Cơ chế của Cistanche Deserticola thúc đẩy chức năng đường ruột

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

trừu tượng

Phenylethanoidglycoside(PhGs), một nhóm các hợp chất polyphenol, được coi là một trong những thành phần hoạt tính sinh học chính củaCistanchesa mạcYC Ma (CD), chiết xuất của nó được sử dụng bằng miệng trong y học cổ truyền Trung Quốc. Mặc dù các nghiên cứu dược lý trước đây đã báo cáo rằng PhG có nhiều hoạt động, nhưng cấu trúc vận chuyển đường ruột của chúng vẫn chưa được làm rõ. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã khảo sát khả năng thẩm thấu qua đường ruột của chiết xuất giàu PhG (PRE) từCistancheDeserticolalà một hệ thống tích hợp trong mô hình đơn lớp Caco -2 sử dụng hệ thống xét nghiệm sinh học. Kết quả cho thấy PRE được vận chuyển chủ yếu thông qua khuếch tán thụ động kém hấp thu xuống một gradient nồng độ mà không có dòng chảy, cung cấp cơ sở dược động học cho ứng dụng lâm sàng của PhGs trongCistanche Deserticola. Chúng tôi cũng xác định tính thấm ruột của ba loại chínhPhGs[acteoside (AC), isoacteoside (IS) và echinacoside (EC)]bởi HLPC. Hơn nữa, chúng tôi đã phát triển một phương pháp phát hiện HPLC-huỳnh quang mới để xác định chính xác lượng thông lượng của AC và IS. Đúng như dự đoán, đặc điểm vận chuyển của baPhGsphù hợp với các quy định của PRE, cho thấy rằng hệ thống xét nghiệm sinh học hiện tại là phù hợp và đáng tin cậy để đánh giá các đặc tính vận chuyển của các nhóm hoạt chất (AIG) trong PRE. Hơn nữa, hệ thống này cũng có thể phù hợp với các chất chiết xuất từ ​​thực vật khác có hoạt tính sinh học thích hợp.

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche Desticola có nhiều tác dụng, click vào đây để biết thêm

Giới thiệu

Dòng tế bào Caco -2, có nguồn gốc từ ung thư biểu mô tuyến ruột kết của người, biểu hiện các đặc điểm giống như tế bào ruột. Trong điều kiện bình thường, các tế bào Caco -2 tự biệt hóa với các tế bào trưởng thành và hình thành các đơn lớp nguyên vẹn [1]. Các tế bào lân cận dính vào nhau thông qua các điểm nối chặt chẽ được hình thành ở phía đỉnh của lớp đơn lớp, có thể phân biệt các loại thuốc được vận chuyển thụ động và tích cực qua lớp biểu mô [2]. Do sự giống nhau về hình thái và sinh hóa với các tế bào ruột bình thường, các tế bào đơn lớp Caco -2 đóng vai trò như một mô hình in vitro được chấp nhận tốt để nghiên cứu về tiềm năng hấp thu ở ruột và các đặc tính vận chuyển của thuốc [3, 4].

Ngược lại với hóa chất, chiết xuất thực vật (PE) là hỗn hợp mà hoạt tính sinh học và các thành phần hoạt tính thường không được xác định rõ [5]. Hơn nữa, các đặc tính vận chuyển trong ruột của PE, trái ngược với các đặc tính của các thành phần của nó, có liên quan chặt chẽ đến việc sử dụng lâm sàng. Các phép đo thông lượng cho một mẫu thử nghiệm trên một lớp tế bào Caco -2 thường liên quan đến các phương pháp hóa học, chẳng hạn như HPLC, LC / MS, v.v. Mặc dù các phương pháp này là công cụ mạnh mẽ, chúng phức tạp, tốn thời gian, đắt tiền và đôi khi yêu cầu thiết bị tinh vi. Quan trọng hơn, không một thành phần đơn lẻ hay thiểu số nào có thể phản ánh PE nói chung. Do đó, một cách tiếp cận mới không phụ thuộc vào việc xác định các thành phần cần được thiết lập để xác định và đánh giá các đặc tính vận chuyển của PE.

Cistanchesa mạcYC Ma (CD), một loài thực vật ký sinh, là một vị thuốc cổ truyền phổ biến của Trung Quốc chủ yếu được sử dụng để điều trị chứng thận hư, suy nhược cơ thể và táo bón, và những công dụng này đã được chính thức ghi trong Dược điển Trung Quốc [6]. Phenylethanoid glycoside (PhGs), bao gồm echinacoside (EC), acteoside (AC), isoacteoside (IS), v.v., là một nhóm hợp chất polyphenolic [7]. Chúng được coi là một trong những thành phần hoạt tính sinh học chính củaCistancheloài [8]. Các nghiên cứu dược lý đã chỉ ra rằng hoạt tính sinh học củaPhGsrất đa dạng và bao gồm các tác dụng chống oxy hóa [9], chống mệt mỏi [10], bảo vệ gan [11], điều hòa miễn dịch [12], chống viêm [7, 13] và bảo vệ thần kinh [14]. Tuy nhiên, đặc điểm vận chuyển đường ruột củaPhGschưa được điều tra. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã khám phá khả năng thẩm thấu qua ruột của chiết xuất giàu PhG (PRE) từ CD như một hệ thống tích hợp và khả năng thẩm thấu của ba PhG chính (AC, IS và EC) trong các tế bào Caco -2 biệt hóa. Kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng PRE được vận chuyển chủ yếu thông qua khuếch tán thụ động kém hấp thu xuống một gradient nồng độ mà không có dòng chảy, cung cấp cơ sở dược động học cho ứng dụng lâm sàng của PhG trong CD.

Nguyên liệu và phương pháp

Vật liệu

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98%) được mua từ Must Biotechnology Co. (Thành Đô, Trung Quốc). Môi trường Eagle's biến đổi (DMEM), huyết thanh bò thai (FBS) và các axit amin không thiết yếu (NEAA) của Dulbecco được sản xuất bởi Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6- tấm TranswellTM tốt (chèn diện tích màng tăng trưởng 4,67 cm2) được lấy từ Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Collagen đuôi chuột được lấy từ Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Hoa Kỳ). Tất cả các thuốc thử và hóa chất để phân tích HPLC đều thuộc loại phân tích.

Chuẩn bị PRE từ Cistanche Desticola

Vật liệu CD được làm khô trong không khí được thành bột và chiết xuất bằng phương pháp thấm màu với 70% etanol. Phần giàu PhG được chuẩn bị như đã mô tả trước đây [10] và được chiết bằng rượu n-butyl bão hòa trong nước. Dịch chiết được cô đặc và làm khô dưới áp suất giảm. Phép đo quang phổ UV-nhựa Macroporous [15] đo được hàm lượng PhG là 78,4%. Mẫu cuối cùng thể hiện sản lượng 1,75 phần trăm của nguyên liệu thô theo trọng lượng khô. Mẫu thu được được bảo quản ở -20 độ cho đến khi sử dụng tiếp.

Xác định AC, IS và EC bằng HPLC

Hệ thống HPLC của Shimadzu được trang bị phần mềm giải pháp LC được sử dụng để kiểm tra nội dung của AC, IS và EC trong PRE. Cột Intersil C18 pha ngược (4,6 mm × 25 0 mm, 5 μm) được sử dụng và duy trì ở nhiệt độ phòng. Các pha động là axetonitril và nước có chứa 0. 1 phần trăm axit photphoric (v / v) với rửa giải gradient (Bảng 1) với tốc độ dòng 1,0 ml / phút. Máy dò quang phổ UV được đặt ở 334 nm. Để xác định chính xác thông lượng của AC và IS, chúng tôi đã phát triển một phương pháp phát hiện huỳnh quang HPLC (HPLC-FLD) mới. Sau khi phân tích cấu trúc và quét bước sóng huỳnh quang (dữ liệu không được hiển thị), chúng tôi thu được các điều kiện phát hiện huỳnh quang tối ưu cho AC (Ví dụ: 338 nm, Em: 448 nm) và IS (Ví dụ: 320 nm, Em: 434 nm)

Phương pháp phân tích HPLC đã được xác nhận bằng cách sử dụng các đặc tính hiệu suất sau: tính ổn định, độ tuyến tính, độ nhạy, độ chính xác (sự thay đổi trong và giữa các ngày) và độ chính xác. Các chất phân tích trong đệm vận chuyển được bảo quản ở 25 độ trong bóng tối trong 24 giờ và độ ổn định của chúng được đo. Các chất phân tích có độ ổn định cao khi có mặt vitamin C (0. 4 phần trăm) vì các giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) trong các vùng pic là <3,5 phần="" trăm.="" phương="" trình="" hồi="" quy="" tuyến="" tính,="" hệ="" số="" tương="" quan,="" phạm="" vi="" tuyến="" tính,="" lod="" và="" loq="" cho="" ac,="" is="" và="" ec="" được="" trình="" bày="" trong="" bảng="" 2.="" lod="" (18–3="" 0="" nm)="" và="" loq="" (60–100="" nm)="" các="" giá="" trị="" minh="" họa="" rằng="" phương="" pháp="" hplc-fld="" và="" hplc-uv="" có="" độ="" nhạy="" cao.="" các="" giá="" trị="" rsd="" thể="" hiện="" độ="" chính="" xác="" của="" phương="" pháp="" đều=""><2 phần="" trăm="" đối="" với="" độ="" biến="" thiên="" trong="" ngày="" và="" giữa="" các="" ngày,="" cho="" thấy="" độ="" chính="" xác="" tốt.="" để="" đánh="" giá="" độ="" phục="" hồi,="" ac,="" is="" và="" ec="" đã="" được="" thêm="" vào="" bộ="" đệm="" vận="" chuyển="" để="" mang="" lại="" ba="" mức="" nồng="" độ="" (cao,="" trung="" bình="" và="" thấp).="" các="" giá="" trị="" thu="" hồi="" của="" phương="" pháp="" đối="" với="" chất="" phân="" tích="" được="" tóm="" tắt="" trong="" bảng="" 3.="" độ="" thu="" hồi="" trung="" bình="" nằm="" trong="" khoảng="" từ="" 90,0="" phần="" trăm="" đến="" 96,4="" phần="" trăm,="" cho="" thấy="" độ="" chính="" xác="" tốt.="" kết="" luận,="" các="" phương="" pháp="" hplc="" đã="" thiết="" lập="" là="" thỏa="" mãn="" về="" độ="" tuyến="" tính,="" độ="" nhạy,="" độ="" chính="" xác="" và="" độ="" chính="" xác="" để="" định="" lượng="" ac,="" is="" và="" ec="" trong="" đệm="" vận="">

Xác định PRE bằng hệ thống xét nghiệm sinh học

Xét nghiệm sinh học (tổng khả năng chống oxy hóa) dựa trên xét nghiệm FRAP (khả năng khử sắt / chống oxy hóa) mà chúng tôi đã mô tả trước đây [16] và được xác nhận về độ tuyến tính và độ chính xác (sự thay đổi trong và giữa các ngày). Tính tuyến tính của phương pháp xét nghiệm sinh học được xác định dựa trên các đường chuẩn. Phạm vi nồng độ của độ tuyến tính là 0. 0 625 - 4 0 ug / ml (y=0. 0258x cộng với 0,0968, R 2=0. 996). Độ chính xác của phương pháp xét nghiệm sinh học đã được thiết lập được xác định dựa trên sự thay đổi trong và giữa các ngày để phân tích PRE (10,0 ug / ml). Độ lặp lại trong ngày của phương pháp được xác định dựa trên năm lần xác định liên tiếp trong cùng một ngày. Độ lặp lại giữa các ngày được đo dựa trên năm lần xác định liên tiếp vào ba ngày khác nhau. Các giá trị RSD cho độ chính xác của phương pháp lần lượt là 1,014 phần trăm và 4,72 phần trăm cho độ biến thiên trong ngày và giữa các ngày, cho thấy độ chính xác tốt. Do đó, phương pháp xét nghiệm sinh học đã được thiết lập là thỏa đáng về độ tuyến tính, độ chính xác và độ chính xác để định lượng PRE trong đệm vận chuyển.

Nuôi cấy tế bào

Tế bào Caco {{0}} được nuôi cấy ở 37 độ và độ ẩm tương đối 95 phần trăm trong môi trường chứa 5 phần trăm CO2 và môi trường bao gồm DMEM, 10 phần trăm FBS, 1 phần trăm NEAA, 1 phần trăm L-glutamine, penicillin ( 100 U / ml), và streptomycin (100 ug / ml). Môi trường được thay đổi cách ngày trong quá trình phát triển và biệt hóa của tế bào. Các tế bào được nuôi trong bình nhựa 75- cm2 và được thu hoạch 3–5 ngày một lần với 0,05% EDTA-trypsin. Đối với các thí nghiệm vận chuyển, các tế bào được gieo với mật độ 1 × 105 tế bào / cm2 trên các miếng chèn Transwell phủ collagen. Khoảng 21 ngày sau khi gieo hạt, các lớp đơn lớp được sử dụng cho các thí nghiệm vận chuyển. Tính toàn vẹn của chúng được xác định bằng cách đo điện trở xuyên biểu mô (TEER) trên các lớp đơn lớp với EVOM được trang bị ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA). Các giá trị TEER của lớp đơn lớp Caco -2 cần phải vượt quá 500 O ∙ cm2.

Thử nghiệm vận chuyển

Đơn lớp được rửa bằng đệm vận chuyển (đệm P chứa 1 0 mM HEPES, 1 mM natri pyruvate, 10 mM glucose, 3 mM CaCl2 và 145 mM NaCl, pH 7,4) và sau đó được ủ trước trong 20 phút ở 37 độ. Sau khi loại bỏ đệm vận chuyển, đệm vận chuyển tươi chứa các mẫu thử nghiệm được thêm vào buồng đỉnh (AP) (1,5 ml) trong AP để nghiên cứu định hướng ba bên (BL) hoặc buồng BL (2,5 ml) trong nghiên cứu định hướng BL đến AP. Đối với các thử nghiệm AC, IS và EC sử dụng HPLC, một phần dư (300 ul) được lấy ra khỏi mỗi buồng thu ở các khoảng thời gian khác nhau (30, 60, 90 và 120 phút). Buồng thu được bổ sung cùng một thể tích đệm vận chuyển mới (37 độ) đã được làm nóng trước sau mỗi lần lấy mẫu. Các mẫu thu thập được được bảo quản ở -20 độ để sử dụng tiếp. Để xác định PRE bằng phương pháp phân tích sinh học, chỉ các mẫu ở 120 phút được lấy. Do sự không ổn định của PRE, AC, IS và EC, 0,4 phần trăm (w / v) vitamin C đã được thêm vào để ổn định mẫu nhằm xác định hàm lượng AC, IS và EC bằng HPLC và các mẫu cho PRE thử nghiệm sinh học được thử nghiệm ngay sau khi được lấy mẫu. Giá trị hệ số thấm biểu kiến ​​(Papp hoặc 'Papp) của mỗi mẫu được tính toán.

Phân tích dữ liệu

Giá trị Papp trong hướng AP BL hoặc BLAP của AC, IS và EC được tính toán dựa trên phương trình sau: Papp {{0}} (4Q / 4t) / (AC 0), trong đó Papp là hệ số thấm biểu kiến ​​(cm / s) được xác định bởi HPLC. (4Q / 4t) là tốc độ xuất hiện của hợp chất thử nghiệm (AC, IS hoặc EC) trên phía máy thu (μmol / s); A là diện tích bề mặt của miếng chèn (cm2); C0 là nồng độ hợp chất thử ban đầu ở phía cho (μmol / ml). Cụ thể, đơn vị khối lượng "ug" đã được sử dụng thay vì "μmol" khi các giá trị 'Papp được tính toán. Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SD.

Kết quả

Thành phần Acteoside, Isoacteoside và Echinacoside trong PRE từ Cistanche Deserticola

Vì AC, IS và EC được coi là các PhG có hoạt tính sinh học chính của các loài Cistanche [8], chúng tôi đã phân tích hàm lượng của chúng trong PRE thông qua HPLC-UV. Sắc ký đồ đại diện được thể hiện trong Hình 1. Việc xác định các thành phần này dựa trên việc so sánh thời gian lưu và phổ UV với các chất chuẩn xác thực ở bước sóng 334 nm. Nội dung của AC, IS và EC trong PRE lần lượt là 26,60 phần trăm, 1,84 phần trăm và 32,83 phần trăm. Do đó, ba hợp chất này chiếm 61,27 phần trăm PRE; hơn nữa, các kết quả trên chỉ ra rằng hàm lượng PhG trong PRE là 78,4 phần trăm. Do đó, AC, IS và EC chiếm khoảng 80 phần trăm PhG trong PRE.

Tổng khả năng chống oxy hóa của PRE, AC, IS và EC

Các nghiên cứu về hoạt tính chống oxy hóa của PhG từ CD đã được báo cáo [9], và AC, IS và EC chiếm khoảng 80 phần trăm PhG trong PRE. Do đó, tổng khả năng chống oxy hóa của PRE, AC, IS và EC đã được thử nghiệm và được biểu thị bằng cách sử dụng các giá trị FRAP (× 10–6 mmol). Như thể hiện trong Hình 2, khi giá trị FRAP là 8 × 10–6 mmol, nồng độ cuối cùng của PRE, AC, IS và EC là 6,20 ug / ml, 3,14 ug / ml, 22,92 ug / ml và 4,89 ug / ml, tương ứng, chỉ ra rằng tổng khả năng chống oxy hóa của bốn mẫu này được xếp hạng như sau: AC> EC> PRE> IS. Hoạt tính sinh học của PRE được quy cho các nhóm thành phần hoạt tính của nó (AIG). Đối với khoảng 60 phần trăm PRE, AC và EC cho thấy hoạt động chống oxy hóa tổng thể mạnh hơn PRE và IS. Bởi vì IS (1,84 phần trăm) tạo thành một phần rất nhỏ của PRE, các thành phần khác, chẳng hạn như IS chống oxy hóa yếu, cũng hoạt động rõ ràng trong PRE. Đáng ngạc nhiên, tổng hoạt tính chống oxy hóa khác nhau gần 7- lần giữa AC và đồng phân IS của nó, cho thấy không chỉ số lượng nhóm hydroxyl phenolic [9] mà còn cả vị trí của các nhóm hydroxyl phenol trong phân tử bị ảnh hưởng đến phản -Tác dụng khử độc.

Xác thực các đơn lớp Caco -2

Để xác thực hệ thống đơn lớp Caco -2, các giá trị Papp của propranolol (một điểm đánh dấu được chuyển tốt) và màu vàng Lucifer (một điểm đánh dấu được vận chuyển kém) từ AP đến BL trên các đơn lớp Caco -2 được xác định lần lượt là 1,51 × 10–5 cm / s và 2,8 × 10–7 cm / s, và các giá trị này đồng ý với các giá trị được công bố trong các báo cáo trước đây [17, 18]. Thử nghiệm hoạt động phosphatase kiềm cũng xác nhận rằng các đơn lớp tế bào Caco -2 có thể so sánh về mặt chất lượng với biểu mô ruột non [19]

Tính thẩm thấu của Acteoside, Isoacteoside và Echinacoside

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1. 0 × 10–5 cm / s), trong khi những thuốc hấp thu kém thì thấp (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

Tính thẩm thấu của PRE

Các kết quả trên chỉ ra rằng tổng khả năng chống oxy hóa của PRE ít nhất là do 61,27% AIG từ PRE. Do đó, chúng tôi đã đánh giá TR của PRE dựa trên đường cong nồng độ-hiệu ứng của tổng khả năng chống oxy hóa của nó và tính toán giá trị 'Papp để phản ánh các đặc điểm vận chuyển của PRE. 'Giá trị Papp của PRE cho AP! BL và BL! AP là (2,16 ± 0. 26) × 1 0 - 7 cm / s và (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm / s, tương ứng, chỉ ra rằng hợp chất này có tính thấm kém. Hơn nữa, dòng chảy hoặc vận chuyển tích cực không rõ ràng vì tỷ lệ 'Papp BL với AP /' Papp AP trên BL đối với PRE là 1,45 [20]. Hơn nữa, TR hai chiều của PRE tăng tuyến tính trong khoảng từ 300 đến 900 ug / ml (Hình 5). Sự thiếu ưu tiên định hướng của các kết quả cho thấy rằng sự khuếch tán thụ động là cơ chế vận chuyển chính của PRE.

Thảo luận

So với các sản phẩm thuốc có độ tinh khiết cao, PE nói chung là một hỗn hợp bao gồm hàng trăm thành phần có các đặc tính hóa lý khác nhau. Do đó, PE thực hiện hành động hiệp đồng có hệ thống, đa mục tiêu và đa kênh do AIG phức tạp của chúng [21], cản trở việc phân tích các đặc tính vận chuyển của PE. Để đánh giá các đặc tính vận chuyển của PE một cách khoa học hơn, một số nhà nghiên cứu đã xác định nhiều thành phần, thay vì một thành phần, trong PE [22–24]. Tuy nhiên, một số thành phần hạn chế không thể phản ánh PE nói chung. Tuy nhiên, việc xác định tất cả các thành phần trong PE là không thể. Hơn nữa, nếu các thành phần đa dạng trong PE thể hiện các đặc tính vận chuyển hoàn toàn khác nhau, thì các đặc tính vận chuyển tổng thể của PE sẽ khó xác định.

Trong những năm 1990, hệ thống xét nghiệm sinh học được sử dụng để đánh giá TR của các chất kháng khuẩn [25]. Đến năm 2005, Eguchi và các đồng nghiệp của ông [26] đã đánh giá hoạt tính chống oxy hóa của chiết xuất cà rốt bằng cách sử dụng môi trường BL từ các tế bào Caco -2 đã biệt hóa; cách tiếp cận này thích hợp hơn để phản ánh các tình huống in vivo.

Dựa trên báo cáo trước đây về hoạt động của PhGs [9] và kết quả của chúng tôi (Hình 2), TR của AIG trong PRE có thể được đánh giá bằng cách xác định tổng khả năng chống oxy hóa của môi trường trong buồng thu. Sau các thử nghiệm vận chuyển, chúng tôi nhận thấy rằng TR của PRE tương tự nhau theo cả hai hướng và sự vận chuyển này không bão hòa và hấp thụ kém ('Papp <1. 0="" ×="" 10–6="" cm="" s)="" [3],="" và="" nó="" không="" chỉ="" ra="" dòng="" chảy,="" cho="" thấy="" rằng="" sự="" khuếch="" tán="" thụ="" động="" xuống="" một="" gradient="" nồng="" độ="" là="" cơ="" chế="" vận="" chuyển="" chính="" của="" pre="" (hình="" 5).="" hơn="" nữa,="" các="" đặc="" tính="" vận="" chuyển="" của="" pre="" phù="" hợp="" với="" các="" đặc="" tính="" của="" ac,="" is="" và="" ec,="" các="" thành="" phần="" hiệu="" quả="" thể="" hiện="" hoạt="" động="" chống="" oxy="" hóa="" trong="" pre="" (hình="" 4="" và="" bảng="" 4).="" kết="" quả="" này="" đã="" được="" mong="" đợi="" và="" chỉ="" ra="" rằng="" hệ="" thống="" xét="" nghiệm="" sinh="" học="" hiện="" tại="" là="" thích="" hợp="" và="" đáng="" tin="" cậy="" để="" đánh="" giá="" các="" đặc="" tính="" vận="" chuyển="" của="" aig="" trong="" pre="" trong="" các="" tế="" bào="" caco="" -2="" biệt="">

Trái ngược với giá trị Papp chuẩn, thường được sử dụng để phản ánh sự vận chuyển của một hợp chất đơn lẻ, giá trị 'Papp thu được từ TR dựa trên đường cong hiệu ứng nồng độ có thể không chỉ phản ánh các thành phần xuyên qua các lớp đơn có cấu trúc nguyên vẹn mà còn cũng liên quan đến các yếu tố khác liên quan đến hoạt động đích, chẳng hạn như chất chuyển hóa của các thành phần, các sản phẩm bị phân hủy hóa học, và thậm chí một số cytokine được tiết ra từ tế bào Caco {1}} để phản ứng với kích thích có thể ảnh hưởng đến hoạt tính sinh học mục tiêu. Do đó, đa yếu tố được đề cập ở trên, thay vì chỉ các thành phần nguyên vẹn được vận chuyển, xác định giá trị 'Papp. Do đó, 'Papp có thể tương quan chặt chẽ hơn trong các tình huống của Vivo so với giá trị Papp chuẩn [26]. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã làm rõ bản chất khuếch tán thụ động và kém hấp thu của PRE dựa trên 'giá trị Papp của nó, và bản chất này có thể liên quan đến liều lượng cao và thời gian điều trị lâm sàng dài của CD [27]. Tuy nhiên, những phát hiện này sẽ cung cấp hướng dẫn hệ thống hơn cho các bác sĩ lâm sàng trong việc áp dụng CD khi chỉ xác định được các đặc điểm vận chuyển của hầu hết AIG trong CD, không chỉ PhGs.

Tuy nhiên, vật phẩm hoạt tính sinh học được chọn phải đủ nhạy để được phát hiện trong môi trường của buồng thu, điều này đặt ra một thách thức đối với việc thiết lập hệ thống xét nghiệm sinh học để đánh giá các đặc tính vận chuyển của PE. Hơn nữa, hoạt tính sinh học cũng phải phụ thuộc vào càng nhiều thành phần càng tốt. Trong nghiên cứu của chúng tôi, xét nghiệm tổng khả năng chống oxy hóa thích hợp hơn so với một số phương pháp khác (Hình S1). Nhưng ngay cả như vậy, xét nghiệm của chúng tôi chỉ có thể phát hiện TR của PRE ở 120 phút.

Nói chung, nghiên cứu này đã thiết lập một hệ thống xét nghiệm sinh học mới để đánh giá tính thấm ruột của PRE trong các tế bào Caco -2 đã biệt hóa. Các kết quả thu được cho thấy sự khuếch tán thụ động kém hấp thu xuống một gradient nồng độ mà không có dòng chảy là cơ chế vận chuyển chính của PRE (Hình 5), cung cấp cơ sở dược động học cho ứng dụng lâm sàng của PhGs trong CD. Việc sử dụng một hệ thống xét nghiệm sinh học mới để đánh giá TR và từ đó tính toán giá trị 'Papp để đánh giá đặc tính vận chuyển đường ruột của AIG trong PEs rõ ràng là khả thi. Cách tiếp cận này cũng có thể phù hợp với PE khác với hoạt tính sinh học thích hợp

Thông tin hỗ trợ

S1 Hình. Ảnh hưởng của PRE đối với (A) anion superoxide, (B) gốc hydroxyl, (C) sản phẩm peroxy hóa lipid, và (D) gốc DPPH. Các quy trình khảo nghiệm được thực hiện theo các báo cáo trước đó [1, 2] mà không sử dụng đệm vận chuyển. Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50 phần trăm) và SC50 (nồng độ nhặt rác 50 phần trăm) được tính toán dựa trên các đường cong nồng độ-đáp ứng tiêu chuẩn. (DOCX)

Sự đóng góp của tác giả

Lên ý tưởng và thiết kế các thí nghiệm: YG XC YQ. Thực hiện các thí nghiệm: YG CZ FL LF RC YS. Đã phân tích dữ liệu: CZ YG YQ. Thuốc thử / vật liệu / dụng cụ phân tích đóng góp: RC. Bài báo đã viết: YG YQ

Phòng Trung tâm Nghiên cứu Dược lý và Độc học, Viện Phát triển Cây thuốc, Học viện Khoa học Y tế Trung Quốc & Cao đẳng Y tế Công đoàn Bắc Kinh, Bắc Kinh, Trung Quốc,

Đại học Y khoa Hắc Long Giang, Cáp Nhĩ Tân, Hắc Long Giang, Trung Quốc