Da đóng một vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh nhiệt độ cơ thể, cảm nhận cơn đau và áp lực

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

TRỪU TƯỢNG

Tiểu sử:Đậu xanh thuộc họ cà phê arabica L. Họ: Rubiaceae là một nguồn giàu polyphenol có tác dụng ngăn ngừa quá trình oxy hóa gây hại cho da. Trong nghiên cứu này, Liposome được bào chế như chất mang thuốc để tăng cường tính thấm qua da của polyphenol để dùng tại chỗ. Nguyên liệu và phương pháp: Chiết xuất hạt cà phê xanh được chuẩn bị bằng cách thay đổi tỷ lệ metanol và nước. Phân tích phytochemical và đánh giá chất chống oxy hóa trong ống nghiệm được thực hiện trên tất cả các chiết xuất để chọn ra chiết xuất tốt nhất cho các nghiên cứu tiếp theo. Khả năng gây độc tế bào (xét nghiệm MTT) và hoạt tính chống elastase của dịch chiết đã chọn được đánh giá trên các dòng tế bào L929 bằng cách sử dụng máy đo dòng chảy. Các liposome của dịch chiết được chuẩn bị bằng phương pháp hydrat hóa màng mỏng và được tối ưu hóa bằng cách thay đổi tỷ lệ phosphatidylcholine thành cholesterol và tăng dần lượng dịch chiết. Công thức liposomal được chuyển đổi thành gel bằng cách sử dụng carbopol "974P làm chất tạo gel. Hỗn dịch liposomal đã chuẩn bị và gel liposomal được đánh giá cho các thông số công thức khác nhau. Kết quả: Kết quả phân tích phytochemical, thử nghiệm chất chống oxy hóa trong ống nghiệm và đánh giá trong ống nghiệm Các dòng tế bào L929 kết luận rằng 25% chiết xuất metanol là không độc với hàm lượng phenol cao nhất và thể hiện hoạt tính kháng men gan tốt. Hiệu suất bao bọc của axit chlorogenic trong công thức liposom được tối ưu hóa là 75%. Gel liposomal cho thấy sự giải phóng thuốc liên tục lên đến 12 giờ so với 6-7 giờ của công thức thông thường. Kết luận: Công thức gel dựa trên chất béo chứa chiết xuất hạt cà phê xanh có thể đóng vai trò như một chất mang tiềm năng cho các tác dụng chống lão hóa.

Từ khóa:Hạt cà phê xanh (GCB), Axit chlorogenic, Chiết xuất, Liposome, Chất chống oxy hóa, Chống lão hóa.

GIỚI THIỆU

Da đóng một vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh nhiệt độ cơ thể, cảm nhận đau đớn và áp lực, và hoạt động như một rào cản quan trọng chống lại ô nhiễm môi trường làm cho da lão hóa rất rõ ràng.1 Da tiếp xúc lâu dài với bức xạ tia cực tím tạo ra các gốc tự do gây ra stress oxy hóa trên da dẫn đến sự phát triển của quá trình sạm da, cháy nắng, hình thành hắc tố, ức chế miễn dịch và hình thành ung thư.² Các gốc tự do là các phân tử oxy cực kỳ phản ứng, tham gia vào việc hình thành các liên kết chéo với các phân tử collagen dẫn đến mất độ đàn hồi của da. 3 Lão hóa biểu hiện bằng chảy xệ, mỏng, khô và đốm trên da. Vì vậy, với mong muốn trông trẻ trung, các sản phẩm chống lão hóa đang có nhu cầu rất lớn. Chất chống oxy hóa có nguồn gốc thảo dược đã trở nên quan trọng trong ngành công nghiệp mỹ phẩm. Chất chống oxy hóa giúp sửa chữa và ngăn ngừa thiệt hại do oxy hóa gây ra bởi các gốc tự do. Hoạt động chống oxy hóa của các loại thảo mộc chủ yếu là do tính chất oxy hóa khử của các hợp chất phenolic.

Hạt cà phê xanh (Coffea arabica L, họ Rubiaceae) là một nguồn giàu polyphenol như axit chlorogenic và các hợp chất liên quan của nó như axit caffeic, axit coumaric và axit ferulic giúp ngăn ngừa da khỏi bị oxy hóa. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng các chất chiết xuất từ ​​C. arabica được tìm thấy có khả năng kháng khuẩn, 5 kháng vi-rút, 6 chống viêm, 7 chữa lành vết thương trên da và 'giảm tổn thương oxy hóa đối với các đại phân tử? và ức chế hoạt động biểu hiện metalloproteinase.10

Axit chlorogenic, hợp chất polyphenolic chính của hạt cà phê xanh có đặc tính chống oxy hóa và làm giảm sắc tố da, đồng thời nó ức chế tổn thương da do tia cực tím gây ra. I2 Theo các nghiên cứu khoa học, hạt cà phê xanh chứa một lượng axit chlorogenic cao hơn so với hạt cà phê rang và các loại thực vật khác. "3

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

Việc cung cấp polyphenol qua da không hiệu quả do khả năng thâm nhập hạn chế. Do đó, cần có cơ sở công thức hoặc các chất tăng cường thâm nhập để tăng cường khả năng thâm nhập của nó. "Vì vậy, liposome được chọn làm chất mang thuốc vì chúng có bản chất là lưỡng tính và các phân tử ưa nước có thể dễ dàng được nhúng vào các lớp kép đồng tâm. Liposome tương tự về mặt sinh lý với màng tế bào là không - có bản chất độc hại. gel chứa liposome chiết xuất từ ​​hạt cà phê xanh được sử dụng như một công thức mỹ phẩm chống oxy hóa để chống lão hóa.

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu

Hạt cà phê xanh arabica L được lấy từ thị trường địa phương của Mumbai vào tháng 8 năm 2019 và đã được chứng thực bởi Tiến sĩ Harshad M. Pandit. Nguyên Hiệu trưởng và Phó Giáo sư Thực vật học, Cao đẳng Guru Nanak Khalsa, Mumbai, Ấn Độ. Phosphatidylcholine được mua từ HiMedia Laboratories Pvt Ltd, Cholesterol 99% được mua từ Loba Chemie Pvt Ltd, 2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl (DPPH) và axit chlorogenic được mua từ Otto Chemie Pvt Ltd, Mumbai . Axit gallic và axit Ascorbic được mua từ SD Fine Chemicals Ltd, Mumbai. Tất cả các hóa chất được sử dụng trong nghiên cứu này đều thuộc loại AR. Liposome được sản xuất bằng cách sử dụng máy bay hơi Rotary, Rotaeva, Equitron và Máy quang phổ nhìn thấy được tia UV, Shimadzu 1800 được sử dụng để đánh giá liposome.

Cistanche có thể chống lão hóa

Phương pháp

Phương pháp khai thác

Hạt cà phê xanh dạng bột được khử chất béo bằng ete dầu mỏ 40-60 độ (1: 6 phần trăm w / v) trong 3 giờ trong thiết bị soxhlet. Bột cà phê xanh đã khử chất béo được chiết xuất bằng các dung môi khác nhau như nước, 25% metanol, 50% metanol, 75% metanol và 100% metanol trong 2 giờ bằng hệ thống soxhlet. Các chất chiết thu được được cô trong một đĩa sứ trên nồi cách thủy điện ở 80 độ để loại bỏ dung môi. Các chất chiết đã chuẩn bị được sử dụng để phân tích định tính và định lượng.

Tổng nội dung phenolic

Tổng hàm lượng phenol được xác định bằng phương pháp thuốc thử Folin-Ciocalteu sử dụng quy trình chuẩn. Axit gallic được sử dụng làm chất chuẩn và tổng hàm lượng polyphenol được biểu thị bằng mg / g axit gallic đương lượng (GAE) từ đường chuẩn của axit gallic.16

Lớp phủ quang phổ

Phương pháp đo phổ UV được sử dụng để xác định sự hiện diện của axit chlorogenic trong dịch chiết. Để chuẩn bị dung dịch tiêu chuẩn, Img / ml axit chlorogenic tiêu chuẩn được hòa tan trong dung dịch đệm phosphat và pha loãng thêm được chuẩn bị để có 10 ug / ml dung dịch tiêu chuẩn. Đối với dung dịch mẫu, 25% dịch chiết metanol 1 mg / ml được hòa tan trong dung dịch đệm photphat và pha loãng thêm được chuẩn bị để có 10 ug / ml dung dịch chuẩn. Phổ phủ của cả hai dung dịch thu được bằng phép đo quang phổ UV-Vis.

Định lượng axit chlorogenic trong mỗi dịch chiết Chuẩn bị dung dịch chuẩn

Axit chlorogenic tiêu chuẩn được hòa tan trong các dung môi như nước, 25% metanol, 50% metanol, 75% metanol và 100% metanol. Để giảm sai sót trong quy trình chuẩn bị, dung dịch axit chlorogenic 10 ppm được chuẩn bị trong mỗi dung môi trên, và sau đó pha loãng tương ứng từ nồng độ 2 đến 10 ppm được chuẩn bị. Đồ thị tuyến tính được thực hiện bằng cách ghi lại độ hấp thụ ở bước sóng 324 nm sử dụng máy quang phổ UV-Vis.

Chuẩn bị dung dịch mẫu

Để chuẩn bị dung dịch mẫu, các chất chiết được hòa tan trong dung môi tương ứng của chúng và tạo ra dung dịch 10 ppm. Độ hấp thụ của dung dịch mẫu được ghi lại ở bước sóng 324 nm bằng máy quang phổ UV-Vis. Độ hấp thụ thu được được ngoại suy trong đồ thị tuyến tính để tìm ra nồng độ của axit chlorogenic trong mỗi dịch chiết.

Xác định các hoạt động chống oxy hóa

Thử nghiệm chất chống oxy hóa PDF (2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl) Hoạt động thu gom triệt để của các chất chiết xuất trên các gốc DPPH được khảo sát bằng phương pháp tiêu chuẩn sau. "Axit ascorbic được sử dụng làm chất chuẩn. Thử nghiệm được thực hiện trong ba lần. Phần trăm hoạt động thu dọn gốc DPPH được vẽ biểu đồ dựa trên mỗi nồng độ chiết xuất và IC được xác định.

Hoạt động thu gom gốc oxit nitric được nghiên cứu bằng cách sử dụng phản ứng Griess Illosvoy.đế chế mất tích cistanchel8 Axit ascorbic được sử dụng làm chất chuẩn. Thí nghiệm được thực hiện trong ba lần. Phần trăm hoạt động thu dọn gốc oxit nitric được vẽ biểu đồ dựa trên mỗi nồng độ chiết xuất và Phần trăm ức chế IC đối với cả hai nghiên cứu chống oxy hóa được tính theo công thức được đề cập dưới đây Hoạt động thu gom được biểu thị bằng phần trăm ức chế được tính theo công thức sau:

Xác định khả năng sống của tế bào bằng Thử nghiệm MTT Chiết xuất hạt cà phê xanh viz 25 phần trăm chiết xuất metanol đã được sàng lọc để nghiên cứu độc tính tế bào đối với các dòng tế bào L929. mật độ tế bào (20, 000 ô trên mỗi giếng), không có chất kiểm tra. Các tế bào được phép phát triển trong khoảng 24 giờ. Thêm nồng độ thích hợp của chất thử (25% dịch chiết metanol), ủ đĩa trong 24 giờ ở 37 độ trong môi trường 5% CO, và môi trường đã qua sử dụng được loại bỏ. Thuốc thử MTT được thêm vào nồng độ cuối cùng là (0,5mg / mL) tổng thể tích và các đĩa được ủ trong 2-3 giờ trong điều kiện tối. 100 ul DMSO được thêm vào sau khi loại bỏ thuốc thử MIT và lắc nhẹ. Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 570nm và 630nm bằng máy quang phổ trên đầu đọc ELISA. Giá trị IC.o được xác định bằng cách sử dụng phương trình hồi quy tuyến tính. Các công thức được sử dụng cho nghiên cứu:

Xác định hoạt động Anti Elastase

Các tế bào được nuôi cấy ở mật độ 3 × 1 0 5 tế bào / 2 ml và được ủ trong tủ ấm CO trong 24 giờ ở 37 độ. 1 Đối với nghiên cứu chống elastase, các tế bào được xử lý bằng 25 0 uM epigallocatechin gallate (EGCG) được sử dụng làm đối chứng dương tính, các tế bào được xử lý bằng 2 0 0 ug / ml 25% dịch chiết metanolic được sử dụng làm mẫu thử (Bảng 6), và các tế bào chỉ với môi trường nuôi cấy được sử dụng làm đối chứng âm tính và được ủ trong 2ml môi trường nuôi cấy trong 24 giờ. Các ống này được ly tâm trong 5 phút ở 300x g ở 25 độ và các tế bào được rửa bằng PBS. 0,5 ml dung dịch BD Cytofix / Cytoperm được thêm vào sau khi loại bỏ PBS và các ống được giữ nguyên trong 10 phút. 0,5 phần trăm albumin huyết thanh bò (BSA) trong 'S [PO OU] USEM Ol pes sem op on phần trăm IO pue SEd 20 μL kháng thể đơn dòng liên hợp chống chuột bạch cầu trung tính Elastase / ELA2 Alexa Fluor® 647- được thêm vào, trộn lẫn và ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng trong điều kiện tối. Các tế bào được xử lý bằng 0,1% natri azit và 0,5 ml PBS và được phân tích bằng phương pháp đo lưu lượng tế bào với kích thích và phát xạ lần lượt là 650nm và 668nm. Trong nghiên cứu này, các hợp chất thử nghiệm cụ thể là chiết xuất hạt cà phê xanh (25 phần trăm chiết xuất methanolic) và Epigallocatechin gallate (EGCG) tiêu chuẩn đã được sử dụng để đánh giá tác động của chúng đối với biểu hiện ELA -2 (kháng thể liên hợp của chuột chống elastase ở người) trong tế bào L929 các dòng.

Chuẩn bị hạt cà phê xanh chiết xuất liposome nạp

Phương pháp hydrat hóa màng mỏng như được mô tả bởi Bangham et al.1 độ đã được sử dụng để tạo ra liposome. Hỗn hợp lipid được chuẩn bị bằng cách hòa tan phosphatidylcholine và cholesterol trong cloroform và metanol (2: 1) trong bình đáy tròn (RBF) và thêm các hạt thủy tinh để tạo màng đồng nhất. RBF được gắn vào thiết bị bay hơi chớp quay (Roteva, phương trình) và cho phép quay ở tốc độ 80 vòng / phút trong nồi cách thủy điều nhiệt ở 40 độ. Các dung môi hữu cơ được loại bỏ bằng cách sử dụng chân không chậm dẫn đến sự hình thành màng lipid đồng nhất 100% trên thành bình. Phim được để khô LH để loại bỏ hoàn toàn các dung môi hữu cơ. Màng lipid khô được ngậm nước bằng dung dịch đệm photphat (pH: 5,4) có chứa chiết xuất hòa tan (25% chiết xuất metanol) và sau đó RBF được quay với tốc độ 150 vòng / phút trong nồi cách nhiệt được duy trì ở 46 độ cao hơn nhiệt độ chuyển tiếp của lipid. Tiếp tục quay trong 60 min cho đến khi thu được huyền phù đồng nhất. Các liposome được tạo ra bằng cách sử dụng phương pháp này có kích thước lớn và không đồng nhất, do đó, phương pháp sonication được sử dụng trong 30 phút để giảm kích thước liposome. Hỗn dịch liposomal dựa trên chiết xuất hạt cà phê xanh được để yên trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng để đảm bảo hydrat hóa hoàn toàn. Hỗn dịch liposom được bảo quản trong chai thủy tinh màu hổ phách trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng tiếp.

Đặc điểm của liposome

Sau đây là các thông số mà các liposome đã chuẩn bị được đặc trưng cho

Xác định hiệu quả đóng gói Máy quang phổ UV-Vis được sử dụng để ước tính hiệu quả đóng gói của axit chlorogenic trong liposome chứa chất chiết xuất từ ​​hạt cà phê xanh. Độ hấp thụ của axit chlorogenic còn lại trong phần nổi sau khi ly tâm được đo ở bước sóng 324 nm bằng máy quang phổ UV-Vis.Sử dụng phần flavonoid tinh khiết vi mô 1000 mgSau đó, nồng độ được tính toán từ đồ thị hiệu chuẩn thu được đối với axit chlorogenic tiêu chuẩn.

Tổng lượng thuốc được thêm vào Kính hiển vi quang học

Một giọt huyền phù liposom được đặt trên lam kính sạch và quan sát dưới công suất 45X và 100X của kính hiển vi quang học (kính hiển vi Motic). Xác định kích thước mụn nước, chỉ số phân tán đa sắc (PDI) và khả năng Zeta

Kích thước mụn nước và Chỉ số phân tán đa sắc được phân tích bằng cách sử dụng thiết bị tán xạ ánh sáng động với hệ thống kiểm tra vi tính (máy phân tích kích thước hạt Malvern). Các lô liposom mới chuẩn bị được pha loãng theo tỷ lệ 1: 1 0 0 với nước khử ion. Tất cả các phép đo được thực hiện ba lần ở 25 ± 0,5 độ. Hỗn dịch liposom được pha loãng với nước khử ion và điện thế zeta được xác định bằng cách sử dụng Malvern Zetasizer.

Phân tích TEM bằng kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) được thực hiện để tối ưu hóa huyền phù nạp thuốc bằng kính hiển vi điện tử truyền qua (Tecnai T20,200Kev, FEI). Một giọt huyền phù được đặt với sự hỗ trợ của micropipette trên lưới. Lưới đã được làm khô tốt. Lưới sấy khô chứa mẫu bị bắn phá bằng các điện tử được gia tốc ở 200 VK. Sau đó, kích thước túi và hình thái liposom được hiển thị bằng TEM dưới chân không (Hình 1). Chuẩn bị Liposomal Gel

Chiết xuất hạt cà phê xanh chứa gel liposomal được điều chế bằng cách sử dụng cơ sở gel carbopol @ 974P. Chính xác 0. 5% carbopol @ 974P được cân và giữ để hydrat hóa trong nước cất hai lần có chứa chất bảo quản qua đêm. Các viên liposomal thu được sau khi ly tâm được phân tán trong nước cất bằng sóng siêu âm và được thêm vào dung dịch carbopol ngậm nước có khuấy. Sự nổi lên được tạo ra bằng cách trung hòa sử dụng triethanolamine (TEA). Gel được đánh giá về màu sắc, kết cấu (độ mịn và độ nhờn), độ pH, độ nhớt, hàm lượng thuốc, khả năng lây lan và nghiên cứu phát hành thuốc.

Nghiên cứu phát hành thuốc trong ống nghiệm

Bộ máy tế bào khuếch tán Franz có dung tích ngăn chứa thụ thể là 22 ml và diện tích bề mặt 3,91 cm2 được sử dụng để ước tính màng thẩm tách giải phóng thuốc trong ống nghiệm (khối lượng phân tử cắt 12, 000-14, 000) mà đã được hydrat hóa trước bằng cách ngâm trong dung dịch đệm qua đêm được gắn trên các tế bào. Dung dịch đệm photphat pH 5,4 (37 độ ± 0. 5 độ) được sử dụng làm chất lỏng thụ thể. Dung dịch hồ chứa được khuấy ở tốc độ 1 0 0 vòng / phút bằng cách sử dụng hạt từ tính. 0,5 g gel được đặt trong ngăn của nhà tài trợ trên màng. Các mảnh nước ngoài được thu thập ở các khoảng thời gian 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12 và 24 giờ và được phân tích bằng máy quang phổ UV-Vis ở 324nm.20

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phương pháp chiết xuất

Phần trăm năng suất của các chất chiết xuất từ ​​hạt cà phê xanh arabica L. được trình bày trong Bảng 3. Hình thức bên ngoài của tất cả các chất chiết xuất là màu vàng sẫm và màu nâu sẫm. 25 phần trăm chiết xuất metanol cho thấy năng suất phần trăm cao nhất là 26,54 ± 0. 13 so với tất cả các chất chiết xuất khác.

Tổng nội dung phenolic

Phương pháp Folin-Ciocalteu được sử dụng để ước tính tổng hàm lượng phenol của tất cả các chất chiết xuất. TPC của tất cả các chất chiết được biểu thị theo đương lượng axit Gallic (Phương trình đường cong chuẩn: y=0. 0 031 cộng với 0,3477, r 2=0. 9953) được đề cập trong Bảng 1. Trong số tất cả các chiết xuất, hàm lượng phenol chính được ước tính trong 25% chiết xuất metanol. Lớp phủ phổ Định lượng axit chlorogenic trong mỗi dịch chiết Lượng hàm lượng axit chlorogenic có trong mỗi dịch chiết được đề cập trong Bảng 3 và Hình 2.oteflavonoidTheo kết quả, lượng axit chlorogenic cao nhất được tìm thấy có trong 25% chiết xuất metanolic.

Dựa trên kết quả thu được từ tổng hàm lượng phenolic, định lượng axit chlorogenic và thử nghiệm chất chống oxy hóa chiết xuất methanolic 25% được phát hiện có chứa hàm lượng phenolic cao nhất, lượng axit chlorogenic lớn hơn và hoạt động loại bỏ gốc tối đa so với các chất chiết xuất khác.

Xác định khả năng sống sót của tế bào bằng thử nghiệm MTT Thử nghiệm khả năng sống là một thử nghiệm xác định khả năng duy trì hoặc phục hồi trạng thái sống sót của các mô, tế bào hoặc cơ quan. Nghiên cứu độc tính tế bào của hợp chất thử nghiệm, chiết xuất hạt cà phê xanh đối với các dòng tế bào L929 trong dữ liệu thống kê của nghiên cứu độc tính tế bào của người đọc ELISA cho thấy chiết xuất hạt cà phê xanh cho thấy đặc tính tiềm năng gây độc tế bào vừa phải với nồng độ ức chế （IC） ở 306,38 ug / ml so với tiêu chuẩn thuốc Camptothecin với 23ug / ml Bảng 5. Quan sát cho thấy rằng chiết xuất hạt cà phê xanh không có khả năng gây độc tế bào đáng kể với nồng độ dao động từ 12. 5-200 ug / ml với thời gian ủ bệnh là 24 giờ ở 37 độ (Đồ thị 1).

Xác định hoạt động Anti Elastase

Enzyme elastase có khả năng phá vỡ elastin, một protein dạng sợi đàn hồi không hòa tan, cùng với collagen góp phần tạo nên độ bền cơ học của mô liên kết. Một số nghiên cứu đã gợi ý rằng cả tác dụng chống lão hóa da và chống nhăn đều tương ứng đáng kể với việc giảm hoạt động của elastase. Do đó, các nghiên cứu antielastase đã được thực hiện để xác nhận công dụng của chiết xuất hạt cà phê xanh như một chất chống lão hóa. Trong nghiên cứu này, hợp chất thử nghiệm cụ thể là chiết xuất hạt cà phê xanh và Std, EGCG đã được sử dụng để đánh giá ảnh hưởng của chúng đối với biểu hiện ELA -2 (kháng thể Elastase của chuột liên hợp chống lại người) trong dòng tế bào L929. Nồng độ của các hợp chất được sử dụng trong thí nghiệm như sau:

Hợp chất thử nghiệm đã cho chiết xuất từ ​​đậu GC đã ngăn chặn biểu thức ELA -2 trong dòng tế bào L929. Các giá trị cường độ huỳnh quang trung bình tương đối của ELA -2 hầu như đều giảm tương tự trong std, Epigallocatechin gallate và hợp chất thử nghiệm chiết xuất từ ​​hạt cà phê xanh. (Bảng 7; Hình 3 và Biểu đồ 1). Do đó, đậu GC có thể được coi là một chất chống elastase tốt. Chuẩn bị hạt cà phê xanh chiết xuất liposome nạp

Trong nghiên cứu này, phương pháp hydrat hóa màng mỏng được sử dụng để tạo liposome.puritans vitamin cLý do chọn cái này

phương pháp này là vì nó là phương pháp đơn giản nhất để chuẩn bị các túi đa sao và có khả năng tải một khối lượng lớn hơn các phân tử ưa nước như axit chlorogenic so với các túi đơn tầng. Phương pháp hydrat hóa màng mỏng cho 75% hiệu suất bao bọc đối với axit chlorogenic có trong dịch chiết Bảng 2. Do đó, phương pháp này được sử dụng để điều chế liposome.

Đặc điểm của liposome Kính hiển vi quang học

Các túi đa sao được quan sát rõ ràng (Hình 4). Các quan sát bằng kính hiển vi được sử dụng để đánh giá hình dạng và kích thước của các mụn nước được ghi nhận cho tất cả các lô đã chuẩn bị.

Xác định chỉ số phân tán đa sắc (PDI), tiềm năng Zeta và kích thước mụn nước

PDI về cơ bản xuất hiện cho sự phân bố kích thước của các mụn nước trong một mẫu nhất định.SistancheGiá trị số của PDI bắt đầu từ {{0}}. 0 (kích thước hạt hoàn toàn đồng nhất) đến 1,1 (kích thước hạt có độ phân tán cao). Trong trường hợp hệ thống chất mang dựa trên lipid như liposome và nanolipsome có kích thước từ 0,3 trở xuống có thể chấp nhận được vì nó chỉ ra một quần thể đồng nhất của túi phospholipid.21 Điện thế Zeta là một kỹ thuật đặc trưng quan trọng được sử dụng để hiểu tính ổn định vật lý của các hạt. Giá trị từ -30 mV đến cộng 30mV thường được coi là có đủ lực đẩy để đạt được độ ổn định vật lý tốt hơn ở dạng keo.

Phương pháp hydrat hóa màng mỏng tạo ra các túi đa sao lớn và không đồng nhất. Phân tích kích thước của liposome được tạo ra cho thấy kích thước trung bình z (d.nm) là 864. 2 nm, PDI là 0. 375 và Zeta Potential là -12. 4 với hiệu quả sử dụng.

Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) Phân tích hình thái của các liposome này bằng TEM cho thấy các liposome hình cầu. Chuẩn bị Liposomal Gel

Sự phân tán liposom chỉ đơn giản là trộn với polyme để tạo ra các gel tương ứng. Công thức gel liposome có lợi vì có thể tránh hoặc giảm thiểu sự hợp nhất của các túi một cách hiệu quả vì polyme đóng vai trò như một chất đệm giữa các liposome. Qua đó, kích thước mụn nước không bị ảnh hưởng vì đây là quá trình tương tác polyme / liposome có kiểm soát. Công thức kem dựa trên liposomal không được chọn vì các vấn đề về độ ổn định được báo cáo trong các sản phẩm dựa trên nhũ tương do phương pháp này là phương pháp đơn giản nhất để chuẩn bị các túi đa sao và có khả năng tải một khối lượng lớn hơn các phân tử ưa nước như axit chlorogenic so với mụn nước ngoài da. Phương pháp hydrat hóa màng mỏng cho 75% hiệu suất bao bọc đối với axit chlorogenic có trong dịch chiết Bảng 2. Do đó, phương pháp này được sử dụng để điều chế liposome.

Đặc điểm của liposome Kính hiển vi quang học

Các túi đa sao được quan sát rõ ràng (Hình 4). Các quan sát bằng kính hiển vi được sử dụng để đánh giá hình dạng và kích thước của các mụn nước được ghi nhận cho tất cả các lô đã chuẩn bị.

Xác định chỉ số phân tán đa sắc (PDI), tiềm năng Zeta và kích thước mụn nước

PDI về cơ bản xuất hiện cho sự phân bố kích thước của các mụn nước trong một mẫu nhất định. Giá trị số của PDI bắt đầu từ {{0}}. 0 (kích thước hạt hoàn toàn đồng nhất) đến 1,1 (kích thước hạt có độ phân tán cao). Trong trường hợp hệ thống chất mang dựa trên lipid như liposome và nanolipsome có kích thước từ 0,3 trở xuống có thể chấp nhận được vì nó chỉ ra một quần thể đồng nhất của túi phospholipid.21 Điện thế Zeta là một kỹ thuật đặc trưng quan trọng được sử dụng để hiểu tính ổn định vật lý của các hạt. Giá trị từ -30 mV đến cộng 30mV thường được coi là có đủ lực đẩy để đạt được độ ổn định vật lý tốt hơn ở dạng keo. 2

Phương pháp hydrat hóa màng mỏng tạo ra các túi đa sao lớn và không đồng nhất. Phân tích kích thước của liposome được tạo ra cho thấy kích thước trung bình z (d.nm) là 864. 2 nm, PDI là 0. 375 và Zeta Potential là -12. 4 với hiệu quả cuốn theo.

Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) Phân tích hình thái của các liposome này bằng TEM cho thấy các liposome hình cầu.

Chuẩn bị Liposomal Gel

Sự phân tán liposom chỉ đơn giản là trộn với polyme để tạo ra các gel tương ứng. Công thức gel liposome có lợi vì có thể tránh hoặc giảm thiểu sự hợp nhất của các túi một cách hiệu quả vì polyme đóng vai trò như một chất đệm giữa các liposome. Qua đó, kích thước mụn nước không bị ảnh hưởng vì đây là quá trình tương tác polyme / liposome có kiểm soát. Công thức kem dựa trên liposomal không được chọn vì các vấn đề về độ ổn định được báo cáo trong các sản phẩm dựa trên nhũ tương do

sự hiện diện của chất hoạt động bề mặt và dầu thừa có thể tương tác với mụn nước. Các đặc tính khác nhau như độ nhớt có thể dễ dàng được kiểm soát bằng cách thay đổi nồng độ của polyme hoặc thay đổi loại polyme. Vì vậy, gel liposomal đã được điều chế để tránh được vấn đề ổn định, cung cấp sự giải phóng có kiểm soát, dễ chuẩn bị và có tính thẩm mỹ cao như mỹ phẩm chăm sóc da.23 Lipogel được điều chế có màu vàng nhạt và mờ đục. 0. 5% w / w carbopol @ 974P được phát hiện là có tính nhất quán tốt và hình thức mịn không có bất kỳ sự kết tụ nào. Hàm lượng dược chất đối với gel liposomal được tìm thấy là 94,16 ± 1,3 với độ nhớt của gel trong khoảng 13.500 cps đến 16.500 cps và khả năng lan truyền khoảng 7-8 g.cm/s.

Hồ sơ phát hành thuốc trong ống nghiệm

Lớp ngoài cùng của da là lớp sừng và được cấu tạo chủ yếu bởi protein keratin và lipid. Các lipid gian bào đóng một vai trò quan trọng trong việc kiểm soát sự hấp thụ qua da. Các lipid gian bào có thể tương tác với các phospholipid có trong các liposome và do đó gây ra hiện tượng sưng tấy lipid mà không làm thay đổi cấu trúc nhiều lớp của lớp sừng. Các lipid bị sưng này làm cho thuốc tích tụ lại và tạo thành chất lắng đọng trong da. Mặc dù cơ chế của liposome bôi tại chỗ chưa được hiểu đầy đủ, nhưng thành phần lipid, điện tích bề mặt và lớp màng liposome chủ yếu đóng một vai trò quan trọng trong việc xử lý thuốc. Các nghiên cứu cũng cho thấy việc phân phối thuốc tại chỗ cũng bị ảnh hưởng bởi kích thước của các liposome.24 Quá trình giải phóng thuốc trong ống nghiệm được thực hiện bằng cách sử dụng màng thẩm phân. Nghiên cứu giải phóng=trong ống nghiệm của gel liposomal đã cho thấy tác dụng giải phóng bền vững lên đến 12 giờ so với 7-8 giờ của gel thông thường. Đồ thị 2.

PHẦN KẾT LUẬN

Các chất chiết xuất từ ​​hạt cà phê Arabica Green Coffee đã được sàng lọc để tìm tổng hàm lượng phenolic, định lượng axit chlorogenic và xét nghiệm chất chống oxy hóa. Dựa trên kết quả thu được từ những nghiên cứu này, 25% chiết xuất metanol đã được chọn để đưa vào liposome vì nó cho thấy hàm lượng phenol cao nhất, một lượng lớn axit chlorogenic và hoạt động chống oxy hóa tốt hơn. Trước khi kết hợp chiết xuất vào liposome, nó đã được sàng lọc để kiểm tra MTT và xét nghiệm antielastase. Dựa trên xét nghiệm MT, chiết xuất không có khả năng gây độc tế bào và theo xét nghiệm antielastase, chất chiết xuất có hoạt tính antielastase. Do đó, chiết xuất có thể được sử dụng để xây dựng các liposome chống lão hóa. Các túi đa sao được chuẩn bị bằng cách sử dụng phương pháp hydrat hóa màng mỏng. Các liposome đã chuẩn bị có hiệu quả đóng gói tốt và ổn định vật lý tốt hơn. Hỗn dịch liposom dựa trên chiết xuất được bào chế thành gel liposom. Theo nghiên cứu giải phóng thuốc trong ống nghiệm, gel liposomal đã cho thấy tác dụng giải phóng kéo dài lên đến 12 giờ so với gel thông thường. Do đó, các liposome chứa chiết xuất từ ​​hạt cà phê xanh có thể được coi là chất vận chuyển hiệu quả để phân phối tại chỗ với tiềm năng chống lão hóa.

NHÌN NHẬN

Các tác giả cảm ơn Stellixir Biotechechnology, Bengaluru và Karnataka vì sự giúp đỡ của họ trong việc hoàn thành thử nghiệm MTT và nghiên cứu thử nghiệm Anti-elastase, chúng tôi cũng cảm ơn các giải pháp thử nghiệm Sprint, Mumbai cho hình ảnh TEM và trường đại học SVKM Dr.Bhanuben Nanavati College of Pharmacy cho cung cấp cơ sở vật chất tốt nhất để thực hiện nghiên cứu này.

XUNG ĐỘT LỢI ÍCH

Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.

CÁC TỪ VIẾT TẮT:

TPC: Tổng hàm lượng phenol; DPPH: 2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl; GAE: Tương đương axit gallic; GC: Green Coffee; GCB: Hạt cà phê xanh; ELA -2 (Liên hợp kháng thể Elastase của chuột chống lại người): Neutrophil Elastase; EGCG: Epigallocatechin gallate; PC: Phosphatidylcholine; CH: Cholesterol; RBF: Bình đáy tròn; TEM: Kính hiển vi điện tử truyền qua; MTT: 3- (4, 5- diemthylthiazol -2- yl) -2, 5- diphenyl tetrazolium bromide; PDI: Chỉ số phân tán đa sắc; IC ": Nồng độ ức chế nửa tối đa.

Bài báo này được trích từ Desai và Mallya.