Cistanche Total glycoside có tác dụng lên khứu giác không?

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tác dụng của cistanche tổng số glycoside trên các tế bào bao bọc khứu giác của chuột và sự tiết ra các yếu tố dinh dưỡng thần kinh của chúng

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Tổn thương tủy sống (SCI) là một chấn thương nghiêm trọng của trung tâmhệ thần kinh, chiếm {{0}}. 2 phần trăm —0,5 phần trăm tổng số chấn thương. Trong gãy xương cột sống, 16% - 40% là biến chứng do tổn thương tủy sống, thường để lại tàn tật nặng nề, dẫn đến khó khăn trong sinh hoạt, ảnh hưởng đến chất lượng cuộc sống của người bệnh và gây gánh nặng lớn cho gia đình và xã hội.Khứu giáctế bào bao bọc (OECs) là một loại keo thần kinh đặc biệt. Tế bào huyết tương có thể di chuyển vào não vớikhứu giáccác sợi trục thần kinh và có thể tiết ra nhiều yếu tố tăng trưởng như NGF, GDNF, BDNF, NT -3, neuropeptide-Y và S -100. Do những đặc điểm này củakhứu giáctế bào nuôi cấy, OEC được coi là một trong những tế bào hạt giống đầy hứa hẹn cho việc cấy ghép tế bào để sửa chữa SCI. Hiện nay, điều trị SCI trong lĩnh vực y học phục hồi chức năng chủ yếu dựa vào phục hồi chức năng toàn diện. Để tìm ra một phương pháp hiệu quả hơn, nghiên cứu sau đây đã được thực hiện về tác dụng củacistanchetoàn bộglycosidetrên các OEC:

Cistanche tổng glycoside cho các tế bào khứu giác

1 Vật liệu và phương pháp

1.1 Vật liệu thí nghiệm

Chuột Wistar (do Trung tâm Động vật của Đại học Nội Mông cung cấp);cistanchetoàn bộglycoside, Môi trường DMEM / F12, huyết thanh bê thai (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsin, dung dịch D -Hanks, chất chống p75NGFR ở thỏ (Santa Cruz), bộ ELISA (Promega), tủ ấm tế bào (Thermo-HEPA Class 100), kính hiển vi tương phản pha ngược (Olympus CKX41, Nhật Bản), bàn làm việc siêu sạch (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Công ty, SW-CJ -2 FD), enzyme máy phân tích nhãn (Wellscan MKH), máy đo lưu lượng tế bào, v.v.

1.2 Phương pháp nghiên cứu

1.2.1 Nuôi cấy, làm sạch và xác định OECs: Chuột Wistar được hiến tế bằng cách chặt đầu và ngâm rượu trong 5 phút. Hộp sọ phía trước được mở ra để lộkhứu giácbóng đèn tròn. Cả haikhứu giácbóng đèn đã được loại bỏ hoàn toàn dưới kính hiển vi soi. Rửa trong dung dịch D-Hanks; cắtkhứu giácbầu bằng kéo vi phẫu, thêm 2ml 0. 25 phần trăm pancreatin và ủ ở 37 độ trong 20 phút; thêm môi trường nuôi cấy D MEM / F12 chứa 10% huyết thanh bê vào ống ly tâm 2ml Sự tiêu hóa được kết thúc ở giữa; pipet bus hút phần mô chưa được tiêu hóa hoàn toàn ở tốc độ 800 vòng / phút và ly tâm trong 5 phút, loại bỏ phần nổi phía trên; cuối cùng đã sử dụng môi trường đã được điều hòa (20% FCS cộng với 20|i, mol / LForskolin cộng với 20|ig / mlBPE cộng với DMEM / F12) Làm cho nó thành huyền phù đơn bào lx 107ml, cấy nó vào bình nuôi cấy tế bào phủ polylysine, đặt nó trong tủ ấm 37 độ, 5% CO2, và sau đó thêm Ara- c Quá trình lọc được thực hiện ở 36 giờ. Sử dụng kháng thể thứ cấp IgG của dê kháng p75E và FITC trên thỏ để xác định tế bào mô hóa miễn dịch và quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang.

1.2.2 Sử dụng MTT và phương pháp đo tế bào dòng chảy để xác định ảnh hưởng củacistanche tổng số glycosidetrênkhứu giácủ tế bào: cấy các tế bào nuôi cấy và tinh sạchkhứu giácủ kín các ô trong một đĩa giếng 96- ở 1X106 và thêmcistanche tổng số glycoside(nồng độ tác dụng là Ijig / ml, 10mg / ml, 100mg / ml), đo giá trị OD và đo lưu lượng tế bào sau 24h tác dụng. Thiết lập nhóm Kiểm soát vàCistanche tổng số glycosidecác nhóm nồng độ khác nhau: Nhóm A (Nhóm chứng): Môi trường nuôi cấy chứa huyết thanh được sử dụng làm đối chứng âm tính; Nhóm B (cistanche tổng số glycosidenhóm nồng độ thấp: llig / ml); Nhóm C (nồng độ trung bình của cistanche tổng glycoside: L10jxg / MK); Nhóm D (cistanche tổng số glycosidenhóm nồng độ cao: 100|xg / mlo): 15 con chuột trong mỗi nhóm.

1.2.3 Xác định hàm lượng yếu tố dinh dưỡng thần kinh trong dịch nổi bằng ELISA: cấy dịch nuôi cấy và tinh sạchkhứu giácủ kín các ô trong một đĩa giếng 6- ở 1x106, thêmcistanche tổng số glycoside(cùng nồng độ như trên) sau 24 giờ và tác dụng trong 24 giờ, và thu riêng phần nổi phía trên, Lưu tại -80 Dài. Hàm lượng các yếu tố tăng trưởng thần kinh trong dịch được xác định bằng phương pháp ELISA.

1.3 Phân tích thống kê

Dữ liệu trong nghiên cứu này được coi là dữ liệu đo lường và dữ liệu thu được được biểu thị dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn và phần mềm thống kê SPSS 11. 0 được sử dụng để phân tích thống kê. Dữ liệu thu được được phân tích bằng phân tích phương sai, và P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 kết quả

2.1 Tác dụng củacistanchetổng số glycoside trênkhứu giáclàm nóng các tế bào

2.1.1 Kết quả xác định theo phương pháp metyl oxazolyl tetrazole (MT): Nhóm A: 0. 617 ± 0. 149; Nhóm B: 0. 589 ± 0. 147; Nhóm C: 0. 761 ± 0. 138; Nhóm D: 0. 732 ± 0. 234. So sánh giữaCistanche tổng số glycoside group (B) and Control group (A), P>0. 05, sự khác biệt không đáng kể;Cistanche tổng số glycosideNhóm nồng độ 10mg / ml, 100mg / ml (C, D) so với nhóm đối chứng (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Kết quả của phép đo tế bào dòng chảy được thể hiện trong Hình 1. So với nhóm Đối chứng,cistanche tổng số glycosidenhóm này cao hơn nhóm Đối chứng và tỷ lệ tế bào apoptotic thấp hơn nhóm Đối chứng.

2.2 Kết quả xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA)

Kết quả xét nghiệm cho thấy, hàm lượng yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc tế bào thần kinh đệm (GDNF): trước khi dùng thuốc: 302,1 ± 16,6 pg / ml, nhóm A: 340,5 ± 13,2pg / ml; nhóm B: 333,2 ± 23,6pg / ml; Nhóm C: 355,2 ± 17,6pg / ml; Nhóm D; 379,2 ± 15,3pg / ml. So với trước khi quản lý, hàm lượng GDNF đã được tăng lên đáng kể; so với nhóm Kiểm soát (A), nội dung GDNF củaCistanche tổng số glycosideNhóm nồng độ 100mg / ml (D) được tăng lên đáng kể.

3 Thảo luận

Khó khăn trong việc tái tạo các sợi trục là một trong những nguyên nhân chính khiến bệnh nhân khó phục hồi sau chấn thương tủy sống. Các OEC có vai trò trong việc tái tạo các sợi trục thần kinh trung ương mà các loại tế bào khác khó có thể thay thế được. Trong những năm gần đây, nghiên cứu vềkhứu giácgiam giữ các tế bào đã trở thành một điểm nóng.Khứu giáctế bào bao bọc là một loại tế bào thần kinh đệm đặc biệt có các đặc điểm của tế bào Schwann và tế bào hình sao. Chúng bắt nguồn từkhứu giácmàng đáy và được phân bố rộng rãi trên bề mặt củakhứu giácniêm mạc,khứu giácthần kinh, vàkhứu giácbóng đèn tròn. Nó có khả năng phân chia và tái tạo cho sự sống và có thể đi kèm vớikhứu giáccác sợi trục thần kinh để di chuyển vào não. Các sợi trục củakhứu giácdây thần kinh có thể đi qua điểm nối giữa hệ thống thần kinh ngoại vi và hệ thống thần kinh trung ương 30-60 ngày một lần, phát triển lại thànhkhứu giácvỏ bọc và thiết lập các kết nối synap4.Khứu giáccác tế bào bao bọc có thể tiết ra nhiều yếu tố tăng trưởng như NGF, BDNF, GDNF, NT -3, neuropeptide-Y và S -100. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng yếu tố tăng trưởng thần kinh (NGF) có thể ngăn chặn các tế bào thần kinh nhân đỏ tủy sống bị teo và tăng cường sức mạnh của ống tủy sống Nảy mầm và thúc đẩy sự tái tạo của đường dẫn thần kinh tủy sống nhân đỏ; cả yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc từ não (BDNF) và neurotrophin -3 (NT -3) đều có thể ngăn chặn quá trình chết rụng tế bào tủy sống nhân đỏ ở chuột trưởng thành bị tổn thương sợi trục và giải cứu các tế bào thần kinh chết và thúc đẩy tái tạo trục P. Thêm vao Đoa,khứu giáctế bào bao bọc cũng biểu hiện các yếu tố khác trên màng tế bào của chúng, chẳng hạn như yếu tố bám dính tế bào thần kinh (N-CAM), có liên quan đến sự kết dính tế bào và sự phát triển sợi trục. Do những đặc điểm này củakhứu giáctế bào nuôi cấy, OEC được coi là một trong những tế bào hạt giống đầy hứa hẹn cho việc cấy ghép tế bào để sửa chữa SCI.

Các thành phần hóa học củaCistanchechủ yếu bao gồm các glycosid phenylethanoid, iridoids, các thành phần dễ bay hơi, lignans, polysaccharid và alkaloid. Nghiên cứu cho thấy rằngCistanchevà các thành phần hóa học của nó có tác dụng bảo vệ thần kinh. Deng và cộng sự. đã nghiên cứu ảnh hưởng của tubulosa B đối với quá trình apoptosis của tế bào thần kinh SH-SY5Y gây ra bởi yếu tố hoại tử khối u (TNF). Kết quả cho thấy sau khi 100ug / The SH-SY5Y tế bào thần kinh sau 36 giờ điều trị TNF bằng L cho thấy các đặc điểm tự chết điển hình, trong khi điều trị bằng tubulin B trong 2 giờ có thể làm giảm đáng kể quá trình tự chết do TNF gây ra. Ngoài ra, các nghiên cứu cũng chỉ ra rằng glycoside phenylethanoid có thể ức chế quá trình chết rụng của tế bào hạt tiểu não chuột bằng cách ức chế caspase -3 và caspase -8, và chống lại bệnh đen ở chuột C57 do methyl phenyl tetrahydropyridine (MPTP) gây ra. Sự tổn thương của các tế bào thần kinh dopaminergic chất lượng có tác dụng bảo vệ. Không chỉ vậy màCistanchecũng có thể làm giảm bớt các thiệt hại khác nhau như thiếu máu cục bộ tái tưới máu của hệ thần kinh. Thí nghiệm chấn thương do thiếu máu cục bộ não trên chuột cho thấy phạm vi nhồi máu trong 24 giờ và 48 giờ sau khi thiếu máu cục bộ ở nhóm tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ trung bình là 72,98 phần trăm và 60,45 phần trăm. Ngược lại,cistanchetổng số glycoside nhóm liều lượng lớn, trung bình và thấp (25 0. 0 mg · kg / d; 125,0mg · kg / d; 62,5mg · kg / d) tương ứng có thể tạo ra não của chuột sau khi tái tưới máu thiếu máu cục bộ não 24h Kích thước ổ nhồi máu giảm xuống còn 25,94 phần trăm, 25,81 phần trăm và 31,13 phần trăm, và kích thước nhồi máu não giảm xuống 22,14 phần trăm, 20,06 phần trăm và 22,27 phần trăm sau 48 giờ. Có một sự khác biệt đáng kể giữa hai loại, cho thấy tác dụng ức chế đáng kể đối với quá trình apoptosis của tế bào thần kinh.

Trong nghiên cứu này, các nồng độ khác nhau củacistanche tổng số glycosideđã được áp dụng cho các OEC. Phương pháp MTT và phép đo lưu lượng tế bào xác nhận rằng 10mg / ml100mg / mlcistanche tổng số glycosidecó thể thúc đẩy sự gia tăng củakhứu giácbảo quản tế bào. Kết quả đo tế bào dòng chảy cho thấycistanche tổng số glycosidecó thể thúc đẩy sự gia tăng củakhứu giácbao bọc tế bào Nó chủ yếu thúc đẩy sự gia tăng của chu trình G1 củakhứu giáctế bào sinh tinh và giảm rõ rệt tế bào apoptotic. Vì vậy,Cistanche tổng số glycosidekhông chỉ có thể thúc đẩy sự gia tăng củakhứu giácbao bọc tế bào mà còn làm tăng hoạt động của tế bào và ức chế quá trình apoptosis của chúng. Thử nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme chứng minh rằngCistanche tổng số glycosidecó thể thúc đẩy đáng kể việc tiết ra GDNF bằng cáchkhứu giácbảo quản tế bào. Các kết quả trên cung cấp cơ sở thực nghiệm cho ứng dụng lâm sàng củaCistanche tổng số glycoside.

Người giới thiệu

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng cuộc sống của bệnh nhân tổn thương tủy sống trong quá trình phục hồi chức năng [J]. Tạp chí Y học Phục hồi chức năng Trung Quốc, 2009, 4 (24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria vàkhứu giáccác tế bào bao bọc bò biểu hiện sự tích hợp và di chuyển khác biệt và thúc đẩy sự nảy mầm của sợi trục lớn trong tủy sống bị tổn thương [J]. J Neurosci, 2005.25 (46): 10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. tế bào bảo quản khứu giác: vai trò của chúng trong việc sửa chữa hệ thần kinh trung ương [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37 (4): 693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Đa năng của tinh khiết. cấy ghép tế bào cơ bản glucose trongkhứu giácbiểu mô [J]. J Comp Neurol, 2004, 46914): 457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. Tế bào marostromal biểu hiện BDNF; hỗ trợ sự phát triển của sợi trục rộng rãi tại các vị trí d tổn thương tủy sống [J]. Exp Neurol, 2005,191 (2): 344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Tác dụng bảo vệ của tubulosa B đối với quá trình chết rụng do TNF gây ra trong các tế bào thần kinh [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004,25 (102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.PhenylethanoidglycosidetừCistanchessalsa ức chế quá trình apoptosis do ion 1- metyl -4- phenylpyridinium gây ra trong tế bào thần kinh [J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1): 59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Tác dụng bảo vệ thần kinh