này dự định khám phá tiềm năng của hàm lượng phenolic trong rễ kháng FoA dưới dạng các hợp chất sinh học hoạt động.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. mẫu thực vật

Nghiên cứu được tiến hành đối với từng mẫu với nguyên liệu từ 10 giống chà là trưởng thành (Phoenix dactylifera L.) được trồng từ các lô đất bị ô nhiễm hoặc không bị ô nhiễm tại Palmaria Figuig, Đông Nam Ma-rốc. Rễ chính (bao gồm cả rễ thở không khí) có đường kính từ 0,5 đến 2 cm của các giống mẫn cảm, chẳng hạn như charas Bouffegous nhiễm bệnh (BI) hoặc không nhiễm bệnh (BNI). Ngoài ra, giống Taabdount (TAAR) kháng FoA đã được thu thập và lá của hai cây thuốc được sử dụng tại địa phương như một phương pháp điều trị phylactic chống lại FoA. Hơn nữa, cây hương thảo (R, Rosmarinus officinalis) và quả lựu (G, Punica granatum L.) [15] cũng được thu thập trong cùng một lô không bị nhiễm bẩn, theo đó chúng được phân tích và sử dụng làm đối chứng. Các mẫu được lấy vào hai khoảng thời gian trong năm, vào tháng 9 và cuối tháng 1 (giữa năm 2013 và 2015) và được bảo quản kín ở nhiệt độ phòng. Vì các mẫu được lấy từ một người trồng cọ nên chúng được chứng nhận hợp lệ (nhận dạng và phân loại) bởi Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Ma-rốc [16].

2.2. Chuẩn bị chiết xuất

Sau khi rửa sạch bằng nước, rễ hoặc lá được phơi khô trong bóng râm, sau đó xay nhuyễn trong máy xay. Đối với mỗi mẫu (BI, BNI, TAAR, R và G), 10 mL metanol được thêm vào 1 g vật liệu khô và sau đó khuấy trong 4 giờ ở nhiệt độ phòng. Sau đó, chúng được lọc và làm bay hơi ở 37 ◦C bằng hơi quay. Dịch chiết khô được cho vào dung dịch metanol ở nồng độ cuối cùng là 10 mg/mL hoặc 50 mg/mL (sau này được sử dụng để thử nghiệm các hoạt tính sinh học trong ống nghiệm). Ba lần chiết độc lập cho mỗi mẫu được thực hiện cho các thử nghiệm hoạt tính sinh học.

2.3. Hoạt động sinh học

2.3.1. Nội dung phenolic và hoạt động chống oxy hóa

Quy trình được vạch ra bởi Nacoulma et al. đã được áp dụng để đánh giá tổng hàm lượng phenolics và tổng hàm lượng flavonoid của từng chiết xuất [17], với sự điều chỉnh cuối cùng về thể tích ở mức 200 µL để sử dụng trên đầu đọc vi bản. Độ hấp thụ lần lượt ở 760 nm và 510 nm được xác định dựa trên mẫu trắng metanol. Các đường chuẩn chuẩn của axit gallic (0–300 mg/L) (y=0.0083x cộng với 0.9106, r2=0.978) và quercetin (0–100 mg/L) (y {{14 }}.0008x cộng với 0,0597, r2=0.994) tương ứng đã được sử dụng.

Bằng cách sử dụng gốc tự do 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, hoạt động nhặt rác chống oxy hóa đã được nghiên cứu (DPPH). Sử dụng sự điều chỉnh cuối cùng của thể tích lần lượt là 300 µL và 275 µL để sử dụng đầu đọc vi bản, khả năng của các chất chiết xuất để giảm sắt (III) đã được đánh giá, như được mô tả bởi Nacoulma et al. [17]. So với mẫu trắng metanol, độ hấp thụ được đo lần lượt ở bước sóng 517 nm và 700 nm. Sau đó, sử dụng phương trình sau đây, hoạt động thu dọn gốc tự do của mỗi dung dịch được ước tính là phần trăm ức chế:

Đường cong hiệu chuẩn tiêu chuẩn thu được bằng cách sử dụng axit ascorbic ({{0}}–100 mg/L) làm chất chuẩn chống oxi hóa (y=0.0014x cộng với 0,0875, r2=0.998).

2.3.2. Xét nghiệm ức chế tăng trưởng helium foAMyc

Với một sửa đổi nhỏ, phương pháp được mô tả bởi Neri et al. [18] đã được sử dụng để xác định mức độ mà các hóa chất tinh khiết ức chế sự phát triển của sợi nấm FoA. Môi trường nuôi cấy FoA 7-ngày tuổi có các đĩa sợi nấm dài 5 milimét được đặt trên đĩa Petri với môi trường PDA được bổ sung các hóa chất tinh khiết được liệt kê ở trên ở nồng độ 50, 75 và 100 µg/mL. Các đĩa được ủ trong 5 ngày ở 28 ◦C. Đường kính trung bình của khuẩn lạc được đo ở hai góc vuông được sử dụng để đánh giá khả năng ức chế sự phát triển của sợi nấm FoA. Mỗi lần xử lý bao gồm ba xét nghiệm sử dụng ba chủng FoA khác nhau: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, Bỉ) và FoA Local (Palemeraie of Figuig, Morocco), cũng như đối chứng âm tính sử dụng môi trường chưa được thêm vào.

2.3.3. Khả năng tồn tại của tế bào và hoạt động đáng tin cậy trong 20S

Các nguyên bào sợi ở da người bình thường từ một người đàn ông {{0}}}tuổi (NHDF) (Promocell, Heidelberg, Đức) đã được sử dụng, theo đó các tế bào được đặt ở mật độ 100,{{3 }} tế bào/mL trong RPMI 10 phần trăm được bổ sung 10 phần trăm (w/v) FBS, 1 phần trăm (w/v) L-glutamine, 100 đơn vị/mL penicillin và 100 µg/mL streptomycin. Chúng được giữ trong các đĩa vi giếng 96-màu trắng hoặc trong suốt trong 24 giờ ở nhiệt độ 37 ◦C trong tủ ấm có môi trường ẩm 5% CO2. Đối với thử nghiệm hoạt tính đáng tin cậy, cũng như để đánh giá tác dụng bảo vệ đối với thiệt hại do hypochlorite gây ra, các tế bào sau đó được xử lý bằng vật liệu thử nghiệm (một hợp chất tinh khiết từ 5 đến 50 µg/mL, kiểm soát dương tính ở 0,5 và/hoặc 1 µM, và chiết xuất thực vật trong metanol từ 15 đến 50 µg/mL) trong 24 giờ với tối đa 0,3 phần trăm DMSO ở nồng độ cuối cùng, đồng thời, không thay đổi, liên quan đến đối chứng âm tính. Nghiên cứu tác dụng bảo vệ của chiết xuất TAAR hoặc các hợp chất tinh khiết đối với hoạt động đáng tin cậy có nghĩa là các tế bào nguyên bào sợi sau đó phải chịu 50 µM OCl− trong 35 phút (được chọn là tối ưu, không gây độc tế bào, chất ức chế oxy hóa của điều kiện đáng tin cậy 20S) [19]. Các giai đoạn thử nghiệm sau đây đã được hoàn thành theo phương pháp của nhà cung cấp (Xét nghiệm dựa trên tế bào giống như Proteasome-Glo Chymotrypsin, Promega Corporation, Hoa Kỳ): đã được sử dụng để bình thường hóa xét nghiệm phát quang sinh học tế bào này. Độ lệch chuẩn và huỳnh quang trung bình trong các mẫu ba lần từ hai thử nghiệm riêng biệt (n=6) được hiển thị. Tất cả các phép đo và thử nghiệm độc lập (n=2) đã được thực hiện hai lần.

2.3.4. Tác dụng ức chế đối với tyrosinase của nấm không có tế bào

Để nghiên cứu ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme, các vật liệu thử nghiệm (chất chống oxy hóa tinh khiết hoặc chất chiết xuất từ ​​thực vật trong metanol) đã được ủ trước với enzyme trong đệm phốt phát ở nhiệt độ phòng. Tóm lại, 300 mL dung dịch L-DOPA 5 mM ở dung dịch đệm phốt phát 50 mM (pH 6,5) có hoặc không có vật liệu thử nghiệm ở các nồng độ khác nhau đã được thêm vào một 96-đĩa vi giếng cùng với 100 mL dung dịch tyrosinase của nấm (20 đơn vị). Trong 40 phút, hỗn hợp xét nghiệm được ủ ở 25 ◦C. Sau khi ủ, mức sản xuất dopachrom của hỗn hợp phản ứng được đo bằng đo quang phổ ở bước sóng 492 nm [20]. Đường cong hiệu chuẩn tiêu chuẩn được vẽ bằng cách sử dụng axit gallic (0–1000 µg/mL) (y=−0,087 × cộng 0,45; r2=0,97). Mỗi phép đo và thử nghiệm độc lập (n=2) được thực hiện hai lần.

2.4. Thủ tục phân tích, cách ly và làm sáng tỏ cấu trúc

Rễ đã xay (20 g) được chiết xuất với 200 mL metanol, khuấy trong 24 giờ ở nhiệt độ môi trường, lọc, ly tâm ở 10,000× g trong 15 phút, sau đó cho bay hơi ở 35 ◦C bằng máy quay thiết bị bay hơi chân không. Dịch chiết thô được pha loãng với 20 mL nước cất, chiết lại bằng 2 × 20 mL etyl axetat, sau đó cô bằng hệ thống bay hơi chân không quay ở 35 ◦C. Sản phẩm chính được tinh chế bằng HPLC điều chế sử dụng cột Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 mm, kích thước hạt 7 µm) với cùng điều kiện độ dốc LC được sử dụng ở trên và tốc độ dòng 5 mL/phút. Đỉnh tại RT là từ 38,8 đến 40,8 phút, được thu thập trong khoảng từ 39,2 đến 40,2 phút; toàn bộ khối lượng thu được đã được đông khô để thu được 27 mg hợp chất. Sau đó MS và NMR 1H và 13C đã xác định được nó.

Các phân tích được thực hiện với hệ thống sê-ri LC 1200 có độ phân giải nhanh bằng cách sử dụng máy dò mảng đi-ốt (DAD) dùng để theo dõi quang phổ UV ở bước sóng 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Quá trình phân tách hợp chất được thực hiện trên cột Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 mm × 4,6 mm, kích thước hạt 5 µm) sử dụng gradient 47 phút của amoni axetat 10 mM/axit formic 0,2 phần trăm trong nước (v/v), pH 2,9 ({{ 13}}dung môi A) và hỗn hợp axetonitril/metanol 30/70 (=dung môi B). Tốc độ dòng chảy là 0,8 mL/phút và dung môi B được tăng từ 5 lên 35 phần trăm trong 45 phút và được cân bằng lại trong 2 phút. Trong một chuỗi với DAD, một chuỗi ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) đã được sử dụng cho các phân tích MS (MS/MS) có độ phân giải cao và nhắm mục tiêu song song. Phổ được thu ở chế độ thu âm và độ phân giải cao (4 GHz).

Phổ 1H NMR và 13C NMR được ghi lại trên máy quang phổ Bruker Avance 300 hoạt động ở tần số 300 MHz. Các phân rã cảm ứng tự do được xử lý với bộ MestreNova 5.3.2 NMR từ MestreLab Research SL.

2.5. Phân tích thống kê

Tất cả các thí nghiệm độc lập đã được thực hiện trong ba lần. Tất cả dữ liệu được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± SD. Sử dụng phiên bản 6 của chương trình GraphPad Prism, các kết quả được phân tích bằng phép thử Kruskal–Wallis không tham số cùng với phép thử so sánh bội của Dunn. Giá trị p 0.05 trở xuống được coi là đáng kể.

3. Kết quả và thảo luận

3.1. Tổng hàm lượng phenolic và flavonoit của chiết xuất metanol

Do tính chất oxi hóa khử của chúng, các hợp chất phenolic thực vật đã được phát hiện có nhiều tác động sinh học, bao gồm cả hoạt động chống oxy hóa [21]. Bảng 1 mô tả tổng hàm lượng phenolic trong chiết xuất rễ bằng metanol (500 µg/mL) của các giống ghagras dễ bị nhiễm bệnh (BI) và không bị nhiễm bệnh (BNI) bởi FoA hoặc kháng như Taabdount (TAAR). Nồng độ của chúng thay đổi từ 171 ± 14 đến 253 ± 47 mg axit gallic đương lượng/g. Lượng cao nhất của các hợp chất này được tìm thấy trong giống BNI, trong khi nồng độ thấp nhất đến từ chiết xuất rễ metanol của BI. Số lượng flavonoid trong cùng các chiết xuất này (Bảng 1)) thay đổi từ 240 ± 25 đến 406 ± 66 mg quercetin eq./g, và một lần nữa, lượng cao nhất được quy cho giống BNI. Có sự mất mát khoảng 1/3 tổng số lượng polyphenol và flavonoid giữa các giống không bị nhiễm bệnh (BNI) và các giống bị nhiễm bệnh (BI) hoặc kháng (TAAR) đối với FoA. Do đó, điều đáng chú ý là kiểm tra xem việc mất các hợp chất, được mô tả là quan trọng đối với khả năng chống oxy hóa của thực vật, có thể ảnh hưởng như thế nào đến các hoạt động sinh học mà chúng ta quan tâm.

3.2. Tiềm năng chống oxy hóa của chiết xuất Methanol

Hoạt động nhặt gốc tự do DPPH là một phương pháp được sử dụng rộng rãi để sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa của chiết xuất thực vật [22]. Thử nghiệm này xác định xem các hóa chất chống oxy hóa có trong dịch chiết có khả năng loại bỏ gốc tự do ổn định DPPH hay không. Dữ liệu thử nghiệm (Hình 1) cho thấy rằng tất cả các chiết xuất metanol (ở 100 hoặc 500 µg/mL) có khả năng có tác dụng loại bỏ các gốc tự do với các hoạt động nhặt rác DPPH cao nhất được quan sát thấy trong rễ TAAR (87,0 phần trăm ức chế DPPH). Hoạt động chống oxy hóa dường như không phụ thuộc vào sự hiện diện của tổng lượng hợp chất polyphenolic hoặc flavonoid. Tuy nhiên, hoạt tính tốt hơn của chiết xuất metanol từ rễ TAAR có thể là do có nhiều thành phần cho hydro hơn có trong chiết xuất.

Khả năng khử được đánh giá bằng khả năng chuyển hóa Fe(III) thành Fe(II) của dịch chiết trong metanol. Khả năng khử Fe(III) này có thể là do số lượng và vị trí của các nhóm hydroxyl có trong các hợp chất phenolic và khả năng cho hydro của chúng [23]. Bảng 2 cho thấy các hoạt động khử của chiết xuất metanol từ các mẫu thực vật của chúng tôi so với axit ascorbic như một tiêu chuẩn. Chiết xuất metanol của rễ TAAR chứa hàm lượng khử cao (95 ± 1 mg axit ascorbic đương lượng/g), trong khi hàm lượng thấp nhất thu được từ chiết xuất rễ BNI (27 ± 2 mg axit ascorbic đương lượng/g).

Một phân tích hồi quy đã được thực hiện để tương quan với các kết quả thu được (hệ số tương quan (R)). Mối tương quan tuyến tính đáng kể đã được tìm thấy giữa tổng hàm lượng phenolic và flavonoid (R {0}}.849, p < 0.05) và giữa DPPH và xét nghiệm năng lượng khử (R=0. 816, p < 0,05), nhưng không có sự khác biệt nào giữa hàm lượng phenolic hoặc flavonoid của dịch chiết metanol và hoạt tính chống oxy hóa của chúng. Cuối cùng, tất cả các chất chiết xuất từ ​​metanol thể hiện các hoạt động chống oxy hóa đáng kể chống lại hoạt động nhặt gốc tự do DPPH và thử nghiệm giảm năng lượng, nhưng các hoạt động chống oxy hóa này dường như không liên quan đến tổng hàm lượng phenolic hoặc flavonoid. Do đó, những phát hiện này ngụ ý rằng một loại hóa chất cụ thể, chứ không phải số lượng hợp chất phenolic hoặc flavonoid được tìm thấy trong các chất chiết xuất đa dạng của chúng tôi, rất có thể chịu trách nhiệm cho hoạt động chống oxy hóa của các chất chiết xuất từ ​​thực vật đang được xem xét. Một số thành phần phenolic đã được mô tả trước đây và có hoạt tính cao cũng có thể có tác động đến hoạt động chống oxy hóa của chiết xuất thực vật: Không phụ thuộc vào nồng độ của chúng, các hợp chất phenolic được tìm thấy trong rượu vang đỏ lâu năm có thể biểu hiện các đặc tính chống gốc tự do khác nhau liên quan đến các khía cạnh cấu trúc của chúng [ 24].

Giống kháng TAAR FoA cho thấy hoạt tính chống oxy hóa cao nhất trong số các giống chà là khác nhau. Tham khảo tài liệu, sự phát triển tính kháng ở những cây chà là cụ thể này có thể được cho là do sự gia tăng số lượng các đồng phân vị trí khác nhau của axit caffeoyl shikimic [5].

3.3. Hoạt động Tyrosinase của nấm

Hoạt tính tyrosinase diphenolase của nấm xúc tác quá trình oxy hóa hai dẫn xuất dopaquinone dẫn đến tổng hợp melanin. Các kết quả được trình bày trong Bảng 3 cho thấy khả năng của các hợp chất có trong chiết xuất metanol của TAAR, BI và BNI can thiệp vào quá trình hydroxyl hóa l-DOPA thông qua ức chế hoạt động tyrosinase của nấm. Hơn nữa, những kết quả này cho thấy rằng chiết xuất TAAR trong metanol có hoạt tính cao hơn về mặt thống kê so với chiết xuất BI (p < 0.05) và BNI (p < 0,05) đối với hoạt động tyrosinase của nấm. Vì vậy, khả năng ức chế hoạt động tyrosinase của chất chiết xuất từ ​​rễ chà là dường như đi theo xu hướng tương tự như khả năng chống oxy hóa.

Tyrosinase chủ yếu liên quan đến sắc tố da, mắt và tóc. Thật vậy, tyrosinase là enzyme tạo hắc tố tham gia vào các bước đầu tiên của quá trình sinh tổng hợp melanin và melanin có liên quan đến việc bảo vệ chống lại tia cực tím (UV), bức xạ mặt trời hoặc gamma, giảm tính nhạy cảm của tế bào và khả năng chống lại các enzyme thủy phân của thành tế bào [20]. Ngược lại, việc sản xuất quá nhiều melanin có thể đóng một vai trò trong các dị tật về da hoặc các bệnh nghiêm trọng hơn như ung thư (ví dụ: U ác tính) và dư thừa dopaquinone có thể dẫn đến bệnh thoái hóa thần kinh (ví dụ: bệnh Parkinson) [20,25]. Hơn nữa, quá trình tạo hắc tố đã được báo cáo là tạo ra hydrogen peroxide và các ROS khác, khiến các tế bào hắc tố của con người bị stress oxy hóa ở mức độ cao [26]. Một số hợp chất chống oxy hóa tự nhiên (phenolics, flavonoid và các hợp chất khác) thu được từ thực vật đã ức chế hoạt động của tyrosinase phenolase [27,28]. Ở đây, chiết xuất TAAR dường như có chứa (các) hợp chất dễ ức chế quá trình lão hóa da và hình thành hắc tố.

3.4. Hoạt động đáng tin cậy của chất chiết xuất từ ​​​​rễ cây chà là Methanolic

Đã có báo cáo rằng mức proteasome 20S tăng cao dẫn đến tăng khả năng chịu đựng stress oxy hóa [13]. Do đó, việc điều chỉnh hoạt động proteasome bằng chiết xuất rễ của BI, BNI và TAAR, các giống cây trồng đã được nghiên cứu. Hoạt động đáng tin cậy 20S đo được có liên quan đến hoạt động giống như chymotrypsin (CT-L) trong các tế bào ở độ tuổi NHDF (xem Vật liệu và Phương pháp). Như được minh họa trong Hình 2A, các tế bào được xử lý với 50 µg/mL dịch chiết metanol trong 24 giờ cho thấy sự kích hoạt đáng kể của CT-L đối với dịch chiết BI và TAAR, đồng thời ức chế BNI mà không tạo ra hơn 30 phần trăm độc tính tế bào. Chiết xuất từ ​​rễ TAAR cho thấy khả năng kích hoạt đáng tin cậy hấp dẫn so với 1µM axit lipoic (Ct cộng ) (tương ứng là 212 phần trăm và 248 phần trăm ). Proteasome là một phức hợp proteinase hình trụ chứa lõi gồm bốn vòng xếp chồng lên nhau chịu trách nhiệm loại bỏ proteasome (26S) bị phân hủy bất thường và các protein bị hư hỏng do oxy hóa (phức hợp lõi phân giải protein 20S) (Ciechanover, 1998). Như đã trình bày trong công trình của Hwang [29], rối loạn chức năng proteasome có thể góp phần gây lão hóa da người. Thật vậy, các tế bào bạch cầu lão hóa và sao chép đã được chứng minh là đã làm giảm hoạt động đáng tin cậy cũng như mức độ protein của các tiểu đơn vị đáng tin cậy. Thực tế là cả protein tế bào bị oxy hóa và / hoặc bị hư hỏng tích lũy thường xuyên hơn trong các tế bào này cho thấy rằng con đường thoái hóa protein đáng tin cậy của ubiquitin có liên quan đến quá trình lão hóa nội tại. Hình 2B và C cho thấy khả năng của chiết xuất metanol TAAR trong việc bảo vệ các tế bào ở độ tuổi NHDF khỏi sự ức chế hoạt động đáng tin cậy 20S của chất oxy hóa OCl−. Thật vậy, chất oxy hóa OCl− ức chế 50% hoạt động đáng tin cậy của các tế bào đối chứng (Ct), trong khi chất kích hoạt 20S-proteasome cao nhất (axit lipoic ở 1 µM, Ct cộng với ) với hơn 50% hoạt động ức chế không đảo ngược được sự ức chế của hoạt tính đáng tin cậy 20S của OCl−, trong khi tất cả các nồng độ khác được thử nghiệm (15, 50 và 75 µg/mL) của chiết xuất metanol TAAR dường như đảo ngược sự ức chế này (0 đến 19 phần trăm ức chế). Những kết quả này cho thấy chiết xuất từ ​​rễ TAAR có thể chứa các phân tử có thể làm chậm quá trình lão hóa da không chỉ bằng cách tăng cường hoạt động đáng tin cậy mà còn bằng cách chống lại tác dụng ức chế của các tác nhân oxy hóa. Trong số các phân tử này, axit caffeoyl shikimic có nhiều khả năng nhất, cũng như các hợp chất khác. Ngoài ra, các phân tích LC-DAD-MS (MS) và NMR đã được tiến hành để xác định các hợp chất chính của dịch chiết và sẽ được thảo luận trong phần tiếp theo.

3.5. Phân tích quang phổ

3.5.1. Phân tích LC-DAD-MS của chiết xuất metanol

Nghiên cứu so sánh về rễ cây chà là không cho thấy sự khác biệt về chất lượng, nhưng thay vào đó, sự khác biệt về bán định lượng (trong sắc ký đồ DAD và MS) giữa các giống (Hình 3A, D) đã được ghi nhận ở một mức độ nào đó. Thật vậy, các kết quả hiện tại không cho phép có mối liên hệ giữa tính kháng của cây chà là với sự gia tăng số lượng các đồng phân vị trí khác nhau của axit caffeoyl shikimic vì giống kháng (TAAR) cho thấy mức độ phong phú tương đối thấp nhất của các hợp chất này (Hình 3C). Tất cả ba đồng phân vị trí của axit caffeoyl shikimic (m/z=335.0768 với sai số 1,2 ppm) được xác định bằng quang phổ MS/MS của chúng (Hình S6) với một mảnh ở m/z 179,0340, tương ứng với một đoạn axit caffeic A (C9H7O4) và một đoạn ở m/z 135,0443, tương ứng với quá trình decarboxyl hóa axit caffeic (C8H7O2). Tuy nhiên, một hợp chất khác không tương ứng với caffeoyl axit shikimic (Hình 3C) và có thời gian lưu là 29 phút với m/z=259.0607 (hoặc 373.0543 đối với chất phụ gia TFA), dường như được phân biệt rõ ràng giữa các giống cây trồng khác nhau (Hình 3D). Sự khác biệt trong sự tích lũy hợp chất này trong rễ của các giống cây nhạy cảm và kháng bệnh (0,135 phần trăm ), với tỷ lệ khoảng 1:35 (từ m/z=259.06, dữ liệu MS), có thể giải thích sự khác biệt về sinh học các hoạt động được quan sát đối với chiết xuất metanol của rễ này.

【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】