Tổng số glycoside của Cistanche Deserticola thúc đẩy quá trình phục hồi chức năng thần kinh bằng cách tạo ra sự tái tạo mạch máu thần kinh thông qua con đường Nrf- 2/Keap-1 ở chuột MCAO/R-Ⅱ

TG thúc đẩy quá trình tu sửa thần kinh ở chuột bị thương I/R

Theo nhiều nghiên cứu, sự hình thành thần kinh sau đột quỵ có thể cải thiện đáng kể việc phục hồi chức năng. Synolinehysin (SYN), protein mật độ sau synap 95 (PSD-95) và protein liên kết với vi ống 2 (MAP-2) đã được sử dụng làm chất đánh dấu để kiểm tra độ dẻo của tế bào thần kinh ở vùng tranh chấp thiếu máu cục bộ của vỏ não. Để đánh giá tác động của việc điều trị bằng TG, PS và OS đối với sự hình thành thần kinh ở chuột bị thương I/R, phương pháp miễn dịch huỳnh quang và vết mờ phương Tây đối với các biểu hiện SYN, PSD95 và MAP{6}} đã được thực hiện. Như được hiển thị trong Hình 9 và 10, mức biểu hiện SYN, PSD95 và MAP{10}} ở chuột I/R sau 14 ngày tái tưới máu đã giảm so với chuột NOR, trong khi phương pháp chữa trị bằng TG và PS có thể tăng đáng kể- điều chỉnh mức độ biểu hiện của chúng. Nhóm OS không có sự thay đổi đáng kể so với nhóm MOD. Dữ liệu chỉ ra rằng phương pháp chữa trị bằng TG và PS có thể cải thiện đáng kểthúc đẩy tái tạo thần kinh sau chấn thương I/R. 

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ BẢO VỆ CHỐNG ĐỘT QUỴ Thiếu máu cục bộ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

TG thay đổi Nrf-2 và giữ các biểu thức-1 trong I/R chuột bị thương

Căng thẳng oxy hóa là cơ chế gây bệnh chính trong chấn thương I/R. Các nghiên cứu đã xác minh rằng Nrf-2 là chất điều chỉnh chính các phản ứng chống oxy hóa. Để điều tra các phản ứng oxy hóa qua trung gian Nrf-2 và Keap-1 sau chấn thương I/R, chúng tôi đã đánh giá tế bào chất

biểu thức cũng như sự chuyển vị hạt nhân của Keap-1. Trong khi đó, sự biểu hiện của Nrf-2 trong mô não của chuột bị tổn thương I/R cũng đã được thử nghiệm (Hình 10 và 11). Theo phân tích miễn dịch huỳnh quang, Nrf-2 được tìm thấy chủ yếu nằm trong tế bào chất trong nhóm NOR. Trong nhóm TG, sự biểu hiện của Nrf-2 trong quá trình định vị tế bào chất đã được điều hòa quá mức, nhưng được điều hòa lại trong nhân và cũng quan sát thấy biểu hiện Keap-1 giảm. Dữ liệu cho thấy khả năng bảo vệ não của TG có thể liên quan đến việc điều chế Nrf-2 và Keap-1.

TG làm giảm căng thẳng oxy hóa mô não ở chuột bị thương I/R

Để xác nhận tác dụng chống oxy hóa của TG, hoạt động của SOD, CAT, GSH-Px và MDA đã được đánh giá ở những con chuột bị thương I/R. Trong Hình 12, hàm lượng MDA tăng lên rõ rệt ở nhóm MOD, đồng thời, hoạt động của SOD, CAT và GSH-Px đều giảm so với chuột bình thường. Ngược lại, việc xử lý bằng TG dẫn đến giảm đáng kể hàm lượng MDA và tăng hoạt động của SOD, CAT và GSH-Px. Những kết quả này tiếp tục khẳng định hoạt động chống oxy hóa của TG.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ ĐIỀU TRỊ ĐỘT QUỴ Thiếu máu cục bộ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

CUỘC THẢO LUẬN

Nhiều nghiên cứu cho thấy TCM C. Deserticola có hoạt tính sinh học sâu rộng, ví dụ như tăng cường khả năng học hỏi, trí nhớ và khả năng miễn dịch. Tuy nhiên, các thành phần hoạt động của C. Deserticola trong việc bảo vệ thần kinh vẫn chưa rõ ràng. Công việc hiện tại nhằm mục đích sàng lọc các thành phần hoạt động từC. Deserticola chống lại đột quỵ do thiếu máu cục bộtrên mô hình MCAO/R. Ba chiết xuất từ ​​C. Deserticola (TG, PS và OS) đã được sử dụng để đánh giá tác động của chúng đối với chuột MCAO/R, cũng như các cơ chế có thể có.

Đột quỵ là bệnh lý mạch máu não cấp tính thường gặp. Các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy đột quỵ phổ biến ở nam giới hơn nữ giới. Vì vậy, trong thí nghiệm của chúng tôi, chuột đực đã được nhận nuôi để thử nghiệm. Kết quả của chúng tôi đã chứng minh rằng cảm ứng I/R làm tăng tốc độ căng thẳng oxy hóa và thể tích nhồi máu, phá vỡ BBB và dẫn đến tổn thương thần kinh và mạch máu não. Sau khi sàng lọc, người ta thấy TG làm giảm thể tích vùng nhồi máu và thúc đẩy quá trình tái cấu trúc thần kinh và hình thành mạch. Hơn nữa, TG đã được quan sát để duy trì tính toàn vẹn của BBB sau chấn thương I / R. Ngược lại, PS và OS không mang lại sự giảm nhẹ đáng kể nào cho tổn thương I/R. Do đó, TG được coi là phần hoạt động chính của C. Deserticola để bảo vệ thần kinh, có khả năng thông qua việc thúc đẩy quá trình tái cấu trúc thần kinh, hình thành mạch và tính toàn vẹn BBB thông qua kích hoạt con đường Nrf- 2/Keap-1.

Bằng chứng ngày càng tăng cho thấy rằng việc thiết lập tuần hoàn bàng hệ hiệu quả là rất quan trọng để tránh hình thành nhồi máu và vùng tranh chấp thiếu máu cục bộ, đồng thời là phương pháp điều trị quan trọng ở giai đoạn đầu của đột quỵ thiếu máu cục bộ. Sự tăng sinh của các tế bào nội mô mạch máu và tế bào cơ trơn sau nhồi máu thiếu máu cục bộ quyết định sự hình thành tuần hoàn bàng hệ. Tuy nhiên, các mô hình thiếu máu cục bộ có một hiện tượng chung - đó là stress oxy hóa tồn tại rộng rãi trong vi mạch não. Dữ liệu nghiên cứu đã chỉ ra rằng một số lượng lớn chất chống oxy hóa có thể làm xáo trộn chức năng của BBB và các đặc tính của sự hình thành mạch. CD31 và a-SMA lần lượt là các dấu hiệu của tế bào nội mô mạch máu cũng như tế bào cơ trơn. Để nghiên cứu ảnh hưởng của sự tăng sinh tế bào nêu trên của các chất chiết xuất từ ​​C. Deserticola, chúng tôi đã kiểm tra các biểu hiện của CD31 và a-SMA trong chất đồng nhất vùng tranh chấp thiếu máu cục bộ não. Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng TG đã tăng cường đáng kể các biểu hiện của CD31 và a-SMA. Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể giữa các nhóm PS và OS. Do đó, chúng tôi đã suy luận rằng TG có thể làm giảm tổn thương não bằng cách thúc đẩy quá trình tạo mạch thông qua việc tăng biểu hiện của CD31 và a-SMA, trong khi PS và OS không cung cấp sự bảo vệ khỏi tổn thương não như vậy. Những kết quả này khẳng định thêm rằng chỉ có TG mới có thể ngăn ngừa chấn thương I/R não.

Đột quỵ do thiếu máu cục bộ có thể được coi là kết quả của thiếu máu não do suy giảm độ dẻo của tế bào thần kinh hoặc tái cấu trúc các vùng não. Phần lớn bệnh nhân đột quỵ bị tổn thương thần kinh. Kích hoạt sự hình thành thần kinh là một chiến lược đầy hứa hẹn cho bệnh nhân đột quỵ để cải thiện chức năng thần kinh của họ. Sự hình thành thần kinh tham gia trực tiếp vào quá trình phục hồi chức năng thần kinh sau chấn thương I/R não. Nghiên cứu trước đây cho thấy TG có thể cải thiện tỷ lệ sống sót của các tế bào hình chóp vùng đồi thị và tạo ra sự hình thành thần kinh. Căng thẳng oxy hóa gây mất tế bào thần kinh trong nhiều bệnh, chẳng hạn như bệnh Parkinson, đột quỵ, v.v. Nrf-2 phiên mã rất nhiều gen liên quan đến bảo vệ thần kinh ở vùng khởi động của chúng, chủ yếu bao gồm các dây chằng SOD, MDA, CAT và g-glutamyl cysteine, v.v. SYN, PSD-95 và MAP{{ 4}} protein, có liên quan chặt chẽ với sự hình thành khớp thần kinh và dẫn truyền thần kinh, có thể được coi là dấu hiệu đánh giá độ dẻo của tế bào thần kinh nghiên cứu ở vùng tranh chấp thiếu máu cục bộ. Sau khi nghiên cứu, chúng tôi nhận thấy rằng việc chữa khỏi bằng TG có thể làm tăng đáng kể các biểu hiện của PSD95, SYN và MAP-2, cho thấy rằng khả năng bảo vệ não của TG có tương quan với việc tăng cường độ dẻo của tế bào thần kinh trong quá trình I/R. Tuy nhiên, thật đáng tiếc là không có sự khác biệt rõ ràng giữa nhóm PS và nhóm OS. Những kết quả này chỉ ra rằng TG có thể tăng cường khả năng dẻo dai sau chấn thương I/R não.

Nghiên cứu hình ảnh ở bệnh nhân đột quỵ cho thấy rối loạn chức năng BBB có thể được coi là một đặc điểm nổi bật của vùng não quanh vùng thiếu máu cục bộ (Bang và cộng sự, 2007). Các TJ, bao gồm các protein tế bào chất, protein xuyên màng và các phân tử bám dính giữa các tế bào nội mô mao mạch, rất quan trọng trong việc duy trì tính toàn vẹn của BBB (Ye et al., 2019). Trong số đó, ZO-1, claudin-5 và conccludin là những protein quan trọng nhất trong TJ. Bằng chứng ngày càng tăng chỉ ra rằng tính thấm tăng lên của BBB do thiếu máu cục bộ thường tương quan với sự thay đổi của ZO-1, claudin-5 và occludin (Cao và cộng sự, 2016a; Page và cộng sự, 2016; Yu và cộng sự, 2017; Liu và cộng sự, 2018). Trong nghiên cứu này, kết quả đã chứng minh rằng mặc dù TG có thể làm tăng đáng kể các biểu hiện của protein ZO-1, claudin-5 và occludin trong các mô não do MCAO tạo ra, nhưng cả PS và OS đều không làm được. BBB bao gồm các tế bào nội mô não và liên kết chặt chẽ với các tế bào ngoại vi (Nyul-Toth et al., 2016). Pericyte rất quan trọng đối với tính toàn vẹn của BBB (Bell và cộng sự, 2010). Đột quỵ do thiếu máu cục bộ gây ra tình trạng chết tế bào và bong ra khỏi các tế bào nội mô não trong giai đoạn cấp tính, do đó làm mất ổn định hệ thống vi mạch và làm thay đổi các đặc tính BBB (Zechariah và cộng sự, 2013). Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng TG có thể tăng độ bao phủ của tế bào ngoại vi trên mao mạch và tăng mức độ biểu hiện của ZO-1, claudin-5 và occludin. Những hiện tượng này đã chứng minh rằng TG có thể bảo vệ tính toàn vẹn BBB một cách hiệu quả sau chấn thương I / R não. Tóm lại, TG có thể làm giảm tổn thương não theo nhiều cách, chẳng hạn như thúc đẩy quá trình hình thành mạch, cải thiện độ dẻo của tế bào thần kinh và duy trì tính toàn vẹn của BBB.

Sau đó, chúng tôi đã nghiên cứu con đường truyền tín hiệu để khám phá cơ chế bảo vệ não của TG. Quá trình tổn thương I/R có nhiều yếu tố và do đó có nhiều cơ chế liên quan đến sinh bệnh học. Căng thẳng oxy hóa là yếu tố nguy cơ cơ bản góp phần gây ra tổn thương não do I/R gây ra, chẳng hạn như tổn thương cấu trúc BBB, rối loạn chức năng nội mô mạch máu và làm trầm trọng thêm tổn thương thần kinh do thiếu máu cục bộ. Do đó, stress oxy hóa đã trở thành mục tiêu điều trị hấp dẫn trong chấn thương não do I/R gây ra. Enzym pha 2, được trung gian bởi yếu tố hạt nhân E2-yếu tố liên quan-2 (Nrf-2), đã được coi là một phương tiện quan trọng giúp tế bào thần kinh tự bảo vệ mình trước stress oxy hóa. Bằng chứng ngày càng tăng cho thấy rằng việc kích hoạt Nrf-2 trong I/R là mục tiêu điều trị tiềm năng để bảo vệ thần kinh. Nrf-2, với vai trò là chất điều chỉnh quan trọng của khả năng phòng vệ chống oxy hóa nội sinh, làm trung gian mức độ heme oxyase 1 (HO-1) và các enzyme chống oxy hóa khác, chẳng hạn như NAD(P)H quinone oxyoreductase 1 (NQO1), SOD, CAT, GSH và MDA. Hơn nữa, Nrf{12}} đóng vai trò điều tiết quan trọng trong quá trình hình thành mạch. Nghiên cứu hiện tại cho thấy Nrf-2 có thể được tăng cường và kích hoạt đáng kể trong quá trình phát triển mạch máu.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN CHO ĐỘT QUỴ CHỐNG ISCHEMIC PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Như đã mô tả trước đây, TG chứa nhiều hợp chất hoạt tính sinh học, ví dụ, echinacoside, tubuloside A, Acteoside, isoacteoside và 2'-acetylacteoside, và một số trong số chúng có chức năng bảo vệ thần kinh sau chấn thương I/R não. Echinacoside có nhiều tác dụng dược lý như chống oxy hóa, chống lão hóa, bảo vệ thần kinh, chống viêm, thúc đẩy quá trình tạo sẹo, bảo vệ gan, thúc đẩy quá trình hình thành xương và hoạt động chống khối u. Gần đây, echinacoside đã được xác định là chất chống oxy hóa mạnh trong hệ thần kinh trung ương. Echinacoside có thể cắt giảm hàm lượng MDA và cải thiện hoạt động của SOD và GSH-Px trong chấn thương não do thiếu máu cục bộ, đồng thời phân tích gắn kết phân tử cho thấy rằng echinacoside có thể liên kết với Keap-1, dẫn đến sự chuyển vị hạt nhân Nrf-2. Nghiên cứu của Xia cho thấy Acteoside có thể làm giảm thể tích nhồi máu và hàm lượng nước trong não để cải thiện tình trạng thiếu hụt thần kinh ở chuột MCAO/R bằng cách giảm thiểu căng thẳng oxy hóa. Các nghiên cứu khác đã chứng minh rằng isoacteoside có thể làm tăng hoạt động của các enzym chống oxy hóa tế bào, SOD và CAT trong các tế bào V{10}} được xử lý bằng H2O2-. Dựa trên các báo cáo trên về các hợp chất hoạt động có trong TG, có thể suy ra rằng TG có thểbảo vệ chống lại đột quỵ do thiếu máu cục bộ thông qua con đường chống oxy hóa.

Li đã báo cáo về tác dụng bảo vệ thần kinh của phenylethanoid glycoside (PhGs) đối với H2O2-gây ra hiện tượng apoptosis trên tế bào PC12 thông qua con đường Nrf2/ARE (Li và cộng sự, 2018). Các PhG này đã bị ức chế đáng kể bằng cách kích hoạt chuyển vị hạt nhân Nrf2 và tăng biểu hiện của HO-1, NQO1, tiểu đơn vị xúc tác ligase glutamate cysteine ​​(GCLC) và tiểu đơn vị biến đổi ligase glutamate-cysteine ​​(GCLM) (Li và cộng sự, 2018 ; Công và cộng sự, 2019). Do đó, những phát hiện này cho thấy rằng con đường Nrf{12}}/ARE đóng một vai trò quan trọng trong các tác động bảo vệ qua trung gian PhG đối với các tế bào thần kinh. Tương tự, trong nghiên cứu này, chúng tôi nhận thấy rằng TG có thể làm giảm mức MDA và tăng mức SOD, CAT và GSH-Px ở chuột I/R. Trong khi đó, TG có thể điều chỉnh tăng biểu hiện Nrf2 trong nhân, điều chỉnh giảm biểu hiện tương ứng trong tế bào chất và giảm đáng kể biểu hiện Keap{16}}. Do đó, con đường Nrf-2/Keap-1 có thể liên quan đến tác dụng bảo vệ thần kinh qua trung gian TG. Việc xác nhận thêm về con đường này sẽ được thực hiện nuôi cấy tế bào in vitro với các mô hình tổn thương do thiếu oxy-glucose/tái oxy hóa trong tương lai. Hơn nữa, chiết xuất C. Deserticola đã được sử dụng trong nghiên cứu của chúng tôi trong 14 ngày liên tục. Vì sự hình thành thần kinh ở người trưởng thành sẽ ảnh hưởng đến việc giải thích các tác dụng bảo vệ thần kinh trong 14 ngày tái tưới máu, nên không thể loại trừ sự hình thành thần kinh khỏi thiết kế thí nghiệm hiện tại của chúng tôi trong việc khám phá tác dụng bảo vệ thần kinh của CT. Đây là hạn chế của nghiên cứu của chúng tôi.

Tóm lại, chính các TG từ C. Deserticola có thểtăng cường sự hình thành mạch và sự hình thành thần kinhcũng như duy trì tính toàn vẹn của BBB ở chuột bị thương I/R, chứ không phải ở PS và HĐH. Các hiệu ứng có thể được điều hòa bằng cách kích hoạt con đường Nrf-2/Keap-1.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ ĐIỀU TRỊ ĐỘT QUỴ Thiếu máu cục bộ PHGS75% ECH 30% ACT 12%